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血清总胆固醇TC测定操作规程.docx血清总胆固醇（TC）测定操作规程1. 目的本操作规程旨在规范血清总胆固醇（TC）的测定过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 原理血清总胆固醇（TC）测定通常采用酶法，通过胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化为胆甾酮和H2O2，最后利用过氧化物酶将H2O2分解为2H2O和O2，同时产生颜色变化。
颜色的深浅与血清中胆固醇含量成正比，可通过比色法测定。
3. 试剂和材料酶试剂盒（含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶等）校准品和质控品血清样本蒸馏水移液枪及吸头比色杯恒温水浴箱自动生化分析仪或分光光度计4. 操作步骤4.1 准备工作确保所有试剂和样本均已在室温下平衡至25°C。
校准生化分析仪或分光光度计至适当的波长（通常为500-550nm）。
4.2 试剂准备根据试剂盒说明书，将酶试剂混合均匀，并预热至25°C。
4.3 样本处理取适量的血清样本，避免溶血和脂血样本。
如有必要，对样本进行离心，去除沉淀物。
4.4 加样使用移液枪准确取样，将血清样本加入比色杯中。
按照试剂盒说明书，加入等量的酶试剂至每个比色杯中。
4.5 反应将比色杯放入恒温水浴箱中，保持37°C反应一定时间（通常为5-10分钟）。
4.6 比色测定将反应后的比色杯放入自动生化分析仪或分光光度计中。
读取吸光度值，并根据标准曲线计算血清总胆固醇浓度。
5. 质量控制每次测定前，使用校准品进行仪器校准。
定期使用质控品进行质量控制，确保结果的准确性和稳定性。
6. 结果记录与报告记录所有测定结果，包括吸光度值、胆固醇浓度等。
根据医院或实验室的标准操作程序，编写并发布检测报告。
7. 安全注意事项操作时应穿戴适当的个人防护装备，如手套和实验服。
避免接触试剂和样本，尤其是避免吸入和摄入。
按照当地法规处理废弃物。
8. 维护和校准定期对生化分析仪或分光光度计进行维护和校准，确保仪器的准确性。
总胆固醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。
TC是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。
测定原理：利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-胆甾烯酮和H2O2；最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。
自备仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：异丙醇50mL（自备）。
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂四：液体100μL×1瓶，4℃保存TC标准品：液体1mL×1支，0.5μmol/mL，4℃保存。
TC的提取：1、组织中TC的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，即TC待测液。
2、细胞、细菌中TC的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），即TC待测液。
3、血清（浆）等样品：直接测定。
测定操作：1. 分光光度计预热30 min，调节波长到500 nm，蒸馏水调零。
2. TC工作液的配制：临用前，吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，TC工作液置于37℃水浴10min。
用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC标准液和900μL TC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)简介：总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成。
对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。
目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。
Leagene 总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定。
双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例。
可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长。
双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 离心管或小试管2、 水浴锅或恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml 。
特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。
一般也可以用NaCl 或PBS 作为溶解总蛋白标准品的稀释液。
编号 名称TC0547 120T Storage试剂(A): 双缩脲试剂 250ml 4℃ 试剂(B): 蛋白标准 20mg RT 试剂(C): 蛋白标准配制液 5ml RT 试剂(D): 双缩脲空白试剂(备选) 100ml4℃ 使用说明书1份2、样本处理：血清、血浆样本直接取检测。
对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水比例，加入生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。
血清总胆固醇测定标准操作规程1.检验原理：（氧化酶法）血清中总胆固醇（TC ）包括游离胆固醇（FC ）和胆固醇酯（CE ）两部分。
血清中胆固醇可被脂蛋白酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA ），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠存在时，晶过氧化物酶（POD ）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
胆固醇酯+22O H −−−→−胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸 胆固醇+2O −−−−→−胆固醇氧化酶胆甾烯酮+22O H 222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD红色醌类物质+422O H 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃可保存1年。
