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美洲大蠊提取物对肝纤维化大鼠NF-κB和α-SMA表达的影响刘丽辉;李武;马得宏;陈一晖;王宏图;张禄;徐雪美;冉慧粉【摘要】目的：探讨美洲大蠊提取物（APA）对实验性肝纤维化组织中核转录因子-κB（NF-κB）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响，并观察 APA的抗纤维化疗效。
方法采用四氯化碳复制大鼠肝纤维化模型，同时用0．5 g/kg的APA灌胃治疗，测定血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、清蛋白（Alb）水平。
免疫组化测定肝组织中NF-κB和α-SMA表达的水平，并以光镜观察肝病理组织学改变，进行炎性活动度分级及纤维化分期。
结果APA可以降低血清中 ALT、AST和肝组织中 NF-κB、α-SMA的水平，APA组和三七丹参组与模型组相比血清中 Alb水平差异有统计学意义，用药后的肝脏细胞变性坏死及纤维化程度明显降低。
结论 APA具有一定的抗纤维化作用，机制可能与其抑制肝组织中 NF-κB和α-SMA的表达有关。
%Objective To investigate the effect of American cockroach extract on the expression of NF-κB andα-SMA in experi-mental liver fibrosis tissue,and to observe its antifibrotic efficacy.Methods The rat model of hepatic fibrosis was duplicated by car-bon tetrachloride and simultaneously given with American cockoach extract 0.5 g/kg by lavage.The level of serum alanine amin-otransferase enzyme (ALT),aspartate aminotransferase (AST)and albumin (Alb)were determined.The expression levels of NF-κB and a-SMA in liver tissue were determined by the immunohistochemical method and the liver histological changes were observed by light microscopy for conducting the grading of inflammatory activity and the fibrosis classification.Results Americancockroach extract could reduce serum ALT,AST and liver tissue NF-κBandα-SMA levels.The serum Alb level had significant difference a-mong the APA group,Pseudo-ginseng Danshen group and the model group.The degeneration and necrosis of liver cells and the fi-brosis degree after medication were significantly reduced.Conclusion The American cockroach extract has certain anti-fibrosis effect,its mechanism may be related with the inhibition of expression of NF-κB andα-SMA.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2014(000)017【总页数】3页(P2152-2154)【关键词】肝硬化;美洲大蠊提取物;大鼠;核转录因子-κB;α-平滑肌肌动蛋白【作者】刘丽辉;李武;马得宏;陈一晖;王宏图;张禄;徐雪美;冉慧粉【作者单位】昆明医科大学第一附属医院感染科，昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院感染科，昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院感染科，昆明650032;昆明医科大学第一附属医院感染科，昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院感染科，昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院感染科，昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院感染科，昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院感染科，昆明 