乳制品中硫氰酸钠检测的参照方法

２０１４年第３期（总第２０６　试验研究　离子色谱法检测生鲜乳中硫氰酸根改进初探　李辉　徐秀玲穆阿丽　（山东省青岛市饲料兽药检测站２６６０７１）　摘要本研究优化了等度离子色谱法测定生鲜乳中硫氰酸根的检测方法。样品经丙酮沉淀蛋白后，高速离心取上清　液过Ｃ１８柱除去样品中的脂肪，而后上机测定。结果表明，在０．１￣５．０　ｍｇ／Ｌ．￣量浓度范围内，硫氰酸根工作曲线的线性相　关系数ｒ＝０．９９９９，加标回收率为８６～９４％。该方法方便可靠，可应用于生鲜乳中硫氰酸根的检测。　关键词硫氰酸根离子色谱生鲜乳丙酮　中图分类号：ＴＳ２５２．７　文献标识码：Ａ　文章编号：１００７－１７３３（２０１４）０３—０００９－０２　在生鲜乳中掺入硫氰酸钠，可以抑菌、保鲜，延长　生鲜乳的保存期，但是硫氰酸钠在人体内释放的氰根离　子能很快与细胞色素氧化酶中的三价铁离子结合，抑制　该酶活性，使组织不能利用氧，可引起重度中毒，少量　的食入就会对人体造成极大伤害。２００８年１２月硫氰酸钠　被卫生部列入第一批公布的《食品中可能违法添加的非　食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中，被认为是可　能违法添加的非食用物质。　硫氰酸根检测的常见方法有滴定法、光谱法、色谱　法、电分析法和离子交换色谱法等。２００９年卫生部公布　了基于离子色谱的硫氰酸根检测方法是基于戴安公司离　子色谱，其前处理采用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，离心后　稀释上清液进行测定，色谱条件采用梯度洗脱。　本文研究了采用等度洗脱的离子色谱仪器检测，对　生鲜乳中硫氰酸根检测方法进行了优化调整。　１材料与方法　１．Ｉ仪器和试剂　瑞士万通８５０型离子色谱仪（配电导检　测器、８５８自动进样器）；固相萃取小柱：Ｓｕｐｅｌｃｌｅａｎ　ＬＣ－　１８　ＳＰＥ　Ｔｕｂｅｓ；硫氰化钾标准品（纯度／＞９８．５％）。　１．２标准溶液的配制　准确称取于８０￣Ｃ烘箱内烘干２ｈ的　硫氰化钾１．６９８６ｇ于ｌＯ００ｍｌ容量瓶中，定容，混匀，得　ｌＯ００ｍｇ／Ｌ硫氰酸标准储备液。取硫氰酸标准储备溶液　ｌｍｌ，置于１００ｍｌ容量瓶中，加水至刻度，此溶液含硫氰　酸１０ｍｇ／Ｌ。移取０．１、０．２、０．５、１．０、２．０、５．０ｍｌ硫氰酸标　准中间液，用水定容至１０ｍｌ，浓度分别为０．１、０．２、０．５、　１．０、２．０、５．０ｍｇ／Ｌ。　１＿３　色谱条件色谱柱Ｍｅｔｒｏｓｅｐ　Ａ　Ｓｕｐｐ　５＇２５０／４．Ｏｍｍ、检　测器电导检测器、淋洗液３．２ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＣＯ３＋１．０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＨＣＯ１＋７．５％Ａｃｅｔｏｎｅ、流速０．７ｍｌ／ｍｉｎ、柱温３Ｏ℃、进样　体积２０ｇｌ。　１．４样品前处理准确量取液态奶样品４ｍｌ，加入５ｍｌ色　谱纯丙酮，涡旋混匀，１００００ｒ／ｍｉｎ离，ｌ￣，３ｍｉｎ，取上清液用　超纯水稀释２倍，过经５ｍｌ甲醇和１０ｍｌ水活化的ＬＣ．１８ｄ＇柱　除去样品中的脂肪，然后上机进行样品检测。　２结果与分析　２．１样品色谱图　图１为硫氰酸根标准品图谱，可见保留　时间在１９ｍｉｎ左右。图２中自上而下，图谱１、２、３依次是　牛奶样品经过丙酮、乙腈和５％乙酸沉淀蛋白后的测试　图，经过丙酮沉淀蛋白后的样品干扰更少，检测结果更　为理想。　２．２线性范围和检出限在上述色谱条件下，以测定标　准系列溶液的浓度（ｍｇ／Ｌ）为横坐标，硫氰酸色谱峰面积　ｆｇＳｘｍｉｎ）为纵坐标，绘制标准曲线，见图３。　回归方程为Ａ＝４．７５７２６Ｅ－３×Ｏ．２．７２０４０　Ｅ一，Ｒ＝０．９９９８６９，　硫氰酸离子色谱具有良好响应值，峰面积与标准系列浓　度呈良好的线性关系，线性范围０．１～５．０ｍｇ／Ｌ。以３倍信噪　比计算求得仪器检出限为０．０８２ｍｇ／Ｌ。　２－３　方法的选择卫生部推荐的“离子色谱法测定牛奶中　硫氰酸根”方法前处理采用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，然后　稀释样品进行测定，色谱条件采用梯度洗脱。该方法前　处理过程简单，但色谱条件采用梯度洗脱，离子色谱仪　必须具备梯度洗脱功能才能实现；且在测定冻融过的生　鲜乳样品时，容易出现上清液与沉淀分离不彻底的问　题，上清液浑浊、杂质较多，容易堵塞小柱，增加了实　验成本，浪费人力物力，尤其不利于对大批量生鲜乳样　品的监督检测。　通过查阅文献，比较了乙酸溶液、乙腈和丙酮沉淀　蛋白，选择用丙酮沉淀蛋白，净化更为充分，其溶液组　成与所使用的淋洗液组成成分更相近，更利于硫氰酸根　的检测，试验结果比较理想。另外采用等度洗脱，拓宽　了离子色谱仪的选择范围。　２．０　４．０　６．０　８　ｌ０．０　ｌ２，０　１４，０　１６ｍ　１ｅ－０　２０．０　２２Ｄ　２４　２５－０　２ｅｍ　３０　图１硫氰酸根标准品图谱　

