ABI7300操作1

操作手册快速入门指南目录一. 开机 3二. 实时定量的软件运行 31.新建文献 32.探针设立 43.填样品表 44.参比荧光 55.循环参数 56.启动扩增 5三. 实时定量的数据分析 61.数据分析 62.基线设定 63.线性图谱 64.原始数据 75.原则曲线 76.实验报告 7四. 终点读板的软件运行 71.新建文献 82.探针(DETECTOR)设立 83.位点(MARKER)设立 84.填样品表 85.参比荧光 86.终点读板 9五. 终点读板的数据分析 91.数据分析 92.信号分布 93.基因分型 94.保存成果 9六. 日常维护 101.荧光污染的检查与解决 102.检测器光源的更换流程 10 7000型荧光定量 PCR 仪ABI Prism 快速入门指南一. 开机1.确认电脑与主机的数据通讯线(灰色 USB 连线)连接对的。

2.确认电脑处在外接电源供电状态。

3.启动电脑，以 Administrator 顾客名登录，进入 Windows 操作系统。

4.待桌面图标出现后，打开7000主机的电源。

5.待主机的电源批示灯点亮后，启动7000 SDS 应用软件。

在进行实验之前，请先检查样品加热模块以拟定它没有受到荧光污染，具体办法请按照第6节的“荧光污染的检查与解决”流程进行。

二. 实时定量的软件运行基因体现的绝对定量和相对定量研究、转基因食品的检测(GMO)、多个病原体的检查检疫等多个定量应用；以CT 值的大小作为样品阴性、阳性鉴定根据的定性应用；以及SNP 检测、等位基因鉴定实验等的第一步PCR 扩增，都是采用实时定量模式，按照下列环节操作。

1.新建文献菜单File → New，Assay 选择Absolute Quantification (实时定量模式)，打开一种空白的96孔板文献。

2.探针设立双击任意一种孔，打开Well Inspector 窗口。

该窗口也能够从菜单View →Well Inspector 打开。

ABI7300荧光定量PCR技术参数荧光定量PCR 技术参数一、技术指标及配置要求：1、包括主机、电脑、软件及试剂，能够完成绝对定量、相对定量、基于MGB 原理的高成功率SNP 分析和熔点曲线分析2、技术规格2.1热循环系统*2.1.1加热冷却方式为半导体*2.1.2 温度范围4℃-99.9℃2.2样品系统2.2.1适用8联管和96孔板，无需适配器或者辅助器，保证实验结果2.2.2机械设计应使样品无需移动，反应后可降温至4℃保存2.2.3 反应体系不少于50ul，样品管为200ul管2.3荧光系统2.3.1通用各种知名品牌荧光染料*2.3.2软件支持Rox荧光校正去除误差2.4光学系统*2.4.1激发光源为卤钨灯，配备时间监测及自我诊断程序，滤光系统为不少于四色光源滤光片结合荧光滤光片*2.4.2检测系统为CCD摄像机成像，实时动态检测，动态显示，可同时检测不少于四种荧光染料2.5检测性能：能检测到≤10个拷贝数的模板，置信度99.7%，线形范围在109以上2.6分析功能2.6.1能进行绝对和相对定量，可同时对无限个数据进行分析、比对和作柱形图2.6.2使用多组分算法，用于多色荧光分辨，去除不同荧光之间的干扰2.7软件系统2.7.1包括有绝对定量和相对定量软件，并有荧光校正软件2.7.2有正版primer express引物探针软件，可用于PCR引物，巢式PCR，多重PCR引物，RT-PCR引物的设计和自动测试*2.8配套试剂盒（提供证件）2.8.1 可提供原厂同品牌的基于taqman MGB技术检测microRNA的试剂盒2.8.2可提供原厂同品牌的基因拷贝数变异（CNV）检测试剂盒2.9 试剂、耗材为开放式2.10装机指标99.7%的置信度下分辨5000和10000模板拷贝数的差异3、资格证明：ISO9001质量认证、CE认证4 有医疗器械注册证，且在国家药品监督管理局认可的有效期之内二交货和售后1、交货期：收到信用证之日起60天之内2、自验收合格日起整机（包括配件）一年保修，终身维护。

ABI 7300 Real Time PCR System 实时荧光定量PCR分析系统发布人：Admin阅读次数：113发布时间：2011-3-3 14:18:39【字号：小中大】本设备主要特点：1、定量检测：绝对定量（病原体检测，转基因食品检测，基因表达研究）；相对定量（基因在不同组织中的表达差异，药物疗效考核）。

