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油橄榄叶橄榄苦苷酶解制备羟基酪醇的研究概述说明1. 引言1.1 概述油橄榄叶是一种常见的植物资源，具有广泛的应用价值。
其中的苦苷酶在油橄榄叶中扮演着重要角色，具有使羟基酪醇合成的能力。
羟基酪醇作为一种重要的化合物，具有多种生物活性和药理作用。
因此，研究如何利用油橄榄叶中的苦苷酶来制备羟基酪醇具有重要意义。
1.2 文章结构本文将分为五个部分进行讨论。
首先，在引言部分我们将介绍本研究的背景和研究目的。
然后，在第二部分我们将详细探讨油橄榄叶及其苦苷酶解制备羟基酪醇的相关知识。
接下来，在第三部分我们将回顾羟基酪醇的化学性质和生物活性方面的最新研究进展。
在第四部分，我们将详细介绍实验方法，并对结果进行全面的分析与讨论。
最后，在第五部分我们将总结研究结论，并展望未来的研究方向。
1.3 目的本文旨在探究利用油橄榄叶中的苦苷酶解制备羟基酪醇的方法，并对其化学性质和生物活性进行深入研究。
通过实验方法的设计和结果分析，我们将为制备高纯度羟基酪醇提供理论依据和技术支持。
同时，我们也将探讨羟基酪醇在药物领域和其他相关领域的应用前景，并指出当前研究所面临的问题和未来研究的方向。
这些研究成果对于进一步推动油橄榄叶资源开发和羟基酪醇应用具有重要意义。
2. 油橄榄叶及其苦苷酶解制备羟基酪醇：2.1 油橄榄叶的特性和应用：油橄榄叶（botanical name: Olea europaea）是一种常见的果树，也是地中海地区最具代表性的农作物之一。
它具有浓绿色的长而狭窄的叶子，通常被人们用于食用油的生产。
油橄榄叶具有丰富的多酚类物质、苦味物质和其他生物活性成分。
油橄榄叶在医药和保健品行业中得到广泛应用。
其提取物被认为具有抗氧化、抗菌、抗炎、降血压等多种生理活性功效，并且已经被证实对心血管健康十分有益。
此外，油橄榄叶还可以作为天然食品防腐剂和美容产品中重要成分。
2.2 苦苷酶在油橄榄叶中的作用和属性：苦苷酶是一种特殊的酶，在许多植物中都存在。
橄榄苦苷的生物活性研究进展
汪浅;葛怡青;仝涛
【期刊名称】《食品工业科技》
【年(卷),期】2022(43)19
【摘要】橄榄苦苷是一种具有天然裂环烯醚萜苷骨架的多酚化合物,具有抗氧化、抗炎和抗凋亡等生物活性,可以调节机体代谢、调控基因表达、改变酶活性,从而对高血糖、高血压、高血脂、肥胖及癌症等人类常见疾病有改善效果,且对多种器官具有保护修复作用。
本文对橄榄苦苷生物活性功能的最新研究进展进行归纳总结和比对分析,以期对橄榄苦苷在食品、医疗及保健产品中的开发应用提供依据。
【总页数】8页(P479-486)
【作者】汪浅;葛怡青;仝涛
【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院;农业农村部转基因生物安全评价重点实验室(食品安全);食品质量与安全北京实验室
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.4
【相关文献】
1.油橄榄橄榄苦苷的研究进展
2.油橄榄叶中橄榄苦苷的体外抗氧化和抑菌活性
3.橄榄苦苷提取分离和药理活性的研究进展
4.橄榄苦苷对铅镉染毒大鼠外周血象和抗氧化酶活性的影响
5.龙胆苦苷和龙胆碱的生物转化和药理活性研究进展
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橄榄抗氧化物质的提取和分离技术研究橄榄是一种常见且广泛种植的果树，它被广泛用于生产食用油和食品添加剂。
橄榄富含各种抗氧化物质，如多酚、维生素E和维生素C等，这些物质对人体健康具有重要的益处。
为了最大限度地提取和分离橄榄中的抗氧化物质，研究人员一直致力于开发高效的提取和分离技术。
一种常用的提取方法是溶剂提取，它利用有机溶剂与橄榄中的抗氧化物质发生亲和性，从而将其分离出来。
