下载文档原格式
OFT与MCV联合检测在地中海贫血产前筛查中的应用杨惠新【摘要】目的探讨红细胞渗透脆性试验(Osmotic fragility test,OFT)与平均红细胞容积检测(Mean corpuscular volume,MCV)两种方法联合使用在孕妇产前地中海贫血筛查的优越性.方法选取2010年8月至2011年10在我站产前检查的孕妇312例,抽取静脉血,独立进行OFT、MCV检测和PCR基因诊断.以PCR基因诊断为参照,对比分析OFT、MCV单项检测及联合检测的灵敏度、特异度和准确度等指标.结果地贫基因携带率为7.69％,OFT检测灵敏度高于MCV (91.67％与87.50％),OFT检测特异度低于MCV (88.54％与92.36％)；OFT和MCV平行联合检测提高检测灵敏度,系列联合检测提高特异度和准确度.结论 OFT和MCV联合检测在产前地中海贫血筛查中具有重要价值,其应用有利于预防与控制地中海患儿出生,提高优生优育服务质量.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2012(023)009【总页数】2页(P95-96)【关键词】地中海贫血;筛查;红细胞渗透脆性试验;平均红细胞容积【作者】杨惠新【作者单位】鹤山市计划生育服务站,广东鹤山 529700【正文语种】中文【中图分类】R446.11+3地中海贫血(地贫)是世界范围最常见的单基因遗传性血红素合成障碍疾病，目前国内外都无有效的治疗方法。
在我国，其发病率为3%～8%，广东、广西和海南等是高发地区。
广泛开展产前筛查，降低地贫儿出生率是降低该疾病发病率的最有效措施[1]。
为优化地贫筛查方法，本站对红细胞渗透脆性试验(Osmotic fragility test，OFT)和平均红细胞容积(Mean corpuscular volume，MCV)两种方法联合使用情况进行评价。
1.1 研究对象选取2010年8月至2011年10月到我站进行产前检查单胎妊娠孕妇为研究对象。
红细胞渗透脆性实验报告
实验目的，通过实验，观察红细胞在不同渗透压下的脆性变化，了解红细胞的渗透脆性特点。
实验原理，红细胞在不同渗透压下会发生渗透作用，当渗透压较高时，红细胞会失去水分而收缩，导致脆性增加；而渗透压较低时，红细胞会吸收水分而膨胀，脆性减小。
实验材料与方法：
1. 材料，新鲜血液、生理盐水、离心管、显微镜、玻璃片、封片、渗透压计。
2. 方法：
a. 取新鲜血液离心，得到红细胞悬液。
b. 分别用生理盐水制备不同浓度的溶液，得到不同渗透压的溶液。
c. 取一定量的红细胞悬液，分别加入不同渗透压的溶液中，放置一段时间后制作干片。
d. 在显微镜下观察红细胞的形态变化，并记录观察结果。
实验结果：经过观察，我们得出以下实验结果：
1. 在高渗透压溶液中，红细胞明显收缩，形态不规则，脆性增加。
2. 在低渗透压溶液中，红细胞膨胀，形态圆润，脆性减小。
实验分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：
1. 红细胞在高渗透压下会失去水分而收缩，导致脆性增加。
2. 红细胞在低渗透压下会吸收水分而膨胀，脆性减小。
实验结论，红细胞的渗透脆性与渗透压密切相关，渗透压较高时，红细胞的脆性增加，渗透压较低时，红细胞的脆性减小。
实验意义，通过本实验，我们深入了解了红细胞的渗透脆性特点，为进一步研究红细胞的生理功能提供了重要的实验数据和理论基础。
结语，本实验通过观察红细胞在不同渗透压下的脆性变化，深入探讨了红细胞的渗透脆性特点，对于加深我们对红细胞生理特性的理解具有重要的意义。
希望本实验能为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
[优质文档]红细胞渗透渗出脆性试验红细胞渗透脆性试验来源于:江西检验医学网红细胞渗透脆性试验red cellosmotic fragility test参考范围:开始溶血 O.40,一0.44, (NaCl液)完全溶血 O.32,一O.36, (NaCl液)临床评价:1(红细胞膜，有人称为鬼影(ghost)，是一种由磷脂、非酰化的胆固醇和糖蛋白等组成膜脂质和主体、膜蛋白质(转运蛋白和表面抗原)与周围膜蛋白质(膜骨架中的收缩蛋白和肌动蛋白以及膜骨架依靠的锚蛋白)所组成。
这些成分要保证红细胞在120天寿命内50，000次通过“急流旋涡”仍能生存;要控制Na+和K+在细胞内的浓度，任何导致K+漏出增高超过Na+的漏入，均会导致细胞内单价阳离子和水分的丢失。
这些生理功能的完善与否，可用简单且明白的膜渗透脆性试验来了解。
2(正常红细胞为双凹盘形，在低渗盐水中吸水膨胀的适应性大(可增加70,的体积而不破裂)，遗传性球形红细胞增多症(HS)等红细胞的S,V比率小，对低渗盐水的适应性小(脆性大)，所以红细胞渗透跪性试验是检测HS最有用的方法，当红细胞混悬于不同浓度的NaCl低渗溶液时，正常红细胞于O(4,一0(44,NaCl浓度时开始溶血，于o(32,一O(36,NaCl浓度时完全溶血。
HS病人的红细胞大多于0(50,一0(75,NaCl时开始溶血，于0(4,NaCl浓度时完全溶血，患者红细胞渗透脆性试验与正常对照组相比提高0.04,(NaCl液)以上即为阳性，还可见于遗传性椭圆形红细胞增多症，某些伴有球形红细胞增多的自身免疫性溶血性贫血。
3(红细胞渗透脆性试验显示，低于参考溶血的NaCl浓度可见于地中海贫血，血红蛋白C、D、E病，缺铁性贫血和肝脏疾病。
4(在试验过程中要严格控制加血量的准确性和防止血标本在体外溶血，否则易影响试验的准确性。
1(原理:悬浮于低张溶液中的红细胞，由于溶液张力差异，可使红细胞外的水渐渐进入红细胞中。
二、影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？红细胞自身因素;凡能影响红细胞表面积/体积的因素均可影响红细胞渗透脆性，如珠蛋白数量不足或完全缺乏、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多、缺铁性贫血、红细胞寿命、等实验因素：血液放置时间较长（一般不能超过6小时）、低渗盐溶液的浓度不准确、实验器具未清洁干燥、试管编号错误、向试管内滴加血液或混匀含红细胞的液体时动作用力过大、有凝血、抗凝剂用量过多、等【课前讲解】一、实验设计的原理将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压差的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。
红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。
但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性高低的指标。
对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。
同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。
将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。
前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。
生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。
等渗溶液不一定是等张溶液，如1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为0.85%的NaCl 溶液既是等渗溶液又是等张溶液。
成败关键（注意事项）1. 血液最好新鲜制备。
2. 准确配制不同浓度的低渗盐溶液。
3. 所有玻璃器皿要求干燥清洁。
4. 向试管内滴加血液时不可用力挤压，不可将血泡沫注入试管。
混匀含红细胞的液体时动作应轻，以免造成溶血。
5. 观察溶血情况时以白色为背景。
6. 为使各管加血量相同，加血时持针角度应一致。
红细胞渗透脆性试验[实验目的]：学习测定红细胞渗透脆性的方法[实验原理]：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。