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非法食品添加物“硫氰酸钠”解读

作者：奇云

来源：《家庭医学·下半月》2012年第08期

硫氰酸钠是什么

硫氰酸钠是一种白色结晶固体，易溶于水、乙醇、丙酮等溶剂，水溶液呈中性。熔点287℃时会分解出硫化物、氮化物和氰化物。主要用作丙烯腈纤维抽丝溶剂、化学分析试剂、彩色电影胶片冲洗剂、某些植物脱叶剂以及机场道路除莠剂，还用于制药、印染、橡胶处理，黑色镀镍及制造人造芥子油等。

硫氰酸钠使用和禁用历史

硫氰酸钠在乳及乳制品中的应用，主要是防腐保鲜作用。1991年，国际卫生组织（WHO）和联合国粮农组织（FAO）的食品法典委员会公布了《乳过氧化物酶体系用于原料乳的保鲜指南》，该指南严格规定了硫氰酸钠的适用范围和使用方法，规定在原料乳收集和运输至乳品加工厂期间，仅在缺乏必要的冷却设施时才可应用，并需对经此法处理过的原料乳检测硫氰酸钠的含量。

在发展中国家，由于奶牛场缺乏冷却设施，采集后的生鲜乳常因细菌繁殖腐败而损失。乳过氧化物酶体系提供了一种费用低廉而实用的方法，提高了原料乳的利用率，因而在第三世界国家普遍使用。

在上世纪80年代，我国在收集鲜乳和将其运到加工厂时，由于条件限制还不可能普遍采用冷却设施。在此背景下，为了暂时保存牛乳而使用化学保存剂是一个折中的办法。国家标准《食品添加剂使用卫生标准》1986年版本中，曾将硫氰酸钠列为允许使用的食品添加剂，主要与过氧化氢合用，用于黑龙江、内蒙古地区的生牛乳保鲜。我国也于1995年发布《活化乳中乳过氧化物酶体系保存生鲜牛乳实施规范》，利用乳过氧化物酶体系保存生鲜牛奶，防止牛奶腐败变质。

但由于硫氰酸钠的毒性作用及其滥用，以及我国经济条件的进步和原奶的冷链运输不断完善，我国于2007年公布的《食品添加剂卫生标准》取消了硫氰酸钠的保鲜用途。2008年12月12日，卫生部又公布了食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单（第一批），明确规定乳及乳制品中硫氰酸钠属于违法添加物质。