通常，重要的溶剂选择包括乙酸乙酯、正己烷和乙醇等。
通过调整提取条件，如温度、时间和溶剂比例等，可以实现不同抗氧化物质的选择性提取。
溶剂提取是一种经济、简单且有效的方法，但它也有一些缺点，比如需要大量的溶剂和长时间的提取过程。
为了弥补溶剂提取的缺点，超声波提取方法被引入到橄榄抗氧化物质的提取中。
超声波提取利用超声波的机械振动和微小气泡的崩裂来增加物质的质量传递速率。
具体而言，橄榄样品被浸泡在溶剂中，并置于超声波振荡器中。
高频率的超声波波动通过产生气泡崩裂引起了样品中的局部加热和冷却，从而提高了溶质的温度和浓度分布均匀性。
超声波提取相对于传统提取方法，不仅提高了提取效率，而且缩短了提取时间，降低了溶剂消耗。
此外，超声波提取还可减少对热敏性抗氧化物质的破坏，具有较好的选择性。
除了溶剂提取和超声波提取，还有一种常用的提取方法是微波提取。
微波提取利用微波的电磁波作用于样品分子，产生分子振动和摩擦热，从而加速提取过程。
在橄榄抗氧化物质的提取中，将橄榄样品与适量的溶剂一起置于微波反应器中，通过微波加热样品溶液来实现橄榄抗氧化物质的提取。
相较于溶剂提取和超声波提取，微波提取具有更短的提取时间和更高的提取效率。
此外，微波提取还可以通过控制微波功率和提取时间来实现对不同抗氧化物质的选择性提取。
在橄榄抗氧化物质的分离中，常用的方法包括凝胶过滤、降解和色谱技术。
凝胶过滤是一种基于分子大小的分离技术，通过不同孔径的凝胶膜筛选橄榄中的抗氧化物质。
降解技术是一种通过酶或酸的作用使橄榄中的抗氧化物质发生部分降解，从而实现它们的分离。
产业科技创新 Industrial Technology Innovation34Vol.2 No.19产业科技创新 2020，2（19）：34~38Industrial Technology Innovation 油橄榄叶中有效成分提取工艺研究夏雅俊（兰州石化职业技术学院，甘肃 兰州 730000）摘要：以油橄榄叶为原料，对其主要有效成分橄榄苦苷和总黄酮的提取工艺进行研究。
以浸膏得率、浸膏中橄榄苦苷含量和总黄酮含量为评价指标，选择料液比（即溶剂体积与油橄榄叶质量的比（倍），下同）（A）、提取时间（B）和浸泡时间（C）为考察因素，采用L9（34）正交试验优选油橄榄叶有效成分的最佳提取工艺条件。
根据不同的提取目的，选择不同的评价指标会得到不同的提取工艺条件。
若以提取橄榄苦苷为目的，其最佳提取工艺为：以10倍量的φ(CH3CH2OH)=60%乙醇溶液(下同)，提取1.5 h，浸泡0 h；若以提取总黄酮为目的，其最佳工艺为：以6倍量60%乙醇溶液，提取2 h，浸泡1 h；若对三个指标采用加权分析，以综合评分为考察指标时，得到的最佳工艺条件为：以6倍量60%乙醇溶液，提取2 h，浸泡1 h。
上述优选工艺条件可为工业化生产提供参考。
关键词：油橄榄叶；有效成分；提取工艺；正交试验中图分类号：TQ461 文献标识码：A 文章编号：2096-6164（2020）19-0034-05油橄榄叶为木犀科（Oleaceae）木犀榄属（Olea）植物油橄榄（Olea europaea L.）的叶，其化学成分主要有橄榄苦苷、黄酮、游离醇、甾醇、烷烃、多酚等物质[1-8]。
研究表明，油橄榄叶提取物具有抗氧化、抗真菌、降血压、降血脂等活性[7-9]。
化物所天然产物重点实验室[3,8-12]近年来系统开展油橄榄叶化学成分、抗氧化活性、抗糖尿病活性、分析方法等研究。
其中关于油橄榄叶抗糖尿病活性研究表明：橄榄苦苷和黄酮类化合物是油橄榄叶抗糖尿病活性的物质基础。
