人心房肌小电导钙激活钾通道在HEK293细胞上的表达与电生理学特性

心房颤动早期阶段心房肌细胞小电导钙激活钾通道的功能改变于涛;刘影;俞晓立;林伟【摘要】目的：观察小电导钙激活钾（ SK）通道在心房颤动（ AF）早期阶段的功能变化，并探讨其意义。

方法成年比格犬分为快速心房起搏组（5只）和对照组（3只），快速心房起搏组犬经右心房快速起搏（400次/min）4 h，分离获取左心房肌细胞；对照组手术方法相同，但不进行起搏，获取左心房肌细胞；采用全细胞膜片钳技术，记录两组SK通道介导的钙激活钾电流（IK，Ca ）电流密度变化。

结果当钳制电位为-100 mV时，快速心房起搏组心房肌细胞电流密度为（-1．7±0．3）pA/pF，对照组为（-0．7±0．1）pA/pF，P＜0．01；＋80 mV 时，快速心房起搏组心房肌细胞电流密度为（4．1±0．6）pA/pF，对照组为（-1．6±0．2）pA/pF，P＜0．01。

结论 SK通道的功能上调是AF初始阶段的重要分子机制之一。

【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2014(000)028【总页数】3页(P29-31)【关键词】小电导钙激活钾通道;心房颤动;膜片钳;犬【作者】于涛;刘影;俞晓立;林伟【作者单位】广州医科大学附属第二医院，广州510260;广州医科大学附属第二医院，广州510260;广州医科大学附属第二医院，广州510260;广州医科大学附属第二医院，广州510260【正文语种】中文【中图分类】R331.3心房颤动(AF)是临床常见病，心房重构是其重要病理生理基础。

