核桃蛋白酶解物的制备及抗氧化活性

安徽农学通报，Anhui Agri.Sci.Bull.2018，24（08）复合酶制备抗氧化活性核桃多肽工艺优化王攀范娜（商洛学院生物医药与食品工程学院，陕西商洛726000）摘要：以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶复合水解核桃蛋白制备抗氧化活性多肽的工艺条件优化为对象，通过研究酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力的影响，并利用正交试验优化工艺条件，以提高核桃蛋白多肽对DPPH·的清除率。

结果表明，酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力有一定影响；当木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解温度为45℃、时间1.5h、酶与底物浓度1500U/g、pH值7.0、复合酶比例为2∶1时，酶解物清除DPPH·的能力最强，清除率达78.7%。

关键词：核桃多肽；复合酶；工艺优化中图分类号TS201.2文献标识码A文章编号1007-7731（2018）08-0022-03核桃蛋白是一种优质的植物蛋白资源，富含18种氨基酸，精氨酸和谷氨酸含量高［1］，其酶解产物核桃蛋白多肽具有浓度高、溶解性好等特性［2-3］，乳化性、吸湿性等均优于核桃蛋白，更适合用于加工生产优质食品［4］。

在食品加工中，脂肪的氧化是影响食品风味、质构和外观的主要因素［5］，具有抗氧化活性的生物活性肽是潜在的天然、安全、高效的抗氧化剂［6-7］。

酶的水解和微生物的发酵是较常用的水解蛋白质的方式［8-9］。

核桃蛋白水解后具有很好的抗氧化、抑菌、抗肿瘤等作用［10］，因此利用核桃蛋白开发具有抗氧化活性的多肽市场前景广阔。

本实验通过利用木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶复合水解核桃蛋白，研究其复合比例、水解条件对水解产物抗氧化活性的影响，以提升核桃蛋白水解物的抗氧化活性，为核桃蛋白多肽的应用提供一定的参考。

1材料与方法1.1材料与设备1.1.1材料与试剂材料：核桃，市售；木瓜蛋白酶（1000U/mg）；碱性蛋白酶（10000U/g）；DPPH（D9132）。

酶解核桃蛋白制备抗氧化肽工艺条件优化康玮丽;唐军虎;敬思群【摘要】采用单因素试验和响应面分析,以对DPPH自由基的清除率为响应值,研究了酶与底物的比值([E]/[S])、pH值和酶解温度对制备抗氧化肽工艺的影响.确定了采用碱性蛋白酶制备核桃抗氧化肽的最佳酶解条件为:[E]/[S]为2.6%,pH值9,酶解温度为49℃.[S]为2%,酶解时闻为2h,在此条件下制备的核桃抗氧化肽对DPPH 自由基的清除率达69.85%.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2010(036)012【总页数】6页(P94-99)【关键词】核桃蛋白;抗氧化肽;酶解;响应面分析法;优化【作者】康玮丽;唐军虎;敬思群【作者单位】新疆大学,生命科学与技术学院,新疆,乌鲁木齐,830046;新疆大学,生命科学与技术学院,新疆,乌鲁木齐,830046;新疆大学,生命科学与技术学院,新疆,乌鲁木齐,830046【正文语种】中文核桃是胡桃科核桃属多年生落叶乔木的坚果，学名Juglans regia L.又名为胡桃、羌桃、合桃等，是四大干果之一，也是世界上栽培最广，经济价值最高的木本油料、干果和用材树种之一［1］。

核桃中除了含有高达65%～83%的核桃油脂以外，还含有大量的核桃蛋白。

核桃蛋白由清蛋白、球蛋白、醇溶谷蛋白和谷蛋白所构成［2］。

研究发现，核桃蛋白质中18种氨基酸齐全，特别是人体必需的8种氨基酸含量合理，不但是很好的蛋白源，还是优良的制备多肽的原料［3］。

随着自由基生命科学研究的不断发展，氧化应激损伤和抗氧化保护作用的理论备受关注，衰老、癌症及心血管等疾病被公认为与氧化应激损伤及自由基代谢失调相关，因而筛选具有强抗氧化活性的天然资源已成为生物学、医学和食品科学研究的新趋势［4－5］。