650032【正文语种】中文在前期研究中，本课题组采用四氯化碳复制小鼠肝纤维化模型，结果表明，美洲大蠊提取物(APA)对小鼠实验性肝纤维化具有一定的保护作用，能够明显改善小鼠受损肝脏的病理形态，降低肝纤维化程度[1]。
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丹参为常用中药，《中华人民共和国药典》(2000年版，一部)规定丹参为唇形科植物丹参Salxia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎。
具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功效，其有效成分为脂溶性的二萜化合物和水溶性的酚酸类化合物。
其化学成分主要包括：丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、二氢丹参酮、水溶性成分丹参素、丹酚酸以及脂溶性成分丹参酮，另含丹参新酮及鼠尾草酚等。
二、丹参的化学成分丹参的有效成分主要分为脂溶性和水溶性两类。
脂溶性方面，现已得到40余中化合物，这些化合物可以分为两类，即丹参酮类和罗列酮类。
丹参酮类化合物多数属于二萜化合物，其中大部分是二萜醌类化合物，如丹参酮I、丹参酮Ⅱ-A、丹参酮Ⅱ-B、丹参酮Ⅲ、异丹参酮、异隐丹参酮、羟基丹参酮Ⅱ-A、二氢丹参酮I、丹参新醌甲、左旋二氢丹参酮I、丹参新醌乙、丹参新醌丙等。
另外有新的二萜醌结构的新丹参酮类化合物及其他类型的化合物，如新隐丹参酮Ⅱ，环酚乳酰胺、油酰新隐形丹参酮和油酰丹参新醌A等。
丹参的水溶性成分均具有酚酸性结构，其中最早发现的丹山素，化学名称为3，4-二羟基苯乳酸。
此后发现了一系列酚酸类化合物，命名为丹酚酸并按照英文字母排序，主要水溶性成分有丹参酚酸A、B、C、D、E、F、H、I、J，四甲基丹参酚酸C，还有迷迭香酸、紫草酸等。
丹参与黄芪配伍干预四氯化碳诱导大鼠肝损害的实验研究阎小女;王金茹;韩子岩【摘要】目的观察丹参与黄芪配伍对四氯化碳诱导的大鼠纤维化程度和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)病变活动度的干预作用及可能机制.方法 32只Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(n=2),模型组(n=6)、丹参组(n=8)、黄芪组(n=8)、丹参+黄芪组(n=8).除正常对照组外,其他四组采用四氯化碳诱导肝损害8周.8周后处死大鼠,取肝右叶组织进行HE染色和Masson染色;并进行非酒精性脂肪性肝病活动度评分(NAFLD activity score,NAS);运用IPP 6.0测肝脏胶原纤维量,胶原指标为面积(area)和积分光密度(integrated optical density,IOD).结果模型组胶原纤维面积、IOD水平较正常对照组均增高(P＜0.05),三组药物组与模型组相比胶原纤维面积、IOD水平均降低(P＜0.05).三个药物组间胶原纤维面积、IOD水平比较,丹参+黄芪组与丹参组和黄芪组相比均降低(P＜0.05),丹参组和黄芪组相比差异无统计学意义(P＞0.05).与正常对照组相比,模型组和药物组的NAS水平升高(P＜0.05),而模型组和药物组这四组间NAS水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论丹参和黄芪均有抗肝纤维化进展的作用,且两药联合效果更显著.丹参和黄芪对非酒精性脂肪性肝病的活动度无影响.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2014(045)006【总页数】4页(P450-452,545)【关键词】丹参;黄芪;肝纤维化;NAS【作者】阎小女;王金茹;韩子岩【作者单位】山西医科大学第二临床医学院消化内科,太原030001;山西医科大学第二临床医学院消化内科,太原030001;山西医科大学第二临床医学院消化内科,太原030001【正文语种】中文【中图分类】R575肝纤维化［1］是慢性肝病最重要的病理特征，是各种慢性肝病演变成肝硬化的必经病理过程，是肝硬化和肝癌进一步发展的重要环节。
