干扰素 PPT课件

TB抗原多肽
T细胞
活化T细胞
γ 干扰素
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IGRAs的结核特异免疫抗原
• SAT-6和CFP一10主要存在于MTB复合群，而在卡介苗和大多数 NTM中缺失，因此IGRAs的特异度较好。
• 但ESAT-6和CFP—10也存在于少数几种NTM中，如堪萨斯分枝杆
菌、海分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、转黄分枝杆菌和胃分枝杆，
IGRAs可发挥其辅助作用
• 应用于活动性结核病的辅助诊断
• 应用于LTBI诊断中
IGRAs用于体液或组织标本？
近几年来国内有IGRAs(仅限于ELISPOT方法)辅助诊断结核性胸膜 炎和结核性腹膜炎等肺外结核的报道，其中采用胸腔积液和 腹水等体液或组织标本检测的IGRAs的敏感度和特异度高达
90％以上，采用血液标本检测时IGRAs则并未显示出优势。 此类研究报道数量不多，病例数也不足，
筛查LTBI。
• 除HIV感染者外，类风湿关节炎等自身免疫性疾病、器官移植等免疫功能受 损患者及糖尿病等特殊患者，因其自身原因，或接受糖皮质激素或肿瘤坏死 因子 TNF拮抗剂等免疫抑制药物治疗导致免疫功能缺陷，这类患者是LTBI发 展为结核病的高风险人群，对这类患者也有必要进行LTBI筛查。
应行IGRAs和PPD检测的6种情况（WHO 2015）
阳性者进一步采用IGRAs帮助确认；
(2)不宜采用IGRAs对大范围人群进行LTBI筛查；
(3)PPD试验仍是在健康人群中动态筛查LTBI的首选。
• (1)对HIV感染人群进行LTBI筛查，单用PPD试验的敏感度不高，
应单用IGRAs或联合使用PPD试验，在方法选择上优先考虑细胞
检测技术。
• (2)自身免疫性疾病和器官移植患者在接受糖皮质激素或 TNF-拮抗剂治疗前，应单用IGRAs或联合使用PPD试验

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3.4．菌体收集
连续流离心机：冷却的发酵液，16000 r/min离心收集。菌体保存：－20℃冰柜，不超过12个月。检测：干扰素含量、菌体蛋白含量、菌体枯燥失重、质粒结构一致性、质粒稳定性。
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4 干扰素的别离纯化工艺过程
4.1、干扰素别离工艺过程 4.2、干扰素的纯化工艺过程
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免疫调节活性机制
对巨噬细胞的作用：IFNγ可使巨噬细胞外表MHCⅡ类分子的表达增加，增强其抗原递呈能力；此外还能增强巨噬细胞外表表达Fc受体，促进巨噬细胞吞噬免疫复合物、抗体包被的病原体和肿瘤细胞。对淋巴细胞的作用：干扰素对淋巴细胞的作用较为复杂，可受剂量和时间等因素的影响而产生不同的效应。在抗原致敏之前使用大剂量干扰素或将干扰素与抗原同时投入会产生明显的免疫抑制作用；而低剂量干扰素或在抗原致敏之后参加干扰素那么能产生免疫增强的效果。在适宜的条件下，IFNγ对B细胞和CD8+T细胞的分化有促进作用，但不能促进其增殖。IFNγ能增强TH1细胞的活性，增强细胞免疫功能；但对TH2细胞的增殖有抑制作用，因此抑制体液免疫功能。IFNγ不仅抑制TH2细胞产生IL-4，而且抑制IL-4对B细胞的作用，特别是抑制B细胞生成IgE。
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〔4〕初级别离
盐析: 4M硫酸铵，2℃～10℃，搅匀,静置过夜。离心：连续流离心机，16000 r/min保存：收集沉淀，粗干扰素，4℃保存。
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4.2、干扰素纯化工艺过程
溶解粗干扰素沉淀与疏水层析阴离子交换层析与浓缩阳离子交换层析与浓缩凝胶过滤层析无菌过滤分装
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1.5.干扰素生产工艺路线〔1〕