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附件

乳及乳制品中硫氰酸根的测定

BJS 201709

1 范围

本方法规定了离子色谱—电导检测器检测乳和乳制品中硫氰酸根的方法。

本方法适用于乳及乳制品（包括婴幼儿配方乳粉，不包括特殊医学用途婴幼儿配方乳粉）中硫氰酸根的测定。

2 原理

样品经过稀释，乙腈沉淀蛋白后，过脱脂柱净化，通过阴离子分析柱，根据分析柱对各离子的亲和力不同而进行分离，进入电导检测器进行检测，外标法定量。

3 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 乙腈（CH3CN)：色谱纯。

3.1.2 45 mmol/L氢氧化钾溶液：称取2.52 g氢氧化钾用水定容至1000 mL。

3.1.3 70 mmol/L氢氧化钾溶液：称取3.92 g氢氧化钾用水定容至1000 mL。

3.2 标准品

硫氰酸钠标准样品的分子式、相对分子量、CAS登录号见表1，纯度≥99%。

表1 硫氰酸钠标准样品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量

中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子量

硫氰酸钠 Sodium sulfocyanate 540-72-7 NaSCN 81.0722

3.3 标准溶液配制

3.3.1 标准储备液：称取硫氰酸钠标准品（3.2）0.1397 g，用水溶解，定容至100 mL，硫氰酸根离子含量为1 000 mg/L。贮存于4 ℃冰箱中，有效期6个月。

3.3.2 标准应用液：准确吸取硫氰酸根离子的标准储备液（3.3.1）1.0 mL于1 000 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，硫氰酸根离子含量为1.0 mg/L。贮存于4 ℃冰箱中，有效期3个月。

3.3.3 标准系列工作溶液：准确吸取硫氰酸根离子的标准应用液（3.3.2）0.0、2.0、4.0、10.0、20.0 —2—

mL于一组100 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，配得浓度分别为0.0、0.020、0.040、0.100、0.200 μg/ mL的标准系列溶液。现用现配。

山东农业科学２０１１，１２：９０～９２　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　

微膜过滤等度离子色谱法测定　

生鲜乳中硫氰酸根残留量　

郭栋梁　，阮彦东　，毛江胜　

（１．山东省农业科学院中心实验室／山东省食品质量与安全检测技术重点实验室，山东济南２５０１００；　

２．滨州经济开发区里则办事处，山东滨州２５６６５６）　

摘要：建立了离子色谱电导法测定生鲜牛奶中硫氰酸根的方法。样品经乙酸、氢氧化钾溶液沉淀蛋白，　滤膜过滤，无需梯度洗脱。方法检出限为０．０５　ｍｇ／Ｌ，线性关系Ｙ＝０．０４８８Ｘ一０．００７５，相关系数Ｒ＝０．９９８５。　通过该方法对市场上的生鲜奶进行测定，平均含量在０．２～１３．５　ｍｇ／Ｌ。　关键词：离子色谱法；生鲜奶；硫氰酸根　中图分类号：Ｑ５ｏ３　文献标识号：Ａ　文章编号：１００１—４９４２（２０１１）１２—００９０—０３　

硫氰酸钠主要用作丙烯腈纤维抽丝溶剂、化　学分析试剂、彩色电影胶片冲洗剂、某些植物脱叶　

剂，还用于制药、印染、橡胶处理、黑色镀镍及制造　

人造芥子油等。原料乳或奶粉中掺入硫氰酸钠后　可有效地抑菌，因此乳制品中添加硫氰酸钠可用　

于保鲜，可延长牛奶保质期。　

２００８年１２月１２日卫生部发布的第一批“违　禁及滥用食品添加剂品种名单”中明确规定乳及　

乳制品中硫氰酸钠属于违法添加物质。硫氰酸钠　

在人体内释放的氰根离子能很快与细胞色素氧化　

酶中的三价铁离子结合，抑制该酶活性，使组织不　能利用氧，可引起重度中毒，出现意识丧失、抽搐　

直至角弓反张、血压下降、尿便失禁，常伴发脑水　肿和呼吸衰竭。由于我国还没有规定其限量标　准，许多不法奶户违法添加硫氰酸钠，因此研究生　

鲜奶中硫氰酸根的测量具有重要意义。　

牛奶中硫氰酸钠的检验方法较多，比如分光　光度法、色谱法、电分析法、荧光动力学法和离子　

交换色谱法等。本试验研究了生鲜奶中硫氰酸根　

的离子色谱检测方法。　

ｌ　实验部分