柔木丹颗粒对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的治疗作用佚名【摘要】目的探讨柔木丹颗粒对四氯化碳(CCl 4)诱导的小鼠肝纤维化的治疗作用.方法将30只成年昆明小鼠随机分为对照组、肝纤维化组和柔木丹组,每组10只.肝纤维化组和柔木丹组小鼠腹腔注射含体积分数20％CCl4的橄榄油混合液5 mL·kg-1,对照组小鼠腹腔注射相同体积的橄榄油,每周2次,连续8周;第3周起,柔木丹组小鼠灌胃柔木丹颗粒4 g·kg-1,每日1次,共6周;肝纤维化组和对照组小鼠灌胃相同体积的生理盐水.实验前和末次给药后24 h(实验后)分别称各组小鼠的体质量,观察各组小鼠体质量的变化;并于取材时称小鼠肝质量,计算各组小鼠肝体比;取小鼠肝组织,进行苏木精-伊红染色和Masson染色,观察小鼠肝组织病理学变化;免疫组织化学法检测小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的定位及表达;实时聚合酶链反应检测小鼠肝组织中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白A1(COL1A1)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达;Western blot 法检测小鼠肝组织中α-SMA、TGF-β1蛋白的表达.结果实验前3组小鼠体质量比较差异无统计学意义(F=2.312,P>0.05).肝纤维化组和柔木丹组小鼠体质量增加显著小于对照组(P<0.01),柔木丹组小鼠体质量增加显著大于肝纤维化组(P<0.01).肝纤维化组小鼠肝体比显著大于对照组和柔木丹组(P<0.01),对照组与柔木丹组小鼠肝体比比较差异无统计学意义(P>0.05).肝纤维化组小鼠肝组织中α-SMA蛋白及mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.01),柔木丹组小鼠肝组织中α-SMA蛋白及mRNA相对表达量显著低于肝纤维化组(P<0.01),柔木丹组与对照组小鼠肝组织中α-SMA蛋白及mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).肝纤维化组小鼠肝组织中COL1A1和TIMP-1 mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.01),柔木丹组小鼠肝组织中COL1A1和TIMP-1 mRNA相对表达量显著低于肝纤维化组(P<0.01),柔木丹组小鼠肝组织中COL1A1和TIMP-1 mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.01).肝纤维化组小鼠肝组织中TGF-β1蛋白及mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.01),柔木丹组小鼠肝组织中TGF-β1蛋白及mRNA相对表达量显著低于肝纤维化组(P<0.01),柔木丹组小鼠肝组织中TGF-β1蛋白及mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.01).结论柔木丹颗粒可通过降低肝组织中α-SMA、COL1A1、TIMP-1及TGF-β1的表达而改善CCl 4诱导的小鼠肝纤维化.【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2019(036)001【总页数】6页(P1-6)【关键词】肝纤维化;柔木丹颗粒;四氯化碳;α-平滑肌肌动蛋白;组织金属蛋白酶抑制剂-1;转化生长因子-β1【正文语种】中文【中图分类】R657.3肝纤维化是慢性肝损伤导致的纤维生成和炎症反应过程，表现为肝细胞外基质(extracellular matrix，ECM)过度增生和异常沉积，导致肝脏的结构和功能异常，可发展为肝硬化，甚至肝癌，严重威胁人类的健康[1-2]。
丹参注射液对急性肝损伤小鼠的保护作用瞿慧;周继法【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2017(000)003【摘要】目的研究丹参注射液对四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用及其机制.方法连续7d小鼠尾静脉注射丹参注射液,继而用CCl4形成急性肝损伤,测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平,以及肝匀浆中丙二醛(M DA) 和超氧化物歧化酶(SOD)水平,并观察肝脏的形态学变化.结果丹参注射液各剂量组均能降低急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST水平,同时增高肝脏中SOD水平、抑制MDA水平,从而减轻肝损伤程度.