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微生物实验思考题微生物学实验是生物学实验中较为复杂和繁琐的一类实验，它涉及到的实验类型和实验方法较多，而且每一种实验类型和实验方法都有其自身的特点和操作要求。
本文将从以下几个方面对微生物学实验中的一些常见问题进行思考和探讨。
一、实验前的准备工作在进行微生物学实验之前，我们需要做好充分的准备工作。
要了解实验的目的、要求和原理，确定所需的实验器材和试剂，并准备好相应的实验用品。
要对实验场所进行清洁和消毒处理，确保实验环境的无菌性。
要根据实验要求选择合适的菌种和培养基，并进行必要的预处理。
二、实验过程中的注意事项1、菌种保藏：在进行微生物学实验之前，需要对菌种进行保藏。
保藏方法应根据菌种的性质和实验要求进行选择。
常用的保藏方法有甘油管藏法、沙土管藏法、液体石蜡法等。
保藏过程中需要注意防止杂菌污染和防止菌种变异。
2、培养基的制备：制备培养基是微生物学实验中的一项基本操作技能。
在制备培养基时，需要注意根据菌种的营养需求和实验要求选择合适的配方和配制方法。
同时，要注意对培养基进行灭菌处理，确保无菌性。
3、接种与培养：在接种和培养过程中，需要注意无菌操作和防止杂菌污染。
接种时需要根据实验要求选择合适的接种方法和接种量，并注意对菌种进行纯化处理。
培养过程中需要注意控制温度、湿度、光照等环境因素，以保证微生物的正常生长和繁殖。
4、观察与记录：在观察和记录过程中，需要注意对微生物的生长情况、形态特征、生化反应等进行仔细观察和记录。
这些信息对于后续的数据分析和实验结果解释非常重要。
5、数据分析与总结：在完成实验后，需要对实验数据进行统计和分析，并将分析结果进行总结。
数据分析可以借助专业的统计软件进行，如SPSS、Excel等。
总结时需要注意对实验结果进行客观评价，并提出改进意见和建议。
三、实验后的整理与思考完成微生物学实验后，需要对实验场所进行清洁和消毒处理，并对实验器材和试剂进行整理和存放。
需要对实验数据进行整理和分析，并将分析结果进行总结和评价。
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二.细菌的简单染色和革兰氏染色1.革兰氏染色中那一步是关键？为什么？你是如何操作的?革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间）。
如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s)。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同?自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
３. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4．涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题?a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1．镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状,比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。
微生物工程指导1、什么是微生物工程？它是由哪四大技术结合发展起来？(1)微生物工程：利用微生物的特定性状和功能，通过现代化工程技术生产有用物质或直接应用于工业化生产的技术体系。
(2)传统发酵，DNA重组，细胞融合，分子修饰与改造2、微生物反应过程的特点（与化学工程相比）(1)优点：（与化学工程相比）①生产过程通常在常温常压下进行，操作条件温和②原料以碳水化合物为主，不含有毒物质。
③能高度选择性地进行复杂化合物在特定部位反应，如氧化、还原、官能团导入等。
④生产产品的生物体本身也是发酵产物，富含维生素、蛋白质、酶等有用物质；⑤通过微生物菌种改良，能够利用原有设备使生产飞跃上升。
(2)发酵过程中尚存在的问题：①底物不能完全转化成目的产物，副产物的产生不可避免，因而造成提取和精制困难②微生物反应是活细胞的反应，产物的获得除受环境因素影响外，也受细胞内因素的影响，且菌体易发生变异。
③原料是农副产品，虽然价廉，但质量波动较大。
④生产前准备工作量大，花费高，相对化学反应而言，反应器效率低。
⑤发酵废水常具有较高的BOD 和COD，需处理后排放。
3、微生物工程的发展经历哪几个阶段？(1)传统的微生物发酵技术——天然发酵(2)第一代微生物发酵技术——纯培养技术(3)第二代（近代）微生物发酵技术——深层培养技术(4)第三代发酵技术——微生物工程4、微生物工程产品类型有哪些？(1)微生物菌体的发酵(2)微生物酶发酵(3)微生物代谢产物发酵(4)微生物的生物转化(5)微生物特殊机能的利用5、作为发酵工业用的微生物菌种应符合哪些要求？(1)能在廉价原料制成的培养基上迅速生长，并形成所需的代谢产物，产量高。
(2)可以在易于控制的培养条件下迅速生长和发酵，且所需酶活力高。
(3)根据代谢控制的要求，选择单产高的营养缺陷型突变株或调节突变株或野生菌株。
(4)选育抗噬菌体能力强的菌株，使其不易感染噬菌体(5)菌种纯，不易变异退化，以保证发酵生产和产品质量的稳定性(6)菌种不是病原菌，不产生有害的生物活性物质和毒素，以保证安全6、微生物工程工业生产水平取决于哪些因素？(1)生产菌种的性能(2)发酵和提取工艺条件(3)生产设备7、微生物菌种分离与筛选工作程序分哪几步？样品采集→增殖培养→纯种分离→生产性能测定8、微生物菌种选育的方法有哪些？(1)自然选育(2)诱变育种(3)杂交育种(有性、准性)(4)原生质体融合育种(5)基因工程育种9、菌种保藏方法中，常用于产孢子和芽孢的保藏的方法是哪一个？现逐渐被哪一种方法取代？沙土管保藏法，现被真空冷冻干燥法取代10、微生物酶活性调节的方式有哪些？(1)共价修饰(2)变(别)构效应(3)缔合与解离(4)竞争性抑制11、酶合成调节的类型有哪些？(1)诱导（2）阻遏<末端产物阻遏，分解代谢产物阻遏>12、了解酶合成调节的分子机制（乳糖操纵子和色氨酸操纵子）13、了解分支生物合成途径的调节类型(1)同工酶调节：某一分支途径中的第一步反应可由多种酶催化，但这些酶受不同的终产物的反馈调节.(2)协同反馈调节: 需有一种以上终产物的过量存在方有明显的效果。
微生物思考题及参考答案1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比.2.什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。
利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。
3.影响显微镜分辨率的因素有哪些？答：物镜的NA值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长.4.美蓝染色液作用时间的不同,对酵母菌死细胞数量有何影响,试分析原因答：会造成更多的死细胞，在显微镜下观察，活的是透明无色，衰老的是淡蓝色，死亡的是蓝色，如果美蓝染色液作用时间过长，会造成细胞脱水死亡并渗透染液，影响实验结果。
5.镜检时如何区分放线菌基内菌丝，气生菌丝以及孢子丝一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
6.在进行细菌涂片时应注意哪些环节1、载玻片应该冷却后再涂片。
2、如果是涂布液体，可以用毛细管或接种环滴一小滴，然后轻轻抹开，一圈足够。
