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试验16 花粉活气的测定在作物杂交育种.作物壮实机理和花粉心理的研讨中,常涉及花粉活气的判定.控制花粉活气快速测定的办法,是进行雄性不育株的选育.杂交技巧的改进以及揭示表里身分对花粉育性和壮实率影响的基本.一.花粉萌发测定法【道理】正常的成熟花粉粒具有较强的活气,在合适的造就前提下便能萌发和发展,在显微镜下可直接不雅察盘算其萌发率,以肯定其活气.【器材与器具】载玻片;显微镜;玻棒;恒温箱;造就皿;滤纸.【试剂】造就基：10%蔗糖,10mg/L硼酸,0.5%的琼脂.称10g蔗糖.1mg 硼酸.琼脂与90ml水放入烧杯中,在100℃水浴中融化,冷却后加水至100ml备用.【方法】1.将造就基融化后,用玻棒蘸少许,涂布在载玻片上,放入垫有潮湿试纸的造就皿中,保湿备用.2.收集丝瓜.南瓜或其他葫芦科植物刚凋谢或将要凋谢的成熟花朵,将花粉洒落在涂有造就基的载玻片上,然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的造就皿中,在25℃阁下的恒温箱（或室温20℃前提下）中孵育,5~10min后在显微镜下检讨5个视野,统计其萌发率.【留意事项】1.不合种类植物的花粉萌发所需温度.蔗糖和硼酸浓度不合,应依植物种类而转变造就前提.2.此法也可用于不雅察花粉管在造就基上的发展速度以及不合蔗糖浓度,离体时光,情况前提等身分对花粉活气的影响.3.不是所有植物的花粉都能在此造就基上萌发,本法实用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活气的测定.二.碘- 碘化钾染色测定法【道理】多半植物正常的成熟花粉粒呈球形,积聚较多的淀粉,I2-KI溶液可将其染成蓝色.发育不良的花粉常呈畸形,往往不含淀粉或积聚淀粉较少,I2-KI溶液染色呈黄褐色.是以,可用I2-KI溶液染色来测定花粉活气.【器材与器具】显微镜;载玻片与盖玻片;镊子;棕色试剂瓶;烧杯;量筒;天平.【试剂】I2-KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸馏水中,参加1g I2,待完整消融后,再加蒸镏水300ml.贮于棕色瓶中备用.【办法】收集水稻.小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药,取一花药于载玻片上,加一滴蒸馏水,用镊子将花药捣碎,使花粉粒释放,再加1～2滴I2-KI溶液,盖上盖玻片,在显微镜下不雅察.凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活气较强的花粉粒,呈黄褐色的为发育不良的花粉粒.不雅察2～3张片子,每片取5个视野,统计花粉的染色率,以染色率暗示花粉的育性.【留意事项】此法不克不及精确暗示花粉的活气,也不实用于研讨某一处理对花粉活气的影响.因为三核期退化的花粉已有淀粉积聚,遇碘呈蓝色反响.别的,含有淀粉而被杀逝世的花粉粒遇I2-KI也呈蓝色.三.氯化三苯基四氮唑（TTC）法【道理】具有活气的花粉呼吸感化较强,其产生的NADH2或NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲）而使其本身着色,无活气的花粉呼吸感化较弱,TTC的色彩变更不显著,故可依据花粉接收TTC后的色彩变更断定花粉的生涯气.【器材与器具】显微镜;载玻片与盖玻片;镊子;恒温箱;棕色试剂瓶;烧杯;量筒;天平.【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5g TTC放入烧杯中,参加少许95%酒精使其消融,然后用蒸馏水稀释至100ml.溶液避光保管,若发红时,则不能再用.【办法】收集任何植物的花粉,取少许放在干洁的载玻片上,加1~2滴0.5%TTC溶液,搅匀后盖上盖玻片,置35℃恒温箱中,10~15min后镜检,凡被染为红色的花粉活气强,淡红次之,无色者为没有活气或不育花粉.不雅察2~3张片子,每片取5个视野,统计花粉的染色率,以染色率暗示花粉的活气百分率.。
实验一花粉收集、贮藏及花粉生活力测定一、实验目的1.掌握鲜花粉收集、储藏的方法及原理。
2.观察花粉在人工配制的培养基上的萌发情况，认识花粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程，为理解植物的生殖过程奠定基础。
二、实验原理花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过延长花期解决，有的不得不进行花粉储藏，花粉贮藏对某些园林植物杂交育种具有重要的意义。
通过花粉贮藏，它可以使一些迟开花的园林植物和早开花的园林植物进行杂交，或到较远的地方给母本授粉，花粉的贮藏与运输可以打破杂交育种中双亲时间上和空间上的隔离，扩大育种的范围。
花粉在贮藏期间的稳定性，与花粉壁外层（外壁）的性质和贮藏期间花粉原生质的代谢有关。
在贮藏期间代谢调较少可溶性糖类和有机酸的花粉能够在较长期间保持其活力。
花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。
花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。
在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。
