esi 蛋白质分子量

APCI源和ESI源 APCI 和ESI 都是API源中两种离子化方法： ESI 为电喷雾，即样品先带电再喷雾，带电液滴在去溶剂化过程中形成样品离子，从而被检测。 APCI 为大气压力化学电离源，样品先形成雾，然后电晕放电针对其放电，在高压电弧中，样品被电离，然后去溶剂化形成离子，最后检测。 1）原理上：APCI利用电晕放电离子化，气相离子化。ESI利用离子蒸发，液相离子化。 2）适用范围：APCI 使用于中等极性，小分子化合物，且具有一定的挥发性。而ESI 使用于极性化合物和生物大分子。 3）多电荷：APCI不能生成一系列多电荷离子，所以不适合分析大分子。ESI 能生成一系列多电荷离子，特别适用于蛋白，多肽类等生物分子。 ESI主要用于极性、大分子有机物，APCI一般用于弱极性、小分子有机物。ESI易形成多电荷离子，因而可测大分子。APCI主要产生单电荷离子，限于四极杆的质量分析范围，一般测定分子量低于1000的有机物。ESI 除与四极杆、离子阱匹配外，也可配合TOF、FTICR用于生物大分子的研究。APCI应用范围较窄，常见如某些环境污染物检测、甘油三酯检测等，一定程度上互补了ESI的应用。 ESI 的软电离程度较APCI 的还小，但其应用范围较APCI 的大，只有少部分ESI 做不出，可以用APCI 辅助解决问题，但是APCI还是不能解决所有ESI 解决不了的问题。 电喷雾电离源是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性强的大分子有机化合物，如蛋白质、肽、糖等。电喷雾电离源的最大特点是容易形成多电荷离子。这样，一个分子量为10000Da的分子若带有10个电荷，则其质荷比只有1000Da，进入了一般质谱仪可以分析的范围之内。根据这一特点，目前采用电喷雾电离，可以测量分子量在300000Da以上的蛋白质。 大气压化学电离源主要用来分析中等极性的化合物。有些分析物由于结构和极性方面的原因，用ESI不能产生足够强的离子，可以采用APCI方式增加离子产率，可以认为APCI是ESI的补充。APCI主要产生的是单电荷离子，所以分析的化合物分子量一般小于1000Da。用这种电离源得到的质谱很少有碎片离子，主要是准分子离子。 APCI与ESI源都能分析许多样品，而且灵敏度相似，很难说出哪一种更合适。同时至今没有一个确切的准则判断何时使用某一种电离方式更好。但是通常认为电喷雾有利于分析生物大分子及其它分子量大的化合物，而APCI更适合于分析极性较小的化合物。 APCI源不能生成一系列多电荷离子，所以不适合分析生物大分子。而ESI源由于它能产生一系列的多电荷离子，特别适合于蛋白质，多肽类的生物分子。ESI和APCI共同点:1、使用高电压元件和雾化气喷雾法产生离子2、通常产生(M+H)+或(M-H)-等准分子离子3、产生极少的碎片，但可以控制产生结构碎片４、非常灵敏的电离技术。不同点:1、生成离子的方式不同，ESI：液相离子化；APCI：气相离子化 2、样品兼容性ESI：极性化合物和生物大分子APCI：非极性，小分子化合物（相对ESI而言）且有一定挥发性3、流速兼容性ESI：0.001到1ml/minAPCI：0.2到2ml/min4、ESI的适用范围要远远大于APCIESI的优点与缺点(1) 优点1.分子量确认2,适合于挥发及不挥发的溶质3.适合于离子化及极性的溶质4.好的灵敏度5.高分子量测定6.适合于毛细管色谱(2) 缺点1.相对较低的LC流速。2.在溶液中必须离子化。3.在高盐条件下会发生离子抑制。4.产生加和离子影响结果。5.有限的结构信息。 APCI优点∶1.利用所得到[M+1]+及[M-1]–进行分子量确认2.源参数调整简单，容易使用3.耐受性好，喷雾器及针的位置不关键4.LC流速可达2.0ml/min5.好的灵敏度 缺点：1.有限的结构信息2.易发生热裂解3.低质量时化学噪声大4.不适合做分子量大于1000的化合物

