・３８・ 中国奶牛・２ＯＯ９年第４期
奶牛结核病实验室诊断技术研究进展
蒋柏茂 ，李文平，，刘从松２刘红良ｚ，陈尔曼
（１．湖南农业大学动物医学院，长沙４１０１２８；２．城步苗族自治县畜牧局，邵阳４２２５０９；
３．湖南株洲市畜牧水产局，株洲４１２０００）
中图分类号：￥８５８．２３．１＋２文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—４２６４（２００９）０４—００３８—０２
牛结核病（Ｂｏｖｉｎｅ Ｔｕｂｅｒｅｕｌｏｓｉｓ）是由牛分枝杆菌引
起的一种慢性传染病『ｌ１。该病传染性强．且能通过奶制
品传染给人和其他动物．危害严重．被世界动物卫生
组织（ＯＩＥ）列为Ｂ类动物疫病．我国将其列为二类动物
疫病。牛结核病的诊断大体上可归为两类：一是临床症状
诊断；二是实验室诊断，包括细菌学检测，如涂片镜检、
细菌培养、动物实验等：免疫学检测：分子生物学诊断技
术等。传统的细菌学方法由于繁琐费时、检出率低、灵敏
度差．已不能满足当前疫病诊断的需要。目前世界各国
都在致力于研究开发牛结核病的快速诊断方法．并已经
建立了一些快速、准确、可靠的新型检测技术，有些技术
已经在生产实践中得到了广泛的应用 本文对奶牛结核
病临床诊断方法不再作赘述．只重点综述其实验室检
测方法的研究进展
１细菌学检测
细菌学检查的方法有涂片镜检、细菌培养等。临床
上样品中的牛分枝杆菌可通过涂片抗酸染色、镜检并
通过细菌培养做出确认。涂片抗酸染色法所需材料、
设备简单。操作方法简便．是较为普遍应用的方法
但菌量在１０３ １０４才能被检查出．易出现假阴性结果
由于此法检出的细菌只能说明有抗酸杆菌存在．而且也
不能准确地鉴定出结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌．
因此。其缺乏特异性。细菌培养需在３７℃培养３～８周才
可生长。菌落形态粗糙。中心隆起，周围大而边缘不规则，
菌落颜色微白 细菌培养法到目前为止仍被认为是确
诊结核的黄金标准【 。但牛结核分枝杆菌生长缓慢，
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结核病的实验室诊断方法
作者：赵雁林
来源：《中国社区医师》2008年第01期
结核病实验室检查主要有；涂片染色显微镜检查、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定、分枝杆菌基因分型、分枝杆菌血清学及核酸扩增检测等。细菌学检查
细菌学检验结果的准确性首先取决于标本的质量。正确地采集、转送标本，是直接影响检验结果的重要因素和取得准确结果的前提。各种标本(痰液、血液、伤口分泌物和各种感染组织等)采集时应充分考虑到选择恰当合理的时问，考虑到可能存在的病原菌的性质，按要求采集标本，这样可使标本包含细菌，并为后续检验步骤打下良好的基础。合格的痰标本在低倍镜视野里上皮细胞应25个。
涂片染色显微镜检查根据我国结核病防治规划的要求，对咳嗽、咳痰>13周或有咯血或血痰的肺结核可疑症状者，应留取3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰)进行痰涂片抗酸染色检查。即时痰为病人就诊时咳出的痰液：清晨痰为清晨深咳出的痰液；夜间痰为就诊前1天晚睡前咳出的痰液。留取的痰液标本常规涂片后，进行要尔－尼尔逊氏染色法(ziehl-Neelsen)染色。
分枝杆菌分离培养 结核分枝杆菌是兼性需氧菌，最适生长温度为37℃，最适pH为6.5～7.2。分枝杆菌分离培养检查法，是结核病确诊最可靠的方法。是获得纯培养物进行菌种鉴定、药物敏感性试验以及其他生物学研究的基础。
当前，我国普遍采用改良L-J(改良罗氏)培养基来分离培养结核分枝杆菌。通常情况下，当每1ml标本中微生物含量达102～3 CFU(菌落形成单位)时，即可培养阳性。分枝杆菌快速培养检查是使用分枝杆菌快速培养仪(MIGT、BacT/A1err、ESP)，通过测定细菌生长代谢检测分枝杆菌生长情况的方法。
在进行分枝杆菌快速培养检查时，标本接种前的祛污染处理，必须严格按照系统说明书中给定的方法进行。孵育检测过程中系统报告阳性时，相应标本的培养液必须首先进行抗酸染色镜检，发现抗酸菌后方可发出阳性报告。
临床肺科杂志２０１０年１１月 第１５卷第１１期 １６０７
・综 述・
结核病实验室诊断技术研发进展
郑晓静张宗德