小电导钙激活钾(SK)通道是钙激活钾通道家族成员，包括3种亚型(SK1～3)，是介导细胞内Ca2+调控与细胞膜电活动的重要离子通道。

近年来发现，SK通道呈“心房选择性”分布，且与AF发生密切相关。

本课题组前期工作［1］首次证实，慢性AF患者心房肌细胞SK1、SK2亚型下调。

但在AF早期阶段，SK通道功能如何变化却存在争议。

人心房肌Kv1.5钾通道稳定表达细胞系的建立作者：赵志敬王晓斌穆润花刘毅孙冬冬李志超王海昌董明清【关键词】 ,心肌/细胞学；钾通道；细胞系【Abstract】 AIM: To establish a cell line stably expressing human cardiac Kv1.5 potassium channel. METHODS: Human cardiac hKv1.5 gene was transfected into HEK 293 cells. G418 at 1 mg/mL was used to select the transfected cells. After 2 weeks for selection, theantiG418 cell clones were further identified with patchclamp method, and whole cell currents were recorded. RESULTS: hKv1.5 gene was successfully transfected into HEK 293 cells. The expressed hKv1.5 currents were ultrarapid outward currents with obvious voltagedependence. Its average amplitude was (3.20±0.60) nA and its activation voltage was about -30 mV. CONCLUSION: The cell line stably expressing human atrial Kv1.5 channels has been successfully established, which has the similar characteristics of human atrial IKur. The established cell line can be used as a cell model for studying in vitro human atrial IKur.【Keywords】 myocardium/cytology; potassium channels; cell line 【摘要】目的：建立稳定表达人心房肌细胞Kv1.5钾通道的细胞系. 方法：将编码人心房Kv1.5钾通道的hKv1.5基因转染HEK 293细胞，用1 g/LG418筛选2 wk后采用膜片钳方法筛选具有抗G418抗性的细胞克隆，电流记录模式为全细胞记录. 结果：hKv1.5通道基因被成功转入HEK 293细胞并稳定表达；稳定表达的hKv1.5电流是具有明显电压依赖性和超快激活特点的外向电流，其电流大小为（3.20±0.60）nA，其激活电压在-30 mV左右.结论：成功构建稳定表达人心房Kv1.5钾通道蛋白的HEK 293细胞系，其电流特性与人心房肌IKur相似，可以作为体外研究人心房IKur的细胞模型.【关键词】心肌/细胞学；钾通道；细胞系0引言超快激活延迟整流钾电流（ultrarapid delayed rectifier potassium current，IKur）是心房肌细胞动作电位复极的主要外向离子流［1］. Kv1.5基因编码IKurα亚单位，是IKur的主要分子基础［2－4］，在人的心脏，IKur仅存于心房肌而不存在于心室肌. 因此，IKur是房性心律失常特异性治疗药物的潜在靶位［5-7］. 由于人心肌标本来源困难、心肌细胞多种电流成分相互影响，国内外多采用瞬时转染技术在体外表达离子通道基因来研究人心肌细胞通道功能，而有关稳定转染人hKv1.5通道的细胞系建立的研究报道较少. 我们将人hKv1.5基因转染HEK293细胞，经反复筛选鉴定，成功建立了稳定表达hKv1.5通道的细胞系，其电生理特性与人心房肌细胞IKur相似，是一种较理想的人心房肌IKur细胞模型.1材料和方法1.1材料HEK 293细胞系(American Type Culture Collection公司)；DMEM，Lipofectamine 2000，胎牛血清(Invitrogen公司)；hKCNA5/pBKCMV质粒（带G418抗性基因）由Dr.GR Li (University of Hong Kong)惠赠；G418及其它试剂均购自SigmaAldrich公司；Axopatch200B膜片钳放大器(Axon公司).1.2方法1．2．1细胞培养、基因转染及克隆筛选HEK 293细胞用含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养基于37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养，按照说明书操作步骤用Lipofectamine2000将含有hKv1.5基因的pBKCMV质粒转染至HEK 293细胞，采用G418，免疫荧光染色，膜片钳等方法筛选，鉴定稳定表达人心房肌hKv1.5钾通道蛋白的HEK 293细胞系，具体步骤如下：共转染hKv1.5基因的HEK 293细胞首先用1 g/L G418筛选2 wk，选取具有抗G418抗性的细胞克隆；用膜片钳方法逐个鉴定有无Kv1.5电流表达，将高表达目标电流的克隆在500 mg/L G418的培养液中传代培养，并通过膜片钳方法反复筛选鉴定，最后获得稳定表达Kv1.5通道蛋白的细胞克隆1个，将该克隆维持培养于含 500 mg/L G418,100 mL/L 胎牛血清的DMEM培养基中.。

一种有效记录人心房肌细胞小电导钙激活钾通道电流的方法李涛;李妙龄;雷明;谭晓秋;丁银元;杨艳;曾晓荣【期刊名称】《泸州医学院学报》【年(卷),期】2011(034)001【摘要】目的:探讨一种有效的记录人心房肌细胞小电导钙激活钾通道(small conductance Ca2+-activated K+ channels,SK)电流的全细胞膜片钳方法.方法:以人心房肌细胞为研究对象,采用传统全细胞膜片钳技术,记录人心房肌细胞的小电导钙激活钾通道的宏观电流.传统全细胞模式形成后,分别记录在浴液中加入apamin(100nM)前后的电流,两者相减就得到了apamin敏感的SK2的电流.结果:采用传统全细胞膜片钳技术,能有效记录人心房肌细胞上apamin敏感的宏观电流.该电流是内向整流,去极化激活时,无明显失活现象,无尾电流出现,这些都符合SK2电流特性.结论:本实验提供了一种简单、有效的记录入心房肌细胞SK2宏观电流的方法,为今后深入的研究提供了实验基础.【总页数】3页(P41-43)【作者】李涛;李妙龄;雷明;谭晓秋;丁银元;杨艳;曾晓荣【作者单位】泸州医学院心血管医学研究所,四川,泸州,646000;泸州医学院心血管医学研究所,四川,泸州,646000;泸州医学院心血管医学研究所,四川,泸州,646000;泸州医学院心血管医学研究所,四川,泸州,646000;泸州医学院心血管医学研究所,四川,泸州,646000;泸州医学院心血管医学研究所,四川,泸州,646000;泸州医学院心血管医学研究所,四川,泸州,646000【正文语种】中文【中图分类】R331.3.8【相关文献】1.心房肌胞内钙浓度变化对心房颤动患者小电导钙激活钾通道电流的影响 [J], 王华;李涛;张丽;李妙龄;杨艳;曾晓荣2.小电导钙激活钾通道在人心房肌细胞中的表达及功能 [J], 于涛;吴若彬;郭惠明;邓春玉;郑少忆;邝素娟3.一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法 [J], 程俊;曾晓荣;刘智飞;李鹏云;李妙龄;裴杰;杨艳4.大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录 [J], 张宇;高秀萍;李建国;郑肇青;张策5.心房颤动早期阶段心房肌细胞小电导钙激活钾通道的功能改变 [J], 于涛;刘影;俞晓立;林伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

