正相色谱柱的使用
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Q:正相手性色谱柱使用前需要注意什么?A:将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液,比如水/乙腈=50/50(v/v)。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路(包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等),然后用正相流动相冲洗液相的所有管路,最后再接上正相手性色谱柱;如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐,要先用纯水冲洗HPLC系统,然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路,最后用正相流动相冲洗。
Q:正相手性色谱柱中保存液是什么?A:正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
Q:新柱CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与原来的大赛璐手性柱有什么区别?A:CHRALPAK IA和CHRALPAK IB是将多糖衍生物共价键合在硅胶上,而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合,所以CHRALPAK IA和CHRALPAK IB柱能使用任何液相流动相,比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与大赛璐原有的正相柱相比,扩大了溶剂选择的范围,增加了新的分离选择性,在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA和CHRALPAK IB上得以分开。
Q:CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H四款正相色谱柱的区别是什么?A:区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物;CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
CHIRALPAK AD-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯);CHIRALPAK AS-H硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯;CHIRALCEL OD-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]; CHIRALCEL OJ-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。
正相、反相和极性胶联柱使用手册分类:质量检验 2007.3.22 22:20 作者:LAI | 评论:0 | 阅读:146正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns 注意:此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>7.0)或酸性溶剂(pH<2.0)会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1.简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相(非水)条件。
反相(C8,C18,ODS,RP-8和RP-18)通常用于反相条件(水相)。
极性胶联型(APS,diol,CN和NH2)依照应用目的,可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下,这是因为柱子在特定的条件下,固定相的性质会发生变化,所以在其他的条件下,会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下,这是因为这种过程会发生重复性差的问题(每一次注射之间和柱与柱之间的比较)。
2.色谱柱老化在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A.在反相条件下老化要老化这类柱子,首先要使用乙腈或者甲醇淋洗,然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
如果流动相中使用了添加物(例如缓冲液或离子对试剂),建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行,最后再使用正常流速。
B.在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥(激活)或润湿(失活)可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
1、色谱柱的使用说明:(1)色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特殊说明,均为评价报告所示的流动相。
在使用前,一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出,堵塞色谱柱。
(2)流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。
另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0,BDS C18适合于碱性化合物,PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。
(3)样品:样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时,所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存(1)反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。
注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
(2)长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的增加,会出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。