结论丹参注射液对小鼠急性肝损伤具有明显保护作用.%OBJECTIVE To research the protective effect of Sal via Injections on acute liver injury in mice caused by carbon tetrachloride (CCl4).METH ODS After tail vein injection of Salvia Injections for seven days,the mice were given CCl4 to form acute liver injury.The levels of ALT and AST in serum were determin ed and the levels of MDA and SOD in liver homogenate were measured.The morphol ogical changes of the liver were observed.RESULTS Salvia Inje ctions could sig nificantly decrease the vitalities of ALT,AST and MDA.The level of SOD was inc reased.CONCLUSION Salvia Injections on acute liver injury in mice has obvious protective effect.【总页数】3页(P40-42)【作者】瞿慧;周继法【作者单位】南京中医药大学附属医院南京 210036;南京中医药大学附属医院南京 210036【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.三叶青提取物对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用及急性毒性实验 [J], 钟晓明;毛庆秋;黄真;魏佳平2.郁金水煎剂对四氯化碳致急性肝损伤小鼠肝细胞p53和caspase-3表达的影响及其对肝损伤的保护作用 [J], 张婉娴;朱彤彤;鲁育铭;赵丽晶;刘鹏;赵丽娟3.复方丹参注射液对实验性肝损伤小鼠的保护作用 [J], 孙沛毅4.丹参注射液对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏脂质过氧化反应的影响 [J], 王文斌;舒慧;任平5.丹参注射液对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用研究 [J], 谭靓;李珊平;吴梦茹;李明进;向家勇;袁才佳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
山丹黄参多糖对四氯化碳损伤小鼠肝形态结构和 TNF-α表达的影响俞诗源;袁静;孟茹;魏娉婷【摘要】To investigate the effects of Shandan Sphallerocarpus gracilis polysaccharide(SGP) on the liver histolomorph structure and the expression of TNF‐α protein in liver tissue injury induced by carbon tetrachloride(CCl4 ) in mice ,40 mice are gavaged with 0.2 mL SGP at different concentrations (12.5 ,25 , 37.5 g・L- 1 ) or physiological saline , and then inject intraperitoneally with doses of 0.2 mL CCl4 solution (0.2 % in olive oil ) . The body weight and liver weight are recorded , the morphologic change of the samples are observed , and the change in the expression of TNF‐α in liver tissue are determined by immunohistochemical method . Results show the body weights of CCl4 group are significantly decreased , while the liver weights are increased significantly (P < 0.01) and