世界卫生组织２００９年全球结核病控制报告显示，全球现 有１３７０万结核病患者，每年发病人数为９２７万，我国发病人
数居世界第二位。近十余年来，结核病实验室诊断技术突飞 猛进，其中一些技术已经过临床验证并获得一些权威机构的
认证，然而，我国多数地区的结核病实验室诊断仍停留在痰涂 片镜检、痰结核菌培养及ＰＰＤ皮试等传统方法。本文介绍近
十余年来具有代表性的几项结核病实验室诊断新技术的研发 情况。
一、显微镜镜检技术研发进展 目前萋一尼氏抗酸染色涂片镜检方法仍是我国传染性结
核病人的主要发现手段，但灵敏度仅４０％～６０％，且方法繁
琐，假阳性和假阴性较高。以金胺一罗丹明为代表的荧光染 色提高了镜检的灵敏度，缩短了读片时间，明显降低假阳性和
假阴性，但由于荧光显微镜价格昂贵，不适宜基层应用。最新
的ＬＥＤ显微镜是将低廉的发光二极管与显微镜相结合，其价
格低于现有的光学显微镜，寿命长，可电池供能，可靠性更强， 诊断性能优于标准荧光显微镜。多项研究经ｍｅｔａ分析显示： ＬＥＤ检查的敏感性比传统镜检方法高约１０％…。同时具备
荧光染色的优点，且花费低、可实施性强，可更广泛的常规使 用。中国卫生部一盖茨基金会和中国卫生部一法国梅里埃基
金会结核病防治项目已准备将ＬＥＤ显微镜在我国基层实验 室推广。
二、分枝杆菌培养技术研发进展
结核杆菌培养是诊断结核病的金标准，但传统的罗氏培 养需要４～６周的培养方能检测到结核菌的生长。目前正在
推广的液体培养系统仅需１—３周，更加敏感、快速。早期的
ＢＡＣＴＥＣ－４６０法由于具有放射性而限制了其应用。ＭＧＩＴ为 ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｔｕｂｅ的简称，其原理是 Ｊ：试管
底部的荧光复合物与氧气结合时处于淬灭状态，当结核菌生 长时，氧气逐渐减少，荧光复合物就发出荧光而被检测到。自
中国城乡企业卫生２０１５年８月第４期（总第１６８期）
结核病的实验室诊断方法学比较及进展
冯玉敏 东丽区东丽医院检验科，天津３００３００ ・综述・
摘要：结核病是一种由分枝杆菌感染引起的传染病，也是单一致病菌感染引起死亡人数最多的疾病。２０１０年我国结核 病流行病学抽样调查结果显示，结核病年发病患者数约为１３０万。正因为我国结核病发病率居高不下因此如何快速检 验结核病对于我国控制及治疗结核病起到了至关重要的作用。作为医学检验工作者要充分掌握新知识、新技术，在实 践中灵活运用，优势互补，予找准确度高、特异性好、敏感度高、简便快捷、经济的结核分枝杆菌检测新方法。本文从细 菌学检测，免疫学检测和分子生物学检测等方面，对各种检测方法的优缺点进行综述，并对结核病实验室诊断技术进 行展望。 关键词：结核病；实验室；诊断方法学 中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００３—５０５２ｌ２０１５）０４—０２９—０３ ＤＯＩ：１０．１６２８６￣．１００３—５０５２．２０１５．０４．０１１
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓ
ＦＥＮＧ Ｙｕ－ｍｉｎ Ｔｉａｎｊｉｎ Ｄｏｎｇｌｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００３００，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｓ ａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ｉｓ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｄｅａｔｈｓ ｃａｕｓｅｄ ｍｏｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒａｎｄｏｍ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｓｕｒｖｅｙ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｉｎ ２０１０ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｎｎｕａｌ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｓ ａｂｏｕｔ １ ３００ ０００．