钙激活性中电导钾离子通道在人宫颈癌组织中的表达及其在细胞凋亡和细胞周期进展中的作用刘玲;詹平;陈倩;林海蕤;任黔川;傅晓冬;聂丹;毛熙光【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2010(0)20【摘要】目的研究钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)在宫颈癌组织中的表达变化及其在宫颈癌HeLa细胞凋亡和细胞周期进展中的作用.方法应用RT-PCR技术研究18例正常宫颈组织及15例宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的表达;利用IKca1通道的阻断剂--克霉唑处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法观察细胞增殖的变化,流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期变化.结果宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为73.33%、1.14±0.45)明显高于正常宫颈组织(分别为11.11%、0.86±0.23).克霉唑以浓度和时间依赖的方式阻滞HeLa细胞的增殖,随着克霉唑农度的增加,细胞凋亡率增加,G1期细胞比率增加,细胞IKCa1mRNA的表达水平降低.结论 IKCa1的异常表达可能与宫颈癌的发生、发展密切相关,可能通过影响细胞凋亡和细胞周期进展从而参与宫颈癌的发生、发展过程.【总页数】5页(P3097-3101)【作者】刘玲;詹平;陈倩;林海蕤;任黔川;傅晓冬;聂丹;毛熙光【作者单位】泸州医学院附属医院,妇产科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属医院,妇产科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属中医院ICU,四川,泸州,646000;泸州医学院附属医院,妇产科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属医院,妇产科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属医院,妇产科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属医院,妇产科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属医院,妇产科,四川,泸州,646000【正文语种】中文【中图分类】R737.33【相关文献】1.人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道的表达 [J], 林海蕤;毛熙光;付晓东;刘玲2.钙激活性中电导钾离子通道在宫颈癌组织中的表达及其在细胞凋亡中的作用 [J], 刘玲;林海蕤;陈倩;詹平;任黔川;傅晓冬;毛熙光3.氧化应激促进AGT-REN双转基因高血压小鼠心肌中电导钙激活钾离子通道表达[J], 周骁;杨会笃;苏叶馨;赵宏跃;王丽萍4.钙激活性中电导钾离子与整合素在人宫颈组织中的表达 [J], 刘成红;金洁琼5.中电导钙激活钾离子通道在肿瘤中的作用 [J], 范凌晔因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小电导钙激活钾离子通道在心房颤动中的研究进展高阳;奚望;申华;王志农【摘要】小电导钙激活钾离子通道(small conductance Ca2+-activated K+ channels,SK通道)是广泛存在于心肌细胞中的仅受细胞内Ca2+调控的离子通道,可以调节细胞膜电位平衡.近来研究发现,SK通道参与了心房颤动(房颤)的发生与发展,有望成为房颤治疗的新靶点.该文介绍了SK通道在房颤中的研究进展及SK通道阻滞剂的临床应用前景.【期刊名称】《国际心血管病杂志》【年(卷),期】2017(044)002【总页数】4页(P96-99)【关键词】小电导钙激活钾离子通道;心房纤颤;靶向治疗【作者】高阳;奚望;申华;王志农【作者单位】200003 上海,第二军医大学长征医院胸心外科;200003 上海,第二军医大学长征医院胸心外科;200003 上海,第二军医大学长征医院胸心外科;200003 上海,第二军医大学长征医院胸心外科【正文语种】中文心房颤动(房颤)是临床常见的心律失常，是脑卒中的独立危险因素，可增加血栓及栓塞风险。