本研究探讨了碱性蛋白酶酶解核桃蛋白制备抗氧化肽的工艺参数，并研究了酶解液对自由基的清除作用，为核桃蛋白的深加工提供科学依据。

核桃，新疆和田产薄皮核桃，由新疆阿布丹食品开发有限公司提供;核桃蛋白，实验室自制;Alcalase2.4L碱性蛋白酶，AS1398中性蛋白酶，木瓜蛋白酶，均购于杰能科酶制剂有限公司;其它试剂均为分析纯。

核桃蛋白中性蛋白酶水解物的制备及其抗氧化活性研究刘昭明;黄翠姬;孟陆丽;黄娟娟;巫俊良【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2008(036)035【摘要】[目的]研究制备核桃蛋白水解物的最佳工艺条件及水解物的抗氧化活性.[方法]以核桃蛋白为底物,采用正交试验研究制备其中性蛋白酶水解物的工艺条件,通过测定自由基清除能力研究酶水解物的抗氧化活性.[结果]制备核桃蛋白酶水解物的最优工艺条件为:温度40 ℃、底物浓度4%、酶浓度4 000 U/g、pH值8.0;核桃蛋白酶水解物的水解度与其对羟自由基(OH·)和超氧阴离子自由基(O2·)的清除能力有关,其水解度为24.2%时对羟自由基(OH·)和超氧阴离子自由基(O2·)的清除率分别为17.0%和52.0%.[结论]采用Sephdex G-25凝胶柱层析对水解度为24.2%的酶水解物进行分离,得到了A、B、C和D 4种肽混合物,其中,肽混合物C 的自由基清除能力最大,肽混合物D最小.【总页数】3页(P15696-15697,15701)【作者】刘昭明;黄翠姬;孟陆丽;黄娟娟;巫俊良【作者单位】广西工学院生物与化学工程系,广西柳州,545006;广西工学院生物与化学工程系,广西柳州,545006;广西工学院生物与化学工程系,广西柳州,545006;广西工学院生物与化学工程系,广西柳州,545006;广西工学院生物与化学工程系,广西柳州,545006【正文语种】中文【中图分类】Q946.5【相关文献】1.木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件优化及水解物抗氧化活性研究 [J], 刘昭明;黄翠姬;巫俊良;黄娟娟2.核桃蛋白肽的抗氧化活性研究 [J], 刘昭明;黄翠姬;孟陆丽;黄娟娟;周文武3.猪骨蛋白的中性蛋白酶酶解工艺及其产物抗氧化活性研究 [J], 李超;王乃馨;王卫东;姚以才;秦卫东4.用AS 1．398中性蛋白酶制备明胶水解物．Ⅱ．酶的固定化研究 [J], 黄雅钦5.用AS 1．398中性蛋白酶制备明胶水解物．Ⅰ．反应规律的研究 [J], 黄雅钦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

核桃蛋白酶解工艺优化与酶解液抗氧化活性分析侯雅坤;王晟;黄昆;王文江;李迪;王建中【摘要】Total enzyme addition, pH, enzymatic hydrolysis temperature and ratio of sample to solution were se- lected to determine the factors and levels by single-factor test method and the orthogonal test method with the hydroly- sis property. The optimized enzymatic hydrolysis conditions with the Alcalase were as follows： total enzyme addition 7% （w/w） , pH 10.0, enzymatic hydrolysis temperature 60~C , sample to solution 1：25, enzymatic hydrolysis time 2h. Under these conditions antioxidative activities of hydrolysates at different hydrolysis property ashigh,middle,low are analyzed. The results are as follows： hydrolysates at different hydrolysis property have good ability to eliminate the DPPH, OH, O2 , and the reducing power is strong.%采用单因素和正交实验,以水解度为评价指标,研究了加酶量、pH值、酶解温度和料液比对酶解工艺的影响。

