微生物实验报告思考题参考答案

食品·微生物学实验思考题答案食品微生物学技术思考题答案1.如何区别高倍镜和油镜答：（1）油镜更接近标本片（2）油镜与标本间的介质是香柏油（3）油镜刻有“oil”或“Hi”字样，也刻有一圈红线或黑线为标记。

2．为什么在使用高倍镜及油镜是应特别注意避免粗调节器的错误操作答：使用高倍镜及油镜时镜头距离标片很近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的错误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。

一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。

3.用油镜观察时应注意哪些问题在载破片和镜头之间加滴什么油起什么作用答：（1）应该先用擦镜纸将镜头擦干净，以防止上次实验的污染，操作时，先低倍再高倍，用完要擦掉油。

（2）在转换油镜时，从侧面水平注视镜头注视镜头与玻片的距离。

使镜头浸入油中而不以压破载玻片为宜。

（3）从目镜内观察，把孔径光阑开到最大，使其明亮。

然后用微调将镜台下降，直至视野内物象清晰。

如油镜已离开油面仍未见物象，需重复操作。

加的是香柏油。

作用是增加折光率，增加显微镜的分辨率。

4.在调节焦距时，往往出现一些疑似观察标本的物象点，物象点可能是目镜或物镜上的杂质，也可能是标本片上的观察对象，如何通过操作判断这些物象点是否在标片上答：移动标本片，看物象点是否移动，如果不移动，则不在标本片上。

5．如果涂片未经热固定或固定温度过高、时间过长，会出现什么现象答：固定时间是杀死菌体，使菌体蛋白质凝固黏附于载玻片上，增加菌体对染色剂的结合力，易于着色。

但是如果没固定，不容易着色，且容易被清水冲走。

温度过高会使细胞收缩变形，时间过长会导致菌体变形或形态破坏，难以着色，从而导致难以着色。

6.为什么要培养18-24h的细菌菌体进行革兰氏染色答:此时菌体进入比较活泼的繁殖生长期，细胞壁比较好着色。

若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应，关键在于细胞壁的通透性的改变。

如果菌龄过老，不便于显微镜下观察时阴性还是阳性菌。

微生物实验思考题微生物学实验是生物学实验中较为复杂和繁琐的一类实验，它涉及到的实验类型和实验方法较多，而且每一种实验类型和实验方法都有其自身的特点和操作要求。

本文将从以下几个方面对微生物学实验中的一些常见问题进行思考和探讨。

一、实验前的准备工作在进行微生物学实验之前，我们需要做好充分的准备工作。

要了解实验的目的、要求和原理，确定所需的实验器材和试剂，并准备好相应的实验用品。

要对实验场所进行清洁和消毒处理，确保实验环境的无菌性。

要根据实验要求选择合适的菌种和培养基，并进行必要的预处理。

二、实验过程中的注意事项1、菌种保藏：在进行微生物学实验之前，需要对菌种进行保藏。

保藏方法应根据菌种的性质和实验要求进行选择。

常用的保藏方法有甘油管藏法、沙土管藏法、液体石蜡法等。

保藏过程中需要注意防止杂菌污染和防止菌种变异。

2、培养基的制备：制备培养基是微生物学实验中的一项基本操作技能。

在制备培养基时，需要注意根据菌种的营养需求和实验要求选择合适的配方和配制方法。

同时，要注意对培养基进行灭菌处理，确保无菌性。

3、接种与培养：在接种和培养过程中，需要注意无菌操作和防止杂菌污染。

接种时需要根据实验要求选择合适的接种方法和接种量，并注意对菌种进行纯化处理。

培养过程中需要注意控制温度、湿度、光照等环境因素，以保证微生物的正常生长和繁殖。

4、观察与记录：在观察和记录过程中，需要注意对微生物的生长情况、形态特征、生化反应等进行仔细观察和记录。

这些信息对于后续的数据分析和实验结果解释非常重要。

5、数据分析与总结：在完成实验后，需要对实验数据进行统计和分析，并将分析结果进行总结。

数据分析可以借助专业的统计软件进行，如SPSS、Excel等。

总结时需要注意对实验结果进行客观评价，并提出改进意见和建议。

三、实验后的整理与思考完成微生物学实验后，需要对实验场所进行清洁和消毒处理，并对实验器材和试剂进行整理和存放。

需要对实验数据进行整理和分析，并将分析结果进行总结和评价。

微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。

因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。

二.细菌的简单染色和革兰氏染色1.革兰氏染色中那一步是关键？为什么？你是如何操作的?革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间）。