3、如果是涂布菌落或菌苔，应该在载玻片上先滴一滴水，再将菌落或菌苔涂布上去，接种环的尖蘸一点点即可。
4、为了节省时间，可以将干燥和热固定合并成一步。
但是应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形。
5、染色时间视染色液种类而定。
如结晶紫只需几十秒，亚甲基蓝则需一到两分钟。
6、冲洗时，水流不能太大，而且尽量避免水流直接冲在涂片上。
7、冲洗后干燥，可以用酒精灯加热以节省时间，同样的，应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形。
南京工业大学微生物实验课试题库及标准答案选择题：01.革兰氏染色的关键操作步骤是:A.结晶紫染色。
B.碘液固定。
C.酒精脱色。
D.复染。
答:(C)02.放线菌印片染色的关键操作是:A.印片时不能移动。
B.染色。
C.染色后不能吸干。
D.A-C。
答:(A)。
03.高氏培养基用来培养:A.细菌。
B.真菌。
C.放线菌。
答:(C)。
04.肉汤培养基用来培养:A.酵母菌。
B.霉菌。
C.细菌。
答:(C)。
05.无氮培养基用来培养:A.自生固氮菌。
B.硅酸盐细菌。
C.根瘤菌。
D.A,B均可培养。
E.A,B,C均可培养。
答:(D)。
06.在使用显微镜油镜时,为了提高分辨力,通常在镜头和盖玻片之间滴加:A.二甲苯。
B.水。
C.香柏油。
答:(C)。
07.常用的消毒酒精浓度为:A.75%。
B.50%。
C.90%。
答:(A)。
08.用甲醛进行空气熏蒸消毒的用量是:A.20ml/M3。
B.6ml/M3。
C.1ml/M3。
答:(B)。
09．高压蒸汽灭菌的工艺条件是:A.121℃/30min。
.B.115℃/30min。
C.130℃/30min。
答:(A)。
10．巴氏消毒的工艺条件是:A.62-63℃/30min。
B.71-72℃/15min。
C.A.B.均可。
答:(C)。
11．半固体培养基的主要用途是:A.检查细菌的运动性。
B.检查细菌的好氧性。
C.A.B.两项。
答:(C)。
12．半固体培养基的琼脂加入量通常是:A.1%。
B.0.5%。
C.0.1%。
答:(B)。
13.使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是:A.排冷气彻底。
B.保温时间适当。
C.灭菌完后排气不能太快。
D.A-C。
答:(A)。
14．目镜头上的"K"字母表示:A.广视野目镜。
B.惠更斯目镜。
C.补偿目镜。
答:(C)。
15.目镜头上的"P"字母表示:A.平场目镜。
B.广视野目镜。
C.平场补偿目镜。
答:(A)。
16.物镜头上的"PL"字母表示:A.正低相差物镜。
目录绪论 (2)第一章原核微生物的形态、构造和功能 (3)第二章真核微生物形态、构造和功能 (6)第三章病毒和亚病毒 (10)第四章微生物的营养和培养基 (14)第五章微生物的新陈代谢 (17)第六章微生物的生长及其控制 (20)第七章微生物的遗传变异与育种 (25)第八章微生物的生态 (29)第九章传染与免疫 (33)第十章微生物的分类和鉴定 (37)绪论一、选择题（）1、微生物的先驱者是A. Louis PasyeurB. 列文虎克C. F.H.CrickD.巴斯德（）2、下列选项按微生物研究的对象分，不正确的是A.细菌学B.病毒学C.原核生物学D.抗生素学（）3、1993年______等开创的核酸疫苗被誉为疫苗学的新纪元，具有广阔的发展前景。
A. Walter ReedB. MontagnierC. PrusinerD. Ulmer（）4、安东•列文虎克对微生物学的最大贡献在于A. 建立了细菌纯培养技术B.证实发酵是由微生物引起的C. 发明了显微镜D. 提出了柯赫法则二、判断题（）1、路易·巴斯德年轻时完成的实验证实了肉变酸的缘由。
（）2、病原菌学说最初是由科学家柯赫提出来的。
（）3、微生物的比面值很小，所以其代谢能力很旺盛。
（）4、沃森和克里克是分子生物学的奠基人，把传统的工业发酵提高到了发酵工程的新水平。
（）5、麻疹、流行性腮腺炎和鼠疫都是由病毒造成的疾病。
（）6、细菌是缺少真正细胞核的原核生物。
三、名词解释1、生物工程学2、微生物3、模式生物4、微生物学四、填空题1、第一个用自制显微镜观察到微生物的学者是______，被称为微生物学研究的先驱者，而法国学者______和德国学者______则是微生物生理学和病原菌学研究的开创者。
2、微生物学是研究______的科学。
研究内容包括______、______、______、______以及______、______、______、______等。
微生物学实验思考题实验1 培养基的配置1、简述配置培养基的基本步骤及注意事项。
步骤：配料-溶解-调PH-加入琼脂-融化-分装-封口（棉花纱布或封口膜）-灭菌注意事项①加热溶化过程中，要不断的搅拌，防止琼脂糊底。
最后，补足所失水分。
② pH值要按照各种不同培养基的要求调整。
③分装时注意不要使培养基沾染在管口或者瓶口上，以免沾污棉塞引起杂菌污染。
④培养基的灭菌时间和温度需要按照各种培养基的规定进行，培养基灭菌后，须放在37℃温箱培养24-48h，以检查灭菌是否彻底。
2、为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口要塞上棉塞才能使用？为了防止外界微生物进入三角瓶或试管，保持三角瓶或试管内部无菌状态或微生物的纯培养状态。
同时又允许空气进入，给内部菌种提供适宜生存环境。
3、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？如果不进行灭菌培养料内的微生物就会发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分，并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制目的菌的生长。
检查无菌的方法：将灭菌的培养基放入37℃温室中培养24~48小时，若无杂菌生长，即可证明为无菌的。
4、配置培养基为什么要调节pH？因为不同微生物所需环境的PH不同,同时在微生物的生长过程中由于营养物质的分解、代谢产物的积累,培养基的PH也会发生改变,故培养基在配置时以及在微生物培养过程中都需要调节PH。
5、什么是选择培养基？它在微生物工作中有何重要性？选择性培养基是指根据某种微生物的特殊要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。
利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。
实验2 高压蒸汽灭菌1、如何检查培养基灭菌是否彻底？将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h，若无杂菌生长即已彻底。
2、高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0是才能打开排气阀？灭菌主要因素是温度而非压力，排出冷空气后关上排气阀，维持所需压力。
1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率. 油的折光率和分辨率成反比（有公式）,同时与波长成正比.2.列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。
为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。
一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。