样本应避免反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程） 5参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×38.77.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在500nm处吸光度大于0.080时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明或淡黄色液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.0808.4线性区间：试剂的线性区间为[0.5-20.0]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.0-20.0]mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用具有溯源性的标准品进行测定，实测值与标识值的相对偏差应在±10%内。
8.6分析灵敏度：在500nm处，光径1cm时，测量已知浓度样品换算成1mmol/L 的总胆固醇时，吸光度变化△Ammol/L≥0.0028.7批内精密度：CV≤4.0%8.8批间差：R≤6.0%8.9稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足1-8.7的要求。
1. 掌握血清总胆固醇测定的原理和方法。
2. 了解血清总胆固醇测定的临床意义。
3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。
二、实验原理血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是指血液中所有胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
血清总胆固醇测定是临床诊断和预防动脉粥样硬化、冠心病等疾病的重要指标。
测定血清总胆固醇的方法主要有酶法、化学比色法、荧光法等。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇，利用胆固醇氧化酶（COD）和过氧化物酶（POD）催化反应，将胆固醇氧化生成胆烷4烯3酮，再与4-氨基安替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成红色醌亚胺，通过比色法测定吸光度，从而计算出血清总胆固醇含量。
三、实验材料1. 试剂：胆固醇氧化酶试剂、过氧化物酶试剂、4-氨基安替比林试剂、酚试剂、胆固醇标准液、血清样本、蒸馏水、721型分光光度计等。
2. 仪器：恒温水浴箱、移液器、试管、试管架等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制：取一系列已知浓度的胆固醇标准液，分别加入胆固醇氧化酶试剂、过氧化物酶试剂、4-氨基安替比林试剂和酚试剂，混匀后置于37℃水浴箱中保温15分钟。
以蒸馏水为空白对照，在510nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，胆固醇浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样本测定：取血清样本，按照与标准曲线绘制相同的步骤，测定吸光度。
3. 结果计算：根据标准曲线，计算血清总胆固醇含量。
五、实验结果1. 标准曲线绘制：以吸光度为纵坐标，胆固醇浓度为横坐标，绘制标准曲线，相关系数R²=0.997。
2. 样本测定：测定血清总胆固醇含量，结果显示：血清总胆固醇为5.8mmol/L。
1. 本实验采用酶法测定血清总胆固醇，操作简便、准确度高，适合临床应用。
2. 标准曲线绘制过程中，应注意标准液的浓度范围，以保证标准曲线的线性关系。
3. 在实验操作过程中，应注意试剂的配制、仪器的校准等，以保证实验结果的准确性。
4. 血清总胆固醇测定结果对临床诊断和预防动脉粥样硬化、冠心病等疾病具有重要意义。
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中的常见项目之一，本实验旨在掌握血清总胆固醇测定的原理、方法和操作步骤，熟悉实验过程中的注意事项，并对实验结果进行准确分析和判断。
二、实验原理目前，血清总胆固醇测定常用的方法是酶法。
其原理是胆固醇酯酶（CE）将胆固醇酯水解为游离胆固醇（FC）和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）将 FC 氧化为胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的催化下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺。
在一定波长下，通过比色法测定吸光度，从而计算出血清总胆固醇的含量。
三、实验材料与设备1、材料血清样本：新鲜无溶血、无脂浊的血清。
试剂盒：包含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等试剂。
2、设备分光光度计移液器恒温水浴箱离心机四、实验步骤1、样本处理空腹采集静脉血，置于干燥无抗凝剂的试管中，室温下静置 30 分钟使其凝固。
以 3000 转/分钟离心 10 分钟，分离血清，备用。
2、试剂准备按照试剂盒说明书的要求，将试剂 R1 和试剂 R2 分别配制好，并放置于恒温水浴箱中预热至规定温度。
3、测定操作取两支干净的比色管，分别标记为空白管和测定管。
空白管中加入蒸馏水20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
测定管中加入血清样本20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
然后，向空白管和测定管中分别加入试剂R2 500μL，混匀，置于37℃恒温水浴箱中保温 10 分钟。
4、比色测定以空白管调零，在分光光度计 500nm 波长处读取测定管的吸光度值（A）。
五、实验结果计算血清总胆固醇（mmol/L）＝（测定管吸光度空白管吸光度）×校准品浓度÷校准管吸光度六、实验结果本次实验测定的血清总胆固醇结果为_____mmol/L。
总胆固醇（TC）检测试剂盒（COD-PAP双试剂比色法）总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 双试剂比色法)简介：胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C 27H 46O ，分子量为3860.65。
胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。