如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s)。

2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同?自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。

固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。

３. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。

在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。

最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。

4．涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题?a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b增加其对染料的亲和力。

固定时应注意：手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。

三. 霉菌、放线菌的形态观察1．镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状,比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。

竭诚为您提供优质文档/双击可除医学微生物学实验报告答案篇一：南医大医学微生物学实验报告总结优化版脓汁和粪便标本中病原菌的检测20xx级xx专业（x）班学号xx姓名xx第x室第x组组员：xx指导老师：xx[摘要]脓汁和粪便标本中有不同的病原菌。

本实验主要探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。

在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。

从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。

[引言]常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。

浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。

粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。

粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如ss、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。

本实验通过常规的病原菌检测方法从脓汁标本中分离出黄白两种细菌，均为革兰氏阳性球菌，其中黄色是致病菌——金黄色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；从粪便标本中分离到紫黑色和粉红色的细菌，均为革兰氏阴性杆菌，其中紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。

1实验材料1.1器材打火机油性笔酒精灯接种环接种针污物盘普通冰柜隔水式电热恒温培养箱奥林巴斯cx21型生物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸硫酸纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子bo片吸水纸拭镜纸1.2试剂药品普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水结晶紫卢戈碘液95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片血浆福氏志贺菌诊断血清2实验方法与步骤实验的总流程细菌的分离培养细菌纯培养细菌的形态学检查细菌的生化试验细菌的血清学试验、结果分析2.1培养基制备干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→1）平板培养基：倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放→4℃冰箱保存备用。

微生物学思考题答案1、你如何使你的朋友相信微生物不仅仅是一种病原？尽管目前微生物仍在严重威胁人类的生存，但另一方面，我们必须强调，大多数微生物对人类是无害的。

事实上，大多数微生物对人类社会还有巨大的价值。

整个农业系统在许多方面都依赖微生物的活动。

许多主要的农作物属于豆科植物，它们的生长同专一性细菌紧密相连，这些细菌可在植物的根部形成根瘤结构。

根瘤结构中，大气中的氮转变成可用于生长的氮化物。

根瘤细菌的固氮活动，减少了昂贵肥料的需要。

微生物在农业上的另一个重要性在于，某些动物是反刍动物，这些主要的农业动物具有瘤胃，微生物在瘤胃中进行消化。

没有这些微生物牛羊的饲养是不可能的。

植物营养方面，微生物在碳、氮、硫这些重要营养成分的循环起着关键作用。

土壤和水中的微生物可见这些元素转化成植物容易利用的形式。

微生物与食品的关系，不仅仅是产生腐败变质等不利影响。

奶制品的制造至少部分是借助微生物的活动，包括乳酪、酸乳酪和黄油，都是主要的具有经济价值的产品。

泡菜、腌制食品和一些腊肠也归功于微生物的活动。

可烘焙的食品及乙醇的制造也基于酵母菌的发酵。

微生物在能源生产方面也起着重要作用。

天然气是细菌作用的产物，由甲烷细菌代谢产生。

光营养的微生物能够收集太阳能生产生命有机体中的储存物――生物量。

废物如生活垃圾、剩余谷物、动物废料等通过微生物转化微生物燃料――甲醇和乙醇。

利用微生物清理被人类活动污染的大气――生物整治。

利用微生物降解油污、溶剂、杀虫剂和其他环境污染物。

通过基因操纵技术，能在微生物种生产出人类胰岛素。

利用基因组学方法搜索带几百个目的蛋白的基因蓝图，然后将它们转入到合适的受体中由于生产重要的、有商业价值的蛋白质。

在自然界中，它无限小，但作用无限大。

2、胡克和列文虎克对微生物学的贡献有那些？科恩对微生物学的贡献有那些？1665年，罗伯特.胡克描述了霉菌的子实体结构，因此他是第一个描述微生物的人。

1676年，列文虎克在研究辣椒水渗出的过程中发现了细菌，因此他是首次描述细菌的人。

微生物实验报告答案微生物实验报告答案【篇一：微生物的革兰氏染色实验报告】=txt>二、实验目的：1、学习并初步掌握革兰氏染色法；2、了解革兰氏染色的原理；3、巩固显微镜的使用。