橄榄苦苷的提取优化及其降压活性研究田志祥;冯坤苗;狄志彪;庞遵霆;韩春超【期刊名称】《中国食品添加剂》【年(卷),期】2015(000)010【摘要】目的:从油橄榄叶中制备高纯度的橄榄苦苷,并且探讨含有高纯度橄榄苦苷的橄榄叶提取物的降压作用及其机制.方法:使用70％的乙醇为溶剂进行加热回流提取,采用高效液相色谱法测定橄榄苦昔的量.利用Design Expert数据处理软件进行响应面实验设计,确定最佳提取工艺.橄榄叶提取物利用大孔吸附树脂技术和萃取技术提升橄榄苦苷的含量.使用自发性高血压大鼠为动物模型,灌胃给药橄榄苦苷提取物来观察其降压作用.结果:经过响应面分析法分析后最佳提取温度为78.29℃,提取时间为89.82min,乙醇体积为12.91mL/g,橄榄苦昔预测最高提取率为0.216mg/g.动物实验在进行2周后,给药组的血压相对模型组的血压得到了明显的降低.结论:在使用响应面软件的优化下,橄榄苦苷的提取率可以达到最高,并且发现最终得到的橄榄苦苷具有显著的降压效果.【总页数】6页(P82-87)【作者】田志祥;冯坤苗;狄志彪;庞遵霆;韩春超【作者单位】山东中医药大学药学院,济南250300;山东中医药大学药学院,济南250300;山东中医药大学药学院,济南250300;山东中医药大学药学院,济南250300;山东中医药大学药学院,济南250300【正文语种】中文【中图分类】TS202.1【相关文献】1.微波辅助提取橄榄苦苷及其抗氧化性能研究 [J], 王晓杰;黄立新;张彩虹;谢普军;邓叶俊2.响应面法优化油橄榄叶中橄榄苦苷超声辅助提取工艺 [J], 闰树军;王远;苏艳红;饶在生;李晖3.油橄榄叶提取物橄榄苦苷的酶法水解产物及其抗氧化能力的研究 [J], 王强;王仲明;谢跃杰;李园园;王波;卢赐强;赵富昌;黄梅桂4.辛癸基葡糖苷辅助提取暴马丁香中橄榄苦苷的工艺优化 [J], 王化;周丽萍;李梦莎;朱良玉;张悦5.响应面法超声辅助提取优化橄榄苦苷工艺的研究 [J], 谢普军;黄立新;张彩虹;王成章;周昊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
专利名称：一种从油橄榄叶中提取高纯度橄榄苦苷的方法专利类型：发明专利
发明人：姚静,张宪,胡伟,杨琴飞,李豫俭,曾奇祥
申请号：CN201811071086.1
申请日：20180913
公开号：CN109021042B
公开日：
20220412
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种从油橄榄叶中提取高纯度橄榄苦苷的方法，包括橄榄苦干粗品的制备和橄榄苦苷的纯化，采用乙醇水溶液浸渍，结合酶解提取和硅藻土吸附，提高浸取率，去除大部分杂质，得到粗品，再通过纯化工艺纯化。
本发明方法，提高橄榄苦干的提取率和纯度，同时满足工业化实际生产的低成本的操作简单、对设备和工艺要求低的要求。
申请人：四川奇格曼药业有限公司
地址：646100 四川省泸州市泸县经济开发区临港经济园
国籍：CN
代理机构：成都华风专利事务所(普通合伙)
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橄榄叶提取物中橄榄苦苷的分离及工艺优化概述说明1. 引言1.1 概述橄榄叶提取物是一种重要的天然药物资源，它被广泛应用于医药、保健品、化妆品等领域。
其中的活性成分橄榄苦苷被认为具有多种药理活性，包括抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
因此，分离和提纯橄榄苦苷并优化其工艺具有重要意义。
1.2 文章结构本文将探讨分离和提纯橄榄苦苷的方法，并进一步介绍现代分离技术以及工艺优化方法。
实验设计与参数调节将在第四部分中进行详细讨论，并展示分析测定指标和结果分析。
最后，在结论部分对工艺优化过程进行总结，并对未来的研究展望进行探讨。
1.3 目的本文旨在通过对目前市场上常见的传统分离方法和现代分离技术进行比较，找到一种高效且可行的工艺优化方案，以提高橄榄叶提取物中橄榄苦苷的产量和纯度。
通过文章的研究和探讨，为进一步开发橄榄叶提取物的利用价值提供理论指导和实践依据。
2. 橄榄叶提取物的重要性：2.1 橄榄叶提取物的用途：橄榄叶提取物是一种天然草药材料，在各个领域都有广泛的应用。
