温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响

温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响【目的】通过本实验，观察影响酶促作用的一些因素。

【原理】唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解，生成分子大小不同的糊精及最后水解成麦芽糖。

淀粉及糊精遇碘各呈不同的颜色反应。

直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色，糊精按分子的大小遇碘可呈蓝色、紫色，睛褐色和红色。

最小的糊精和麦芽糖遇碘不显色。

根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。

由于在不同温度、不同酸碱度下，唾液淀粉酶的活性高低不同，所以淀粉被水解的程度也不一样。

另外，有些物质可作为激活剂，能提高酶活性，有些物质可作为抑制剂，能降低酶活性，也能影响淀粉被水解的程度。

因此、通过与碘产生的颜色反应判断淀粉被水解的程度，了解温度、pH，激活剂和抑制剂对酶促作用的影响。

【试剂】1、1％淀粉溶液配制取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水80毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升。

2、稀释唾液制备将痰咳尽，用水漱口，再含蒸馏水30毫升，作咀嚼运动，2分钟后吐入烧杯中，再用滤纸过滤后待用。

3、不同PH缓冲液（1）PH6.8缓冲液用0.2M磷酸二氢钠溶液772毫升，0.1M柠檬酸溶液485亳升，混合即得。

（2）pH5.0缓冲液取0.2M磷酸氢二钠溶液515毫升，0.1M柠檬酸溶液485毫升，混合即成。

（3）pH8.0缓冲液取0.2M磷酸氢二钠溶液972毫升，0.1M柠檬酸溶液28毫升，混合即成。

4、0.9％NaCl溶液。

5、0.1％CuSO4溶液。

6、0.1％Na2SO4溶液。

【器材】10×100毫米试管、恒温水浴、沸水浴、水浴、蜡笔。

【操作】一、温度对酶促作用的影响1、取试管三支，用蜡笔编号，每管各加入pH6.8缓冲液20滴，1％淀粉10滴。

2、将第一管放入37℃恒温水浴，将第二管放入沸水浴，将第三管放入冰浴。

3、放置5分钟后，分别向各管加入稀唾液5滴，再放回原处。

4、10分钟后，分别向各管滴加碘液1滴，观察三管中颜色的区别，说明温度对酶促作用的影响。

激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
影响酶作用的因素：影响酶促反应的因素常有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度、抑制剂、激活剂等。

其变化规律有以下特点：
1、酶浓度对酶促反应的影响：在底物足够，其它条件固定的条件下，反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其它不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。

2、底物浓度对酶促反应的影响：在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而加快，反应速度与底物浓度近乎成正比，在底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速度也随之加快，但不显著，当底物浓度很大且达到一定限度时，反应速度就达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应也几乎不再改变。

3、酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。

氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂，激活剂使酶的活性升高，抑制剂使酶活性降低。

注意事项：
激活剂和抑制剂对于酶活性的影响，常常分不清激活剂，因为加入蒸馏水、NaCl、Na2SO4这3支试管的颜色一致，都是黄色。

出现这种现象的原因是酶活性太高了，需要稀释唾液，唾液稀释至加入蒸馏水的试管呈浅红色即可。

这样一来，这3支试管的颜色分别是浅红、黄、浅红，就可以断定Cl-是激活剂。

偶尔也有分不清抑制剂的就是加入蒸馏水、CuSO4、
Na2SO4这三支试管的颜色一致，都是蓝色。

因为酶活性太低，需要提高酶活性，只要重新制备唾液淀粉酶就行（但是新酶的活性不可太高，否则又分不清激活剂）。

最后3支试管的颜色应该是浅红、蓝、浅红，可以断定Cu2+是抑制剂。

影响酶活性的条件
影响酶活性的条件有：
pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂的条件影响。

影响酶活性的因素，一定会影响酶促反应的速率，但影响酶促反应的速率的因素不一定影响酶的活性，这是易忽略点也是易错点。

pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率。

酶的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性，但可以影响酶促反应的速率。

酶活性的简介：
酶活性也称酶活力，是指酶催化一定化学反应的能力。

酶活力的大小可以用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的转化速率来表示，即酶催化的转化速率越快，酶的活力就越高。