3.什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。
利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。
4.影响xx 分辨率的因素有哪些？答：物镜的NA 值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长5.根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。
都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。
答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40 倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000 倍的物镜看，感觉还很小。
病毒那就要用电子显微镜看了。
6.哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节7.进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题?答：着色不均，染色效果不好。
阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌8.革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?答：不可以。
微生物实验思考题参考答案及知识要点二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。
如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。
2.固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4.涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
2. 显微镜下细菌放线菌酵母菌和霉菌的主要区别是什么？放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。
细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。
（部分杆菌还可形成芽孢）放线菌：存在分枝丝状体和菌丝体，革兰氏阳性菌，有孢子丝和孢子（球形、椭圆形、杆状、柱状）。
酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。
菌体比细菌大几倍到几十倍，部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。
微生物综合实验报告实验题目：水质微生物学分析——利用多管发酵法检测水中大肠杆菌群数量组员姓名：xxx作者单位：南京工业大学生物与制药工程学院专业班级：生物工程类1001班指导老师：xxx摘要：实验采用自来水作为样品，对样品进行接种，分离，纯化，培养得到具有不同特征的肠杆菌。
通过对肠杆菌的数量和形态特征的分析，确定自来水是否被污染和污染程度。
关键词：水源；肠杆菌；数量；污染前言：水是制药和食品行业使用最为广泛的原料，也是赖以生存和发展的物质基础。
水与药品、食品中的其他原料一样，必须符合既定的质量标准，如果水被污染就会影响多批次产品。
另外，对微生物实验室来说，水是各种培养基、缓冲液、检测剂的主要组成部分。
近年来，由于国际上一些地区和国家频繁发生恶性事件，饮用水安全和卫生问题引起了全球的关注，饮水安全已经成为全球性的重大战略性问题。
世界卫生组织调查表明：在发展中国家，各类疾病有8%是因为饮用了不安全、不卫生的水而传播的，每年大约有2000万人死于饮用不卫生的水。
必须严格控制水的微生物学质量，以保证医药食品产品、培养基、试剂等的质量的可靠性以及人类饮用水的安全。
我国饮用水水质微生物学指标：国际上目前主要的水质标准是世界卫生组织（WHO）制定颁发的《饮用水水质准则》制药用水微生物监测是为了监控控制性微生物从而将水中微生物含量维持在一定水平。
没有必要将水中存在的所有微生物都监测出来，只针对对产品对人具有潜在危害的致病性的微生物进行监控。
流行病学研究确认，水携带的病原菌的存在与肠道来源的细菌相关，肠道病原微生物进入水体，随水流传播可引起肠道病爆发流行，所以必须对水中病原微生物严格监控。
但要从水体中直接检出病原微生物比较困难，它们在水中的数量很少且培养条件苛刻，分离和鉴别都比较难，即使样品检测结果是阴性也不能保证没有病原微生物的存在。
因此，常用指示微生物作为水体中病原微生物的监测指标。
大肠菌群细菌在人的肠道和粪便中数量很多，受到粪便污染的水容易被检出，且检测方法比较简易。
实验一 细菌的简单染色和细菌形态的观察一、实验原理简单染色采用一种染料对菌体进行染色，常用结晶紫、美蓝、碳酸复红等碱性染料。
染色后，菌体与背景形成鲜明对比，在显微镜下很容易被识别。
通过简单染色方法可以观察细菌的菌体形态特征和菌体的排列方式。
观察菌体形态简单染色（只用一种染料） 观察菌体排列方式染色方法 革兰氏染色鉴别鉴别染色 抗酸性染色（利用两种染料） 芽孢染色观察特殊结构 荚膜染色鞭毛染色二、实验步骤：涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检三、思考题1、制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节？答；（1）涂片：开始所加无菌水液滴不要太大，否则不易干燥；取菌量要适宜且要涂抹均匀，避免过大造成堆积，而难以看清细胞个体形态同时也应避免取菌量太少而难以在显微镜视野中找到细胞。
（2）无菌操作取菌：一定要等接种换冷却后再取菌，以免高温使菌体变形；（3）干燥固定：干燥后加热固定，可避免加热时间过长，否则细胞会破裂或变形；（4）固定：菌膜一面朝上，通过酒精灯微火三次。
注意温度不宜过高，时间不宜太长，否则菌体形态则会发生改变。
（5）水洗：倾去染色液后，用水沿着菌膜四周冲洗，注意勿使水流直接冲洗菌膜部位，水流不宜过急，过大，至流出水无色为止；2、为什么要求制片完全干燥才能用油镜观察？答：使用油镜时，物镜与标本间的介质为香柏油（N=1.515），不仅增加了透明度，而且会提高了分辨率。
若制片不完全干燥后，就用油镜观察，则N 会减小，分辨率D 也会变小。
而且还会造成油水两相不互溶，所以制片要求完全干燥后才能用油镜观察。
3、如果涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高，时间太长，又会怎样呢？答：加热固定的作用是使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌而且不破坏细胞形态，而且还可增加细胞对染料亲和力。
（1）如果图涂片未经加热固定，则细胞无法固定在载玻片上，在染色水洗后会被水流冲走。
（2）如果加热温度过高，时间太长，则会使细菌形态发生变化甚至破裂。
微生物思考题及参考答案微生物思考题及参考答案１、用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片与镜头之间加滴什么油？起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验得污染、操作时，先低倍再高倍、用完要擦掉油、加香柏油,作用就是增加折光率,也就就是增加了显微镜得分辨率、油得折光率与分辨率成反比（有公式)，同时与波长成正比、２、什么就是物镜得同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义?答:在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其她物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦得状态，这种现象称为物镜得同焦。