如一般木本植物花粉寿命很长，如在干燥凉爽的条件下，柑橘花粉能存活40～50d，椴树45d，苹果10～70d，樱桃30～100d，麻栎一年，叶培忠教授试验发现杉木的花粉可存活17年之久；而在草本植物中，如棉属花粉采下后24h存活只有65％，超过24h 很少存活；多数禾本科植物的存活时间不超过一天，如玉米1～2d，水稻花粉在田间条件下3min就有50％丧失生活力，5min后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。
一般在自然条件下自花授粉植物花粉寿命比常异花、异花授粉植物为短。
花粉的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉的寿命要比二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三胞花粉，寿命都是比较短的。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。
通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。
据亚达姆斯试验，苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。
花粉生活力测定方法研究进展摘要:总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词:花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体,在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象,也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中,研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难,为解决这一难题,保存花粉的活力成为重要手段,而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此,掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果,花粉生活力的检测方法可以分为四大类:①染色法;②萌发测定法;③田间授粉检测法;④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法1.1TTC 染色法TTC 即 2,3,5-氯代三苯基四氮唑,它是一种氧化还原染料,水溶液无色。
基本原理是 [1]:当 TTC 渗入细胞后, 遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子,由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物,由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤:①配制 PH 为 7.17的磷酸缓冲液。
称取 0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于 100ml 的蒸馏水中,调整 pH 为 7.17。
② TTC 溶液配制。
依据不同植物称取 0.02~1.0g 的 TTC 溶于 100ml 的磷酸缓冲液中, 于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上,加上一滴 TTC 溶液,用镊子搅拌均匀,盖上盖玻片,然后放置于 35℃的恒温箱中染色 15~20min 。
④镜检。
于 10×10倍镜下观察,凡具有活力的花粉被染成红色,部分丧失活力的呈现粉红色,无色的是的或不育的花粉粒。
兰花花粉保存技术兰花作为一种具有极高观赏价值和经济价值的花卉植物，在园艺种植中具有重要地位。
而为了保护和延长兰花的繁衍和遗传资源，兰花花粉的保存成为一门关键的技术。
本文将介绍兰花花粉保存技术及其应用。
一、花粉的提取与储存为了有效地保存兰花花粉，首先需要进行花粉的提取与储存。
在花粉成熟时，可以通过采用传统的刷子或棉签的方式将花粉轻轻地刷下来。
收集到的花粉需要避免接触水分，因此可以利用干燥剂或低温环境将其保存。
常用的方法是将花粉装入小瓶中，加入干燥剂，然后密封保存于低温干燥的环境中，例如冰箱或干燥柜内。
二、花粉活力测试为了确保保存的花粉依然具备活力，需要进行花粉的活力测试。
一种常用的方法是利用离体培养来观察花粉的萌发情况。
首先，在无菌条件下，将保存的花粉撒在培养基上。
经过一段时间的培养，观察花粉的萌发率和花粉管的生长情况，从而判断花粉的保存状况和活力。
三、花粉冷冻保存技术花粉冷冻保存技术是一种较为有效的保存方法，它能够在较长时间内保持花粉的活力。
具体操作步骤如下：1. 花粉干燥：首先，将采集到的花粉置于无水环境中，通过自然风干或加入干燥剂使其迅速干燥，避免水分对花粉的损害。
2. 花粉包装：将花粉放入小袋子或小瓶子中，密封保存。
为了确保保存效果，可以在花粉的包装材料中加入适量的干燥剂。
3. 低温冷冻：将包装好的花粉放入冷冻盒或冷藏箱中，置于低温环境中进行冷冻保存。
一般建议将花粉保存在-20℃以下的温度下，以确保花粉的保存效果。
四、花粉复苏技术除了保存花粉，如何将花粉复苏并应用到育种或繁殖中也是关键的一步。
花粉复苏技术包括花粉萌发和花粉导入两个方面。
1. 花粉萌发：将保存的花粉在含有适宜萌发物质的培养基上进行无菌培养，提供适宜的光照和温度条件。
经过一段时间的培养，即可观察到花粉管的生长和花粉的萌发。
2. 花粉导入：将萌发的花粉导入母株的柱头中，促使花粉与柱头结合，实现授粉过程。
这一步需要在无菌的环境中进行，确保花粉的导入和柱头的接受都是无菌的。