核桃蛋白的分离纯化及功能性质的研究随着现代科学技术的发展，蛋白质已经成为现代生物学研究中非常重要的研究对象，在以它们构成和性质为基础的研究和开发被广泛应用。

核桃蛋白是一类非常重要的单元蛋白，具有多种生理活性。

本文旨在研究核桃蛋白的分离纯化及其机理性质。

一、核桃蛋白结构核桃蛋白是一种植物类乳糖酶，主要由两种可溶性蛋白组成：核桃抗性蛋白（NRT）和核桃糖酶（NE）。

NRT是一种65 kDa的肌动蛋白，它通过酶解作用分解能量类外源物质和非结构性抗原来支持核桃生长。

它以其独特的结构支持它的抗性和活性。

与NRT相比，NE是一种25 kDa的核苷酸酶，它可以水解糖苷键，以便提供能量到核桃细胞。

核桃蛋白的其它功能包括抗体反应，细胞因子合成和调节细胞凋亡等。

二、核桃蛋白的分离纯化核桃蛋白的分离纯化，需要使用一系列技术，包括柱层析、电渗透和膜过滤等方法。

层析可以分离和纯化核桃蛋白，而其纯度比电渗透稍低。

膜过滤是一种高纯度分离纯化方法，它可以有效地去除杂质和其它蛋白。

当核桃蛋白经过分离和纯化后，它可以用于生物化学分析和功能性研究。

三、核桃蛋白的功能性研究核桃蛋白具有多种生理活性，因此，很多研究者都想深入了解它的生理功能。

最近的研究表明，核桃蛋白可以增强机体的抗氧化能力，对对抗内在和外在的氧化应激具有重要作用；它还可以阻断放射性物质的吸收，具有显著的辐射防护作用；它还具有显著的抗细菌活性，可以抑制致病性细菌的生长和复制。