2、点突变检测：与疾病相关的等位基因点突变检测；SNP检测。

ABI 7300 Real Time PCR System 实时荧光定量PCR操作规程一、仪器开/关机程序1、开机程序1.1 打开电脑，进入桌面。

1.2 打开PCR仪器的电源开关（注：该仪器有两个电源开关，一个控制PCR仪，一个控制光源系统）。

1.3 双击桌面上的软件图标，点击“yes”，进入软件的主菜单。

2、关机程序2.1 保存数据，退出软件的主菜单。

2.2 关掉电脑，关闭PCR仪器的电源开关。

二、程序文件的设置及打开1、实验程序已预先设定1.1 点击软件左方主目录中的“Library”，进入该界面后。

1.2 选择“View Protocol”页面，根据路径，找到预存的程序文件。

2、创建新的程序文件2.1 点击软件左方主目录中的“Workshop”，进入该界面。

2.2 选择“Edit Protocol”页面，输入相应的温度、时间、重复的循环数（Repeats），增加或删除步骤（Cycle和Step），在“Select data collection step（s）”中选择需要进行荧光收集的步骤。

2.3 完成后，在“Protocol Filename”中输入程序的文件名，点击“Save this protocol”。

三、仪器操作程序1、编辑样本1.1 将装有反应液的PCR反应管放入PCR仪，记录样本摆放顺序。

1.2 点击进入软件左方主目录的“Workshop”界面，选择“Edit Plate Setup”页面。

1.3 点击“Samples：Whole Plate loading”，根据样本摆放的顺序和样本属性，选择相应的图标（Unknown和Standard），在plate上相应位置作标识，是标准品（Standard）的，在屏幕右下方的“Standard Quantity”中输入相应浓度。

ABI Prism® 7300型荧光定量PCR仪安装培训美国应用生物系统中国公司技术服务部 2004年1培训内容1、仪器简况 2、定量PCR的数学原理 3、定量PCR的化学原理 4、等位基因鉴定原理 5、定量PCR实验操作 6、定量PCR的数据处理 7、应用举例2仪器简况7300功能一览• 绝对定量(Absolute Quantification，AQ)– 自动计算基线、阈值、CT值、浓度、百分比• 相对定量(Relative Quantification，RQ)– RQ Plate：控制实验 – RQ Study：计算数据，最多10块RQ Plates• 等位基因分型(Allelic Discrimination，AD) • 阴性阳性鉴定(Plus/Minus with IPC，+/-)47300选用的荧光组合报告荧光(Filter A) 报告荧光(Filter B) 淬灭或报告荧光(Filter C) 参比荧光(Filter D) FAM™ 或 SYBR® Green VIC™ 或 JOE™ TAMRA™ 或 NED™ ROX™5相对定量数据自动处理选配软件6定量PCR的数学原理PCR曲线有两种表达形式线性图谱 对数图谱8PCR分4个阶段平台期 线性增长期 指数增长期基线期9起点定量与终点定量起始DNA量是“天然”的量，更有意义；终点DNA 量是经过PCR “加工”的量，存在部分“失真” 起点定量重现性好，终点定量误差大终点：误差大同一个样品重复96次起点：重现性好10C T = -k logX0+ b CT阈基线值使用两条探针，标记两种颜色，针对两个基因目标基因1目标基因2野生型(wt)突变型(mut)2/2纯合子1/1纯合子1/2 杂合子空白对照1.推荐所有的用户到AB公司的网站上查询现成的试剂盒，价格比国内合成更便宜，质量比国内试剂高10倍，保质期更长，成功率有保证人类、大鼠、小鼠：全部基因的表达试剂盒，人类试剂盒20万个人类：200万个SNP试剂盒2.如果网上没有，由用户提供61-300碱基长的序列，由AB设计并合成引物和探针3.基础好的用户可以使用Primer Express软件自己设计，在国内合成和标记只要引物和探针质量符合要求循环温度和时间就不需要修改2-步PCR1250 copies2500 copies5,000 copies10,000 copies20,000 copies1.25x103 pg2.5x103 pg5x103 pg1x104pg2x104pg total RNA2-fold differenceThank You !。