根据房颤的发作特点，可分为初发性房颤、持续性房颤、长程持续性房颤及永久性房颤[1]。

房颤的治疗主要包括射频消融及药物治疗，目的是转复窦性心律并控制心室率。

随着对房颤发生发展机制研究的逐步深入，发现小电导钙激活钾离子通道(small conductance Ca2+-activated K+ channels， SK通道)在房颤心房电重构(atrial electrical remodeling， AER)中发挥重要作用[2]，其特异性通道阻滞剂成为目前房颤基因及分子靶向治疗的研究热点[3]。

SK通道仅受细胞内Ca2+浓度调控，激活后可以调控细胞膜电流。

通过对小鼠体内注射SK通道特异性阻滞剂蜜蜂神经毒素(apamin)引起小鼠抽搐的研究，人们在脑组织中发现了SK通道。

随后在平滑肌细胞、上皮组织及血细胞中也发现了SK通道[4]。

小电导钙激活钾通道与心血管疾病（全文）心血管疾病（CVD）是全世界范围发病率和死亡率最高的疾病之一。

离子通道重构是心血管疾病发生和发展的重要因素。

小电导钙激活钾通道（SK channels）是一类对膜电位变化不敏感，而对细胞内钙离子浓度敏感的钾离子通道蛋白，其中α亚基构成孔道结构，SK通道蛋白单通道的电导值约为5~20 pS，包括SK1、SK2和SK3这三种亚型。

三种亚型在心脏中均有表达，它们在调节心血管系统的可兴奋细胞中发挥重要作用。

SK 通道蛋白在心脏电生理活动中的作用至关重要，参与形成动作电位复极化、心脏电生理重构，可能是多种心血管疾病治疗干预的重要靶点。

在此作一概述。

1. SK通道与心律失常SK通道在心脏中广泛表达，与心室相比，心房SK1、SK2通道表达更丰富，而SK3通道在心房心室表达水平相似，由于SK通道在心脏的空间分布差异，主要有利于心房复极化；在正常生理状态下，SK通道的功能重要性大于心室组织，但在心室发生病理改变时，在心室复极化中也发挥重要作用，并可能影响心脏传导系统。

近年来SK通道蛋白在心脏电生理的功能一直是人们关注和争论的话题，SK通道在心肌细胞质膜和线粒体中均有表达，激活SK通道可能抗心律失常，但也可能导致心律失常的发生，这取决于具体的临床情况，精准调控SK通道有利于心律失常等疾病的防治。

1.1房颤心房颤动（AF）是临床心律失常最常见的表现形式，以心房被快速、不规则异常激活为特征，AF的发生率随年龄增加而增加，容易导致心输出量减少、血栓、中风和心动过速引起的心脏失代偿等并发症，若得不到及时有效的控制，极易转化为永久性房颤。

房颤的进行性发展与心房电重构和结构重构相关，SK通道有利于心房动作电位复极化，对维持正常心脏功能起重要作用，因其作为房颤的潜在治疗靶点而受到广泛关注。

多项研究表明，SK电流在心房复极化中起重要作用，并参与了房颤的维持，SK通道阻滞剂可以延长心房ERP却不影响QT间期，因而SK通道阻滞剂可能成为抗AF的新型靶向治疗药物。