此外，核桃蛋白还具有抗肿瘤作用，可以降低细胞癌变的风险。

四、总结本文旨在研究核桃蛋白的分离纯化及其功能性质。

核桃蛋白是一类单元蛋白，由NRT和NE两种可溶性蛋白组成，具有多种生理活性，如抗氧化能力、辐射防护作用、抗细菌活性和抗肿瘤作用等。

核桃蛋白的分离纯化，需要使用技术，如柱层析、电渗透和膜过滤等，可以有效地去除杂质和其它蛋白，并可用于生物学分析和功能性研究。

鉴于其多种功能，核桃蛋白可能在科学研究和产业应用中发挥重要作用。

核桃蛋白酶解物的制备及抗氧化活性陈宁;孙一;刘淑莹【摘要】采用碱性蛋白酶对核桃蛋白进行酶解,检测了所得酶解物的抗氧化能力,包括对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和羟基自由基(·OH)的清除能力；利用Sephadex G-25凝胶层析柱和反相柱对核桃蛋白酶解物进行分离纯化；采用液相色谱-质谱(LC-ESI-Q-TOF)联用方法测得抗氧化能力最强的多肽的序列为Ala-Gly-Gly-Ala,其还原力和还原型谷胱甘肽相当.%Many studies have reported that peptides from various food sources possess antioxidant activity. In the present study, walnut proteins were hydrolyzed using Alcalase 2. 4 L to obtain antioxidant peptides. The antioxidant activities of the hydrolysates were measured using 1, l-diphenyl-2-picryl hydrazyl ( DPPH) assay and hydroxyl radical scavenging activity( HRSA) assay. Then, walnut protein hydrolysates were purified sequentially by gel filtration and RP-HPLC. The sequence of the peptide with the highest antioxidative activity was identified to be Ala-Gly-Gly-Ala using RP-HPLC-ESI-MS, which was identified for the first time from walnut protein hydrolysates. The reducing power of the peptide was similar to that of L-glutathione reduced ( GSH). These results suggest that the peptide isolated from walnut protein hydrolysates is potent antioxidant and may be effectively used as food additives and as pharmaceutical agents.【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2013(034)001【总页数】5页(P72-76)【关键词】核桃蛋白水解;抗氧化;纯化;抗氧化肽【作者】陈宁;孙一;刘淑莹【作者单位】中国科学院长春应用化学研究所,长春质谱中心,长春130022;中国科学院研究生院,北京100039;吉林省人参科学研究院,长春130117;中国科学院长春应用化学研究所,长春质谱中心,长春130022;吉林省人参科学研究院,长春130117【正文语种】中文【中图分类】O657核桃(Juglans regia L)又名胡桃，系胡桃科胡桃属植物，味甘，性温．核桃营养价值很高，日常生活中除少量新鲜食用和加工成休闲食品外，大部分用于榨油，榨油剩余的残粕中含有大量的蛋白质，但残粕的利用度却很低．核桃蛋白中含有18种氨基酸，其中有8种必需氨基酸，精氨酸和谷氨酸的含量很高［1～3］．蛋白质是人体所需的重要营养素之一，在人体内以氨基酸或肽的形式被消化吸收［4］．因此，充分利用好核桃蛋白，可提高核桃产品的附加值和竞争力．在生物体内，生物大分子的氧化是一个由自由基介导的必要的生理过程．但是过量的自由基则会给细胞带来伤害甚至死亡，导致癌症、中风、糖尿病及心肌梗塞等疾病的发生［5～11］．已有研究［12］表明，食物来源的生物活性肽具有在体内清除自由基的能力，并且比合成的抗氧化剂更安全．目前，对食物蛋白质来源的酶水解物的抗氧化性研究主要集中在大豆蛋白、小麦蛋白、鹿茸和鱼等［13～16］，而对核桃蛋白水解物抗氧化性的研究报道则较少．本文以碱性蛋白酶(Alcalase 2.4 L)水解核桃蛋白，对获得的水解产物进行了葡聚糖凝胶柱和反相层析分离纯化，测定了水解物对DPPH和羟自由基的清除能力，探讨了核桃蛋白水解物的抗氧化活性;对抗氧化能力强的多肽采用LC-ESI-Q-TOF鉴定了其一级序列．1 实验部分1．1 材料、试剂与仪器核桃购自长春沃尔玛超市;碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L购自丹麦Novozymes公司;HPLC级乙腈购自美国Fisher公司;1，1-diphenyl-2-picryl hydrazyl(DPPH)，L-glutathione reduced(GSH)购自 Sigma公司．Waters Alliance 2695高效液相色谱系统;Waters 2996二极管阵列检测器;RRLC-Q-TOF 6520质谱仪(Agilent公司);ZORBAX Extend-C18色谱柱(1.8 μm，2.1 mm×150 mm，Agilent公司);多功能酶标仪(Tecan公司)．1．2 核桃蛋白酶解物的制备与分离纯化1．2．1 核桃蛋白的制备将核桃去皮粉碎过40目筛，用石油醚脱脂2次(料液体积比1∶10);用NaOH调节pH=9.0，于45℃孵育1 h，以3500 r/min转速离心30 min，取上清液调节pH=4.5后静置，以3500 r/min转速离心30 min，将沉淀用水洗至中性，冻干即得核桃蛋白．1．2．