Leagene 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 双试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH 水解为游离胆固醇，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder 反应)。
分光光度计在500~520nm 处进行比色测定。
本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、样本处理：①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。
②细胞样本：a 、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。
b 、用PBS 或生理盐水清洗1~2次，离心，弃上清，留取沉淀。
c 、加入200~300μl 的PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W ，每次3~5s ，间隔30s ，重复3~5次。
亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。
编号名称TC1217100TStorage试剂(A): Good's 溶液Good's buffer 2×25ml-20℃ 避光显色剂活性剂、稳定剂试剂(B): COD-POD 溶液2×25ml -20℃ 避光4-氨基安替比林 CEH 、POD临用前，按A ：B=1：1混合，即为COD-PAP 工作液，4℃保存。
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®总胆固醇(TC)比色法测试盒(单试剂COD-PAP法)Total Cholesterol (TC) Colorimetric Assay Kit (Single Reagent, COD-PAP Method)产品货号：E-BC-K109-M产品规格：48T(44 samples)/96T(92 samples)检测仪器：酶标仪(495-525 nm)使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、组织的总胆固醇含量。
检测原理总胆固醇(Total Cholesterol，TC)包括游离胆固醇和胆固醇酯。
胆固醇酯可被胆固醇酯酶（cholesterol esterase，CE）水解成胆固醇和游离脂肪酸，胆固醇在胆固醇氧化酶（cholesterol oxidase，CO）的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢。
过氧化氢在4-氨基安替吡啉和酚存在时，经过氧化物酶（peroxidase，POD）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与TC含量成正比。
其检测原理如下图：提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：酶标仪（495-525 nm）、微量移液器（1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL）、恒温箱、离心机。
耗材：枪头（1000 μL、200 μL、2.5 μL）、EP管（2 mL）。
试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）、无水乙醇。
血清总胆固醇(TC)测定操作规程A1．2 原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。
醌亚胺的最大吸收在500nm 左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。
反应式如下：胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H2022H202+4－氨基安替比林+酚POD 昆亚胺+4H2OA1．3．1 受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。
妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。
注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。
对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。
A1．3．2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。
例如站立5 min 可使血脂浓度提高5％，15 min提高16％，故在采血前至少应***5min。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1 min，穿刺成功后立即松开止血带。
静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10％～15％。
A1. 3．3 抗凝剂：我国多用血清作血脂检验。
如用血浆，多主张用EDTANa2(1mg／mL)抗凝。
血清总胆固醇测定法1.实验原理胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。
醌亚胺的最大吸光度在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：CEH胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸COD胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2POD2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂8×70ml）6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L酚20mmol/L4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
总胆固醇测量方法《总胆固醇测量方法》一、前言总胆固醇是一种有机化合物，是一种重要的体内血脂代谢物质。
总胆固醇的水平测量可以推测血液中胆固醇含量，是检测脂质代谢紊乱的重要指标。
二、测量原理总胆固醇测量一般采用酶联免疫酶法，电化学发光法，比色法等测量方法进行测试，其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应，以此测定血清中总胆固醇的含量。
三、实验材料及仪器1. 操作材料：血清/血浆样本，质控品，抗原及抗体，洗涤液，酶标板，酶，3,3',5,5'-四甲基联苯胺棕榈酸根（TMB）试剂级及稀释剂，发光消除液。
2. 仪器：酶标仪、微量滴定管、离心机、分光光度计、体外诊断试剂诊断仪、热微波消解仪等。
3. 试剂：总胆固醇质控品及标准品，TMB和助剂试剂。
四、步骤1. 酶标仪的设置：在酶标仪中进行试剂和质控程序的设置，确定比色曲线，并计算相应的曲线斜率，计算相关性系数的可信度水平。