三、实验原理：革兰氏染色是1884年丹麦病理学家christain gram氏创立的，是细菌学中最重要的鉴别染色法。

染色步骤分为四个部分：1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片；2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物；3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色；g-和g+细胞壁的比较：1、阳性（g+）菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。

当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。

2、阴性（g-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。

四、实验器材：1、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。

2、溶液和试剂：革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红复染液、水。

3、仪器及其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、接种环、试管架、滤纸、滴管。

五、实验步骤：1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。

2、打开酒精灯，用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。

3、轻旋结晶紫染液滴管，将其旋出，滴加1滴草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位（轻晃使其完全覆盖），染色40s。

4、染色完成后倾去染液，水洗至流出水为无色。

5、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。

微生物工程思考题参考答案Ricky & Bullet 2017.11、举出几例微生物大规模表达的产品, 及其产生菌的特点？A.蛋白酶表达产物一般分泌至胞外，能利用廉价的氮源，生长温度较高，生长速度快,纯化、分离及分析快速；安全性高，得到FDA的批准的菌种。

B.单细胞蛋白生长迅速，营养要求不高，易培养，能利用廉价的培养基或生产废物。

适合大规模工业化生产，产量高，质量好。

安全性高，得到FDA的批准的菌种。

C. 不饱和脂肪酸生长温度较低，安全性高，能利用廉价的碳源，不饱和脂肪酸含量高，D.抗生素生产性能稳定，产量高，不产色素，，能利用廉价原料F. 氨基酸代谢途径比较清楚，代谢途径比较简单2、自然界分离微生物的一般操作步骤？样品的采取→预处理→培养→菌落的选择→初筛→复筛→性能的鉴定→菌种保藏3、从环境中分离目的微生物时，为何一定要进行富集培养？自然界中目的微生物含量很少，非目的微生物种类繁多，进行富集培养，使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，使筛选变得可能。

4、菌种选育分子改造的目的？防止菌种退化; 解决生产实际问题;提高生产能力; 提高产品质量; 开发新产品5、什么叫自然选育？自然选育在工艺生产中的意义？自然选育就是不经人工处理，利用微生物的自然突变进行菌种选育的过程。

自然选育在工业生产上的意义：自然选育可以有效地用于高性能突变株的分离。

然选育虽然突变率很低，但却是工厂保证稳产高产的重要措施。

6、什么是诱变育种？常用的诱变剂有哪些？诱变育种是指用物理、化学因素诱导植物的遗传特性发生变异，再从变异群体中选择符合人们某种要求的单株，进而培育成新的品种或种质的育种方法。

诱变剂有两大类：物理诱变剂和化学诱变剂。

常用的物理诱变剂有紫外线、x射线、γ射线(如Co60等)、等离子、快中子、α射线、β射线、超声波等。

常用的化学诱变剂有碱基类似物、烷化剂、羟胺、吖定类化合物等。

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本实验主要探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。

在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。

从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。

[引言]常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。

浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。

粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。

粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如ss、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。

本实验通过常规的病原菌检测方法从脓汁标本中分离出黄白两种细菌，均为革兰氏阳性球菌，其中黄色是致病菌——金黄色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；从粪便标本中分离到紫黑色和粉红色的细菌，均为革兰氏阴性杆菌，其中紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。

1实验材料1.1器材打火机油性笔酒精灯接种环接种针污物盘普通冰柜隔水式电热恒温培养箱奥林巴斯cx21型生物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸硫酸纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子bo片吸水纸拭镜纸1.2试剂药品普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水结晶紫卢戈碘液95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片血浆福氏志贺菌诊断血清2实验方法与步骤实验的总流程细菌的分离培养细菌纯培养细菌的形态学检查细菌的生化试验细菌的血清学试验、结果分析2.1培养基制备干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→1）平板培养基：倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放→4℃冰箱保存备用。