干扰素对乙肝的治疗效果与副作用
治疗效果
干扰素治疗乙肝的疗效因个体差异而异，整体而言，干扰素可有效抑制乙肝病 毒复制，减轻肝脏炎症，改善肝功能，从而降低肝硬化和肝癌的发生风险。
副作用
干扰素的副作用包括发热、肌肉酸痛、乏力等流感样症状，以及甲状腺功能异 常、骨髓抑制等严重副作用，需要在治疗过程中密切关注并及时处理。
注意事项1
使用干扰素后可能出现发热、 肌肉酸痛、乏力等不良反应， 一般在3-5天内自行缓解
注意事项2
使用干扰素期间应定期检查肝 功能，观察病情变化，及时调
整治疗方案
04
干扰素与其他药物的比较
干扰素与核苷类药物的比较
01
总结词
核苷类药物与干扰素是治疗乙肝的两种不同药物，各自具有独特的优缺
点。
02 03
自1957年以来，干扰素的研究经历了多个阶段，包括对其生 物学特性、作用机制、临床应用等方面的深入探讨。
干扰素的作用机制
干扰素的作用机制主要是通过与靶细胞表面的干扰素受体结合，激活靶细胞内的抗 病毒蛋白基因，诱导合成抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制。
此外，干扰素还可以通过调节免疫应答、抑制肿瘤细胞生长和诱导细胞凋亡等方式 发挥抗肿瘤作用。
定期进行肝功能检查，观察肝 脏炎症指标的变化，以评估干
扰素的治疗效果。
病毒载量检测
通过检测血液中的病毒载量， 了解病毒复制的情况，判断干
扰素的治疗效果。
副作用监测
密切关注患者使用干扰素后的 副作用，如发热、肌肉酸痛、
乏力等，及时处理。
心理状况评估
了解患者情绪变化，及时发现 和处理心理问题，确保治疗的
目前乙肝治疗以抗病毒为主，干扰 素是其中一种重要的抗病毒药物。

*
目前，在中草药中发现广泛存在半抗原，如小檗碱、茶碱、丹参酮等，具有生化活性基因的化学成分都有可能成为半抗原，这些半抗原可与体内蛋白质结合成完全抗原，造成一些过敏反应。
*
抗原的特异性既表现在免疫原性上，也表现在反应原性上。
沙门氏杆菌
大肠杆菌
抗大肠杆菌的抗体
抗沙门氏杆菌的抗体
结合
结合
抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹
IFN作用特点:
产生的时间早； 中断受染细胞的病毒感染，限制病毒扩散； IFN诱导的抗病毒蛋白，只对病毒起作用， 不影响宿主细胞蛋白质合成。
专题二 抗体制药
第一节 概述 第二节 单克隆抗体 第三节 基因工程抗体 第四节 噬菌体抗体工程 第五节 抗体诊断试剂和抗体药物
四 干扰素抗病毒机理
干扰素具有广谱抗病毒作用，又具有细胞种属特征。即某一种动物产生的干扰素只能保护同种属或近缘种属动物细胞。 干扰素是一种活性很强的生物制剂，既能治疗病毒性疾病，又具有抗肿瘤和调节免疫机能的作用。
四 干扰素抗病毒机理
干扰素抗病毒作用
作用机理 不是直接杀灭病毒
IFN → 抗病毒蛋白基因 → 抗病毒蛋白 (蛋白激酶, 磷酸二脂酶)
Each hybridoma line can produce pure single antibody, called mon
oclonal antibody.
If B cell is fused with myeloma, the fused cell might be culture
d and produce antibody.
单克隆抗体的应用
*
基因工程技术为解决这两个问题提供了可能。 1984年：人-鼠嵌合抗体 1984年至今：单克隆抗体的鼠源性及分子过大的问题得以解决，可仅作为与抗原特异性结合试剂。 已通过基因工程技术，制备出改形抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等很多类型的抗体或抗体单位。基本消除了单克隆抗体的鼠源性，相对分子质量只有完整抗体分子的1/80~1/3，而且消除了鼠源性单克隆抗体的生物学活性如激活补体、促进吞噬功能（免疫调理）、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等，只保留同抗原特异性结合的活性。

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质粒DNA的纯化②
6)吸出上清，用400μl TE(pH8.0)溶解质粒DNA沉淀。用酚、酚：氯 仿、氯仿各抽l次。
7)将水相转到另一微量离心管中，加100μl 10mol/L乙醇铵，充分混 匀，加2倍体积(约lml)乙醇，于室温放置10分钟，于4 ℃以 12000g离心5分钟，以回收沉淀的质粒DNA。
3 破碎细胞,提取细胞总mRNA.
4
用逆转录试剂盒逆转录,把总mRNA逆转录成cDNA
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以cDNA为模板、干扰素引物为引物,PCR,得到完全的干扰素基因的PCR产物
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6
目的基因与克隆载体进行体外重组
1.提取载体(连接
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,现在 来进行生
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基因工程菌的制备
目的基因的分离
目的基因与克隆
克隆载体
载体的体外重组
重组导入大肠杆菌K12
受体菌的培养 及筛选
从受体菌中获取目的基因 重组质粒
表达载体
导入大肠杆菌
受体菌的筛选（表达性、稳定性等检测）
工程菌
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工艺流程
目的基因的分离与获得
2、细菌的收获和裂解
1）用合适转头于4℃以4000转/分离心15分钟,弃上清,敞开离心管口并倒置离心管使上清全
部流尽。
2）将细菌沉淀重悬于100ml用冰预冷的STE中。
STE 0.1mol/L NaCl
10mmol/L Tris.Cl(Ph8.0)
1mmol/L EDTA(Ph8.0)
按步骤1）所述方法离心，以收集细菌细胞。
级联调节通气量和搅拌转速，控制溶解氧30%,培养4小时。然后控制培养温度20℃ ，pH6.0, 溶解氧60%,继续培养5-6.5小吋。同时进行发酵液杂菌检查，当0D值达9.0±1.0后，用5℃冷 却水快速降温至15℃以下，以减缓细胞衰老。或者将发酵液转入收集罐中，加入冰块使温 度迅速降至10℃以下。