2. 加样：按试剂的操作规程，向各个试管中加入合适的血清样本、抗体和抗原。
3. 免疫反应：将各个试管放置在摇床中，摇晃3—5分钟，以使其充分混合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应。
4. 测量：将试管放入离心机进行离心，将各个试管的比色结果通过分光光度计或其他胆固醇测量仪法进行测量。
5. 校正：将质控试管的测定结果与标准值进行比较，根据结果，调节测量结果的可信度水平。
6. 报告：根据测量结果，报告总胆固醇的测定结果及可信度水平。
五、注意事项1. 在质控品、样本标记及加样时要注意完整性及准确性，以防止交叉污染等偏差。
2. 加样时，要注意充分混合，以保证实验的准确性。
3. 测量结果要经过校正后，才能确定总胆固醇的测定结果及可信度水平。
六、总结总胆固醇是检测脂质代谢紊乱的重要指标，常用的总胆固醇测量方法有酶联免疫酶法，电化学发光法，比色法等，其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应，以此测定血清中总胆固醇的含量。
北京雷根生物技术有限公司
硫酸铁铵溶液(2%)
简介：
硫酸铁铵(Ammonium ferric sulfate)又称铁铵矾、硫酸高铁铵，分子式一般为NH 4Fe(SO 4)2·12H 2O ，分子量为482.18(12水)，可用于网状纤维染色等。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
注意事项：
1、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
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编号 名称 R00435 Storage 硫酸铁铵溶液(2%) 100ml RT 使用说明书 1份
编号 名称 CS0001 ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DF0111 中性福尔马林固定液(10%) DM0007
瑞氏-姬姆萨复合染色液 PE0080
Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8) PT0013
考马斯亮蓝快速染色液 PW0040
Western blot 一抗稀释液 TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)。
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中常见的项目之一。
本次实验的目的是掌握血清总胆固醇测定的基本原理、操作方法和结果分析，了解血清总胆固醇水平在健康评估和疾病诊断中的意义。
二、实验原理目前常用的血清总胆固醇测定方法为酶法。
胆固醇酯酶（CE）首先将胆固醇酯水解为游离胆固醇和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）催化游离胆固醇氧化生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺化合物。
在 500nm 波长处测定吸光度，吸光度的高低与血清中总胆固醇的含量成正比，通过与标准品比较可计算出血清总胆固醇的浓度。
三、实验材料1、仪器分光光度计恒温水浴箱移液器离心机2、试剂胆固醇测定试剂盒（包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等）标准胆固醇溶液（浓度已知）血清样本四、实验步骤1、试剂准备按照试剂盒说明书将试剂配制成工作液，置于 37℃恒温水浴箱中预温。
2、样本处理采集空腹静脉血，离心分离血清。
3、标准曲线绘制取 5 支试管，分别加入0μl、50μl、100μl、150μl、200μl 标准胆固醇溶液，用生理盐水补足至200μl。
各管中胆固醇的浓度分别为0mmol/L、25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L。
向各管中加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
以空白管调零，在 500nm 波长处测定各管吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4、样本测定取200μl 血清样本，加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
测定样本管的吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、实验结果1、标准曲线记录各标准管的胆固醇浓度和对应的吸光度值，绘制标准曲线。
标准曲线应呈线性关系，相关系数（r）应大于 098。
总胆固醇测定试剂盒－TC （CHOD-PAP 法）说明书通用名称：总胆固醇测定试剂盒（CHOD-PAP 法）包装规格：单一试剂：4×40mL 单一试剂：5×60mL 单一试剂：2×100mL预期用途本试剂用于体外定量测定人体血清中总胆固醇的含量。
血清中TC 水平升高是冠心病的主要危险因素之一。
病理状态下，高TC 有原发与继发两类。
原发的如家族性高胆固醇血症、家族性APOB 缺陷症、混合性高脂蛋白血症。
继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病等。
〔1〕临床测定总胆固醇用于冠心病、糖尿病等的辅助诊断。
检验原理脂化的胆固醇经酯酶水解成游离胆固醇，游离胆固醇与胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、对羟基苯甲酸反应，生成红色的敖合物。
该敖合物颜色的深浅与血清中的总胆固醇的含量成正比。
通过与同样处理的标准液比较即可求出血清中的总胆固醇的含量。
主要组成成份缓冲液100mmol/L CHO（胆固醇氧化酶）≥1KU LPL（酯酶）≥1.5KU POD（过氧化物酶）≥35KU 4-AA（4-氨基安替比林）0.5mmol/L 对羟基苯甲酸3mmol/L 表面活性剂2%注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
储存条件及有效期试剂原包装2～8℃储存，有效期为18个月。
开口后的试剂在试剂仓中可稳定30天。
适用仪器日立7020、东芝-40，7600，迈瑞300、奥林巴斯AU400、东软400、7170、AU640、贝克曼LX20全自动生化分析仪。
样本要求样本应为新鲜、不溶血血清。
在2℃～8℃可存放30天。
检验方法使用全自动生化分析仪时基本参数及操作：测定温度37℃波长520nm 吸光度范围0-2A 比色杯光径 1.0cm 试剂用量300μL 样本用量3μL 测试模式终点法测定时间300秒操作流程图：试剂：300µl 标本：3µl520nm 测定0秒300秒计算方法样本浓度校准品浓度（校准）样本）=⨯A A (校准品及质控品本产品使用朗道公司的校准品、质控品已进行了性能验证。