首先，橄榄叶提取物被广泛应用于食品工业。
由于其丰富的抗氧化剂含量，可以作为天然食品添加剂，延长食品货架期限，保持食品的新鲜度和质量，并对人体健康有益。
此外，橄榄叶提取物还被用作调味剂、色素和营养补充剂等。
其次，橄榄叶提取物在医药领域也具有重要价值。
其中最主要的活性成分是橄榄苦苷。
研究表明，橄榄苦苷具有抗菌、抗病毒、降压、抗哮喘和抗肿瘤等多种药理活性，对心脑血管疾病、癌症和炎症等疾病具有预防和治疗作用。
因此，通过对橄榄叶提取物中橄榄苦苷的分离和提纯，可以进一步研究其药理活性和开发相关药物。
此外，橄榄叶提取物还具备环保和可持续发展的特点，在化妆品、洗涤剂、农业领域等也得到了广泛应用。
由于其生物降解性和无毒性，可以作为替代传统化学合成物的天然原料，减少对环境的污染，并具有更好的安全性。
2.2 橄榄叶中的橄榄苦苷：橄榄叶中主要存在一种名为橄榄苦苷（Oleuropein）的化合物。
油橄榄叶提取物橄榄苦苷的酶法水解产物及其抗氧化能力的研究王强1,2王仲明1,2谢跃杰 1,2李园园1,2王波3姚新民4黄梅桂2,5(重庆第二师范学院生物与化学工程学院1，重庆400067）(重庆第二师范学院脂质资源与儿童日化品协同创新中心2，重庆400067)(甘肃出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心3，兰州737100)(重庆金峡油橄榄开发有限公司4，重庆404600)(南京林业大学轻工与食品学院5，南京210037）摘要：评价了木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、β-葡萄糖苷酶（A. niger）、β-葡萄糖苷酶（来自杏仁）、半纤维素酶（A. niger）、纤维素酶等7种酶对橄榄苦苷水解程度、水解产物（橄榄苦苷元、烙醇苷元、去(羧基甲基)橄榄苦苷元、去(羧基甲基)烙醇苷元、羟基酪醇）的影响，采用三价铁离子还原法、DPPH•体系对油橄榄叶提取物及其水解产物抗氧化活性进行研究，以VC、BHT、橄榄苦苷、羟基酪醇（对照品）等为对照。
结果表明：酶法辅助提取和水解处理可以显著提高产品中橄榄苦苷元、烙醇苷元、去(羧基甲基)橄榄苦苷元、去(羧基甲基)烙醇苷元、羟基酪醇的含量，其中，β-葡萄糖苷酶（A. niger）水解效果最佳。
此外，经过酶水解后油橄榄叶提取物水解液（A. niger）的还原能力明显高于VC（2.12倍）和BHT（5.95倍），其清除DPPH•的能力也高于VC（1.29倍）和BHT （3.38倍）。
结论对油橄榄叶提取物酶解制备特定水解产物的工业化生产提供了有效借鉴。
关键词：油橄榄叶；提取物；水解产物；β-葡萄糖苷酶；抗氧化能力Assessment of enzymatic hydrolysis produces and its antioxidant activities of oleuropein inolive leaf extractsWang Qiang1,2Wang Zhongmin1,2Xie Y uejie1,2LI Yuanyuan1,2Wang Bo3, Yao Xinmin4Huang Meigui2,5 (College of Biological and Chemical Engineering, Chongqing University of Education1, Chongqing 400067 ) (Cooperative Innovation Center of Lipid Resources and Children's Daily Chemicals, Chongqing University of Education2, Chongqing 400067 )(College of Light Industry and Food Science, Nanjing Forestry University3, Nanjing 