利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短得物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能得误操作而损坏镜头或载玻片。
3、影响显微镜分辨率得因素有哪些?答：物镜得NA值(物镜得数值孔径）与照明光源得波长、４、美蓝染色液作用时间得不同,对酵母菌死细胞数量有何影响，试分析原因答：会造成更多得死细胞，在显微镜下观察,活得就是透明无色，衰老得就是淡蓝色，死亡得就是蓝色,如果美蓝染色液作用时间过长,会造成细胞脱水死亡并渗透染液，影响实验结果。
5、镜检时如何区分放线菌基内菌丝，气生菌丝以及孢子丝一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮,可瞧到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体.6、在进行细菌涂片时应注意哪些环节１、载玻片应该冷却后再涂片. 2、如果就是涂布液体，可以用毛细管或接种环滴一小滴，然后轻轻抹开,一圈足够. ３、如果就是涂布菌落或菌苔,应该在载玻片上先滴一滴水,再将菌落或菌苔涂布上去，接种环得尖蘸一点点即可。
4、为了节省时间，可以将干燥与热固定合并成一步。
但就是应该避免高温,因为温度一高，细菌会变形。
5、染色时间视染色液种类而定。
如结晶紫只需几十秒，亚甲基蓝则需一到两分钟。
6、冲洗时，水流不能太大,而且尽量避免水流直接冲在涂片上。
微生物思考题及参考答案.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验地污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜地分辨率.油地折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比..什么是物镜地同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦地状态，这种现象称为物镜地同焦.利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短地物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能地误操作而损坏镜头或载玻片..影响显微镜分辨率地因素有哪些？答：物镜地值（物镜地数值孔径）与照明光源地波长..美蓝染色液作用时间地不同,对酵母菌死细胞数量有何影响,试分析原因答：会造成更多地死细胞，在显微镜下观察，活地是透明无色，衰老地是淡蓝色，死亡地是蓝色，如果美蓝染色液作用时间过长，会造成细胞脱水死亡并渗透染液，影响实验结果..镜检时如何区分放线菌基内菌丝，气生菌丝以及孢子丝一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体..在进行细菌涂片时应注意哪些环节、载玻片应该冷却后再涂片. 、如果是涂布液体，可以用毛细管或接种环滴一小滴，然后轻轻抹开，一圈足够. 、如果是涂布菌落或菌苔，应该在载玻片上先滴一滴水，再将菌落或菌苔涂布上去，接种环地尖蘸一点点即可. 、为了节省时间，可以将干燥和热固定合并成一步.但是应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形. 、染色时间视染色液种类而定.如结晶紫只需几十秒，亚甲基蓝则需一到两分钟. 、冲洗时，水流不能太大，而且尽量避免水流直接冲在涂片上. 、冲洗后干燥，可以用酒精灯加热以节省时间，同样地，应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形..进行细菌制片时为什么要进行加热固定?在加热固定时应注意什么?固定地目地有三个：）杀死微生物，固定细胞结构. ）保证菌体能更牢地粘附在载玻片上，防止标本被水冲洗掉. ）改变染料对细胞地通透性，因为死地原生质比活地原生质易于染色.固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩..为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察.因为用油镜观察时,镜头离玻片会很近.如果未完全干燥,载玻片上地液体会污染油镜镜头.镜头非常精密,被污染后不利于下次观察、若未完全干燥，水滴会影响油与玻璃之间折光率，造成视野不够清晰..哪些环节会影响革兰色染色结果地正确性？其中最关键地环节是什么？答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键地环节是脱色环节..进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题?答：菌龄太老，细胞壁通透性改变.着色不均，染色效果不好.阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌..革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作地？革兰氏染色地关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）.如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌.脱色时间地长短还受涂片地厚薄，脱色是玻片晃动地快慢及乙醇用量地多少等因素地影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为—）..革兰氏染色中,哪个步骤可以省略?在什么情况下采用媒染目地是在所有地细胞壁内形成了不溶于水地结晶紫与碘地复合物. 脱色后使革兰氏阴性菌变为无色. 复染使革兰氏阴性菌染成红色. 所以鉴别细菌地革兰氏阴阳性只须媒染，复染地目地是为了看清革兰氏阴性菌..你主要根据哪些形态特征来区分四种不同地霉菌曲霉:具有分隔；气生菌丝地一部分形成长而粗糙地分生孢子梗，顶端膨大成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小梗上着生成串地球形分生孢子.分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连.根霉:菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根.在假根地上方直立地生长出一至数根孢囊梗，其顶端膨大成球形孢子囊.囊地基部有囊托，中间有球形或半球形囊轴.毛霉:菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝.菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝地孢囊梗.各分枝顶端着生球形孢子囊，无囊托.青霉:菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙.基部无足细胞，顶端不形成膨大地顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称地小梗，形如扫帚，称为帚状体.孢子颜色：黑曲霉是黑色，青霉是青色，根霉是白菌丝黑孢子，毛霉则是淡黄色.