反之，速率越慢，酶的活力就越低。

所以，测定酶的活力就是测定酶促转化速率。

酶转化速率可以用单位时间内单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。

酶活力的测定既可以通过定量测定酶反应的产物或底物数量随反应时间的变化，也可以通过定量测定酶反应底物中某一性质的变化，如黏度变化来测定。

通常是在酶的最适pH值和离子强度以及指定的温度下测定酶活力。

（一）、溫度、PH對酶活性的影響一、實驗目的了解溫度對酶活性的影響。

了解酶活性的最適PH及掌握一種檢測最適PH的方法。

二、實驗原理三、實驗步驟1、溫度對酶活性的影響取3支試管，編號后按下表加入試劑試管編號試劑1230.2%淀粉溶液 1.5 1.5 1.5稀釋唾液/ml11無煮沸過的稀釋唾液/ml無無1搖勻后，將1、3號兩試管放入37攝氏度恒溫水浴中，2號試管放入冰水中。

10min后取出，將2號試管內的液體分為兩半，用碘化鉀-碘溶液來檢驗1、2、3號試管內淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。

將2號試管剩下的一半溶液放入37GAGGAGAGGAFFFFAFAF攝氏度水浴中繼續保溫10min后，再用碘液檢驗，結果如何？記錄并解釋結果。

注意事項：1、唾液制備時，先用蒸餾水漱口，以清除食物殘渣，再含一小口蒸餾水，0.5~1min后，使其流入量筒，并稀釋到50ml。

2、PH對酶活性的影響取4個標有號碼的20ml試管。

用吸管按下表添加0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液和0.1mol/L檸檬酸溶液以制備PH=5.0~8.0的4種緩沖液。

試管編號試劑12340.2mol/L磷酸氫二鈉/ml 5.15 6.057.729.720.1mol/L檸檬酸/ml 4.85 3.95 2.280.28PH5 5.8 6.88從4個試管中各取緩沖液3ml，分別注入到4支帶有號碼GAGGAGAGGAFFFFAFAF的試管中，隨后于每個試管中添加0.5%淀粉溶液2ml和稀釋唾液2ml。

向各試管中加入稀釋唾液的時間間隔分別為1min。

將各試管內容物混勻，并依次置于37攝氏度恒溫水浴中保溫。

第四管加入唾液2min后，每隔1min由第二管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘化鉀-碘溶液，檢驗淀粉的水解程度。

待混合液變為棕黃色時，向所有試管中依次添加1或2滴碘化鉀-碘溶液。

添加碘化鉀-碘溶液的時間間隔從第一管起，均為1min。

觀察各試管內容物呈現的顏色，分析PH對唾液淀粉酶活性的影響。

温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响一、实验目的酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。

通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。

二、实验原理酶的化学本质是蛋白质。

凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性。

此外，温度、pH和抑制剂、激活剂对酶的活性都有显著的影响。

酶的活性通常是用测定酶作用基质在酶作用前后的变化来进行观察的。

本实验用唾液淀粉酶作用的基质—淀粉，被唾液淀粉酶分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物的变化来观察该酶在各种环境条件下的活性。

淀粉被酶水解的变化，可以借遇碘呈不同颜色来观察。

淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。

三、试剂1.0.5%淀粉溶液称取可溶性淀粉0.5g加蒸馏水少许搅拌成糊状，然后用煮沸的;1%氯化钠溶液稀释至1Ooml。

2.碘化钾一碘溶液取碘化钾2g及碘1.27g溶解于2OOml蒸馏水中，使用前用蒸馏水稀释5倍。

3.1%尿素溶液。

4.奈斯勒试剂(见实验二十二)5.1%CuSO4溶液台秤称取CuSO4•5H2O， 1g用蒸馏水溶解至1OOml。

6.磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液pH5.0-8.0:A. 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液称35.62gNa2HPO4·2H2O用蒸馏水溶解后，定容至10OOml。

