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第1节高效液相色谱的特点与仪器ppt

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高效液相色谱仪ppt课件

高效液相色谱仪ppt课件
8
高压泵应具有以下性能

流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
9
根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
30
2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

高效液相色谱法 PPT课件

高效液相色谱法 PPT课件
①固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈

高效液相色谱仪课件完美版PPT资料

高效液相色谱仪课件完美版PPT资料

• 样品 1、 采用过滤或离心方法处理样品，确保样 品中不含固体颗粒；
2、 用流动相或比流动相弱（若为反相柱，
则极性比流动相大；若为正相柱，则极性
比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量 用流动相制备样品液；
3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量 管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；
• 色谱柱： 1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围， 如pH值范围、流动相类型等； 2、 使用符合要求的流动相； 3、 使用保护柱； 4、 如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先 用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲 洗。
高效液相色谱的特点
• 高压——压力可达150～300 kg/cm2。色 谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
• 高速——流速为～10ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ0 mL/min。 • 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱
中同时分离成份可达100种。 • 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达。同
时消耗样品少。
主要分离类型
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内。
液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。 如分析氨基甲酸 酯农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快, 如在环境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染分析得到新的发展。
高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
在一根柱中同时分离成份可达100种。 亲和色谱：利用生物大分子与固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择分离。
操作过程中应注意的事项

高效液相色谱的特点与仪器PPT课件

高效液相色谱的特点与仪器PPT课件
输液系统通常采用高压泵，能够产生较高的压力，以满足色谱柱对流动 相的阻力和分离要求。
色谱柱
色谱柱是高效液相色谱仪器中用于分离 样品的关键部件，由固定相和流动相组
成。
根据不同分离需求，可以选择不同类型 色谱柱的填料粒径和柱长对分离效果和 的色谱柱，如正相、反相、离子交换等。 分离时间有重要影响，粒径越小、柱长
高效液相色谱仪器配备各种自动检测 和控制功能，如压力控制、流量控制、 温度控制等，确保实验结果的准确性 和可靠性。
03
高效液相色谱仪器介绍
输液系统
输液系统是高效液相色谱仪器的核心部分，负责将流动相泵入色谱柱进 行分离。
输液系统应具备高精度和高稳定性，以确保流动相的流量和压力稳定， 从而获得准确的分离结果。
检测和分析。
环境分析
生物分析
用于环境样品中有机污 染物、重金属等的检测 和分析，评估环境质量。
用于生物样品中蛋白质、 核酸、糖类等的分离和 分析，研究生物分子结
构和功能。
02
高效液相色谱的特点
高分离效能
高效液相色谱采用小颗粒填料， 减小了传质阻力，提高了柱效。
高效液相色谱的固定相和流动 相的极性、酸碱度等参数可根 据需要进行调整，提高了分离 的选择性。
高效液相色谱的固定相和流动相 的纯度较高，减少了杂质干扰，
提高了检测灵敏度。
高效液相色谱可采用柱后衍生技 术或在线富集技术等手段，进一
步提高检测灵敏度。
自动化程度高
高效液相色谱仪器自动化程度高，可 实现自动进样、自动清洗、自动控制 等操作。
高效液相色谱仪器可与计算机技术相 结合，实现数据采集、处理和报告的 自动化，提高工作效率。
越长，分离效果越好，但同时也会增加 分离时间和仪器压力。

高效液相色谱的基础知识 PPT

高效液相色谱的基础知识 PPT
高效液相色谱的基础知识
1 2 3
高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法仪器工作原理 高效液相色谱仪的维护 高效液相色谱法仪的注意事项
4
5
高效液相色谱法的特点
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70 年代初发展起来的一种新型分离分析技术。它是 在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论， 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度 检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、 操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色 谱法优越性，现从两方面进行比较：
• 高压输液系统 • 进样系统 • 分离系统 • 检测系统
高效液相色谱仪工作原理
其工作过程如下：
高效液相色谱仪的维护 泵的使用和维护
1.防止任何固体微粒进入泵体，输液泵的滤器应经常清洗或更换。 2.流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内。泵工 作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或 密封环，最终产生漏液。 3.泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏 液。 4.流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气 泡，泵就无法正常工作
高效液相色谱法的特点
高效液相色谱法与经典液相色谱法
高效液相色谱法 速度 灵敏度 高速 高灵敏度 经典液相色谱法 极慢 低
自动化
进料方式 效率
高自动化
高压输液设备 高效
低
重力加料 低
如对氨基酸分离，用经典色谱法，需用20多小时才能分离出20种氨基酸； 而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。
高效液相色谱仪工作原理
CAP2000+粘度计使用说明书（下）
• • 样品应完全覆盖锥转子底部表面，并且溢出其边沿 1.0mm。 8. 等待约 1至 3分钟，使锥转子、加热板及样品的温度到达设置温度。