swelled markedly , surface is rough and presenting bright red . There are clear white fat droplets , the liver is surrounded by some white fat deposits , positive expression of TNF‐αprotein increases significantly in liver (P < 0.01) . However , the body weights in the SGP groups are significantly increased ( P < 0.01 ) , but the liver weights are significantly decreased(P< 0.05) , the liver swollen is significantly mitigated , surface is smooth , there is a little white fat droplets , no white fat deposits around the liver , positive expression of TNF‐α protein decreases significantly in liver ( P < 0.01) . All resultsindicate that CCl4 has an obvious damage effect on the liver tissue . SGP can reduce lipid composure , inhibit the swollen of the liver and excessive apoptosis of liver cell , promote liver function stability , which can reduce liver tissue damage induced by carbon tetrachloride effectively .%研究山丹黄参多糖对四氯化碳（CCl4）致小鼠肝损伤的影响．对40只小鼠先灌胃山丹黄参多糖（12.5，25，37.5 g・L －1）和等量的生理盐水，然后腹腔注射0.2％的CCl4橄榄油溶液，称量小鼠体重、肝重变化，解剖观察小鼠肝脏的形态变化，显微镜观察肝组织结构的变化，免疫组织化学法检测TNF‐α在肝组织表达的变化．研究显示， CCl4组小鼠体重明显减轻（P＜0.01），肝重明显增大（P＜0.01），肝脏明显肿胀，肝表面粗糙，有大量脂滴附着，肝脏周围亦有脂状物堆积；肝组织结构不清，细胞炎性坏死，TNF‐α蛋白阳性表达明显增强（P＜0.01）；山丹黄参多糖各组与 CCl4组相比体重显著或极显著增加（P ＜0.05或 P ＜0.01），肝重明显减小（P＜0.05），肝脏肿胀明显减轻，肝形态正常，肝脏表面脂滴减少，肝组织结构清晰，TNF‐α蛋白阳性表达明显减少（P＜0.01）．结果表明，四氯化碳对肝组织有明显的损伤效应，山丹黄参多糖具有减少脂质沉着、抑制肝脏肿胀、促进肝脏机能稳定、抑制细胞过度凋亡等作用，能有效减轻四氯化碳对肝组织的损伤．【期刊名称】《西北师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】7页(P78-84)【关键词】山丹黄参多糖;四氯化碳;小鼠;肝形态结构;TNF-α【作者】俞诗源;袁静;孟茹;魏娉婷【作者单位】西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州 730070; 西北师范大学学报编辑部，甘肃兰州 730070;西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州 730070;西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州 730070;西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州 730070【正文语种】中文【中图分类】R338.21四氯化碳(Carbon tetrachloride，CCl4)被广泛用作麻醉剂、驱虫剂、除垢剂等，在工业生产中主要用于制造二氯二氟甲烷和油漆、橡胶的溶剂等，是生产中常用的有机溶剂和民用化学品，已有研究显示CCl4刺激粘膜、麻醉中枢神经，对肝、肾有严重的损害作用，吸入高浓度的CCl4可迅速出现昏迷、抽搐，甚至造成室颤和呼吸中枢麻痹而猝死[1].