微生物学实验原理及思考题答案第一篇：微生物学实验原理及思考题答案油镜便于观察的原理是什么?用油镜观察时在油镜与载玻片之间加入了和玻璃折射率相近的香柏油，使进入透镜的光线增多，视野亮度增强，使物象明亮清晰。

1.细调节器每旋转一周使镜筒上升或下降0.1mm.一。

培养基的配制原理：微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养物，为其生长发育提供所需营养的基质。

培养基配制好以后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物实验。

一次培养基的配制和灭菌是微生物实验室中最基本的操作，通过本次实验学习微生物实验室中常用培养基的配制方法和灭菌方法。

1.称药品的钥匙不要混用称完药品应及时盖紧瓶盖，因为某些成分如蛋白胨极易吸水潮解调PH时要小心操作，避免回调。

配制培养基应注意哪些问题？要选定合适的培养基;培养基成分要称量准确；PH要适宜；灭菌要严格。

培养基配制完成后为什么要立即灭菌？已灭菌的培养基如何进行无菌检查？防止细菌污染培养基一旦细菌污染了培养基，由于培养基有丰富的营养物质，细菌会段时间内大量产生这样子就会跟培养物争夺营养物质，另一方面，细菌生长过程中会产生有毒物质致使培养物死亡。

放在37℃的恒温箱中一两天后，培养基上没有生长任何微生物的就可以使用（若有微生物则是以菌落出现的肉眼可以看见）二。

细菌的单染色技术原理：单染色法师利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

在中性，碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。

碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易于带负电荷的细菌结合而使细菌着色。

制备染色标本时的注意事项？选择合适菌龄的细菌；固定时避免火焰直接烘烤破坏细菌形态；染色时间要适宜；水洗时水不能直接冲在涂片处。

制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？油和水之间会分层，油就不能与标本接触还有光会发生折射等等原因，这样不利于油镜观察三。

细菌的革兰氏染色法原理：细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，为G+，有的可被脱去，为G-.1.革兰氏染色成败的关键是乙醇脱色。

（完整版）微生物思考题及参考答案微生物思考题及参考答案1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比.2.什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。

利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。

3.影响显微镜分辨率的因素有哪些？答：物镜的NA值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长.4.美蓝染色液作用时间的不同,对酵母菌死细胞数量有何影响,试分析原因答：会造成更多的死细胞，在显微镜下观察，活的是透明无色，衰老的是淡蓝色，死亡的是蓝色，如果美蓝染色液作用时间过长，会造成细胞脱水死亡并渗透染液，影响实验结果。

5.镜检时如何区分放线菌基内菌丝，气生菌丝以及孢子丝一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。

6.在进行细菌涂片时应注意哪些环节1、载玻片应该冷却后再涂片。

2、如果是涂布液体，可以用毛细管或接种环滴一小滴，然后轻轻抹开，一圈足够。

3、如果是涂布菌落或菌苔，应该在载玻片上先滴一滴水，再将菌落或菌苔涂布上去，接种环的尖蘸一点点即可。

4、为了节省时间，可以将干燥和热固定合并成一步。

但是应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形。

5、染色时间视染色液种类而定。

如结晶紫只需几十秒，亚甲基蓝则需一到两分钟。

6、冲洗时，水流不能太大，而且尽量避免水流直接冲在涂片上。

实验一 细菌的简单染色和细菌形态的观察一、实验原理简单染色采用一种染料对菌体进展染色，常用结晶紫、美蓝、碳酸复红等碱性染料。

染色后，菌体与背景形成鲜明比照，在显微镜下很容易被识别。

通过简单染色方法可以观察细菌的菌体形态特征和菌体的排列方式。

观察菌体形态 简单染色 〔只用一种染料〕 观察菌体排列方式染色方法 革兰氏染色鉴别鉴别染色 抗酸性染色〔利用两种染料〕 芽孢染色观察特殊构造 荚膜染色鞭毛染色二、实验步骤：涂片 枯燥 固定 染色 水洗 枯燥 镜检三、思考题1、制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节？答；〔1〕涂片：开场所加无菌水液滴不要太大，否则不易枯燥；取菌量要适宜且要涂抹均匀，防止过大造成堆积，而难以看清细胞个体形态同时也应防止取菌量太少而难以在显微镜视野中找到细胞。

