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目前常用的检测方法
(2) 分段扩增患者及正常对照 hMSH2 、hMLH1之
cDNA,然后电泳及SSCP检测
(3)
IVSP(invitrosynthesizedprotein) 法 : 即提取 mR-
NA,反转录出cDNA,再经PCR扩增,产物进行体外转
录、翻译,电泳比较蛋白产物,根据缺陷性蛋白,再检 测其基因变化
一 HNPCC的分子机制研究 及分子病理检测
分子机制研究及分子病理检测
HNPCC 是一种常染色体显性遗传性疾病 , 其遗传学基 础为错配修复基因(mismatch repair,MMR)突变
目前已克隆出的错配修复基因有 hMLHl 、 hMSH2 、
hMSH6、hPSMl、hPSM2、hMSH3、hMSH5
HNPCC 发生的主要的分子遗传学基础是错配修复基 因的突变
检测该基因的突变是确定HNPCC的最根本的标准,具 有前瞻性作用,可以在HNPCC病人和家属未发病前 了解其发病的危险程度 ,从而进行随防 ,以发现早期 癌和预防癌。
分子机制研究及分子病理检测
常用的直接检测MMR基因突变的方法: 单链多态性分析 蛋白截断实验 变性凝胶电泳 直接测序等 各种检测的方法均不能检测出所有的 HNPCC病人
半结肠。这同散发性结直肠癌平均65岁和主要发生于左半结
肠相有所区别 （2）HNPCC病人多发生同时性或异时性结直肠癌,而且显示黏 液比例增加和肿瘤分化低,肿瘤边缘淋巴细胞增生 (3) 常有大肠以外多器官受累，如子宫内膜癌、小肠癌、泌
尿系统肿瘤、胰腺癌，胃癌等
（4）有较高的生存率,这可能与部分HNPCC病人的早期诊断有 关
非典型HNPCC临床诊断标准
三 诊断标准
另外 , 随着错配修复基因突变研究的逐渐深入 ,
发现 Amsterdam 标准将 HNPCC 家系中重要成 员—肠外肿瘤排除在HNPCC的诊断范围之外。 为此 ICG-HNPCC 于 1998 年修改了 Amsterdam 标 准 , 将肠外肿瘤包括在 HNPCC 诊断范围中 , 称
遗传性非息肉病性大肠癌
Herediary Nonpolyposis Colorectal Cancer
温州医学院附属第一医院胃肠外科
大肠癌 (colorectal 势
cancer,CRC) 是最常见的恶
性肿瘤之一 , 近年来其发病率呈上升趋 环境因素及遗传因素在其发病过程中起 重要作用
遗传因素导致的大肠癌主要有两种
率高
二 临 床 特 点
二 临 床 特 点
HNPCC是来源于DNA错配修复基因突变的常染色体
显性遗传疾病 遗传这些突变的个体一生患结直肠癌的风险为80% 与FAP不同的是HNPCC病人极少表现为腺瘤性息肉, 但显示结直肠癌的早发和转移,从而显示快速的腺
瘤到癌的的过程。
发病特点
(1) 早期发生大肠癌，其诊断年龄平均为45岁,易于发生在右
(4) 排除家族性腺瘤性息肉病(FAP)
三 诊断标准
符合 Amsterdam 标准的 HNPCC 家系 具有以下特征：
发病早 肠外肿瘤多见 肿瘤位于近段结肠 黏液腺癌多见 预后相对较好
三 诊断标准
由于 Amsterdam 标准的严格性 , 因此从其确立开始就
得到许多研究者质疑 不少国家的学者还根据地域和人种等不同特点制定 了相应的诊断标准 对于家族中出现不足3个病例的家系也同样具有 HNPCC的临床及分子特点,就此提出
家 族 性 大 肠 腺 瘤 息 肉 病 (familial adenomatous polyposis ， FAP)导致的 大肠癌,约占CRC总数的1% 遗 传 性 非 息 肉 病 性 大 肠 癌 (herediary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC), 约 占 CRC 总 数 的
分子机制研究及分子病理检测
携带hMLHl、hMSH2基因突变的人
其 在 70 岁 前 发 生 大 肠 癌 的 绝 对 危 险 为
70%～90%
其他肠外肿瘤如子宫内膜癌、卵巢癌、膀
胱癌等发生率明显升高
分子机制研究及分子病理检测
分子水平对 HNPCC 的理解有助于区别于其他散发性 大肠癌的特征,了解基因诊断在HNPCC的临床诊治 中的价值
三 诊断标准
三 诊断标准
1991 年成立了 HNPCC 国际合作组
织 (ICG-HNPCC), 并 同 时 制 定 了
HNPCC临床诊断标准,即所谓的
Amsterdam标准
Amsterdam标准
(1) 一家族中在连续 2 代人中至少有
3例大肠癌病人;
(2) 至少1例为其他2例的一级亲属;
(3) 至少1例在50岁前发病;
生。
分子机制研究及分子病理检测
MMR基因家族中各种基因在HNPCC的发病中所起
的作用不同 约在 40% ～ 70% 的 HNPCC 病人中检测到 MMR 基因 的错义、移码等突变 hMLHl 及 hMSH2 突 变 约 占 所 有 突 变 的 80%, 说 明
hMLHl 及 hMSH2 在 HNPCC 的发病中起主要作用。
MMR表达产物为错配修复蛋白,为一种核酸水解酶,在
DNA的复制过程中水解错配的碱基从而使DNA能精 确地复制,保证人类遗传的保守性和稳定性。
分子机制研究及分子病理检测
如果该基因发生突变,错配修复蛋白的表
达量就会下降、不表达或出现截短,使
DNA 的复制错误增加 , 微卫星不稳定
(MSl)而致测方法
(4) 检测突变相对集中的hMSH2的ex-on5。由
于 exon5 突变率约占 HNPCC 突变总数 10%, 可 以将exon5的PCR产物经MSeI消化,正常的产生 69nt 和 17nt 两个片段 ; 而突变者产生 39 、 30 、 173个片段
此法检查相对热点exon5较为快捷,但漏诊
目前常用的检测方法
(1) 扩增、检测其基因组DNA:
提取组织或淋巴细胞中的基因组 DNA, 利用 内含子、外显子交界处设计引物,分别扩增多个外 显子,然后进行琼脂糖电泳或SSCP。 该方法的优点是用 DNA 作模板 , 避免了 RNA 操作的繁琐与RNA酶降解的危险性,且检测完整无 遗漏。缺点是需要多对引物及多次PCR,耗资费时