2 核桃蛋白酶解物的制备取一定量的核桃蛋白用水溶解(质量分数3%)，用0.5 mol/L NaOH调节反应体系pH=8.0，于50℃恒温振荡反应．将50℃预热的碱性蛋白酶(Alcalase 2.4 L)加入到反应体系中，启动酶解反应;反应过程中加入NaOH以维持反应体系的pH值．反应3 h后，于90℃水浴保持10 min，使酶失活;以3500 r/min转速离心30 min，上清液即为核桃蛋白酶解物．1．2．3 核桃蛋白酶解物的分离纯化将核桃蛋白酶解物用截留分子量(MWCO)为3000的超滤管进行超滤，超滤组分进行抗氧化实验．对核桃蛋白酶解物超滤后抗氧化强的组分进一步用Sephadex G-25凝胶层析柱分离纯化，收集各组分、冻干，进行抗氧化实验筛选．取Sephadex G-25纯化后抗氧化活性最强的组分进一步用HPLC纯化，收集各组分、冻干，进行抗氧化实验筛选．1．3 核桃蛋白酶解物的抗氧化活性研究1．3．1 DPPH清除能力(DRSA)实验参照文献［17，18］方法测定酶解物的DPPH清除能力，DPPH清除能力按下式计算:式中，As为蛋白酶解物的吸光度;Ab为样品背景的吸光度(不加DPPH);Ac为对照管的吸光度(水代替样品)．1．3．2 羟基自由基(·OH)清除能力(HRSA)实验参照文献［18，19］方法测定酶解物的羟基自由基清除能力，羟自由基清除能力按下式计算:式中，As为蛋白酶解物的吸光度;A1为损伤管的吸光度(水代替样品);A0为未损伤管的吸光度(水代替双氧水)．1．3．3 还原力的测定参照文献［19］方法，以酶解物还原三价铁为二价铁，用铁氰化钾检测二价铁，溶液在500 nm处有吸收，吸光度值与还原力成正比．1．4 核桃蛋白酶解多肽的序列鉴定将HPLC纯化后抗氧化活性最强的组分先用UPLC测定其纯度，再用LC-ESI-Q-TOF手段鉴定肽段的一级序列．UPLC条件:流动相A为超纯水［含0.1%甲酸(体积分数)］，流动相B为乙腈;梯度洗脱:5%～50%B(0～14 min);柱温30℃;流速0.3 mL/min;进样量10 μL．测序色谱条件:流动相A为超纯水［含0.1%甲酸(体积分数)］，流动相B为乙腈;梯度洗脱:5%～70%B(0～20 min)，70%B(20～25 min);柱温30℃;流速0.3mL/min;进样量10 μL．测序质谱条件:电喷雾正离子电离模式，质量扫描范围m/z 50～2000，气体温度350℃，干燥气流速9 L/min，喷雾气压0.28 MPa，毛细管电压3.5 kV，裂解电压150 V，锥孔电压65 V．利用Peaks Viewer 4.5软件(Bioinformatics Solutions Inc．)和手动计算相结合的方式鉴定多肽序列．2 结果与讨论2．1 核桃蛋白酶解物的分离与纯化利用超滤管超滤核桃蛋白酶解物后，用DPPH清除实验及羟基自由基清除实验来检测酶解物分子量分别大于和小于3000的组分的抗氧化活性．结果表明，酶解物分子量小于3000的组分具有更强的抗氧化能力，故取此组分进行下一步分离纯化．经Sephadex G-25分离纯化共获得4个主要洗脱峰F1，F2，F3和F4［图1(A)］;经抗氧化实验［图1(B)］发现F2具有更强的抗氧化活性．收集F2组分，冻干后进一步利用HPLC纯化［图2(A)］，发现F2-5抗氧化活性最强，多次收集，冻干．Fig．1 Separation of antioxidant peptides from active fraction of walnut protein hydrolysates after ultrafiltration by Sephadex G-25 gel filtration chromatography(A)and DRSA，HRSA of the eluted peaks(B)All the results are triplicates of mean±SD in(B)．Fig．2 RP-HPLC chromatography of antioxidant peptides from gel chromatography fraction 2(A)and DRSA，HRSA of the eluted peaks(B)All the results are triplicates of mean±SD in(B)．2．2 核桃蛋白酶解物的抗氧化活性DPPH自由基清除能力测定是一种常见的筛选和评价抗氧化剂活性的有效方法．DPPH是一种较为稳定的自由基，分子结构中有未成对电子，其乙醇溶液呈蓝紫色，在517 nm处有最大吸收值．当未成对电子被其它自由基电子配对后，吸收值降低，其褪色程度与所接受的电子数呈定量关系．当与抗自由基活性物质反应时，溶液颜色变浅，吸收值降低．吸收值越低表明该物质的抗自由基活性越强．羟基自由基清除力的测定选用邻二氮菲法，以H2O2/Fe2+体系通过Fenton反应产生羟自由基，总反应可表示如下:邻二氮菲-Fe2+水溶液被羟自由基氧化为邻二氮菲-Fe3+后，其515 nm吸收峰明显降低，根据以上原理，可以A515 nm变化反映羟自由基的氧化作用．图1(B)和图2(B)分别为核桃蛋白酶解物经过Sephadex G-25纯化后的4个组分(F1，F2，F3和F4)和组分F2经过HPLC分离纯化后各组分的DPPH和羟基自由基清除力测定结果．图1(B)显示，4个组分均具较好的DPPH和羟基自由基清除力，其中F2的抗氧化能力最强．图2(B)显示，F2-5的DPPH和羟基自由基清除力最强，收集多次冻干，分别用于测定还原力实验和多肽序列．Fig．3 Reducing power abilities of peptide F2-5，GSH and BHT used at different concentrationsAll the results are triplicates of mean±SD．图3为组分F2-5、阳性对照还原型谷胱甘肽(GSH)及二丁基羟基甲苯(BHT)的还原力实验结果．样品的抗氧化能力与还原力密切相关［14，19］，还原力越强则吸光度值越大．随着F2-5、谷胱甘肽和二丁基羟基甲苯浓度的增大，还原力逐渐增强;当F2-5浓度为1 mg/mL时还原力达到1.5，与谷胱甘肽相当，说明F2-5具有较好的还原力．2．3 核桃蛋白酶解多肽的序列鉴定将F2-5冻干样品用水溶解，先用液相色谱测定其纯度，结果显示谱图中(图4)只有1个峰，可见其为纯品;再利用液相色谱-质谱进行序列鉴定．