〔2〕无菌操作取菌：一定要等接种换冷却后再取菌，以免高温使菌体变形；〔3〕枯燥固定：枯燥后加热固定，可防止加热时间过长，否则细胞会破裂或变形；〔4〕固定：菌膜一面朝上，通过酒精灯微火三次。

注意温度不宜过高，时间不宜太长，否则菌体形态则会发生改变。

〔5〕水洗：倾去染色液后，用水沿着菌膜四周冲洗，注意勿使水流直接冲洗菌膜部位，水流不宜过急，过大，至流出水无色为止；2、为什么要求制片完全枯燥才能用油镜观察？答：使用油镜时，物镜与标本间的介质为香柏油〔N=1.515〕，不仅增加了透明度，而且会提高了分辨率。

就用油镜观察，则N 会减小，分辨率D 也会变小。

而且还会造成油水两相不互溶，所以制片要求完全枯燥后才能用油镜观察。

3、如果涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高，时间太长，又会怎样呢？答：加热固定的作用是使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌而且不破坏细胞形态，而且还可增加细胞对染料亲和力。

〔1〕如果图涂片未经加热固定，则细胞无法固定在载玻片上，在染色水洗后会被水流冲走。

〔2〕如果加热温度过高，时间太长，则会使细菌形态发生变化甚至破裂。

微生物学实验报告答案微生物学实验报告答案引言：微生物学是研究微生物的结构、功能、分类、生长、繁殖以及微生物与其他生物之间的相互作用的学科。

在这个实验报告中，我们将讨论一些关于微生物学实验的答案，以帮助读者更好地理解微生物学的基本概念和实验技术。

实验一：细菌培养与观察在这个实验中，我们通过培养细菌并观察其形态和结构来研究细菌的特征。

1. 细菌培养基的选择：细菌培养基通常包括富含营养物质的琼脂和适当的缓冲液。

常用的培养基有LB （Luria-Bertani）培养基、MacConkey琼脂培养基等。

选择合适的培养基对于细菌的生长和观察非常重要。

2. 细菌培养条件：细菌培养需要一定的温度、湿度和氧气条件。

通常，细菌培养在37摄氏度下进行，因为这是大多数人体病原菌的适宜生长温度。

此外，培养皿需要保持湿润，以确保细菌的生长。

对于厌氧菌的培养，需要使用厌氧培养箱。

3. 细菌形态和结构观察：在观察细菌形态和结构时，可以使用显微镜。

细菌的形态包括球菌、杆菌和螺旋菌等。

此外，细菌还具有不同的结构特征，如菌落形态、荚膜和鞭毛等。

通过观察这些特征，我们可以初步鉴定细菌的种类。

实验二：细菌的致病性测试在这个实验中，我们将研究细菌的致病性，了解细菌在人体内引起疾病的机制。

1. 动物模型的选择：为了研究细菌的致病性，我们通常使用动物模型。

常见的动物模型包括小鼠、大鼠和兔子等。

选择合适的动物模型对于研究细菌的致病性非常重要。

2. 细菌接种和观察：在动物模型中，我们将细菌接种到动物体内，观察细菌是否引起疾病。

观察的指标可以包括动物的行为改变、体温升高和组织病理学变化等。

通过这些观察，我们可以评估细菌的致病性。

3. 细菌致病性机制的研究：细菌引起疾病的机制非常复杂，包括产生毒素、侵袭宿主组织和抑制免疫系统等。

通过研究细菌的致病性机制，我们可以更好地理解细菌与宿主之间的相互作用，为疾病的预防和治疗提供理论基础。

实验三：抗生素敏感性测试在这个实验中，我们将研究细菌对抗生素的敏感性，以评估抗生素的疗效。

微生物思考题及参考答案1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比.2.什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。

