THP-1 细胞培养

THP-1和单核细胞诱导分化方法1.THP-1细胞的诱导分化（1）THP-1用185ng/ml佛波酯（PMA，用DMSO溶解）作用 6小时，诱导细胞分化为巨噬细胞（M0）。

（2）在PMA继续存在的情况下，通过分别：•与IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小时以上，使其向M1表型极化。

•与 IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小时以上，使其向M2表型极化。

（3）极化完成后，细胞用不含刺激物和PMA的无血清RPMI1640重悬，可保持72小时。

2. 人单核细胞来源的巨噬细胞(MDM)的诱导分化（1）采血后，首先用 Ficoll密度梯度离心法分离PBMC（400g，25min），然后再用 Percoll （400g，15min）分离PBMC，最后将单核细胞以5×10E5/ml的浓度接种在含有 10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中，同时加入 20 nM的CSF-1。

（2）单个核细胞在37°C、5%CO2条件下培养7d，每3d更换一次培养液，获得MDM。

（3）MDM得到之后，去除培养基后：•若与新鲜的、无血清的RPMI1640继续培养，则维持M0状态。

•若与LPS(1μg/ml)和IFN-γ(10 ng/ml)孵育48小时，则向M1表型极化。

•若与IL-4(20 ng/ml)和IL-13(5 ng/ml)孵育48小时，则向M2表型极化。

（3）极化完成后，细胞用不含刺激物和PMA的无血清RPMI1640重悬，可保持72小时。

参考文献：Tedesco S, et al. (2018) Convenience versus Biological Significance: ArePMA-Differentiated THP-1 Cells a Reliable Substitute for Blood-Derived Macrophages When Studying in Vitro Polarization?. Front. Pharmacol. 9:71. doi: 10.3389/fphar.2018.00071。

thp1细胞成团解决方法
THP-1细胞是一种常用的人类单核细胞系，通常用于研究炎症、免疫和癌症等领域。

在培养THP-1细胞时，有时候会出现细胞成团
的情况，这可能会影响实验结果和细胞的健康状况。

解决THP-1细
胞成团问题的方法可以从以下几个方面来考虑：
1. 培养基配方优化，THP-1细胞通常使用含有血清的培养基进
行培养，因此可以尝试调整培养基的配方，例如尝试不同浓度的血清、添加细胞因子或生长因子等，以优化细胞的生长环境，减少细
胞成团的情况。

2. 细胞密度控制，细胞密度过高容易导致细胞成团，因此在培
养THP-1细胞时，需要注意控制细胞的密度，定期进行细胞的传代
分装，避免细胞过于密集。

3. 细胞培养技术，在培养THP-1细胞时，需要注意培养技术的
操作，比如轻柔地振荡或者振动培养皿来分散细胞，避免细胞聚集
成团。

4. 检查细胞的健康状况，定期观察和检查细胞的形态和健康状
况，及时发现并处理细胞成团的情况，比如通过细胞离心、重新分装等方法来解决细胞成团问题。

总的来说，解决THP-1细胞成团问题需要综合考虑培养条件、细胞密度、培养技术等多个因素，通过优化培养条件和细胞处理技术来减少细胞成团的情况，从而保证细胞的健康和实验结果的准确性。