MS/MS图谱利用专业软件Peaks的de novo功能进行分析，所得结果再手动计算确认，结果如图5所示．F2-5的氨基酸序列为 Ala-Gly-Gly-Ala．Chen等［6，20］和Sampath等［16，21］指出，活性肽中疏水性氨基酸有利于增加脂溶性，抑制油脂的氧化;甘氨酸的侧链只有1个氢原子，多肽骨架具有较高的灵活度，有利于增加多肽的抗氧化能力［22］，故本文中的活性肽也具有一定的抗氧化活性．Fig．4 RP-UPLC chromatogram of fraction F2-5Fig．5 MS/MS spectrum of the purified F2-53 结论核桃蛋白质通过碱性蛋白酶水解后得到的酶解物具有较强的抗氧化活性;经过多步分离纯化后得到多肽Ala-Gly-Gly-Ala，其还原力和谷胱甘肽相当．本文为进一步研究核桃多肽的抗氧化机理及核桃的深加工提供了一定的理论和实验依据，为核桃作为抗氧化的保健品及药品食品添加剂的开发提供了思路．参考文献【相关文献】［1］Martínez M．L．，Labuckas D．O．，Lamarque A．L．，Maestri D．M．，J．Sci．Food Agric．，2010，90(12)，1959—1967［2］ Blomhoff R．，Carlsen M．H．，Andersen L．F．，Jacobs D．R．Jr．，Br．J．Nutri．，2006，96，s52—s60［3］ Carvalho M．，Ferreira P．J．，Mendes V．S．，Silva R．，Pereira J．A．，Jerónimo C．，Silva B．M．，Food Chem．Toxicol．，2010，48(1)，441—447［4］ Szetao K．W．C．，Sathe S．K．，J．Sci．Food Agric．，2000，80(9)，1393—1401［5］ Butterfield D．A．，Castenga A．，Pocernich C．B．，Drake J．，Scapagnini G．，Calabrese V．，J．Nutr．Biochem．，2002，13，444—461［6］ Chen C．，Chi Y．，Zhao M．，Lv L．，Amino Acids，2012，43，457—466［7］ Rajamani K．，Manivasagam T．，Anantharaman P．，Balasubramanian T．，Somasundaram S．T．，J．Appl．Phycol．，2011，23，257—263［8］ Du Q．Q．，Zhang X．，Song F．R．，Liu Z．Q．，Liu S．Y．，Chem．J．ChineseUniversities，2010，31(7)，1332—1336(杜芹芹，张旭，宋凤瑞，刘志强，刘淑莹．高等学校化学学报，2010，31(7)，1332—1336)［9］ Li C．，Yang Z．，Shen M．Y．，Yin W．T．，Li J．L．，Zhao G．F．，Shi Z．，Chem．J．Chinese Universities，2011，32(9)，2046—2061(李晨，杨征，厍梦瑶，尹文婷，李剑利，赵桂仿，史真．高等学校化学学报，2011，32(9)，2046—2061)［10］ Han L．，Du L．B．，Jia H．Y．，Tian Q．，Liu Y．，Chem．J．Chinese Universities，2011，32(5)，1013—1015(韩璐，杜立波，贾宏瑛，田秋，刘扬．高等学校化学学报，2011，32(5)，1013—1015)［11］ Liu S．，Yan J．，Li H．L．，Song F．R．，Liu Z．Y．，Liu Z．Q．，Liu S．Y．，Chem．J．Chinese Universities，2010，31(6)，1137—1142(刘舒，闫峻，李慧琳，宋凤瑞，刘忠英，刘志强，刘淑莹．高等学校化学学报，2010，31(6)，1137—1142)［12］ Li Z．H．，Gong J．J．，Zhao Y．H．，Tang J．，Food Res．Devel．，2011，32(6)，157—161(李振华，龚吉军，赵延华，唐静．食品研究与开发，2011，32(6)，157—161) ［13］ Chen H．M．，Muramoto K．，Yamacuchi F．，J．Agric．Food Chem．，1995，43，574—578［14］ Wang H．，Huang Y．B．，Gao K．X．，Sun H．，Gao Z．L．，Chem．J．Chinese Universities，2010，31(12)，2390—2395(王华，黄宜兵，高科祥，孙辉，高忠礼．高等学校化学学报，2010，31(12)，2390—2395)［15］ Yan M．M．，Qu X．B．，Wang X．，Liu N．，Liu Z．Q．，Zhao D．Q．，Liu S．Y．，Chem．J．Chinese Universities，2007，28(10)，1893—1896(严铭铭，曲晓波，王旭，刘宁，刘志强，赵大庆，刘淑莹．高等学校化学学报，2007，28(10)，1893—1896)［16］ Sampath K．N．S．，Nazeer R．A．，Jaiganesh R．，Peptides，2011，32，1496—1501［17］ Shimada K．，Fujikawa K．，Yahara K．，Nakamura T．，J．Agric．Food Chem．，1992，40，945—948［18］ You L．J．，Zhao M．M．，Regenstein J．M．，Ren J．Y．，Food Res．Int．，2010，43，1167—1173［19］ Li Y．H．，Jiang B．，Zhang T．，Mu W．M．，Liu J．，Food Chem．，2008，106，444—450［20］ Chen H．M．，Muramoto K．，Yamauchi F．，Nokihara K．，J．Agric．Food Chem．，1996，44，2619—2623［21］ Sampath Kumar N．S．，Nazeer R．A．，Jaiganesh R．，Amino Acids，2012，42，1641—1649［22］ Oyaizu M．，Japanese J．Nutri．，1986，44，307—315。