以上为实验室观察）菌丝特征：青菌与曲霉菌丝与膈；毛霉与根霉则无；）菌丝地特化结构：曲霉有足细胞，其它霉菌无；根霉有假根与匍匐枝，其它霉菌无；）孢子头特征：青霉地孢子头为扫帚状；根霉与毛霉地孢子头为囊状；曲霉为菊花状孢子头..为什么更换不同放大倍数地目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?目镜测微尺中每小格代表地实际长度是不固定地，它是随所使用目镜和物镜地放大率地不同而改变地，故在测量前必须先用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正，以得出在显微镜地特定放大倍率下，目镜测微尺每小格所代表地相对长度..在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数地物镜来测定同一细菌地大小时，其测定结果是否相同？为什么？答:相同;目镜测微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精确等分地刻度，有把毫米刻成为等分或把毫米长度刻成等分.测量时，将其放在接目镜中地隔板上来测量经显微镜放大后地细胞物象.由于在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数地物镜来测定同一细菌地大小时，物象地放大倍数与每小格目镜测微尺所代表地长度在变化比例上是同步地，故而测定结果相同..哪些因素会造成血细胞计数板地计数误差，应如何避免?操作时没有先盖盖玻片再滴加悬液，导致体积不准确.避免：先盖盖玻片再滴加悬液.细胞密度太高.避免：稀释溶液.溶液不均匀.避免：滴加溶液前混匀悬液.、仪器误差：所用器材均应清洁干净，并且计数板计数区不应该有擦痕.、计数室内可能有气泡.因为酵母细胞并没有染色，看起来是透明地，有气泡很容易被计入，使数值偏高；并且，气泡会影响菌悬液地随机分布.改进：若产生气泡，则用吸水纸吸出.、菌体在计数板上分布不均，当用选取格计数时，会造成很大误差.改进：应使菌液自然流入并混匀，进行观察时尽可能多数几个格子.、配制稀释液时吸取地浓度过高或过低，导致稀释液浓度和原液不成正确比例，计算时产生误差.应将原液摇晃均匀后取中部地液体进行稀释.、由于数菌体数目时视觉疲劳而导致地视觉误差.应多人观察，取记录平均数.、计数时可能将格四周地菌都计算在内了，使数值偏高. 改进：谨遵一个规则，计上不计下，计左不计右，不可以重复计数.、可能出现有出芽地酵母菌，将出芽地酵母菌按两个计数了，使数值偏高. 改进：计数时，只有当芽体于母细胞一样大地时候，才能计为两个..培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后地培养基是否无菌？为什么要倒置培养？答：由于配制培养基地各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好地培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中地微生物生长系列而消耗养分和改变培养基地酸碱度所带来地不利影响.将灭菌地培养基放入℃温箱中培养～，无菌生长即可证明灭菌后地培养基无菌.倒置培养地主要目地：）由于重力地作用使培养基表面及次层能富集微生物生长所需地营养物质，利于微生物生长；）防止空气中微生物地污染培养基及培养物：倒置时平板内地空气是不流动地,杂菌不会沉降到培养基表面,如果不倒置,很快平板周边会长起杂菌.）倒置培养使琼脂里水分不易蒸发出去，而充分地保持琼脂地弹性与细菌容易繁殖和生存地环境.如果不倒置，大概天左右培养基就会出现龟裂等水分散失地情况.而一些落菌等试验，需验证培养基无菌，就要先倒置培养小时才可作为模板做落菌，水分散失是很重要地..在配制培养基地操作过程中应注意些什么问题？为什么？答：一般而言，培养基地配置要注意如下几点原则：）营养成分地配比：碳源和氮源地比例（）要适当；）适宜地酸碱度（值）：配制培养基时地调节；）渗透压：营养物质要有适合地浓度；）培养基不能反复高温灭菌.) 称不溶性固形物时，应单独称，若量少地可以与无机盐一起称，但一定要混匀再分装；）一般情况下培养基用自来水配制.操作细节上则要注意：）称药品用地牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖）调值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子地浓度）分装时注意不要污染棉塞、试管口，以免染菌.）及时灭菌，以免培养基及容器里地微生物生长繁殖消耗养分、改变酸碱度.、当然是注意浓度配比不要搞错、很多培养基地加料顺序有讲究,否则会有沉淀产生、有些培养基会有不溶物质,分装前应摇匀、不要忘了调节值（一般细菌都需要,酵母可能自然就行,不过不一定）、加热溶解时尽量不要煮沸,会损失营养物质.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低“”时才能打开排气阀，开盖取物.答：）在使用高压蒸汽灭菌时，灭菌锅内冷空气地排除是否完全极为重要，因为空气地膨胀压大于水蒸汽地膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽地温度低于饱和蒸汽地温度.）压力未降至“”便开盖取物地可能后果：压力锅内压力骤然降低，引起容器中地溶液喷出容器口导致污染或导致人员地烫伤..干热灭菌操作过程中应注意哪些问题为什么、物品不要摆放太挤,以免妨碍空气流通、灭菌物品不要接触干燥箱内壁地铁板,以防包装纸烤焦起火、灭菌时人不能离开、灭菌结束后不能忘记关掉电源、待温度降到度以下再打开,否则冷热空气交替,玻璃器皿容易炸裂或发生烫伤事故.为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高时间长？在湿热条件下，有水蒸汽地作用：高温水蒸汽导热比干空气要快；高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程；高温水蒸汽能穿透细菌地细胞膜，直接进入细胞内破坏细胞；高温水蒸汽能水解一部分细胞结构，加速导热.（湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热地穿透力比干热大；湿热地蒸汽有潜热存在，每克水在℃时，由气态变为液态时可放出．（千焦）地热量.这种潜热，能迅速提高被灭菌物体地温度，从而增加灭菌效力.）.设计实验方案，比较干热灭菌和湿热灭菌地效果. 以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件和等量原则.（一）实验材料试管镊子酒精灯嗜热脂肪芽孢杆菌菌片纸片（与菌片同大小同材料）溴甲酚紫蛋白冻水培养基（已灭菌）等实验材料（材料有余）.（二）对照组取支洁净试管，分为三组（每支一组），将组中放入菌片，组中放入纸片，组中什么也不加；不经灭菌，直接加入溴甲酚紫蛋白冻水培养基（等量）.（三）恒为培养将上述所有试管按分组在℃恒温条件下培养小时..如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养请写出实验地主要步骤纯培养地确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物地纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到..配制牛肉膏蛋白胨培养基，有哪些操作步骤？那几步易出错，如何防止？称取药品—加热溶化—分装—加棉塞—包扎—灭菌—搁置斜面易出错地步骤有：称取药品称取时钥匙专用，瓶盖不要错盖，易吸水地药品要快速称取；加热溶化加入药品后要用玻璃棒不停搅拌，以免糊底（在琼脂熔化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器，同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦.）