脂蛋白磷脂酶A2测定试剂盒(胶体金免疫层析法)产品技术要求乐普

脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PLA2）测定试剂•产品名称通用名称：脂蛋白磷脂酶A2(LP-PLA2)测定试剂盒（免疫增强比浊法）•包装规格50人份/盒100人份/盒•预期用途用于体外定量测定人血清、血浆或全血中LP-PLA2的含量。

LP-PLA2是磷脂酶A2 超家族的成员。

循环中的LP-PLA2是一种主要由巨噬细胞产生的反映血管炎症的特异性标记物，在低密度脂蛋白的氧化、促进动脉粥样硬化以及冠心病和卒中的形成等方面发挥重要作用。

LP-PLA2水平升高是预测冠心病和卒中风险的一种独立危险因子。

•检验原理样本中的LP-PLA2在磷酸盐缓冲系统中与试剂中鼠抗人LP-PLA2 单克隆抗体的致敏乳胶颗粒发生抗原抗体反应，在促聚剂聚乙二醇作用下产生凝集以使浊度上升，在546 nm 波长检测反应液吸光度的变化，其变化程度与样本中的LP-PLA2含量成正比。

•临床应用1、独立，准确预测中风和心血管事件2、独立，准确反应血管的炎症情况3、独立，准确反应动脉粥样硬化斑块的破裂危险性4、冠心病，心血管疾病以及卒中的危险评估•临床价值对心脑血管疾病的评估，检测和治疗的需求越来越大。

LP-PLA2检测将成为未来针对心脑血管疾病预测，诊断，治疗以及疗效评估的新指标。

LP-PLA2为反映动脉粥样硬化斑块破裂及血栓形成事件的高度一致性、精确性的独立风险因子，是急性动脉粥样硬化血栓复发事件高风险患者的准确风险评估标志物。

LP-PLA2研制成功，完全解决了酶联免疫法耗时长、操作繁琐、实验室需凑足一定标本量才能开始检测的缺陷，填补了行业内空白。

其成功实现了“准确、稳定、一分钟出报告”的POCT需求，成为迄今为止世界范围内唯一能够用比浊法快速检测的POCT产品。

•临床指南LP-PLA2已成功进入美国临床内分泌协会（AACE）血脂异常管理和动脉粥样硬化预防指南（2012）和欧洲心脏病学学会（ESC）心脏病预防指南（2012）。

临床随访显示：保持最低LP-PLA2水平的心脑血管疾病患者的存活率最高，然而，伴随着LP-PLA2水平的升高，患者存活率持续下降。

脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒(免疫比浊法)适用范围：用于体外定量测定人血清中脂蛋白相关磷脂酶A2的含量。

1.1 包装规格校准品(选配)：5×0.5mL；质控品(选配)：水平1：1×0.5mL，水平2：1×0.5mL。

1.2 主要组成成分注：校准品靶值、质控品质控范围详见包装标签。

2.1 外观2.1.1试剂1：无色到淡黄色液体，无可见不溶物。

2.1.2试剂2：无色到白色液体。

2.1.3校准品：无色至淡黄色液体，无可见不溶物。

2.1.4质控品：无色至淡黄色液体，无可见不溶物。

2.1.5包装外观:外观整洁，标签字迹清晰，不易脱落。

2.2 净含量液体试剂的净含量不低于标示体积。

2.3 空白吸光度空白吸光度≤1.8。

2.4 分析灵敏度样本浓度为165μg/L时，吸光度差值应≥0.008。

2.5 线性在[10，800] μg/L的范围内，线性相关系数r≥0.990。

测试浓度在[10，200] μg/L时；绝对偏差应不超过±20μg/L；测试浓度在（200，800] μg/L 时，相对偏差应不超过±10%。

2.6 精密度2.6.1 重复性用高、低2个浓度的样本进行测试，各重复测试10次，其变异系数（CV）应不大于10%。

2.6.2 批间差用3个不同批次的试剂盒分别测试样本，每个批次测试3次，其相对极差（R）应不大于10%。

2.7 准确度回收率应在85%-115%范围内。

2.8 校准品/质控品瓶内重复性校准品/质控品瓶内重复性（CV）应不大于10%。

2.9 溯源性根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，校准品溯源至柏定公司内部工作校准品，并与已上市产品比对赋值。

2.10 质控品赋值有效性测试结果在质控范围内。

2.11 稳定性2.11.1 效期稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存条件下有效期为12个月。

有效期满后3个月内测试，应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7、2.8和2.10的要求。

货号：MS2414 规格：100管/48样磷脂酶 A2（phospholipase A2，PLA2）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂酰基水解酶，广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中，参与脂肪消化，精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程，在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。

测定原理：磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱（HEPC）产生游离巯基，与DTNB反应生成黄色物质，在412nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：天平、超速冷冻离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体×5瓶，-20℃避光保存。

临用前根据用量每瓶加入1.8mL试剂二充分混匀；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

样品处理：1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g 离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。

2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。

3.血清：直接测定。

测定操作：计算公式：第1页，共2页a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下1．按照蛋白浓度计算酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2的浓度。

1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=6.5）50mmol/L 试剂2：磷酸盐缓冲液（pH=8.0）50mmol/L 包被鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体的胶乳悬浊液<0.5%1.2.2校准品的组成校准品为液体，校准品组成是在磷酸盐缓冲液中加入含一定浓度的脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。

1个水平校准品目标浓度为800ng/mL，浓度有批特异性，具体定值详见瓶签。

1.2.3质控品的组成两水平液体质控品，在磷酸盐缓冲液中加入脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。

靶值范围分别为：（90～200） ng/mL、（200～500）ng/mL。

2.1 外观试剂R1为无色至淡黄色澄清液体；试剂R2为乳白色悬浊液；校准品为无色至淡黄色澄清液体；质控品为无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 空白吸光度试剂空白吸光度应在0.2～2.0之间。

2.4 空白限试剂空白限应不大于10ng/mL。

2.5 分析灵敏度测定分析灵敏度：浓度为160ng/mL时，吸光度变化应≥0.01。

2.6 线性测试血清样本，试剂线性在(0，800] ng/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.99；测定结果在(0，200] ng/mL时绝对偏差不超过±20ng/mL；在（200，800] ng/mL范围内的相对偏差不超过±10%。

2.7 重复性试剂盒测试项目重复性CV≤10%。

2.8 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤15%。

2.9 准确度回收实验：回收率在90%～110%。

2.10质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。

2.11校准品溯源性依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至脂蛋白相关磷脂酶A2纯品（来源：Sigma；纯度≥95%）。