专利名称：一种富含精氨酸特征肽段的核桃蛋白酶解物及其制法和用途
专利类型：发明专利
发明人：赵谋明,王曙光,郑淋,苏国万
申请号：CN202111391067.9
申请日：20211123
公开号：CN114196718A
公开日：
20220318
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种富含精氨酸特征肽段的核桃蛋白酶解物及其制法和用途。

本发明的核桃蛋白酶解物，精氨酸特征肽段占总肽段数目的49.11‑50.13％。

所述核桃蛋白酶解物的制备方法包括以下步骤：将核桃蛋白加水适度稀释后，加入蛋白酶酶解，然后灭酶，离心，取上清液，含有富含精氨酸特征肽段的核桃蛋白酶解物；所述的蛋白酶为胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶。

本发明含精氨酸特征肽段的核桃蛋白水解物对东莨菪碱诱导的斑马鱼记忆障碍具有良好的改善作用，表明具有潜在的缓解认知和记忆损伤的功效，可用于制备改善记忆类药物或改善记忆类保健品，也可与其他保健品或食品添加剂复配使用。

申请人：华南理工大学,广州现代产业技术研究院
地址：511458 广东省广州市南沙区环市大道南路25号华工大广州产研院
国籍：CN
代理机构：广州市华学知识产权代理有限公司
代理人：郭炜绵
更多信息请下载全文后查看。