B. O.lmol/L柠檬酸溶液称取19.21g无水柠檬酸，用蒸馏水溶解后定容10OOml。

用A、B两液，按附录五，配制pH5.O、pH6.2、pH6.8、pH7.4、pH8.0各lOml。

7.0.5%NaCl溶液。

8.唾液淀粉酶制备每人用自来水漱口3次，然后取20m1蒸馏水含于口中，半分钟后吐入烧杯中，纱布过滤，取滤液lOml，稀释至2Oml为稀释唾液，供实验用。

9.脲酶提取液取黄豆粉6g，加30%乙醇250ml，振摇lOmin，过滤，滤液供实验用。

实验六淀粉酶的专一性和温度、pH、激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验类型：验证型目的和要求1.通过本实验观察、验证酶的专一性和温度、pH、激动剂及抑制剂对酶活性的影响。

2.熟悉淀粉及其酶解产物的特殊显色方法；电热恒温水浴的使用。

3.了解唾液淀粉酶的收集与预处理。

原理酶具有高度专一性，一种酶只能催化一种或一类底物发生反应，如淀粉酶只能水解淀粉，不能水解蔗糖。

当淀粉被淀粉酶彻底水解为还原性麦芽糖和葡萄糖时，能使班氏试剂的Cu2+还原成Cu1+，生成砖红色Cu2O沉淀。

淀粉酶的活性受温度、pH、激动剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素影响，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。

不同程度的水解糊精可与碘反应生成紫色、棕色或红色络合物。

通过上述特征性反应，并以蔗糖等作对照，便可观察、验证淀粉酶是否具有专一性以及它的催化活性是否受到影响。

操作方法一、唾液淀粉酶的收集与处理1.制备唾液实验者先将痰咳尽，用自来水漱口，以清除口腔内食物残渣，再在口腔内含蒸馏水约15ml，并作咀嚼咕漱运动，3分钟后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内，过滤于小烧杯中备用，为与下面稀释唾液相区别，此称制备唾液。

2.煮沸唾液取上述唾液约2ml，盛入1中号试管中,置沸水浴煮沸5分钟备用。

3.稀释唾液调整唾液淀粉酶活性，使之在pH6.8、37℃和既无激动剂又无抑制剂条件下，作用5min，水解淀粉至红色糊精为宜。

具体做法是取12凹白瓷反应板一块，按下列步骤操作：①第1排每凹各加1滴制备唾液，12、13、14凹分别加生理盐水1、2、3滴，用滴管采用抽吸法，由稀到浓（14→12）小心混匀各凹，勿使溅入相邻凹中。

每混匀一凹便取其1滴放入同列的2排凹中，剩余稀释唾液应全部放回原凹中。

②在盛有不同稀释度唾液的第2排各凹中，均加入4滴缓冲液（pH6.8），2滴1%的淀粉液和2滴蒸馏水，用①混匀法充分混匀，置37℃下5min。

③在第2排各凹中加I液一滴，混匀，观察比较各凹颜色，以浅棕-红色对应的稀释倍数，用生理盐水稀释3ml制备唾液备用。

温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响（间接碘量法）（effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme）一、目的1.了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响2.学习酶活性的判定二、原理酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶所催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。