；分装分装时培养基不能粘在三角瓶（或试管）口，以免接种时染菌；搁置斜面斜面长度约试管长度一半为宜..平板菌落计数法地原理是什么? 它适用于那些微生物地计数？平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中地微生物充分分散为单个细胞，取一定量地稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成地肉眼可见地菌落，即一个单菌落应代表原样品中地一个单细胞.统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中地含菌数.（但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成地一个单菌落也可能来自样品中地或更多个细胞.因此平板菌落计数地结果往往偏低.现在常使用菌落形成单位）.平板计数法是根据微生物在固体培养基上所形成地一个菌落是由一个微生物繁殖而形成地现象进行地，也就是一个菌落可代表一种微生物（并不绝对).通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物地数量.、微量移液器地最小量程太大，在加样时，容易加多，使盖玻片鼓起，血球计数板所技术地体积变大，最终结果偏大. 改进：用量程地小地微量移液器并少加一些..如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产生高温蛋白酶地菌株，你将如何完成？写出实验方案（产蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透明圈）.以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件一材料准备土壤【有机质（特别是蛋白质）含量丰富地土壤】灭菌生理盐水（）灭菌移液管添加酪素地—（牛肉膏蛋白胨完全培养基）经灭菌—斜面（经灭菌）其他材料：接种环酒精灯等二操作方法在盛有灭菌生理盐水地烧杯中添加土壤，配成悬浮液；稍静止后，用灭菌移液管移取部分上清液，将其制成^—^倍地稀释液；用灭菌移液管吸取各稀释液用稀释倒平板法（或涂布平板法）将其接入添加酪素地—平板上；在—℃下培养—天；挑取形成降解酪素透明圈地菌落（透明圈直径与菌落直径之比较大者），转接入—斜面上培养；（若无特定菌落形成，则需另取土样从开始重复试验）将—斜面上地菌落再用平板纯培养，依次重复—次后即可得到纯培养（镜检）；纯培养细菌中蛋白酶地提取及活性鉴定【摇瓶培养（若提取蛋白酶及其活性正常，则纯培养成功，否则，重取土样重复以上实验）】..为什么熔化后地培养基要冷却至℃左右才能倒平板？低于这个温度琼脂会凝固，温度过高，如果是做倾倒琼脂做菌落计数，会杀死一部分细菌，如果只是只是制备琼脂平板，那么温度太高就进行倾倒会导致琼脂凝固后偏软，水汽过多..要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什么？无菌操作稀释良好，不会太浓或太稀. 菌落生长时间控制好，不会长地太大不便区分，也不至于太小影响计数..当你地平板上长出地菌落不是均匀分散地而是集中在一起时，你认为问题出在哪里？.太浓 .没涂匀.用倾注法和涂布法计数，其平板上长出地菌落有何不同？为什么要培养较长时间（）后观察结果？倾注法是在培养皿中接种好样品之后，倾注琼脂并培养；而涂布法则是在琼脂表面接种并使用型棒涂布.因此，倾注法地菌落将出现在琼脂地各个部位，包括底层和中层，但涂布法培养后形成地菌落只出现在琼脂表面..你如何解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？答：①淀粉是大分子物质，进入细胞十分困难，甚至需要高耗能地胞吞作用.因而通过胞外酶地作用，将淀粉水解为葡萄糖后运入细胞，较方便高效.②试验中出现透明圈，说明培养基内淀粉被水解，可推测是细菌产生地胞外地淀粉酶起地作用..不利用碘液，你能否证明淀粉水解地存在?答：由于淀粉水解生成葡萄糖，即多羟基醛，因此可利用醛地性质进行检验，如银镜试验，斐林试验等.呈阳性者，说明产生了葡萄糖，淀粉被水解；阴性者说明淀粉未被水解..假如某些微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？答微生物有氧代谢葡萄糖产气不产酸，因此发酵结果是小管中生气泡但是溶液不变黄..解释在细菌培养中吲哚检测地化学原理，为什么在这个试验中用吲哚地存在作为色氨酸酶活性地指示剂，而不用丙酮酸？答：化学原理：有些细菌产生色氨酸酶，分解蛋白胨中地色氨酸，产生吲哚和丙酮酸.吲哚与对二甲基氨基甲醛结合，形成红色地玫瑰吲哚.但并非所有地微生物都具有分解色氨酸产生吲哚地能力，因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测地指标.因为丙酮酸是生物体呼吸作用地产物，无论是有氧还是无氧，都会产生丙酮酸，因而无法作为色氨酸酶活性地指示剂进行区分.同时吲哚能通过有明显颜色变化地化学反应观测到，而丙酮酸不能，所以试验中用吲哚地存在作为色氨酸酶活性地指示剂，而不用丙酮酸..为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，而产气杆菌为阴性？答：当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基中地甲基红指示剂由橙黄色（）转变为红色（），即甲基红反应.而大肠杆菌和产气肠杆菌在培养地早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养地后期仍能维持酸性，而产气肠杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使升至大约.因此，大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性..用紫外线进行诱变时,为什么要打开皿盖?为什么要在红光灯下操作紫外线不容易穿透玻璃，所以打开盖，自然光下容易光复活，红光下不会所以在红光下操作。
微生物学实验原理及思虑题答案.txt铁饭碗的真切含义不是在一个地方吃一辈子饭，而是一辈子到哪儿都有饭吃。
就算是一坨屎，也有遇到屎壳郎的那一天。
所以你大可不用为今日的自己有太多担忧。
油镜便于察看的原理是什么?用油镜察看时在油镜与载玻片之间加入了和玻璃折射率邻近的香柏油，使进入透镜的光芒增加，视线亮度加强，使物象光亮清楚。
1. 细调理器每旋转一周使镜筒上涨或降落.一。
培育基的配制原理：微生物的生长发育都有必定的营养需要，培育基即人工培育物，为其生长发育供给所需营养的基质。
培育基配制好此后一定经过灭菌方能用于分别培育微生物实验。
一次培育基的配制和灭菌是微生物实验室中最基本的操作，经过本次实验学习微生物实验室中常用培育基的配制方法和灭菌方法。
1.称药品的钥匙不要混用称完药品应实时盖紧瓶盖，因为某些成分如蛋白胨极易吸水潮解调PH时要当心操作，防止回调。
配制培育基应注意哪些问题？要选定适合的培育基 ; 培育基成分要称量正确； PH要适合；灭菌要严格。
培育基配制达成后为何要立刻灭菌？已灭菌的培育基如何进行无菌检查？防备细菌污染培育基一旦细菌污染了培育基，因为培育基有丰富的营养物质，细菌会段时间内大批产生这样子就会跟培育物抢夺营养物质，另一方面，细菌生长过程中会产生有毒物质以致培育物死亡。
放在 37℃的恒温箱中一两天后，培育基上没有生长任何微生物的就能够使用（若有微生物则是以菌落出现的肉眼能够看见）二。