希望以上建议对你有所帮助。

thp1细胞电转方法THP-1细胞是一种具有单核细胞功能的人类白血病单核细胞系，常用于炎症和免疫反应的研究。

THP-1细胞可以通过电转某些基因来进行功能研究，如炎症因子的表达和调控，信号通路的研究等。

下面将介绍THP-1细胞电转的方法。

一、细胞培养1.1 THP-1细胞维持：THP-1细胞应在37°C、5% CO2的恒温培养箱中维持。

培养基一般为RPMI-1640培养基，含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素。

1.2 细胞传代：THP-1细胞密度应在8×10^5至1×10^6个细胞/ml之间，每2-3天传代一次。

二、电转试剂2.1 质粒DNA：选择合适的质粒表达载体，含有目的基因的表达序列。

2.2 转染试剂：常用的转染试剂有聚乙烯亚胺（PEI）和脂质体转染试剂。

2.3 负载DNA：将质粒DNA与转染试剂混合，形成复合物。

三、电转过程3.1 THP-1细胞培养：在电转前需将THP-1细胞培养至对数生长期，细胞密度应在1×10^6个细胞/ml以上。

3.2 转染：将负载DNA的复合物滴加到THP-1细胞培养基中，轻轻摇动培养皿使复合物均匀分布。

3.3 电转：将培养皿放置于电转仪中进行电转；电转条件一般为电压1500-1800V、电容时间20-30ms。

3.4 处理：将电转后的THP-1细胞培养液转移至含有适当抗生素的培养基中，并培养至目的。

四、结果检测4.1 抗生素筛选：通过加入抗生素筛选培养THP-1细胞，检测是否成功转染。

4.2 蛋白表达：通过Western blot或ELISA等方法检测目的基因的蛋白表达水平。

4.3 mRNA表达：通过RT-PCR或Real-time PCR等方法检测目的基因的mRNA表达水平。

4.4 细胞功能：通过细胞功能实验检测目的基因的功能变化，如细胞增殖、凋亡、炎症因子的表达等。

总结：THP-1细胞的电转是一种用于基因功能研究的有效方法，通过该技术可以实现外源基因的表达和功能研究。

thp1细胞电转方法THP-1细胞是一种来源于人类单核细胞系的模型细胞，广泛用于炎症、免疫和肿瘤等相关研究中。

在研究过程中，需要对THP-1细胞进行电转染，以实现外源基因的转染和表达。

下面将介绍一种常用的THP-1细胞电转方法。

1. 购买所需试剂和试验器材：首先需要购买所需的试剂和试验器材，包括电转剂、细胞培养基、完整培养基、含抗生素的培养基、细胞培养器具（离心管、移液器、离心机等）等。

2. 预处理THP-1细胞：将THP-1细胞解冻后在完整培养基中培养至细胞密度达到80%以上，然后用含抗生素的培养基将细胞转移至新的培养皿中。

3. 调整细胞密度：在进行电转染前，需要将细胞密度调整至适宜的水平。

一般来说，细胞密度应在1×10^6至5×10^6之间。

4. 准备电转剂和DNA：根据电转剂的说明书，合适地稀释电转剂，并将要转染的质粒DNA溶解在含有电转剂的缓冲液中。

5. 进行电转染：将细胞培养皿放入离心管中，加入预先混合好的电转剂和DNA 溶液，轻轻摇动培养皿使其均匀分布，并将离心管置于电转仪中进行电转染。

6. 培养和筛选转染细胞：将进行电转染的THP-1细胞移至含抗生素的培养基中培养，并在接下来的培养过程中定期检查细胞的外观和生长情况，筛选出具有稳定表达目的基因的细胞株。

7. 验证转染效率：通过检测外源基因的表达水平、蛋白质水平或功能性实验等方法，验证转染效率和稳定性。

总结：以上就是一种常用的THP-1细胞电转方法的步骤。

通过合理地进行电转染实验，可以实现对THP-1细胞的基因转染和表达，为相关研究提供有力支持。

当然，在进行电转染实验时，需要注意操作规范，遵守相关实验守则，以确保实验结果的可靠性和准确性。

Macrophage Virulence Assays一、THP-1细胞的制备1、第一天，加5x106 THP-1 于50ml 完全培养基1640，于225cm2培养瓶中培养（根据实验需要，设置培养体积）。