利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。

3.影响显微镜分辨率的因素有哪些？答：物镜的NA值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长.4.美蓝染色液作用时间的不同,对酵母菌死细胞数量有何影响,试分析原因答：会造成更多的死细胞，在显微镜下观察，活的是透明无色，衰老的是淡蓝色，死亡的是蓝色，如果美蓝染色液作用时间过长，会造成细胞脱水死亡并渗透染液，影响实验结果。

5.镜检时如何区分放线菌基内菌丝，气生菌丝以及孢子丝一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。

6.在进行细菌涂片时应注意哪些环节1、载玻片应该冷却后再涂片。

2、如果是涂布液体，可以用毛细管或接种环滴一小滴，然后轻轻抹开，一圈足够。

3、如果是涂布菌落或菌苔，应该在载玻片上先滴一滴水，再将菌落或菌苔涂布上去，接种环的尖蘸一点点即可。

4、为了节省时间，可以将干燥和热固定合并成一步。

但是应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形。

5、染色时间视染色液种类而定。

如结晶紫只需几十秒，亚甲基蓝则需一到两分钟。

6、冲洗时，水流不能太大，而且尽量避免水流直接冲在涂片上。

7、冲洗后干燥，可以用酒精灯加热以节省时间，同样的，应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形。

微生物学实验思考题实验1 培养基的配置1、简述配置培养基的基本步骤及注意事项。

步骤：配料-溶解-调PH-加入琼脂-融化-分装-封口（棉花纱布或封口膜）-灭菌注意事项①加热溶化过程中，要不断的搅拌，防止琼脂糊底。

最后，补足所失水分。

② pH值要按照各种不同培养基的要求调整。

③分装时注意不要使培养基沾染在管口或者瓶口上，以免沾污棉塞引起杂菌污染。

④培养基的灭菌时间和温度需要按照各种培养基的规定进行，培养基灭菌后，须放在37℃温箱培养24-48h，以检查灭菌是否彻底。

2、为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口要塞上棉塞才能使用？为了防止外界微生物进入三角瓶或试管，保持三角瓶或试管内部无菌状态或微生物的纯培养状态。

同时又允许空气进入，给内部菌种提供适宜生存环境。

3、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？如果不进行灭菌培养料内的微生物就会发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分，并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制目的菌的生长。

检查无菌的方法：将灭菌的培养基放入37℃温室中培养24~48小时，若无杂菌生长，即可证明为无菌的。

4、配置培养基为什么要调节pH？因为不同微生物所需环境的PH不同,同时在微生物的生长过程中由于营养物质的分解、代谢产物的积累,培养基的PH也会发生改变,故培养基在配置时以及在微生物培养过程中都需要调节PH。

5、什么是选择培养基？它在微生物工作中有何重要性？选择性培养基是指根据某种微生物的特殊要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。

利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。

实验2 高压蒸汽灭菌1、如何检查培养基灭菌是否彻底？将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h，若无杂菌生长即已彻底。

2、高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0是才能打开排气阀？灭菌主要因素是温度而非压力，排出冷空气后关上排气阀，维持所需压力。

微生物实验报告范文思考题答案
思考题
1、脱色环节，脱色不足会把革兰氏阳性菌染成阴性菌，脱色过度会
把阴性菌染成阳性菌；复染环节，染液不能干涸。

最关键的环节是乙醇脱
色环节。

2、菌龄太老会造成着色不均染色效果不好~阴性阳性不明显分不太清楚,不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌~
3、不可以。

因为革兰氏碘液的作用是增加结晶紫染料和细胞之间的
亲和性或附
着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落。

改变顺序
可能会对效果有影响，所以最好按步骤做；脱色后复染前，理论上革兰氏
阳性菌呈紫色，阴性菌无色。

4、可以，因为脱色后G+是紫色的而G-是无色的，这时，已经可以区
分了，但是如果不经复染的话，镜检时看不清G-的细胞形态，而且如果
没有和G+一起混染的话，基本看不清什么，但是如果只做区分的话，可
以不经过复染。