210037)(Gansu Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau Central Laboratory of Technical Center4, Gansu 730010 ) (College of Light Industry and Food Science, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China)Abstract: The influence of seven different enzymes (papain, alkal i protease, neutral protease, β-glucosidase (A.基金项目：重庆市社会事业与民生保障科技创新专项（cstc2017shms-xdny80081），北京食品营养与人类健康高精尖创新中心开放基金（20171044）,重庆市创新创业示范团队支持计划（201618793）,重庆第二师范学院科技协同创新平台建设项目（2017XJPT01）收稿日期：2017-12-03作者简介：王强，男，1982年出生，副教授，抗氧化自然资源利用与生理生化通信作者：黄梅桂，女，1983年出生，副教授，食品化学niger), β-glucosidase(almonds), cellulose (A. niger) and cellulase) on oleuropein hydrolysis capacity and its hydrolysis produces (oleuropein aglycon, ligstroside aglycon decarboxymethyl oleuropein aglycon, decarboxymethyl ligstroside aglycon, and hydroxytyrosol) were investigated. The antioxidant capacities were analyzed by FRAP and DPPH• compared with VC, BHT, oleuropein and hydroxytyrosol. The hydrolysis capacity of β-glucosidase from A. niger was highest a nd selected. Further the influence of β-glucosidase from A. niger on hydrolysis produces was analyzed. The reduce power of hydrolysis produces of olive leaf extracts was higher than VC and BHT (2.12 times and 5.95 times, respectively). The DPPH• scavenging capacity of hydrolysis produces of olive leaf extracts was higher than that of VC and BHT (1.29 times and 3.38 times, respectively).Key words:olive leaf; extracts; hydrolysis produces; β-glucosidase; antioxidant中图分类号：S565.7文献标志码：A 文章编号：橄榄苦苷（oleuropein，OE）及其苷元（aglycon）是一种天然裂环烯醚萜苷类多酚化合物，广泛存在于各种木犀科的木犀榄属、丁香属、女贞属等植物中。
20世纪50年代初，OE一直被认为是橄榄油中的一种苦味素；1960年，Panizzi等[1]首次从橄榄油中苦味成分中分离出OE；1970年，Inouye 等[2]首次从女贞树提取并纯化了橄榄苦苷，并明确了OE结构，其结构中含有6个羟基（如图1所示），具有多种药理活性，近年来研究备受关注。