2、于CO2培养箱中直立培养3d。

3、第四天，将培养瓶放倒，继续培养2d。

4、第六天，另外加入50ml新鲜完全培养基。

5、继续培养2d。

6、第八天，轻轻震荡培养瓶使贴壁细胞悬浮起来。

7、200g，10min，收集细胞。

8、弃上清。

9、加入25ml新鲜完全培养基，轻轻吸打重悬细胞，进行细胞计数（用0.4%的台盼蓝稀释细胞液4倍，计数=5个中格总细胞数/5x4（稀释倍数）x25x104）。

10、根据细胞计数，使用完全培养基调整细胞密度，12孔板的细胞浓度为1.0X 106/ml或24孔板5x105/ml。

11、加PMA到终浓度为5ng/ml（有待摸条件）。

12、向24孔板中加入1ml细胞液（带PMA），每孔5x105/ml。

13、培养3d（根据PMA浓度调整分化时间）。

14、加入1ml D-PBS，每孔严格上下吸打3次，吸去残留的没有附着的细胞。

重复洗涤一次。

15、加入1 ml 新鲜培养基。

16、此时的巨噬细胞可以用来感染。

二、分枝杆菌培养物的制备侵染巨噬细胞的分枝杆菌在7H10+ADC+Tween-80长到晚期对数生长期。

传代次数不超过5，OD550控制在0.6-0.8。

1)、挑取分枝杆菌单菌落接种于7H9液体培基（10% ADC for BCG，静置培养10-15d，OD600约0.5-1.0）中, 37℃、110rpm、培养24h，至OD600约为1；2)、1%接种量转接到新鲜7H9液体培基中继续培养15-17h, OD600约为0.5-0.8；3)、2000g, 20min或8000g，5min 离心收集对数生长晚期的分枝杆菌。

5)、弃上清。

6)、站立10min，使气溶胶沉淀。

7)、用PBS洗涤三次后，用不含抗生素的RPMI1640加血清的培养基重悬，再次以1600rpm 离心5min，此时上清液中基本为分散的分枝杆菌。

这个是急性单核白血病细胞，悬浮的（如果养的时间很长了有的会贴壁），培养基用普通的1640就可以了，这里是这个细胞株的详细资料供参考。

THP-1：human acute monocytic leukemiaOrigin: established from the peripheral blood of a 1-year-old boy with acute monocytic leukemia (AML) at relapse in 1978; the cells can be used for induction of differentiation studies; the cells were described to produce lysozyme and to be phagocytic; carries t(9;11)(p21;q23) leading to MLL-AF9 fusion geneMorphology: round, single cells in suspension, partly in clustersMedium: 90% RPMI 1640 + 10% FBSSubculture: maintain at 0.1-1.0 x 106 cells/ml; split 1:2 to 1:3 every 3-4 days; seed out at ca. 0.5 x 106 cells/mlIncubation: at 37 °C with 5% CO2Doubling time: ca. 35-50 hoursHarvest: saturation density at about 1.0 x 106 cells/mlStorage: frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 5 x 106 cells/ml Mycoplasma: contamination was eliminated with Ciprobay (ciprofloxacin), then negative in DAPI, microbiological culture, PCR assaysImmunology: CD3 -, CD4 +, CD13 +, CD14 (+), CD15 +, CD19 -, CD33 (+), CD34 -, CD68 +, HLA-DR +Fingerprint: multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA pro: confirmed as human with IEF of AST, MDH, NPCytogenetics: human near-tetraploid karyotype - 94(88-96)<4n>XY/XXY, -Y, +1, +3, +6, +6, -8, -13, -19, -22, -22, +2mar, add(1)(p11), del(1)(q42.2), i(2q), del(p21)x2-4, i(7p), der(9)t(9;11)(p22;q23)i(9)(p10)x2, der(11)t(9;11)(p22;q23)x2, add(12)(q24)x1-2, der(13)t(8;13)(p11;p12), add(?18)(q21) - carries t(9;11) associated with AML M5Viruses: ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -, HIV -, HTLV-I/II -THP-1单核细胞是悬浮生长的细胞，用1640＋10％FBS是很容易养的，但复苏的细胞可适当加量至20%FBS。