宝枫林 SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定 一、实验目的与原理 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。 本实验的目的是对多酚氧化酶的纯化度鉴定及分子量的测定，通过实验，学习和掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质纯度和分子量的鉴定。 二、仪器与试剂 1、材料： 硫酸铵盐析沉淀的多酚氧化酶粗酶样品、DEAE-纤维素DE52柱层析的样品，Sephadex G-100柱层析的样品。 2、试剂： （1）丙稀酰胺（Acr母液）：30%Acr （Acr/Bis） （2）10%的SDS溶液 （3）10%的过硫酸铵溶液 （4）四甲基乙二胺（TEMED） （5）分离胶缓冲液：1.5M Tris，PH8.8 （6）浓缩胶缓冲液：1.0M Tris，PH6.8 （7）电极缓冲液：10×30g Tris，125g 甘氨酸和5g SDS，加水溶解定容至1000ml，pH8.3 （8）样品缓冲液：0.2M Tris，PH6.8，1%SDS，30%甘油，巯基乙醇及溴酚兰 （9）染色液：0.15%考马斯亮蓝R250，溶于脱色液 宝枫林 （10）脱色液：50%的甲醇，7%的冰醋酸的水溶液 （11）标准分子量蛋白。 3、仪器设备： 电泳仪、垂直电泳槽等。 三、操作步骤 1、凝胶制备： 用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。将配制好的分离胶溶液倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。 2、上样： 分别取样品若干ml于离心管中，按1/1～1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3～5min，取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30μl不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后，调节电泳仪电流到10mA（2～3mA/em），保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1～2cm时，即可停止电泳。 3、染色： 电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带。 四、结果 （略） 五、注意事项 1、SDS与蛋白质的结合按质量成比例（即：1.4gSDS/g蛋白质），如果比例不当，就不能得到准确的数据。 2、用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。 3、有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。 4、有的蛋白质（如：电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质）不能采用该法测相对分子量。 5、如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象，可能是SDS不纯引起。

常见蛋白质分子量参考值（单位：dalton）

蛋白质

分子量

肌球蛋白[myosin]

甲状腺球蛋白[thyroglobulin]

β-半乳糖苷酶[β-galactosidase]

副肌球蛋白[paramyosin]

磷酸化酶a[phosphorylase a]

血清白蛋白[serum albumin]

L-氨基酸氧化酶[L-amino acid oxidase]

地氧化氢酶[catalase]

丙酮酸激活酶[pyruvate kinase]

谷氨酸脱氢酶[glutamate dehydrogenase]

亮氨酸氨肽酶[glutamae dehydrogenase]

γ-球蛋白，H链[γ-globulin, H chain]

延胡索酸酶（反丁烯二酸酶）[fumarase]

卵白蛋白[ovalbumin]

醇脱氢酶（肝）[alcohol dehydrogenase (liver)]

烯醇酶[enolase]

醛缩酶[aldolase]

肌酸激酶[creatine kinase]

220,000

165,000

130,000

100,000

94,000

68,000

63,000

60,000

57,000

53,000

53,000

50,000

49,000

43,000

41,000

41,000

40,000

40,000

胃蛋白酶原[pepsinogen]

D-氨基酸氧化酶[D-amino acid oxidase]

醇脱氢酶（酵母）[alcohol dehydrogenase (yeast)]

甘油醛磷酸脱氢酶[dlyceraldehyde phosphate dehydrogenase]

原肌球蛋白[tropomyosin]

乳酸脱氢酶[lactate dehydrgenase]

胃蛋白酶[pepsin]

转磷酸核糖基酶[phosphoribosyl transferase]

esi 蛋白质分子量

Esi蛋白质分子量是一项实验室技术，用于确定特定蛋白质的分子质量。蛋白质分子量是衡量蛋白质大小的指标，因其在许多生物学和生物化学研究中起着重要作用。

对于 esi 蛋白质分子量的测定，一个常用的方法是质谱分析。在质谱仪中，蛋白质样品首先经过电离过程，通常使用电喷雾（ESI）技术。ESI技术能够将溶解在溶剂中的蛋白质转化为气态离子，进而能够在质谱仪中进行分析。

质谱仪接纳电离后的蛋白质离子，并将蛋白质离子推入仪器中的离子飘移室。在离子飘移室中，蛋白质离子根据其质量-电荷比（m/z）被分离和分析。在蛋白质离子的摩尔质量（取决于离子的质量数和电荷数）和电荷数已知的情况下，可以根据公式计算蛋白质的分子量。

ESI蛋白质分子量的测定方法具有高灵敏度、高分辨率和高可靠性的特点。这种方法通常用于研究蛋白质的结构和性质，例如确定蛋白质的化学修饰、检测蛋白质的混合物中的成分等。

总之，esi蛋白质分子量是通过使用质谱仪中的电喷雾离子化技术来确定蛋白质分子的质量。这项技术在研究生物化学和生物学中有广泛的应用，对于我们理解蛋白质的功能和特性非常重要。