高效液相色谱分析 教学PPT课件

高效液相色谱分析 教学PPT课件

四、离子交换色谱
此法是利用离子交换原理和液相色谱技术相结 合，测定各类阴、阳离子的分离分析方法。它既 适于无机离子，也适于有机物分离，如蛋白质、 氨基酸、核酸等。
1. 原理：利用不同待测离子对固定相的亲和能力 （或离子交换能力）的差别来实现分离的。
阳离子交换: R - SO-3H M R SO-3M H
从速率理论各项的差别看HPLC与GC的区别
H A B Cu u
1）涡流扩散项A 2）分子扩散项 B/u
A=2dp B=2Dl
3）传质阻力项
包括固定相传质阻力系数和流动相传质阻力系数
Hs
Cs df2 Ds
u
Hm
Cm
d
2 p
Dm
u
Hsm
Csm d p2 Dm
u
改进固定相成为提高液相色谱柱效的一个重要问题
惰性核
薄膜型
表面多孔型
四、排阻色谱法固定相
• 软质凝胶：水为流动相，孔径大小由交联剂控制 • 半硬质凝胶：适用于非极性有机溶剂，不能随意 更换溶剂，能耐较高压力，流速不宜大
• 硬质凝胶：多孔硅胶、多孔玻珠；多孔硅胶化学 稳定性好，热稳定性好，机械强度高，吸附问题需 要进行特殊处理。
• 选择填料时首先要考虑相对分子质量排阻极限
三、离子对色谱法（IPC）
主要用来分离强极性有机酸和有机碱。
原理：将与待测物离子A电荷相反的离子B（称为 对离子或反离子）加入到流动相中，使待测离子 与对离子形成离子对AB，该AB离子对的性质与A 离子或B离子的性质不同，即间接改变了待测离子 的保留特性。
还可借助离子对的生成给试样引入紫外吸收活发 荧光的基团，以提高检测的灵敏度。
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定 相, 现多为化学键合固定相（通过化学反应将有机 分子键合在载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、 流失小、适于梯度淋洗等特点 ）。

第1节 高效液相色谱的特点与仪器.ppt

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2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇 、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
1. 流动相特性
（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动 相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；
（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。
（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液 液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上 的出峰顺序相反。
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(4) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
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(5) 液相色谱检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
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3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂， 若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使 保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳> 环己烷>己烷>煤油(最小)

高效液相色谱仪介绍课件


谢谢
号
05
数据处理系统： 处理和分析色
谱数据
06
07
流动相储液瓶： 储存流动相
废液收集器： 收集废液
08
泵管路：连接 各部件，保证 流动相的流通
09
10
温度控制系统： 控制色谱柱和 检测器的温度
安全保护装置： 保护操作人员 和仪器的安全
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱仪是一种利用液体 作为流动相的色谱分析仪器。
安装
定期校准与保养
01
定期检查仪器的 各个部件，确保
其正常工作
02
定期更换易损部 件，如泵密封圈、 进样阀密封圈等
03
定期进行仪器校 准，确保分析结
果的准确性
04
定期清洁仪器， 保持仪器的清洁
和干燥
05
定期检查仪器的 电源和接地线，
确保安全使用
06
定期记录仪器的 使用情况和维护 保养情况，便于 日后查询和分析
农药分析
农药残留检测： 检测农产品中的 农药残留，保障
食品安全
农药质量控制： 监控农药生产过 程中的质量，确 保产品质量合格
农药环境污染监 测：监测环境中 的农药污染，评
估环境风险
农药研发：辅助 农药研发，提高 研发效率和质量
环境监测
01
水质监测：检测水中的污染物和化学物质
02
空气监测：检测空气中的污染物和化学物质
药物代谢：研 究药物在生物 体内的代谢过 程和机制
药物相互作用： 研究药物之间 的相互作用和 影响
3
高效液相色谱 仪的发展趋势
仪器自动化
仪器操作自动化：通过计算机控 制，实现仪器的自动化操作
数据处理自动化：自动采集、处 理和分析数据，提高分析效率