5、注意菌龄，12-18小时的培养物；注意乙醇的脱色时间，20-30秒，时间过长或过短都会和结果不符。

6、因为用油镜观察时,镜头离玻片会很近.如果未完全干燥,载玻片上
的液体会污染油镜镜头.镜头非常精密,被污染后不利于下次观察。

另外,一般作细菌装片不用盖盖玻片,所以待干燥后才能观察.如果盖
上盖玻片后就不用考虑需要干燥的问题.
7、未经热固定，在剩下的步骤中，菌体会被液体冲走，镜检时出现在视野中的细菌极少，甚至没有；加热温度过高或时间过长会导致菌体变形或形态破坏。

微生物实验思考题参考答案及知识要点------------------------------------------ 二.细菌的简单染色和革兰氏染色1.革兰氏染色中那一步是关键？为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。

如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s ）。

2.固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。

固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。

3.不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。

在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（W）,被酒精脱色为革兰氏阴性菌。

最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。

4.涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b增加其对染料的亲和力。

固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。

三.霉菌、放线菌的形态观察1.镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。

2.显微镜下细菌放线菌酵母菌和霉菌的主要区别是什么？放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。

细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。

（部分杆菌还可形成芽抱）放线菌：存在分枝丝状体和菌丝体，革兰氏阳性菌，有抱子丝和抱子（球形、椭圆形、杆状、柱状）。

酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。

微⽣物⼯程思考题参考答案微⽣物⼯程思考题参考答案Ricky & Bullet 2017.11、举出⼏例微⽣物⼤规模表达的产品, 及其产⽣菌的特点？A.蛋⽩酶表达产物⼀般分泌⾄胞外，能利⽤廉价的氮源，⽣长温度较⾼，⽣长速度快,纯化、分离及分析快速；安全性⾼，得到FDA的批准的菌种。

B.单细胞蛋⽩⽣长迅速，营养要求不⾼，易培养，能利⽤廉价的培养基或⽣产废物。

适合⼤规模⼯业化⽣产，产量⾼，质量好。

安全性⾼，得到FDA的批准的菌种。

C. 不饱和脂肪酸⽣长温度较低，安全性⾼，能利⽤廉价的碳源，不饱和脂肪酸含量⾼，D.抗⽣素⽣产性能稳定，产量⾼，不产⾊素，，能利⽤廉价原料F. 氨基酸代谢途径⽐较清楚，代谢途径⽐较简单2、⾃然界分离微⽣物的⼀般操作步骤？样品的采取→预处理→培养→菌落的选择→初筛→复筛→性能的鉴定→菌种保藏3、从环境中分离⽬的微⽣物时，为何⼀定要进⾏富集培养？⾃然界中⽬的微⽣物含量很少，⾮⽬的微⽣物种类繁多，进⾏富集培养，使⽬的微⽣物在最适的环境下迅速地⽣长繁殖，数量增加，由原来⾃然条件下的劣势种变成⼈⼯环境下的优势种，使筛选变得可能。

4、菌种选育分⼦改造的⽬的？防⽌菌种退化; 解决⽣产实际问题;提⾼⽣产能⼒; 提⾼产品质量; 开发新产品5、什么叫⾃然选育？⾃然选育在⼯艺⽣产中的意义？⾃然选育就是不经⼈⼯处理，利⽤微⽣物的⾃然突变进⾏菌种选育的过程。

⾃然选育在⼯业⽣产上的意义：⾃然选育可以有效地⽤于⾼性能突变株的分离。

然选育虽然突变率很低，但却是⼯⼚保证稳产⾼产的重要措施。

6、什么是诱变育种？常⽤的诱变剂有哪些？诱变育种是指⽤物理、化学因素诱导植物的遗传特性发⽣变异，再从变异群体中选择符合⼈们某种要求的单株，进⽽培育成新的品种或种质的育种⽅法。

诱变剂有两⼤类：物理诱变剂和化学诱变剂。

常⽤的物理诱变剂有紫外线、x射线、γ射线(如Co60等)、等离⼦、快中⼦、α射线、β射线、超声波等。

常⽤的化学诱变剂有碱基类似物、烷化剂、羟胺、吖定类化合物等。