黄参是多年生纯天然植物，具有重要的药用和食用价值，含有人体必需的各种氨基酸、有机酸、微量元素等[1,2]，具有抗氧化、镇咳、增强免疫等生理功能[3-5]，但山丹黄参多糖对CCl4致小鼠肝脏代谢异常是否有影响尚未见报道，为了搞清黄参多糖对CCl4致小鼠肝代谢异常的影响，笔者通过给小鼠连续灌胃山丹黄参多糖，腹腔注射CCl4橄榄油溶液，观察小鼠肝形态结构的变化，检测肝组织TNF-α表达的变化，研究山丹黄参多糖对小鼠肝损伤的影响，为临床药物损伤的治疗提供依据.山丹黄参(购自甘肃省山丹军马场)，冷冻粉碎后按1∶60的料液比蒸馏水提取，70 ℃水浴搅拌2 h，3 000 r·min-1离心(15 min)，取上清液减压浓缩，加三倍体积95%乙醇振荡后静置，3 000 r·min-1离心弃去上清液，冷冻干燥24 h至恒重，即得山丹黄参多糖，用苯酚硫酸法测得多糖含量为61.30%，用时配制成12.5，25，37.5 g·L-1山丹黄参多糖水溶液.TNF-α抗体、免疫组织化学试剂盒和显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，四氯化碳(Carbon tetrachloride，CCl4)分析纯.高速台式冷冻离心机(TGL-16M型，Beckman 美国)；旋转蒸发仪(RE52-05型，上海亚荣生化仪器厂)，光学显微镜(Olympus，FX-35WA，Japan).选昆明小鼠40只(20±2)g(兰州大学第一医学院实验动物中心提供)，随机分为对照组，CCl4组，山丹黄参多糖1,2,3组5个组，预饲养1 W后，山丹黄参多糖1，2，3组分别连续灌胃0.2mL浓度为12.5，25，37.5g·L-1的山丹黄参多糖(共28 d，每天上午10.00，下午4.00各1次)，对照组和CCl4组灌胃等量的生理盐水.CCl4组、山丹黄参多糖1,2,3组小鼠再分别腹腔注射0.2%CCl4橄榄油溶液0.2 ml(每3天1次，共9次)，正常对照组腹腔注射等量的生理盐水.小鼠灌胃或给药后，先称量检测体重，再经眼眶采血、处死，在冰袋上剖开腹腔解剖观察肝脏的形态变化，再取肝脏用生理盐水漂冼后，用电子天平称量肝脏重量. 将肝组织块入15%的福尔马林液固定，做常规石蜡包埋、切片(6 μm)，光学显微镜下观察、摄片.取上述肝组织切片脱蜡至水，微波处理修复后，按免疫组化试剂盒说明书，3%H2O2避光孵育以消除内源性过氧化酶活性，山羊血清室温孵育以封闭非特异性反应位点，滴加TNF-α一抗4 ℃冰箱过夜，室温孵育1 h，PBS冲洗，滴加生物素标记的二抗(羊抗兔IgG)37 ℃孵育30 min，滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液室温孵育，DAB显色，苏木精复染，常规脱水封片，显微镜观察检测肝组织中TNF-α的表达量.从每组免疫组织化学切片中选择形态典型的图片10张，用Image-proplus 6.0图像分析软件检测TNF-α蛋白在小鼠肝组织中阳性反应产物的平均光密度.实验数据用 SPSS 13.0进行统计分析，结果以平均值±标准差(Mean±SD)表示，两组间均数比较(CCl4组与对照组，山丹黄参组与CCl4组)采用双尾t检验，P<0.05表示差异显著，P<0.01差异极显著.山丹黄参多糖影响CCl4损伤小鼠的体重(图1).注射CCl4后CCl4组小鼠体重下降，与对照组相比差异极显著(P<0.01)；与CCl4组相比，山丹黄参多糖各组小鼠体重均又升高，其中，山丹黄参多糖2、3组与CCl4组相比差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)；山丹黄参多糖影响CCl4损伤小鼠的肝重(图2).与对照组相比，CCl4组小鼠肝脏重量极显著升高(P<0.01)；山丹黄参多糖各组小鼠肝脏重量亦有不同程度升高，但与CCl4组相比，山丹黄参多糖2、3组小鼠肝重显著降低(P<0.05).山丹黄参多糖影响CCl4损伤小鼠肝脏系数(图3).与对照组相比，CCl4组小鼠肝脏系数明显升高(P<0.01)；与CCl4组相比，山丹黄参多糖各组小鼠肝脏系数明显降低(P<0.05或P<0.01).山丹黄参多糖影响CCl4损伤小鼠肝脏的形态(图4).对照组小鼠肝脏呈棕红色，表面光滑，质地柔软，形态正常(图4：A)；CCl4组小鼠肝脏肿大，色泽血红，质地变硬且表面比较粗糙，有大量颗粒状白色脂滴，肝脏周围亦有白色油脂状物堆积(图4：B)；山丹黄参多糖各组小鼠肝脏与CCl4组相比，色泽红润，表面光滑，肝肿胀明显减轻，表面颗粒状脂滴明显减小，肝脏周围无明显油脂状物堆积(图4：C).山丹黄参多糖影响CCl4损伤小鼠肝脏的结构(图4).对照组小鼠肝脏结构完好，肝索呈辐射状排列，肝细胞结构清晰(图4：D)；CCl4组小鼠肝脏结构紊乱，肝索不清楚，肝细胞变性坏死，细胞间有大量大小不一的白色脂滴(图4：E)；山丹黄参多糖各组随浓度增高，小鼠肝索趋于清晰，细胞间脂滴消失，坏死细胞数减少，肝组织结构逐渐恢复正常(图4：F-H).免疫组织化学显示，阳性表达部位被染成棕黄色(图4：I~M)，TNF-α蛋白表达于肝细胞胞浆内.