放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。
将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。
开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。
对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。
[实验对象]家兔[实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。
[实验步骤]（一）低渗盐溶液的配制取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。
试管号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10试管蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25（二）枸椽酸钠血的制备家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。
[观察项目]用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。
1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。
2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。
地中海贫血实验诊断的研究进展作者：黄莲芬来源：《中外医学研究》2011年第18期【摘要】地中海贫血(thalassaemias)是人类常见的特异性隐性遗传病。
该病为单基因溶血性贫血症，在我国常见于南方人群，具有发病率高、重症患者胎儿死亡率高等特点，目前尚无彻底根治的方案。
筛选恰当的地中海贫血实验诊断方法对该病的预防具有重要意义。
本文综述了地中海贫血的实验室诊断方法，综合阐述了将筛查法和基因诊断法有机结合后统一应用，可以为地中海贫血的实验室诊断方面做出相应的贡献。
随着现代社会科学技术的日益更新，地中海贫血的多种实验室诊断检测方法层出不穷。
【关键词】地中海贫血；实验室诊断；研究进展Laboratory diagnosis of thalassemia Progress HUANG Lian-of Beihai City，Beihai 536000，China【Abstract】Mediterranean anemia(Thalassaemias)the specificity of the human common recessive genetic disease.Single gene disease hemolytic anemia, common in southern populations in China,with a high incidence of severe fetal mortality in patients with advanced features,the program is currently no complete cure. Appropriate screening method for laboratory diagnosis of thalassemia prevention of the disease is important.This paper reviews the laboratory diagnosis of thalassemia,described the comprehensive screening method and combination of genetic diagnosis after the reunification of the application for the laboratory diagnosis of thalassemia and make the appropriate contributions.With the growing science and technology of modern societyupdates,thalassemia endless variety of laboratory diagnostic tests.【Key words】Thalassemia；Laboratory diagnosis；Research地中海贫血(thalassaemias)在人类遗传病中较为常见，它指的是因珠蛋白合成肽链时受阻而引发的特异性隐性遗传病［1］。
红细胞渗透脆性的测定[目的与原理] 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。
将红细…[目的与原理]掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。
将红细胞置于等渗溶液中，其形态和容积可保持不变。
若将红细胞悬浮于低渗的NaC1溶液中，则水分进入红细胞使之膨胀甚至破裂溶解，但红细胞对低渗溶液具有一定的抵抗力，其抵抗力大小与红细胞膜脆性有关。
通常用不同浓度的NaC1溶液来测定红细胞膜的渗透脆性，红细胞膜渗透脆性大的，则对低渗NaC1溶液的抵抗力小，NaC1溶液的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶血。
反之，脆性小的则对NaC1溶液的抵抗力大，Nac1溶液的渗透压降到很低时才使这些红细胞破裂溶血。
刚能引起一部分红细胞溶解的低渗NaCl的浓度可以代表最小抵抗值；使全部红细胞溶解的NaCl浓度为最大抵抗值。
通常就以抵抗值表示红细胞的渗透脆性。
在刚成熟的红细胞，其膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。
[实验对象]鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]5毫升无菌注射器，消毒棉球，中试管，小试管，试管架，滴管，1%NaCl，蒸馏水，75%酒精，碘酒，凹瓷盘，1%肝素钠或10%草酸钾溶液，3.8% 枸橼酸钠。
[实验步骤]滴血，将试管夹在两掌心中迅速搓动，使血液与管内NaCl溶液混匀（切勿用力震荡），室温下放置2小时后观察结果。
多余血液注入盛有0.1毫升3.8% 枸橼酸钠的试管内。
加以混合，以备重复实验使用。
红细胞渗透脆性试验[实验目的]：学习测定红细胞渗透脆性的方法[实验原理]：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。
放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。
将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。
开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。
对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。
[实验对象]家兔[实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。
[实验步骤]（一）低渗盐溶液的配制取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。
蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25（二）枸椽酸钠血的制备家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。
[观察项目]用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。
1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。
2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。