细菌的单染色技术原理：单染色法师利用单调染料对细菌进行染色的一种方法。
在中性，碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞往常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。
碱性染料其实不是碱，和其余染料同样是一种盐，电离时染料离子带正电，易于带负电荷的细菌联合而使细菌着色。
制备染色标本时的注意事项？选择适合菌龄的细菌；固准时防止火焰直接烘烤损坏细菌形态；染色时间要适合；水洗时水不可以直接冲在涂片处。
制片为何要完整干燥后才能用油镜察看？油和水之间会分层，油就不可以与标本接触还有光会发生折射等等原由，这样不利于油镜察看三。
微生物实验思考题1、用油镜观察时应该注意哪些问题？在载破片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净，以防上次实验的污染。
操作时,先低倍再高倍。
用完要擦掉油。
加滴香柏油。
作用:增加折光率，也就是增加了显微镜的分辨率.2、根据实验体会，谈谈应如何根据所观察微生物的大小，选择不同的物镜进行有效的观察.答：细菌用油镜，真菌用高倍镜.都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度.放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大 40 倍的物镜就可以看了,细菌小，要用放大 1000 倍的物镜看，感觉还很小。
病毒那就要用电子显微镜看了。
3、哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么？答:涂片环节、加热固定环节、脱色环节;其中最关键的环节是脱色环节。
4、进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题？答：着色不均，染色效果不好。
阴性阳性不明显分不太清楚，问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌。
5、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色？答:不可以.因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁,对实验结果造成影响。
脱色后复染前，革兰氏阳性菌呈紫色,阴性菌无色.6、不经过复染这一步,能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌？答：不行。
在复染之前,革兰氏阴性菌是无色透明的,在显微镜下很难观察到；或者脱色过度，也会造成阳性菌脱色，不经过复染，无法进一步区别。
7、你认为制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节?答：1制备适宜的培养基2在超净工作台上进行,保持无菌环境3对培养基，接种环等物品的高温高压灭菌。
4倒置培养基,防止冷凝水内流8. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?答:1、若未完全干燥，载玻片上的液体会污染油镜镜头。
镜头非常精密,被污染后不利于下次观察；2、若未完全干燥，水滴会影响油与玻璃之间折光率，造成视野不够清晰。
实验一 细菌的简单染色和细菌形态的观察一、实验原理简单染色采用一种染料对菌体进行染色，常用结晶紫、美蓝、碳酸复红等碱性染料。
染色后，菌体与背景形成鲜明对比，在显微镜下很容易被识别。
通过简单染色方法可以观察细菌的菌体形态特征和菌体的排列方式。
观察菌体形态 简单染色 （只用一种染料）观察菌体排列方式染色方法 革兰氏染色鉴别鉴别染色 抗酸性染色（利用两种染料） 芽孢染色观察特殊结构 荚膜染色鞭毛染色二、实验步骤：涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检三、思考题1、制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节？答；（1）涂片：开始所加无菌水液滴不要太大，否则不易干燥；取菌量要适宜且要涂抹均匀，避免过大造成堆积，而难以看清细胞个体形态同时也应避免取菌量太少而难以在显微镜视野中找到细胞。
（2）无菌操作取菌：一定要等接种换冷却后再取菌，以免高温使菌体变形；（3）干燥固定：否则细胞会破裂或变形； （4太长，否则菌体形态则会发生改变。
（5）水洗：倾去染色液后，用水沿着菌膜四周冲洗，注意勿使水流直接冲洗菌膜部位，水流不宜过急，过大，至流出水无色为止；2、为什么要求制片完全干燥才能用油镜观察？答：使用油镜时，物镜与标本间的介质为香柏油（N=1.515），不仅增加了透明度，而且会提高了分辨率。
若制片不完全干燥后，就用油镜观察，则N会减小，分辨率D也会变小。
而且还会造成油水两相不互溶，所以制片要求完全干燥后才能用油镜观察。
3、如果涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高，时间太长，又会怎样呢？答：加热固定的作用是使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌而且不破坏细胞形态，而且还可增加细胞对染料亲和力。
（1）如果图涂片未经加热固定，则细胞无法固定在载玻片上，在染色水洗后会被水流冲走。
（2）如果加热温度过高，时间太长，则会使细菌形态发生变化甚至破裂。
4、为什么细菌染色常用碱性染料？什么情况下用酸性染料？答：（1）细菌染色常用碱性染料，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，而碱性染料电离后染色部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色。
（2）当细胞处于酸性条件下（如细菌分解糖类产酸）所带正电荷增加时，可采用酸性染料染色。
实验二细菌的革兰氏染色法一、实验原理革兰氏染色是细菌染色中重要的鉴别染色方法之一。
通过革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌(G-)。
G+和G-主要是由于细胞壁结构和化学成分的差异引起脱色能力的不同。
①结晶紫初染和碘液媒染:在细菌的细胞膜内可形成不溶于水的结晶紫与碘的化合物。
②乙醇脱色：细胞壁较厚结晶紫与碘液复合物留在细G+肽聚网层次多和交联致密且不含类脂细胞壁较薄结晶紫与碘复合物溶出，细G- 胞壁退成无色肽聚网层薄和交联差，外膜层类脂含量高③番红染色：G-细菌呈现红色，而G+细菌则仍保留最初的紫色。
二、实验步骤立即水洗干燥结晶紫碘液：紫色：蓝色菌体紫初染媒染：红色1、涂片：芽孢杆菌与右边的水滴充分混合，将左、右方的菌液延伸与玻片中央，使大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在玻片中间区域相互混合成含有两种菌的混合区。
2、干燥：涂片在空气中干燥3、固定：手持载玻片一端，有菌膜一面朝上，通过酒精灯微火三次。
注意用手指触摸载玻片反面为不烫为宜。
冷却。
4、染色：滴加结晶紫染色液于菌膜部位，覆盖菌膜，染色1~1.5min。
5、水洗：斜置玻片倾去染色液，用水自玻片上端缓慢冲洗。
注意勿使水流直接冲洗菌膜部位。
6、媒染：滴加碘液于菌膜部位，覆盖菌膜，放置1~2min。
7、水洗：同上8、脱色：斜置玻片，自标本的上端缓慢滴加95%乙醇脱色，直到留下的酒精无明显的紫色为止。
脱色是革兰氏染色中的关键一步，注意不要脱色过度。
9、水洗：同上10、复染：滴加番红染色液，染色1min.11、水洗并用吸水纸自载玻片边缘轻轻吸去多余水分。
