临床微生物室标本处理及操作流程课件

留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。
采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过30分钟；将注射器针头插入采样
端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中
尿标本的运送
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•
收集中段尿液5-10ml，及时送检。
室温保存下不得超过2小时，否则应置于4℃冰箱保存，保存时间不得超过24h。
本。
室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，
但也不能超过24小时。
粪便培养标本采集与运送
粪便标本采集指征：
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•
当病人出现以下一种情况时应该采集粪便标本进行细菌培养：
1.粪便涂片白细胞>5个/HP；
2.体温>38℃;
3.重症腹泻；
4.脓血便；
5.未经抗菌药物治疗的持续性腹泻病人；
• 有腹部痉挛的患者在发病6h内采集到的血便或液
• 状便的效果最好。
•
脑脊液标本采集与运送
•
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•
采集：
按脊椎穿刺操作规程，采集约3-5ml脑脊液于3支无菌试管中，每支试管至少1-2ml，然后马
上将第2支（或第1支）送至实验室。
做脑脊液培养时，建议同时做血培养。腰穿时必须作彻底消毒和无菌操作。
运送：
行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。
3.可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至1h采集1套，连续采集3套标本。如果24小时内报
告阴性，则继续采集2套血培养。
应该采多少血量？
• 采血量是影响灵敏度最关键因素
1.成人一份标本2个培养瓶（需氧＋厌氧），每瓶8－10ml，共20ml；要求至少采两份标本，即

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2.创伤性取痰方法（均由医生操作）：
经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）
直接从肺部感染病灶采集高浓度的病原菌，较为安全，但不能避免咽喉部正 常菌群污染。

经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）
较为采用，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，建议采集前先做细胞血筛 查。

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（二）采集时间

在抗生素应用前采集痰标本;
标本采集后1～2h内必须立即进行实验室处理；
咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本 ; 取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口;


深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导;
对于细菌性肺炎，痰标本送检每天 1 次，连续 2 ～ 3 天； 不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状改变；

Maki 滚动法
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二 、 呼吸道标本
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咳痰途经口咽部

不可避免地受到污染
唾液中口咽部定植菌的浓度可达108 ～109/ml。 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现 象。
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（一）采集指征

凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性， 并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细 胞总数及中性粒细胞比例明显增高， X 线检查提 示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性 休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道 标本。 对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺 鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全 防护。
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。

ห้องสมุดไป่ตู้
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但就目前来说，判断血培养污染的金标准并不 存在，比如凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）既是最 常见的污染菌，也是现在常见的菌血症病原菌 之一，其临床意义的判 定仍是一个世界性难题， 需要临床医生和实验室人员相互沟通，综合分 析。血培养污染的鉴别主要依靠以下几个方面： 微生物鉴定、阳性检出时间、重复培养结果以 及临床特征等。



拒收不符合实验要求的标本，微生物学工作者 应准确、负责地向临床科室阐明和解释标本拒 收条款和正确采集方法。 临床医师不应要求微生物报告包罗万象，因为 提供不相干的信息可能导致不准确或不恰当的 治疗。 标本信息应准确、完整，以便于准确地进行临 床解释，包括详尽的采集部位和临床信息
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实验室必须严格依照既定的标准操作手册并接 受法律监督。 实验室应建立技术规范，这种规范并不是狭义 地单纯为实验人员设立权限，而是建立更好的 相互交流与尊重，以及良好的协作关系。 实验室需要的标本多样，体液、组织及提取物 是外伤等微生物学常需采集的标本；而拭子一 般用于鼻、咽部和病毒性呼吸道感染标本的采 集。
保存。
采集另外一个血培养标本，以帮助阳性结果判 读。
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血培养的运送
采集后血培养瓶应立即送往实验室（2小时内） 接种前后的血培养瓶不得冷藏或冷冻。 任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为将 会延误或阻止细菌生长的检测； 血培养瓶保留在室温不得超过数小时；
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血培养污染
污染导致的血培养假阳性是一个较为普遍的问 题，即使采用最好的血培养标本采集方法也很 难将污染率降至2%以下。血培养假阳性结果将 导致不必要的抗生素治 疗，延长住院时间，增 加患者负担和细菌耐药性的选择性压力。准确 辨别污染能极大减少相应的花费，并有利于降 低以后的污染率。