临床症状和体征，即可作出准确诊断。
• 对于有不典型表现者、感染状态不明的性伴、
高危新生儿及大量的亚临床感染者，实验室 检查有相当价值。
• 诊断明确后予尤靖安外用疱疹患处同时子宫
颈开始重组人干扰素α -2b凝胶治疗。
淋菌性宫颈炎
• 病史：有可疑的性病接触史及其他直接或间接接
触患者分泌物史。
• 临床表现：主要症状有尿痛、尿频、尿急、宫颈
口、阴道口脓性分泌物，也可无明显症状或症状 轻微。
• 实验室：宫颈口涂片发现细胞内革兰染色阴性双
球菌仅做参考，进行培养以证实淋球菌感染。
• 诊断明确后予头孢曲松3g静点，每日一次，连续
三日，同时开始重组人干扰素α -2b凝胶治疗。
滴虫性阴道炎
• 临床表现:阴道烧灼感，行经时加剧;阴道分
泌物黄色泡沫样，有恶臭。
• 本研究发现，宫颈糜烂程度越轻治疗效果越好，单纯型糜
烂的疗效明显好于颗粒型及乳突型，与其它文献报道的研 究结果相一致，其原因可能是糜烂程度的轻重及糜烂类型 与感染病毒多少有关。
• 综上所述，干扰素治疗宫颈糜烂具有使用方便，操作简单，
疗效好，无禁忌症及明显副作用等优点，较微波、冷冻、 激光等治疗安全、可靠，患者易于接受，值得临床上推广 使用。
谢谢！
97.30 92.11 54.55
注：有效率=痊愈+显效
表2 以宫颈糜烂程度观察疗效
分度
痊愈 N(%)
显效 N(%)
有效 N(%)
无效 N(%)
有效率 N(%)
单纯型 65（69.15） 18（19.15） 8（8.51） 3（3.19） （n=94）
颗粒型 4（19.05) 6（28.57) 9（42.86) 2（9.52） （n=21）

2021/6/16
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• 1980-1982年，科学家 用基因工程方法在大 肠杆菌及酵母菌细胞 内获得了干扰素，从 每1升细胞培养物中可 以得到20-40毫升干扰 素。从1987年开始， 用基因工程方法生产 的干扰素进入了工业 化生产，并且大量投 放市场。
2021/6/16
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什么叫干扰素（IFN）
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干扰素及其制剂的分类
1. 天然IFN
2. 非天然 IFN
干扰素制剂的分类，按制作方法不同，可分为利用基 因工程生产的重组α-干扰素和人自然干扰素两大类。
2021/6/16
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1. 天然IFN
• 天然干扰素种类繁多，分子量也不同，亦有不同的抗原性。目前了解 由人的不同细胞产生的干扰素至少有三种不同的抗原成分：白细胞干 扰素抗原(Le),人成纤维细胞干扰素抗原（F）和T淋巴细胞干扰素抗 原（T）。
• 基因工程干扰素再按基因表达分子结构和抗原性可分为α 、β、γ型，同一型内按氨基酸组成差异再分20多个亚型 ：α1、α2、α3……在同一亚型内又因氨基酸的差异而细 分，如α2：有三种：α2a、α2b、α2c
• 人自然干扰素是通过分别刺激淋巴母细胞和人体白细胞， 然后提纯制备而得。目前市场供应的只有由类淋巴母细胞 产生的干扰素（IFN）…αN1，是天然的多亚型的混合物 。临床用的主要是重组制剂，有α2a、α2b和α1b。
干扰素-β制剂进入血液后，稳定性差，确切疗 效尚在观察中，但可作为干扰素- α的替代制剂。 当前国内对干扰素-α各亚型制剂的活用较佳剂 量为（3～5）X106单位／日，连续用1 周后改 为隔日或每周3次，肌内注射，疗程3～6月。
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干扰素的发现
1957年，英国病毒生物学家Alick Isaacs和瑞士研究人员 Jean Lindenmann，在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干 扰现象时了解到，病毒感染的细胞能产生一种因子，后者 作用于其他细胞，干扰病毒的复制，故其命名为干扰素。