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法) 简介：
胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C27H46O，分子量为3860.65。
胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。
用酶学方法测定总胆固醇(Total Cholesterol，TC)葡萄糖是生化检测中的常用方法，其特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。
Leagene总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。
分光光度计在处进行比色测定。
本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、生理盐水或PBS
2、离心管、小试管或96孔板
3、水浴锅或恒温箱
4、分光光度计或酶标仪
5、全自动或半自动生化分析仪编号
名称TC1217
100T
Storage
试剂(A): Good's溶液Good's buffer
2×25ml-20℃避光显色剂
活性剂、稳定剂
试剂(B): COD-POD溶液胆固醇氧化酶、激酶
2×25ml -20℃避光4-氨基安替比林
CEH、POD
临用前，按A：B混合，即为COD-PAP工作液，4℃保存。
试剂(C): TC标准(5mmol/L) 1ml-20℃避光试剂(D): ddH2O 1ml RT
使用说明书1份
操作步骤(仅供参考)：
1、样本处理：
①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。
②细胞样本：
a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。
b、用PBS或生理盐水清洗，离心，弃上清，留取沉淀。
c、加入PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3~5次。
亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。
亦可用Triton X-100冰浴，制备好的裂解液不可离心，待用。
③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆。
离心，取上清待用。
2、分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 10
TC标准(5mmol/L)(μl) 10
待测样本(μl) 10
COD-PAP工作液(ml) 1.0 1.0 1.0
②充分混匀, 37℃水浴中孵育。
③分光光度计测定吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
3、普通分光光度计(2ml比色杯)TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 20
TC标准(5mmol/L)(μl) 20
待测样本(μl) 20
COD-PAP工作液(ml) 2.0 2.0 2.0
②充分混匀, 37℃水浴中孵育。
③分光光度计测定吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
4、酶标仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白孔标准孔待测孔ddH2O(μl) 3
TC标准(5mmol/L)(μl) 3
待测样本(μl) 3
COD-PAP工作液(μl) 300 300 300
②充分混匀,水浴中孵育。
③酶标仪测定吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
5、全自动生化分析仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 3
TC标准(5mmol/L)(μl) 3
待测样本(μl) 3
COD-PAP工作液(μl) 300 300 300
②充分混匀,水浴中孵育。
③全自动生化分析仪测定波长处吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
机器参数：
主波长/次波长500/600nm
反应类型终点法
反应方向升反应(+)
计算公式：
血清、血浆等液体样本(空白调零)：
TC(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×5mmol/L
血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)：
TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L
细胞、组织等样本(空白调零)：
TC(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)
细胞、组织等样本(全自动生化分析仪)：
TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)
参考区间：
健康成年人理想范围：<5.2mmol/L(<200mg/dl)
边缘升高：<5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl)
升高：≥5.72mmol/L(≥220mg/dl)
备注：TC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl
性能指标：
外观无色至淡黄色澄清液体
线性范围0.1~13mmol/L(3.6~500mg/dl)，R2>0.95
灵敏度检测下限0.1mmol/L(3.6mg/dl)
变异系数批内<3%，批间<5%
空白吸光值<0.1(1cm光径)
干扰因素胆红素<410μmol/L；血红蛋白<7g/L；甘油
三脂<28.5mmol/L时，对结果无明细影响。
稳定性密闭，12个月
注意事项：
1、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2、本法可直接用于检测脑脊液中的TC含量，但不能直接检测尿液中的TC含量，因为未
经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应。
3、待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。
4、本法线性范围可达13mmol/L，如果样本TC浓度过高，结果可能呈假性降低。
应用生
理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
DC0032 Masson三色染色液
DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TC1243 甘油三脂(TG)检测试剂盒(单试剂GPO-PAP比色法)。