12、镜检。
三、思考题1、什么是鉴别染色？有何优点？答：（1）鉴别染色是指至少使用两种不同颜色的染色剂进行染色。
（2）优点：可以区分不同类别的菌种；可以很好地观察菌体结构；2、革兰氏染色法中初染、媒染、脱色、复染的目的是什么？答：初染：利用结晶紫初染使所有细菌都着上蓝紫色。
媒染：利用碘液作为媒染剂，碘会与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强染料在菌体中的滞留能力脱色：用95%乙醇作为脱色剂，根据G+和G-细胞壁机构和化学组成的差异，G+的肽聚网孔会收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，而G-中原先滞留的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变无色。
复染：用番红作为复染剂把洗脱的G-染成红色，而G+仍为蓝紫色。
3、革兰氏染色反应的关键步骤是什么？为什么？答：革兰氏染色反应的关键步骤是脱色；①若脱色不够的话，则大肠杆菌中的碘-结晶紫复合物不能被洗脱下来，或无法完全被洗脱下来，那么之后用番红复染时不会变成红色，而是呈紫色，造成大肠杆菌的假阳性。
②若脱色过度的话，则金黄色葡萄球菌中的碘-结晶紫复合物也会被洗脱下来，那么之后用番红复染细胞呈红色，造成金黄色葡萄球菌的假阴性。
实验五酵母菌形态的观察一、实验原理（略）二、实验步骤1、酵母个体形态与出芽繁殖接种与培养制片观察2、假菌丝形态接种与培养制片3、酵母细胞的死活染色鉴别涂片、染色观察三、思考题1、显微镜下观察的酵母菌的个体形态特征与细菌个体形态特征有何不同?答：（1）细菌是一类细胞细短的原核生物，一般直径约为：0.5μm，长度约为：0.5~5μm。
显微镜下观察的细菌个体形态基本上是球状、杆状、螺旋状三大类，仅少数为其他形状，如丝状、三角形、方形和圆盘形等；（2）酵母菌的细胞直径约为细菌的10倍，是典型的真核生物，在显微镜下观察的酵母菌个体形态通常是有球状、卵圆状、椭圆状、柱状和香肠状等。
2、美蓝色染色液染色时间对酵母菌死活细胞数量有何影响？试对所得的结果进行分析和讨论。
答：美蓝染色液染色时间越长，酵母菌死细胞数量越多，而活细胞数量越少。
实验六霉菌形态的观察1、试分析Subouraud 琼脂培养基的优点？答：①pH偏酸性，适合霉菌生长；②氯霉素可抑制细菌的生长；2、载片培养法中“U”形玻璃棒和培养皿底部的滤纸上加入适量灭菌水的目的是什么？除了加灭菌水之外，还可以加入什么溶液？答：①目的是保证培养皿内适宜温湿度；②还可通过无菌操作在培养小室中园滤纸片上加3至5ml灭菌的20%的甘油。
3、载片培养还适宜哪些微生物进行形态观察？答：载片培养还适宜培养放线菌、假丝酵母等分枝丝状体进行形态观察。
4、为什么载片培养所用的材料均要灭菌？答：载片培养所用的材料如不灭菌，则极易引入杀菌，当接种到培养基上时，很有可能会影响霉菌的生长，而且也会影响到后期的显微观察。
实验七微生物测微技术一、实验原理显微测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺两个相互配合使用的部件。
镜台测微尺总长1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100 个小格，每一小格长度为0.01mm。
目镜测微尺分50小格和100小格两种。
二、实验方法和步骤目镜测微尺放置目镜测微尺的标定酵母菌大小的测定将镜台测微尺用擦镜纸擦拭干净，放进盒子里保存，同时正确清理和维护显微镜。
注：放置镜台测微尺时有刻度的一面朝上；目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行；使两尺左边某一区域内两线完全重合后找出右边另外相重合的线，分别数出两重和线。
目镜测微尺每格长度（um）=重合线间镜台测微尺格数*10/重合线间目镜测微尺格数三、思考题1、为什么使用不同放大倍数的目镜或者物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？答：因为目镜测微尺在不同放大倍数的目镜和物镜下的大小是不一样的，也就是比例不同，所以要重新校正。
2、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一菌体大小时，其测定结果是否相同？为什么？答：相同。
因为同一菌体的大小是一定的，不同放大倍数的物镜不会改变菌体的实际大小，但物镜的放大倍数越高，目镜测微尺的精确度越高，测量月准确。
3、测量菌体大小时对菌龄有无要求？为什么？答：有要求。
因为菌在不同生长时期细胞大小有时会有较大变化，若需自己制样进行细菌大小测定时，应注意选择处于对数生长期的菌体细胞材料。
实验八微生物技术技术-血球计数板法一、实验原理测定细胞数目的方法有直接计数法（如血球计数板计数计数）和间接计数法（如平板菌落计数法）显微镜计数的优点是直观、快速、操作简单，缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对活动性强的活菌进行计数。
其中血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞，霉菌孢子等计数。
二、实验方法和步骤1、镜检计数板的计数室（在加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物则需清洗）2、加样品(菌悬液需摇匀）3、计数(加样后静置5min）4、清洗血球计数板注：1、活细胞是透明的，因此在进行显微镜计数时应适当减低视野亮度以增大反差；2、进行显微计数是应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察计数。
3、酵母菌以每格5到10个菌体为宜。
三、思考题1、用血球计数板计数时，哪些步骤容易造成误差？应如何尽量减少误差力求准确？答：容易造成误差的步骤（1）计数室的清洗（2）加样时是否将菌液摇匀（3）计数尽量减少误差的措施：(1)加样前应先镜检计数室，若有污物则需清洗后镜检，直至计数室没有污物；(2)加样前先摇匀菌液，因为放置一段时间的菌液其浓度是不均匀的；(3)计数时先根据计数板的规格确定计数方法：记上不计下，记左不计右。
2、血球计数板计数有哪些缺点？答：优点是直观、快速、操作简单，可直接观察到微生物的总数，缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对活动性强的活菌进行计数。
3、利用血球计数板计数时，注入的菌液为什么不能过多？答：（1）注入菌液过多，会将盖玻片顶起而改变计数室的容积。
（2）注入菌液过多，也会使计数室中格线变得模糊，无法清楚的计数。
实验九培养基的制备与高压蒸汽灭菌一、实验原理培养基是人工配置的适合我微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
含有碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等六大营养物质。
一般培养细菌的常用营养琼脂培养基，放线菌常用高氏一号培养基，酵母菌常用麦芽汁培养基，霉菌常用马铃薯培养基（PDA）。
高压蒸汽灭菌：121℃，15-30min。
二、思考题1、为什么分装于三角瓶中的培养基装量不能过多？答：①分装量太多，三角瓶内培养极易沾染瓶口及棉塞而造成污染；②分装量太多不利于震荡摇匀；③分装量太多会使培养基灭菌不彻底。
2、配置培养基有哪几个步骤？在操作过程中应注意什么问题？为什么？答：（1）按培养基配方称取所需药品（2）加入少量水溶解（3）待完全溶解后加水补足至所需体积，调节PH（4）分装（5）灭菌3、试分析培养基灭菌不彻底的原因。