3、做好包装和防护
临床标本及感染性物质，不管运送距 离有多远，应严格注意标本的包装，并且应 采取安全防护措施。
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标本送检样本
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标本的接受、处理原则
当标本送至实验室时，应有病人基本信息、标本来源、采集时 间等。
实验室遇到下列情况标本时拒绝接受 1.不正确的运送温度 2.不正确的运送工具 3.延长送检时间 4.标本容器上未贴病人信息或贴错 5.标本有泄漏 6.盛标本的容器有破损 7.标本有明显污染 8.标本量不足或已干涸 9.24h内重复送检的标本（不包括血培养） 10.对某种试验不适合的标本
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临床常见标本 采集、运送与
接种
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临床常见的标本：
血液 痰及鼻咽分泌物 尿液 粪便 穿刺液（脑脊液、胆汁、胸腹水等） 脓液及创伤感染分泌物 生殖道
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血液
正常人的血液是无菌 的。当细菌侵入时可引 起菌血症或败血症。
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血液培养的意义：
菌血症 感染性心内膜炎 临床不明原因的感染 假体植入后感染（人工关节、人工瓣膜） 静脉导管相关性感染 肺炎
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常见临床标本的采集及处理
泌尿生殖道标本
二、生殖道和尿道标本 送检指针：
女性患者
外阴阴道炎 细菌性阴道炎
阴道溃疡 尿道炎 宫颈炎 子宫颈炎 子宫内膜炎 输卵管炎 卵巢脓肿
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男性患者
尿道炎 附睾炎 前列腺炎 生殖器
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标本采集（根据不同感染种类和病变特征采集不同的标本）
尿道分泌物
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泌尿生殖道标本
一、尿液标本 适应症：尿路感染

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拭子标本采集后应立即送检，室温 运送时间小于2小时，如果不能立即接 种，必须装在无菌运送培养基中，避免 由于干燥而使某些细菌死亡。检测淋病 奈瑟菌或脑膜炎奈瑟菌的拭子应放人含 碳的转运培养基，采集后2小时内接种 平板，以防细菌死亡。
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下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimen
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血培养 Blood Culture
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微生物实验室的一项重要功能是诊断血液系统感染 （blood stream infections, BSIs）。大多数引起BSIs的病原菌应常规血 培养48 h检出，少数病原菌培养时间超过5 d，这些病原菌培养常需要复 杂的营养环境，如嗜血菌属、心杆菌属、艾肯菌属、金氏杆菌属和布鲁杆 菌等。 常规培养可检测多数引起心内膜炎感染的病菌，但巴尔通体属和考 克斯体属常规培养多为阴性，需要血清学或分子生物学辅助诊断。 在少 数培养为阴性的感染者中，对有价值的标本进行分子生物学检测（包括 16S-RNA和DNA测序）有助于诊断。
WBC >+ PRO >+
WBC <++*/－ PRO －
计数 > 105 培养出大于两种致病菌
计数 > 105 培养出大于两种致病菌
患者泌尿系统可能感染，但标本 可能被污染，应重复送检。
标本污染
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粪便标本
采集时间 腹泻患者应在用药前、急性期采集； 沙门菌感染、肠热症应在2周内采； 厌氧菌出现症状即采集。
评述
可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明 在采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口 水的污染。 中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培 养
很多中性粒细胞混合有形态 多样的细菌（革兰氏阴性杆 菌，纺锤形，革兰氏阳性球 菌）

检，需冷藏。 4小时延迟送检，须废弃标本。
自然排尿 是
过夜培养
否
继续培养； 随后观察；发送初步的培养阴性报告
> 105 CFU/ml
< 105 CFU/ml
24小时后仍不生长则发出 最终的生长阴性报告
纯培养的机会致病菌 （查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）
1 organism 一种以上细菌生长
三种或以上的机会致病 菌包括酵母菌
ID & Suscept.鉴定&药敏
多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本
多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本
)1-2种机会致病菌 （查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）
若为腐生葡萄球菌，则处理与其他致病菌相同； 其他的凝固酶阴性葡萄球菌则视为污染
进行鉴定和药敏，若数量< 105CFU/ml， 仍然对可能的致病菌进行操作
Lower Respiratory Tract Specimens
下呼吸道感染
Lower Respiratory Tract Infections