大花蕙兰与墨兰种间杂交种子无菌播种繁殖技术研究随着社会的发展，人们对植物的需求也越来越多。
而对于植物种间的杂交繁殖技术的研究，一直以来都是植物学领域的热点之一、本文将对大花蕙兰与墨兰种间杂交种子无菌播种繁殖技术进行研究和探究。
大花蕙兰（Dendrobium bigibbum）和墨兰（Dendrobium formosum）是兰科植物中非常常见的两个种类，它们之间的杂交繁殖能够产生具备二者优点的新品种。
但是，在进行种间杂交时，常常会出现一些问题，比如种子不育、无菌播种困难等。
在进行大花蕙兰与墨兰种间杂交时，首先要解决的问题是种子的发育和无菌播种。
种子的发育需要良好的花粉柱和花粉的结合，需要进行人工授粉。
在授粉之后，要及时将结的子房果实进行采摘，进行种子的发育。
种子发育过程中需要对其进行无菌处理，以确保其生长和发育的顺利进行。
种子的无菌处理可以采用消毒法，具体步骤如下：首先，将采摘下来的果实进行清洗，将外部的杂质去除干净。
然后，将果实进行消毒处理，常用的消毒液可以是过氧化氢、希夫酮等。
消毒液的浓度和处理时间需要根据实际情况进行调整。
处理完毕后，将种子取出，进行无菌播种。
无菌播种的前提是提供无菌的播种培养基。
播种培养基的配方需要根据实际需求进行调整。
一般来说，基本的配方包括无菌水、蔗糖、植物生长素等。
将种子放置在无菌播种培养基上，进行培养。
在培养过程中，需要注意保持培养基湿润和温度适宜，以提高种子的发芽率和生长率。
种子的生长和发育是一个漫长的过程，需要保证其充分的光照和营养供应。
在种子成熟之后，可以进行试管苗的移栽，将其移植到适宜的培养基中，进行进一步的生长和发育。
在移栽过程中，需要注意保护种子和苗的完整性，减少伤害和感染的机会。
通过以上的研究和分析可以看出，大花蕙兰与墨兰种间杂交种子无菌播种繁殖技术是一项非常复杂和精细的工作。
种子的发育和无菌播种是其中的关键环节。
通过合理的措施和方法，可以提高种子的发芽率和生长率，从而实现杂交品种的繁殖和推广。
实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
花粉的采集与保存、形态观察及生活力测定1.上述方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？答：否。
形态观察法只适用于测定新鲜花粉的生活力，不适用于测定贮藏的花粉，体积较小的花粉和形态结构不规则的花粉，这都会影响实验结果。
染色观察法不适用于测定花粉颜色与染色结果相近的植物花粉活力，会对观察有一定的干扰。
另外，碘－碘化钾染色法不能准确表示花粉的活力，也不适用-KI 于研究某一处理对花粉活力的影响。
因为核期退化的花粉已有淀粉积累，遇I2呈蓝色反应。
另外，含有淀粉而被杀死的花粒遇I-KI也呈蓝色。
2培养基发芽法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定，不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发。
不同种类植物花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.哪种方法更能准确反应花粉的活力？答：个人认为发芽实验法更能准确反应花粉活力，虽然发芽试验法更为麻烦一些，但其结果更接近花粉的自然生活力，能较为直接的反应花粉的萌发率。
3.还有哪些方法可以用来检测植物花粉活力？答：①醋酸洋红染色法。
此法的染色原理是靠花粉中的脱氢辅酶而染色，有活力的花粉被染成红色，部分失去活力的呈现粉红色，而无活力或不育的花粉无色。
②过氧化物酶染色法。
此法又称联苯胺染色法,是根据花粉中过氧化物酶的活性来判断花粉的活力。
由于有活力的花粉含有活跃的过氧化物酶，所用试剂与过氧化物酶发生氧化反应而染色，有活力的花粉被染成红色，无活力的花粉则呈现黄色或无色透明。
③MTT染色法。
MTT染色法是根据花粉粒中脱氢酶的活性判断花粉生活力，镜检时,花粉呈现蓝色表明花粉有活力。
④FCR染色法。
此法也叫荧光染料反应法，其基本原理是荧光染料本身不产生荧光，无极性，并能自由地透过完整的原生质膜。
当此种染料进入原生质后，即被醋酶作用形成一种能产生荧光的极性物质一荧光素。
由于荧光素不能自由地出人原生质膜，而只在细胞内积累，因此可以根据花粉产生荧光的情况来判断花粉的生活。
实验四花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术。
（为什么贮藏花粉？）一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料油松、辣椒、一串红、矮牵牛、油茶、油菜等植物的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、毛笔、干燥器、小指形管、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、滴管、玻璃棒、量筒、电炉、石棉网、冰箱；凡士林、无水氯化钙、蔗糖、琼脂、蒸馏水、硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、碘、碘化钾、氯化二苯基四氮唑（TTC ）。
四、实验原理花粉在低温（0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低（呼吸）、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（0.3g 碘＋1.3g 碘化钾溶于100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力（不太准，比如刚死的花粉）。