中电导钙激活钾通道渊IKCa通道冤在HeLa细胞中的表达及其对细胞增殖的影响范凌晔;石磊;詹平;刘玲;聂丹;毛熙光【期刊名称】《泸州医学院学报》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】Objective: To detect the expression of intermediate conductance calcium activated potassium channel in cervical cancer cell lines (HeLa), and to observe the effect of blocking IKCa channels on cell proliferation and cycle. Methods The plasmid of pGenesil-IK containing of IKCa specific shRNA fragment channel was transfected into HeLa cells. The combined use of fluorescence quantitative PCR and Western blotting were used to investigate the gene and protein expression level of IKCa channels. The effect of IKCa channels on the proliferation of HeLa cells was investigated by WST-1 and flow cytometry. Results [1] After transfection with the interference plasmid of pGenesil-IK1, IKCa channel mRNA and protein expression levels in the HeLa cells were lower than in the control group (P < 0.05). [2]The cell cycle was inhibited by transfection with the interference plasmid of pGenesil-IK1 (P < 0.05). Conclusion: IKCa channels are highly expressed in cervical cancer HeLa cells. Inhibiting expression of IKCa channel can effectively inhibit, cell proliferation of HeLa cells, which suggested that IKCa channels may be one of the targets in the treatment of cervical cancer.%目的：本研究旨在探讨中电导钙激活钾通道(IKCa通道)在宫颈癌HeLa细胞中的表达及其对细胞增殖的作用。

人胚肾(HEK293)细胞自身的钾通道李春;郭继鸿;王世强【期刊名称】《中国血液净化》【年(卷),期】2007(6)11【摘要】目的研究人胚肾(HEK293)细胞自身的电压依赖性的钾通道.方法利用全细胞膜片钳技术,记录HEK293细胞上的外向电流及其通道的电生理特点.结果HEK293细胞上未发现氯电流.59.7%的细胞表达一种类似瞬间外向钾电流(Ito)的钾电流,该电流对4-AP敏感,2mmol/L的4-AP可明显抑制此电流.在40mV时,此电流幅度为(175±112)pA.失活曲线显示其通道的半数失活电压为(-3.5±0.9)mV,斜率为(6.3±0.8)mV.该通道从失活状态中恢复的时间常数为(333.3±33.9)ms,其失活动力学曲线呈钟形.结论 HEK293细胞自身存在Ito样电流,且此电压依赖性钾通道是其自身表达的最主要的有功能的离子通道,提示在利用此广泛应用的表达系统来研究外源性离子通道的时候,应该加倍注意.【总页数】4页(P604-607)【作者】李春;郭继鸿;王世强【作者单位】100044,北京,北京大学人民医院心内科心脏电生理室;100044,北京,北京大学人民医院心内科心脏电生理室;100084,北京,北京大学生命科学学院,生物膜与膜生物工程国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.过表达MIPU1降低阿霉素所致人胚胎肾HEK293细胞的凋亡 [J], 时春丽;蒋磊;肖献忠2.地高辛抑制豚鼠心室肌细胞Na+,K+-ATP酶和人胚肾上皮细胞系HERG钾通道电流 [J], 陈秋;韩圣娜;张雨;段彦彦;张莉蓉3.罗红霉素对转染HERG基因人胚肾上皮细胞HERG钾通道的抑制作用 [J], 马新方;韩圣娜;张雨;陈秋;段彦彦;张莉蓉4.CD24在人胚肾上皮细胞Hek293中的表达及检测 [J], 敖翔;章清;武强;贺乐奇;张群峰;柯文才;彭志海5.分子伴侣Rer1参与人胚胎肾上皮细胞系HEK293T中hERG钾通道蛋白转运[J], 陈邦盛;余小玲;毛飞燕;廉姜芳;俞徐云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。