核酸分离纯化的原则

磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。

硅磁（Magnet ic Silic a Partic le）就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。

离心磁珠是指磁珠微珠表面包裹了一层可发生离心交换的材料（如DEAE，COO H）等，从而达到吸附核酸目的。

不同性质的磁珠微珠所对应的纯化原理是不一致。

使用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。

磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程。

Omega拥有全面的磁珠法核酸分离试剂盒，基于这种技术的试剂盒，名称前都有’Mag-Bind’。

核酸分离与纯化的原则核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。

核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。

在分离核酸时应遵循以下原则:保证核酸分子一级结构的完整性;排除其他分子污染。

核酸分离与纯化的步骤大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。

每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。

1. 细胞裂解:核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。

细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。

(1) 机械作用:包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。

这些方法用机械力使细胞破碎,但机械力也可引起核酸链的断裂,因而不适用于高分子量长链核酸的分离。

有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp ～> 20kb 之间,而颗粒匀浆法提取的核酸一般< 10kb。

(2) 化学作用:在一定的p H 环境和变性条件下,细胞破裂,蛋白质变性沉淀,核酸被释放到水相。

上述变性条件可通过加热、加入表面活性剂(SDS、Triton X-100 、Tween 20 、NP-40 、CTAB、sar-cosyl 、Chelex-100 等) 或强离子剂(异硫氰酸胍、盐酸胍、肌酸胍) 而获得。

核酸提取的原则和流程嘿，朋友！今天咱们来聊聊核酸提取这个超有趣又超级重要的事儿。

一、核酸提取的原则1. 保证核酸的完整性这就像是保护一件精美的艺术品一样。

你想啊，如果核酸断成了一节一节的，那它就像一幅被撕得七零八落的画，可就没法好好发挥作用了。

我们得小心翼翼地处理样本，避免那些物理因素，像过度的震荡、剪切力，就好比你不能拿着那幅画胡乱摇晃，不然画就毁了。

还有化学因素，不合适的酸碱度就像给这幅画泼上了腐蚀性的液体，会把核酸给弄坏的。

温度也很关键呢，太热或者太冷都可能让核酸像脆弱的花朵在恶劣天气里一样受到伤害。

2. 纯度要高这纯度啊，就像是你做饭时用的原料得特别干净一样。

如果核酸提取出来混着好多杂质，就像你煮的粥里混着沙子，那怎么能行呢？杂质会干扰后续对核酸的各种研究和检测。

比如说那些蛋白质杂质，就像不速之客，它们可能会和核酸“抢地盘”，影响核酸在实验中的表现。

还有其他的小分子杂质，就像捣乱的小虫子，在我们想要精准研究核酸的时候，它们在旁边搅和得一团糟。

3. 得率要高想象一下你在果园里摘果子，你肯定希望把树上的果子尽可能多地摘下来呀。

核酸提取的得率高，就意味着我们能从样本里拿到更多可用的核酸。

要是得率低，就像你去果园忙活了半天，只摘到寥寥几个果子，那多不划算啊。

这得率和我们最初选择的样本量、提取的方法以及操作的精细程度都有关系呢。

二、核酸提取的流程1. 样本采集这是核酸提取的第一步，就像盖房子打地基一样重要。

不同的样本来源可有不同的采集方法哦。

如果是采集血液样本，护士就像专业的探险家一样，用针管精准地抽取适量的血液。

那动作必须熟练又小心，要是抽多了，病人可能会不舒服，抽少了又可能不够用。

要是采集的是组织样本，医生就像是技艺精湛的工匠，用特殊的工具精准地切取需要的组织部分。

这时候啊，旁边的助手就会在旁边提醒，“这个部位取的量要合适哦，不然会影响核酸的量呢。

”采集的样本要尽快处理，就像刚摘下来的新鲜水果得赶紧吃或者做成罐头保存一样，不然核酸可能会开始降解啦。

核酸分离与纯化的技术路线与原则核酸包括DNA 、RNA两类分子，在细胞内均与蛋白质结合成核蛋白。

真核生物基因组中，95%DNA 为双链线性分子，存在于细胞核中，5%为双链环状分子，存在于细胞器中；原核生物DNA 及质粒DNA 为双链或单链环状分子；RNA 为单链线性分子，主要存在于细胞质中。

DNA 与RNA 性质的不同导致对其分离与纯化的条件也不相同。

一、核酸分离与纯化的原则(1)保证核酸一级结构的完整性。

生物的遗传信息全部贮存在核酸一级结构中，而且核酸的一级结构还决定其高级结构的形式及和其他大分子结合的方式。

所以，所提取的核酸一级结构的完整性直接影响着后续实验中对其结构与功能研究的质量。

因此，在制备核酸的过程中，要做到：尽量简化操作程序，缩短提取过程；避免过酸、过碱等化学因素对核酸链中磷酸二酯键的破坏，在pH 值4～10条件下进行操作；操作时动作要轻缓，提取的样品小包装保存，以免诸多的物理因素对核酸的降解；避免细胞内及环境中核酶对核酸的生物性降解。

(2)排除其他生物大分子的污染，如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应尽可能降低到最低程度，特别是提取DNA 分子时应除去RNA 分子，反之亦然。

(3)排除核酸样品中有机溶剂和过高浓度的金属离子。

二、分离与纯化的技术路线(一)核酸的释放通常情况下DNA 及RNA 均位于细胞内，因此核酸分离与纯化的第一步就是制备单个细胞，再破碎细胞，从而释放核酸。

破碎细胞的方法包括机械法与非机械法两大类。

机械法又可分为液体剪切法与固体剪切法；非机械法可分为干燥法与溶胞法。

由于溶胞法采用适宜的化学试剂与酶，能有效地裂解细胞，方法温和，能保证较高的核酸获得率，并能较好地保持核酸的完整性，从而得到广泛的应用。

(二)核酸的分离与纯化利用核酸与其他物质性质上的差异，可以分离与纯化核酸。

这种差异包括细胞定位与组织分布上的差异，物理、化学性质上的不同，以及各自独特的生物学特性。

操作过程中，既可以从复杂样品中抽提出核酸分子，也可以将样品中的非核酸成分(非核酸的生物大分子、非需要的核酸分子及在操作过程中加入的溶液与试剂)逐步清除。