HOHOOO OO OOOOHOH HO HOHOOOOO OHOHOOHOOO OOHOHOOOOHOHOOHOOO图1橄榄苦苷、橄榄苦苷元Oleuropein aglycon、烙醇苷元Ligstroside aglycon、去(羧基甲基)橄榄苦苷元、去(羧基甲基)烙醇苷元的基本结构研发发现，橄榄苦苷以油橄榄及其叶中含量最高[3-5]。
油橄榄（Olea europaea L.）属木犀科（Oleaceae）木犀榄属（Olea）常绿乔木，是世界著名的木本油料兼果用树种，栽培品种有较高食用价值。
采用油橄榄提取橄榄苦苷及其苷元成本太高[3,4]。
研究发现油橄榄叶含有的抗氧化活性成分较之橄榄油更为突出，主要有橄榄苦苷、羟基酪醇（hydroxytyrosol，HT）、黄酮类、木酚素类和咖啡酰苯乙醇苷类等多酚类化合物[3-7]；油橄榄叶提取物早已被地中海地区的人们当作民间医药来治疗发烧和其他疾病如疟疾等[8]，油橄榄叶提取物具有强的抗氧化活性和抑菌活性[9]。
现代药理实验研究表明，油橄榄叶中含有丰富的活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌、抗肿瘤和降血糖等活性，并逐渐应用于医药、保健食品、化妆品等行业且应用前景广阔[8-12]。
我国甘肃陇南、重庆奉节、四川广元等地均大力推广油橄榄种植，但均缺乏除橄榄油外其它副产物的深加工和综合利用，油橄榄叶及榨油所产生的果渣和废液不仅没有得到充分利用，还造成了环境污染。
在油橄榄果生长过程中，会产生大量的副产物——油橄榄叶，每年每棵油橄榄树修剪过程就要产生超过25 kg的嫩枝和树叶。
长期以来，对油橄榄叶的利用还很不充分。
虽然国外已有将油橄榄叶提取物用于食品、药品和化妆品等行业的应用报道，国内也有一些将橄榄叶加工成茶饮料、油橄榄叶挂面等报道，但均直接利用原料叶或粗提物；对如何有效提取分离油橄榄叶中裂环烯醚萜类化合物，拓展该类化合物的应用范围，还有做大量的工作要做。
油橄榄叶中橄榄苦苷的提取方法通常有酶提取法、醇浸提法、索氏抽提法、微波辅助提取法、超临界CO2萃取法等，但是均对油橄榄叶提取物中橄榄苦苷及其水解产物的组成未知[13-18]。
本试验通过在橄榄苦苷提取的过程中添加各种水解酶，探索水解酶对提取过程及其水解产物的影响机制，在此基础上，分析油橄榄叶提取物中橄榄苦苷及其水解产物的组成和抗氧化能力，以期对油橄榄叶有效综合利用提供一定的借鉴。
1 材料与方法1.1 材料与仪器供试油橄榄叶：从重庆奉节县油橄榄种植基地采集（试验采用完全随机设计，选取不同株生长健壮、长势一致的生叶为试材，均为成熟叶，即非嫩叶或老叶）；橄榄苦苷、羟基洛醇对照品(纯度≥ 98%) 成都曼思特生物科技有限公司；1,1-二苯基-2-苦基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、维生素C（VC）、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）、β-葡萄糖苷酶（A. niger）（100 U/mg）、β-葡萄糖苷酶（来自杏仁）（100 U/mg）美国Sigma-Aldrich 公司；半纤维素酶（A. niger）（1.5 U/mg）北京索莱宝科技有限公司；木瓜蛋白酶（100 U/mg）、碱性蛋白酶（200 U/mg）、中性蛋白酶（100 U/mg）诺维信（中国）生物技术有限公司；纤维素酶（45 U/mg）阿拉丁试剂(上海)有限公司；其他化学试剂均为分析纯。
JYL-C012Joyoung/九阳料理机；高压均质机；DHG-9240A电热恒温鼓风干燥箱、DK-8D三孔电热恒温水槽、722S 型可见分光光度计；PHS-3C型pH计；KH-5200DE 型数控超声波清洗器。