细胞干扰素能够刺激免疫细胞的活化和增殖，提高机体的免疫反应能力，增强 机体对病毒的抵抗和清除能力。
抗肿瘤作用
抑制肿瘤细胞生长
细胞干扰素能够抑制肿瘤细胞的生长和增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，从而起到抗肿 瘤的作用。
增强放疗和化疗效果
细胞干扰素能够增强放疗和化疗对肿瘤细胞的杀伤作用，提高治疗效果。
பைடு நூலகம்
免疫调节作用
细胞干扰素在临床应用中的挑战与问题
细胞干扰素的副作用
细胞干扰素作为一种生物活性物质，在临床应用中可能出现一些 副作用，如发热、肌肉酸痛等。
细胞干扰素的稳定性
细胞干扰素在储存和使用过程中可能存在稳定性问题，影响其活性 和效果。
细胞干扰素的给药方式
细胞干扰素的给药方式及剂量对治疗效果有重要影响，需要进一步 研究优化。
性质
细胞干扰素是一种信号传递分子 ，能够诱导靶细胞产生一系列的 效应，以应对病毒感染。
发现与历史
发现
细胞干扰素是在20世纪60年代初期 由病毒学家发现的一种细胞因子。
历史
自发现以来，细胞干扰素在医学领域 的应用已经得到了广泛的研究和应用 。
细胞干扰素的作用机制
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抗病毒作用
细胞干扰素能够刺激靶细 胞产生抗病毒蛋白，从而 抑制病毒的复制和扩散。
这些细胞也可以产生干扰 素。
其他细胞类型
如巨噬细胞和上皮细胞也 可以产生干扰素。
诱导细胞干扰素产生的因素
病毒或细菌感染
当身体遭受病毒或细菌感染时，免疫系统会触发干扰素的产 生以对抗这些威胁。
免疫刺激分子
一些分子，如双链RNA (dsRNA)，可以刺激细胞产生干扰素 。
细胞干扰素的调控机制

干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀 伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使 细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制； 同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞 和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并 增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活 性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和 淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有 广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免 疫功能等多种生物活性。。





上海生物制品研究所 北京三元基因工程有限公司 长春海伯尔生物技术有限责任公司 深圳科兴生物工程有限公司 哈药集团生物工程有限公司 天津华立达生物工程有限公司 沈阳三生制药有限责任公司 安徽安科生物工程(集团)股份有限公司 ……




干扰素在病毒细胞表面与特殊膜受体结合发挥抗DNA和RNA作 用，包括对某些酶的诱导作用，阻止受病毒感染细胞中病毒 的复制，抑制这些细胞的繁殖。本品具有免疫调节作用，可 增强巨噬细胞的吞噬作用，增强淋巴细胞对靶细胞的特殊细 胞毒性。 1.抗病毒作用：其抗病毒活性不是杀灭而是抑制病毒，它一 般为广谱病毒抑制剂，对RNA和DNA病毒都有抑制作用。当病 毒感染的恢复期可见干扰素的存在，另一方面用外源性干扰 素亦可缓解感染。 2.抑制细胞增殖：干扰素抑制细胞分裂的活性有明显的选择 性，对肿瘤细胞的活性比正常细胞大500～1000倍。干扰素 抗肿瘤效果可以是直接抑制肿瘤细胞增殖，或通过宿主机体 的免疫防御机制限制肿瘤的生长。 3.干扰素对体液免疫、细胞免疫均有免疫调节作用，对巨噬 细胞及NK细胞也有一定的免疫增强作用。
药浓度波动，浓度过高时会导致较为严重的不良反应，但浓度过低又 会导致病毒重新复制和反弹；此外，一旦注射了普通干扰素，它广泛 期只有2至5小时，必须频繁注射用药，因而干扰素的临床应用受到了 很大限制。 到1990年代末2000年代之初，聚乙二醇化(PEG)技术的出现使干扰素 终于成为人类与乙肝斗争中的真正利器。2002年，罗氏研究生产的聚 乙二醇化干扰素α-2a(派罗欣)正式上市，聚乙二醇与干扰素的结合， 大大改善了干扰素的药物特性，使血药浓度变得更加稳定，同时聚乙 二醇分子支链对干扰素有效成分的保护作用，大大降低了它的抗原性， 高，副反应显著减少。