急性支气管炎 社区获得性肺炎
院内获得性肺炎
免疫妥协患者肺炎
下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimen 自然咳痰 诱导痰 气管内吸取物 肺部组织 支气管肺泡灌洗液 保护性毛刷 支气管灌洗液
淀粉样小体
弹性纤维
库什曼螺旋体
呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上 皮细胞提示混合厌氧菌感染
几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。 如果是呼吸道标本可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示 吸入性肺炎”
你看见多少种形态？
呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌

运输需氧、厌氧和苛养菌
不同材料对细菌的影响
棉花中的脂肪酸或树 脂 及木棒中渗出的甲醛 对 细菌生长的抑制作用
咽拭子注意避免接触口腔和舌粘膜。 检查脑膜炎奈瑟细菌和白喉棒状杆菌时 如在咽部肉眼见有明显发红和有假膜存 在时，应在局部涂抹。标本立即送检。
标本运送留取量少，易干燥，如不能及 时处理，要储存于4℃冰箱，超过48小 时不可用。
标本正确采集的重要性
●正确的采取处理与运送对于细菌培养的标本 是临床细菌检验成功的关键 ●标本采取与处理的规范化是准确、及时地向 临床提供重要的临床感染信息的基础 ●标本采取与处理不符合要求，则细菌培养的 结果毫无意义。
●为推行检验方法的标准化，我国借鉴国外部分 经验已成立中国临床实验室标准化委员会 (CLSI)，临床实验室的认证工作已经开始准备。 微生物检验的标准化首先应从标本采取与处理 的规范化开始。
●全面的检验保证系统更加重视分析前与分析后 的因素对检验结果质量的影响，是微生物检验 分析前质量控制的主要内容之一，即单元
血液细菌培养标本的采集和处理 下呼吸道分泌物(痰) 标本采取与质量要求 尿液细菌培养标本的采集与运送 粪便标本微生物学检查质量要求 分泌物标本送检规范 厌氧菌标本送检规范
(5) 膀胱镜检查、输尿管插管或逆行肾盂造影
时，收集的尿液可用来做细菌培养。
(6)病毒学检测
● 做病毒学检测收集清洁的标本即可，不 需特殊方法收集。 ● 标本中加入抗生素可抑制细菌的过度生 长，标本需冷藏。 巨细胞病毒(CMV)的检 测，需多次检测标本，因其释放常是周期性 的。 ●检测衣原体时，尿液标本不能代替尿(阴) 道分泌物。
尿液在膀胱内应停留6～8h以上 使细菌有足够时间繁殖。（夜尿）
(1)清洁排尿法：

按照医疗废弃物处理规范，对实验过程中 产生的废弃物进行分类、包装和处理，防 止交叉感染和环境污染。
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引言
临床微生物学的重要性
临床微生物学是研究微生物与疾 病关系的科学，对感染性疾病的 诊断、治疗和预防具有重要意义。
微生物检测可为临床提供准确的 病原体诊断依据，指导医生合理 使用抗生素，减少耐药菌株的产
生。
临床微生物学的发展推动了医学 科学的进步，为人类的健康事业
作出了巨大贡献。
标本采集处理的意义
标本采集是微生物检测的第一 步，直接关系到检测结果的准 确性和可靠性。
标识明确
在运输容器外标明患者信息、标本类 型、数量及采集时间等。
运输条件
根据标本类型选择合适的运输条件， 如温度、光照等，确保标本在运输过 程中保持稳定。
安全防护
运输过程中需采取必要的安全防护措 施，防止标本泄漏或破损。
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质量控制与安全防护
质量控制
标本采集前准备 确保采集工具无菌、无污染，遵守无菌
使用干净、无菌的容器收集尿液，避免污染。
清洁中段尿是常用的采集方法。女性应先清 洁外阴部，男性应翻转包皮清洁尿道口，然 后排尿弃去前段尿，留取中段尿。
采集时间
采集量
根据需要检测的项目，选择不同时间段的尿 液进行采集。如晨尿、随机尿、餐后尿等。
留取足够量的尿液标本，以满足检测需求。