注射CCl4和灌胃山丹黄参多糖后各组小鼠肝组织都有TNF-α蛋白不同程度的阳性表达，CCl4组表达显著增加，阳性细胞数量多而密集，显色较深(图4：J)，山丹黄参多糖各组TNF-α蛋白亦有阳性表达，但与CCl4组相比阳性细胞较少，且表达量与多糖剂量呈负相关(图4：K~M).TNF-α蛋白表达的平均光密度值见表1.**P<0.01,与对照组比较(Compared with the control group)；#P<0.05，##P<0．01,与CCl4组比较(Compared with the CCl4 group)肝脏是机体内最大的消化腺，对糖、蛋白质、脂肪等代谢具有重大意义.γ球蛋以外的球蛋白、酶蛋白及血浆蛋白的生成、维持及调节及氨基酸代谢、许多维生素合成与储存等均与肝脏密切相关.CCl4进入体内后可使肝脏对胰岛素的降解能力降低，促使组织利用葡萄糖增加，造成血糖水平下降[6]， CCl4还可引起大鼠外周血T淋巴细胞比例和白细胞介素显著降低，使机体血浆总蛋白和白蛋白含量下降，造成大鼠免疫失调[8]，使小鼠体重减轻.肝脏参与产热和水、电解质的调节，肝损伤时对钠、钾、铁、磷等电解质调节失衡，肝脏微循环受到影响[7]，造成肝脏重量升高.因此，腹腔注射CCl4后，小鼠体重增长缓慢、肝脏肿大、肝脏系数增加，表明肝组织结构受到破坏造成肝内血液循环异常，导致肝脏代谢紊乱、机体免疫力下降，肝脏出现炎性浸润.山丹黄参富含人体必需的多种氨基酸、矿物质和钙、磷、铁、锌等微量元素[2]，可调节机体代谢活动、增强机体的免疫能力[5]，提高机体对氧自由基的清除能力[4]，灌胃不同浓度的山丹黄参多糖后，机体免疫力增强，微循环得到改善，增强了肝的代谢能力，从而降低了CCl4引起的肝脏炎性损伤，使得小鼠体重逐渐增加，肝脏系数比向正常水平恢复.脂肪酸分解、胆固醇与磷脂合成、脂蛋白合成等均在肝脏内进行.肝细胞胆汁的产生分泌与肝脏胆固醇合成的调节密切相关，胆汁酸是胆汁的重要成分，是脂类食物消化必不可少的物质，也是机体内胆固醇代谢的最终产物.胆汁酸随胆汁流入肠道后，约有95%被肠壁重吸收回肝脏并经肝细胞再处理后释放[8].CCl4进入机体后，引起肝细胞膜、线粒体膜、溶酶体膜等膜类结构的损伤[9]，导致肝细胞发生内质网应激，阻碍了肠肝循环，使固醇调节元件结合蛋白表达增加，造成肝细胞的脂肪变性[10,11]，并引起大鼠肝门静脉压和中心静脉压明显升高[12]，破坏肝被膜，导致部分肝被膜出血和血纤维蛋白析出及以嗜酸性白细胞为主的炎性浸润[13]，在炎症的介导下，肝细胞摄入外源性胆固醇增加，导致肝脏脂质的异常聚集[14].本研究显示CCl4组小鼠肝脏表面欠光滑，周围有白色脂状物堆积，肝脏充血肿胀，肝组织结构紊乱，肝细胞大量坏死，细胞间出现大量白色脂滴，表明CCl4在体内的代谢物影响了肝脏微循环，使胆汁酸的分泌、运输、回收等出现障碍，破坏了胆固醇的代谢平衡，导致炎症反应加剧.植物多糖可修复受损细胞，增强免疫细胞活性[15].本研究显示，山丹黄参多糖各组肝脏形态趋于正常，肿胀明显减轻，表面趋于光滑，肝脏表面脂滴明显减小减少，周围组织脂肪积累减少，肝组织坏死、细胞及胞间脂肪变性明显减少，表明山丹黄参多糖对CCl4所致的肝损伤具有保护作用，其机制可能与多糖抗氧化作用、改善肝脏微循环、增加膜类结构的稳定性、促进蛋白的正确合成与胆固醇的正常代谢有关.肿瘤坏死因子(Tumor cecrosis factor，TNF)对维持机体稳态具有重要作用，一定范围内的TNF-α可调节机体的免疫功能，而TNF-α异常分泌又是重要的炎症介质，引起局部炎症反应和器官的损害，过量的TNF表达与肝细胞坏死呈正相关[16]，TNF-α可通过脂类介质和氧自由基，诱导花生四烯酸代谢导致肝组织出血，激活巨噬细胞等方式引起肝损伤[17].CCl4进入机体后可改变细胞膜通透性，使水分及一些离子进入细胞内，导致细胞因细胞器遭到破坏而死亡[9]，由其引起的氧化损伤会刺激TNF-α的表达，进而引起肝脏中NOS活性增加，导致肝内NO含量升高，抑制线粒体呼吸，同时与氧自由基反应生成超氧化亚硝基阴离子损伤细胞，加快了肝细胞的凋亡和坏死[18,19]，所以CCl4组小鼠肝组织TNF-α的表达量增多.肝组织坏死细胞增多.植物多糖对氧化损伤细胞具有保护和修复作用，当归水提液可缓解CCl4所致的线粒体及内质网结构损伤[20]，山丹黄参多糖可能通过促进肝细胞的新陈代谢，抑制超氧自由基的形成，维持细胞的能量代谢和物质运输等途径减少TNF-α在肝组织中的表达，缓解CCl4及其代谢物对肝脏造成的损伤.。
CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质（特别是胶原）过度沉积，不是一个独立的疾病，是许多慢性肝病共同的病理过程，几乎各种慢性肝病（化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性，以及胆汁淤积性）都可以导致肝纤维化。
CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。
在肝细胞内质网中，经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后，CCl4产生了自由CCl3·及Cl，它们与肝细胞内大分子发生共价结合，可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放出Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原。
同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌I 型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化1.实验动物SPF级BablC小鼠，健康，雄性，体重为18g-20g2.实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.实验周期6W4.主要试剂CCl4（上海国药集团）5.建模方法按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液（CCl4：橄榄油=1:4）, 每3天1次，连续6W。
对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。
正常饮食饲养，观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。
完成持续给药6W后，称体重，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80℃冰箱冻存。
同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋；其余肝组织液氮冷冻-80℃保存。
6.模型评价1.大体观察：CCl4组小鼠随着给药时间延长活动逐渐减少, 精神萎糜,毛发蓬乱无光泽；大体标本显示，CCl4组肝脏与周围组织粘连明显，肝边缘圆顿，肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节。
2.肝脏指数变化：取肝脏，称质量，计算肝脏指数=肝脏重/体重，CCl4组小鼠肝脏显著高于对照组小鼠。
一、实验目的1. 了解急性肝损伤的实验方法及原理。
2. 掌握急性肝损伤动物模型的建立方法。
3. 学习观察肝损伤指标的变化，评估肝损伤程度。
4. 探讨不同药物对急性肝损伤的保护作用。
二、实验原理急性肝损伤是指由多种因素导致的肝脏急性损伤，如药物、毒素、酒精等。
本实验采用CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型，通过观察肝功能指标的变化，评估肝损伤程度，并探讨不同药物对急性肝损伤的保护作用。
三、实验材料1. 实验动物：ICR小鼠，体重18-22g，雌雄不限。
2. 试剂与仪器：CCl4、橄榄油、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）试剂盒、酶标仪、离心机等。
四、实验方法1. 实验分组：将60只ICR小鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型组、阳性对照组、药物高剂量组、药物中剂量组和药物低剂量组。
2. 建立急性肝损伤模型：除正常对照组外，其余各组小鼠按20mg/kg剂量腹腔注射CCl4橄榄油溶液，正常对照组注射等体积的橄榄油。
3. 给药：阳性对照组给予联苯双酯（200mg/kg），药物高、中、低剂量组分别给予不同剂量的药物，正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水。
4. 样本采集：给药后24小时，各组小鼠眼球取血，分离血清，测定ALT、AST和TBIL。
5. 数据处理：采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，组间比较采用单因素方差分析。
五、实验结果1. 各组小鼠ALT、AST和TBIL水平比较：与正常对照组相比，模型组ALT、AST和TBIL水平显著升高（P<0.01）；与模型组相比，阳性对照组和药物高、中、低剂量组ALT、AST和TBIL水平均显著降低（P<0.01）。
2. 药物对急性肝损伤的保护作用：与模型组相比，药物高、中、低剂量组ALT、AST和TBIL水平均显著降低，且呈剂量依赖性。
六、实验结论1. 本实验成功建立了CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型。