人单核细胞THP-1说明书目录号：SCSP-567细胞名称：THP-1细胞描述：人单核细胞，急性髓细胞白血病。

该细胞来源于一岁男孩的外周血，对乳胶微粒和致敏红细胞有吞噬作用，可在佛波酯（TPA，也称为PMA，全名12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate）诱导下分化成为巨噬细胞。

物种：人，男性，1岁组织：外周血细胞来源：2014年引进生物安全等级：BSL-1完全培养液配方：见下方备注批次/冻存日期：详见冻存管/培养瓶标识参考传代比例：传代时控制细胞密度在2-4⨯105cell/mL，并在细胞生长至8-10⨯105cell/mL时进行传代参考传代周期：传代时控制细胞密度在2-4⨯105cell/mL，并在细胞生长至8-10⨯105cell/mL时进行传代参考换液频率：传代时换液冻存液配方：完全培养液95%，DMSO5%细胞形态：悬浮生长支原体检测结果：阴性STR鉴定结果：D5S818:11,12D13S317:13,13D7S820:10,10D16S539:11,12vWA:16,16THO1:8,9.3Amelogenin:X,YTPOX:8,11CSF1PO:11,13THP-1细胞照片参考文献：备注：1.人单核细胞THP-1完全培养液配方（100ml）：RPMI Medium1640(Invitrogen,11875-093)90mlFBS10mlβ-Mer(Invitrogen21985)0.05mM2.注意事项：a)该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。

同时，您在收到细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以直接向培养瓶中添加等体积的新鲜培养液，然后将细胞吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中继续培养即可。

b)细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。

北京索莱宝科技有限公司
人急性单核细胞白血病细胞；THP-1贴壁培养
细胞名称：人急性单核细胞白血病细胞；THP-1
形态特性：单核细胞
生长特性：悬浮生长
培养条件：1640+10%FBS
传代方法：维持细胞浓度在2×105~1×106cells/ml；2~3天换液1次
冻存条件：基础培养基+5%DMSO+20%FBS
特征特性：该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。

细胞处理方法：
1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超
净台中操作。

2.将细胞转移至50mL的无菌离心管中，1000rpm离心5-10min，用完全培养基重悬细胞，适宜的密度分
瓶培养。

特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1.我们使用自产培养基及进口血清培养细胞，在您拿回细胞后，如想更换其它品牌培养基，请依照逐次替换的原则，先保留培养瓶中的培养基，多日多次代逐步更换，以减轻对细胞的刺激。

2.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系售后。

3.细胞任何售后问题，均需拍照存档并在2周之内及时联系客服。

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HP-1细胞是一种单核细胞白血病细胞系，广泛应用于免疫学、血液学和肿瘤学研究。

THP-1细胞的培养方法和注意事项：
一、培养方法：
1.培养基：使用含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养基，
确保无菌且不含抗生素。

2.细胞接种：以每孔1×10^5个细胞接种到96孔板，在37℃、
5%二氧化碳的细胞培养箱中培养。

3.培养时间：通常情况下，每2-3天更换一次培养基，根据细胞生
长情况决定传代时间。

4.细胞传代：当细胞达到80%-90%汇合时，使用0.25%胰蛋白酶
和0.02% EDTA溶液进行消化，并按照1：3-1：5的比例传代。

5.细胞冻存：当细胞达到80%-90%汇合时，使用细胞冻存液进行
冻存，并置于-80℃冰箱中保存。

二、注意事项：
1.无菌操作：确保所有操作过程在无菌条件下进行，以防止污染。

2.细胞密度：注意控制细胞密度，避免细胞过度堆积导致生长状态
恶化。

3.培养液更换：定期更换培养液，以保持营养充足，防止有害代谢
产物积累。

4.避免刺激：在操作过程中，尽量避免对细胞产生机械性或化学性
刺激。

5.观察记录：定期观察细胞生长情况，记录实验数据，以便分析和
总结。