高效液相色谱的特点与仪器优秀课件

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三、进样装置
装入状态
采样环
进色谱柱 泵入溶剂 出口
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进样状态
四、柱高材：效一分般离采柱用不锈钢管和 PEEK 塑料。
柱型及尺寸：一般采用管内径1～6 mm，柱长 5～40 cm直型柱，标准柱型φ3.9 或 4.6mm ，L 15、
30cm。
填料粒度：5~10 µm，柱效5000～10000 ， 3~5 µm，L 5~10cm。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
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五、液相色谱检测器
常用的理检想测的器HPLC 检UV测D器；应RI具D；备E的C特D 性；FLD。 ➢ 灵敏度高； ➢ 对所有溶质都 有快速响应； ➢ 响应对流动相 流量和温度变化不 敏感； ➢ 202线0/12性/18 范围宽；
• 泵死体积要小；以便迅速更换溶剂和梯度洗提。
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2. 高压泵分类： 恒流泵：输出流量恒定，与柱引起阻力无关。 恒压泵：输出压力恒定，与柱引起阻力无关。
(1) 恒流泵：常用往复式柱塞泵和注射泵。
特点：流量恒定，液腔体积小（0.1ml），更换 溶剂和梯度洗提方便，但有脉动，应用广泛。
大于400 的有机物都可用 HPLC 法分析。
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HPLC的局限性
➢ 分析成本高，宜引起污染。 ➢ 缺少高灵敏度的通用型检测器。 ➢ 不能替代GC完成沸程范围宽的石油产品的分
析。
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➢ 操作较GC复杂。
HPLC与GC比较
气相色谱 只能分析挥发性物质 不能用于热不稳定物质的分析
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3．梯度洗脱装置 梯度洗提：在分离过程中按一定的程序连续改
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特点：高压、高效、 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
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三、流程及主要部件
process and main assembly of HPLC
1.流程 1.流程
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2.主要部件 主要部件20来自1-9-8示差折光检测器
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d. 荧光检测器
（fluorescence detector） 高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、 黄曲霉素、卟啉类化合物、 农药、药物、氨基酸、甾类 化合物等有响应；
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请选择内容
第一节 高效液相色谱的特点与仪器
feature and instrument of HPLC
(1) 高压输液泵
♥主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 ♥为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10µm），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 ♥应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 ♥
（动画） 动画）
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第二节 基本原理与主要分离类型
basic principle and main separating type
第三节 固定相与流动相
stationary phase and mobile phase
第四节 影响分离的因素与操作条件选择
factors influenced separation and choice of operation condition
第五节 离子色谱法
ion chromatograph
第六节 超临界流体色谱
supercritical fluid chromatograph
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结束
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一、液相色谱仪器
high performance liquid chromatograph
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液相色谱仪（ 液相色谱仪（2）
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液相色谱仪（ 液相色谱仪（3）
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液相色谱仪（ 液相色谱仪（4）
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二、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC
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b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展； 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器： 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
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光电二极管阵列检测器
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c. 示差折光检测器
(2)梯度淋洗装置 梯度淋洗装置
外梯度: 外梯度 利用两台高压输液 泵，将两种不同极性的 溶剂按一定的比例送入 梯度混合室，混合后进 入色谱柱。 内梯度: 内梯度 一台高压泵, 通过 比例调节阀,将两种或 多种不同极性的溶剂 按一定的比例抽入高 压泵中混合。
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(3) 进样装置
流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示：
第三章 高效液相色谱分析法
high performance liquid chromatograph
第一节 高效液相色谱的 特点与仪器
feature and instrument of HPLC
一、高效液相色谱仪 高效液相色谱仪 HPLC 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 三、流程及主要部件 general process and main assembly of HPLC
（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（ 每种物质具有不同的 折光指数）； 灵敏度低、对温 度敏感、不能用于梯 度洗脱； 偏转式、反射式 和干涉型三种；
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(4) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径 ～ 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长 ～40 cm。 ，柱长5～ 。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
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(5) 液相色谱检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8µL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。