酶活性大，反应速度就快。

反之则慢。

酶促反应速度受多种因素的影响。

如温度、pH、激活剂、抑制剂等。

本实验是观察在不同温度，pH，以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾液淀粉酶的活性大小。

借以验证各种因素对酶活性的影响。

唾液中含有唾液淀粉酶，此酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麦芽糖。

麦芽糖具有还原性。

根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量（即还原性麦芽糖的多少）判定酶活性的大小。

用碘的反滴定法测定还原物的量，还原物多，酶活性大。

具体反应如下：1、试剂成分（S、H、S试剂）：CuSO4、Na2CO3、NaHCO3、KI、KIO3、酒石酸钾钠、草酸钾。

2、判定酶活性大小的化学反应过程：Na2CO3＋2H2O —→2NaOH ＋ H2CO3CuSO4＋2NaOH —→Cu(OH)2↓＋ Na2SO45KI ＋KIO3 ＋ 3H2SO4—→3I2＋3K2SO4 ＋3H2O酶淀粉———→麦芽糖麦芽糖＋Cu++—→麦芽糖氧化产物＋Cu+ Cu+＋ I2—→Cu++ ＋ 2I-COO- 草酸钾COO-Cu++＋|—————→| >CuCOO- 防止逆反应COO-剩余I2 ＋ Na2S2O3—→2I- ＋ Na2S4O6（与淀粉呈兰色) （与淀粉无色)3、判定酶活性大小的标志酶活性大→麦芽糖多→Cu+ 生成量多→I2消耗量多→剩余I2少→Na2S2O3消耗量少酶活性越大，Na2S2O3消耗量越少。

空白实验无酶活性，因此Na2S2O3消耗量最多。

与空白实验进行对比，差值越大，说明此条件下酶活性越大。

影响酶促反应的因素——温度,ph,激活剂及抑制剂,生化实验报告(共8篇) 影响酶促反应速度的因素生化实验实验二影响酶促反应速度的因素【目的】观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

【原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。

淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。

在不同温度，不同PH值下，唾液淀粉酶活性不同，催化淀粉水解程度不一，生成的产物也就不同。

此外，激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性，影响淀粉的水解。

因此可根据在不同反应条件下，溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度，从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

淀粉I2 【操作】1. 温度对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：2. PH对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：3．激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响取4支试管，编号，按下表操作：【结果及分析】观察各管颜色变化，说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。

【实验注意事项】篇二：生化实验思考题参考答案生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么？答：生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。

从科研工作的角度选材，还应当注意具体的情况，如植物的季节性、地理位置和生长环境等，动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等，微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。

2、材料的破碎方法有哪些？答：(1) 机械的方法：包括研磨法、组织捣碎法；(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等；(3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。

实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。

间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。

影响酶催化作用的因素1．酶催化速率的表示方法：单位时间内底物的减少量或产物的生成量。

2．影响酶作用的因素及其规律。

影响酶促反应的因素常有酶的浓度、pH、温度、、底物浓度、激活剂、抑制剂等，其变化规律有以下特点：(1)温度对酶促反应的影响①在一定温度范围内酶促反应速率随温度的升高而加快；但当温度升高到一定限度时，酶促反应速率不仅不再加快反而随着温度的升高而下降。

②在一定条件下，酶活性最大时的温度称为该酶的最适温度。

见图1。

③低温影响酶的活性，但不会使酶的空间结构破坏，温度升高后，酶仍能恢复活性。

但高温会导致酶变性，使其永久失去活性。

(2)pH对酶促反应的影响①每一种酶只能在一定限度的pH范围内才有活性，超过这个范围酶就会永久失去活性。

②在一定条件下，每一种酶在某一pH时活性最大，此pH称为该酶的最适pH。

如图2表示胰蛋白酶的活性与pH的关系。

(3)底物(反应物)浓度对酶促反应的影响①在底物浓度较低时，反应速率随底物浓度增加而加快，反应速率与底物浓度近乎成正比。

②在底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速率也随之加快，但不显著。

③当底物浓度很大，且达到一定限度时，反应速率就达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应速率也几乎不再改变，原因是酶饱和了。

见图3。

(4)酶浓度对酶促反应的影响。

在底物足够、其他条件固定的条件下，反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其他不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应速率与酶浓度成正比。

见图4。

(5)酶激活剂和酶抑制剂对酶活性的影响①酶激活剂：能增强酶的活性或使非活性的酶变为活性酶，如唾液淀粉酶需要被氯离子激活后，其活性才能增强。

②酶抑制剂：能使酶的活性下降或丧失，如氰化物可以抑制细胞色素氧化酶的活性。

影响酶作用的因素：曲线分析：曲线含义的准确表述：B 点：该酶发挥催化作用的最适温度或最适pH 值AB 段：达到最适温度(pH 值)前，随着温度(pH 值)升高，酶的催化效率提高酶的最适pH 值往往随底物种类、浓度等的变化而不同，因此，并不是一个常数，只是在一定条件下才有意义。