ABI PRISM®7300Sequence Detection System簡易上機操作步驟1.先開電腦，帶開機後在將ABI PRISM7300的電源打開。

2.開啟ABI PRISM7300SDS軟體：按兩下電腦螢幕上7300軟體的icon。

3.當軟體開啟之後會出現視窗，視窗下方為狀態顯示列。

此時右下顯示Disconnected，左下顯示Ready。

4.File下選New之後，即出現New Document Wizard，可依實驗設計選擇Assay:Assay Applications When to use thisAbsolute Quantification (Standard Curve)絕對定量建立標準曲線以得之樣品之基因表現量For data collectionand data analysis.Dissociation SYBR之解離曲線單獨run SYBR之解離曲線Allelic Discrimination SNP genotyping For Post read PCR signal and SNP genotyping analysisTemplate:若有已設定好之模板，可直接點選；若無，則選擇”Blank Document”即可。

設定完成後按下Next開始選擇或設定Detector。

5.開始設定Detectors(Detectors代表樣品的螢光種類)，選擇此次所需的Detector，並按下Add將Detector加入Plate Document後則可按下Next。

如要設定新的Detector，則按下New Detector選項以設定新的DetectorName:可輸入基因名稱Reporter Dye:依實際所使用的螢光種類選擇。

Quencher Dye:若為一般的Taqman Probe選TAMRA若為MGB P選none若為SYBR選noneColor:代表此Detector的樣品在Plate Document中之顏色。

7300型PCR仪检测标准操作规程目的: 指导使用者操作ABI 7300型PCR仪，以确保设备运行状态良好。

1.1上机操作步骤：1.1.1 先开电脑，进入Windows 界面。

接着打开PCR仪电源开关，预热5分钟。

1.1.2双击7300 System Software 软件图标。

窗口下方为状态栏，右下显示Disconnected，左下显示Ready。

1.1.3 从File菜单中选择New，1.1.4 在New Document Wizard窗口中，Assay项选择“Absolute Quantification(Standard Curve)”：1.1.4.1 选择“完成”，就会出现一个96孔的空白面板[Plate1 (Absolute Quantification)]1.1.5 在这个空白面板中用鼠标左键双击任一方格就会弹出“”菜单1.1.6 点击“Add Detector”，就会弹出“”1.1.6 点击“File \ New...”，就会弹出“”菜单在“Name”可以输入：HBV_20060101 / 或者按自己的喜好输入易于区分的name。

在“Reporter Dye”选择所用试剂探针所采用的报告基团如：FAM在“Quencher Dye”选择所用试剂探针所采用的报告基团如：TAMRA在“Color”点击右边颜色小方格后可以按自己的喜好选择颜色。

1.1.6 设置好“New Detector”点击“OK”就会弹出“”菜单依次点击“Add To Plate Document”/ “Done”。

4．1。

7完成了Detecter的设置；会重新回到“”菜单在“Passive Reference”选折None；在“Use”下的小方框中打勾；在“Sample Name”一般在参考标准品反应孔中习惯性的输入：试剂批次号如：HBV2006018现在可以按照自己的意愿安放样品/ 或者按照打印报告软件生成的反应孔来编辑96孔板。

ABI 7300的使用维护及校准标准操作程序1、目的：ABI PRISM 7300型核酸扩增荧光检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。

2、适用范围：ABI PRISM 7300型核酸扩增荧光检测仪。

3、操作人：段建平蔡果4、操作程序4.1操作方法4.1开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开ABI7300系统软件，进行实验。

4.2 创建荧光定量PCR检测文件：4.2.1 双击7300 System Software 软件图标。

从File菜单中选择New（或单击工具栏中的“新建”按扭）4.2.2 在New Document窗口中，Assay项选择“Absolute Quantification(StandardCurve)”，选择“完成”，就会出现一个96孔的空白面板。

4.2.3 双击此空白面板中的任一方格，就会弹出“Well Inspector” 。

4.2.4 在“Well Inspector”窗口单击“Add Detector”就会弹出“detector manager”窗口。

4.2.5点击“File \ New...”，就会弹出“new detector”菜单4.2.6 在“new detector”窗口进行样本信息输入：1）在“Name”可以输入：HBV_20060101按自己的喜好输入易于区分的name。

2）在“Reporter Dye”选择所用试剂探针所采用的报告基团如：FAM 3）在“Quencher Dye” 选择所用试剂探针所采用的报告基团如：TAMRA4）在“Color”点击右边颜色小方格后可以按自己的喜好选择颜色。

5）设置好之后点击OK会回到“detector manager” 窗口4.2.7在“detector manager” 窗口依次点击“Add To Plate Document” 、“Done”。

ABI7300使用方法--绝对定量--李娜总结1 打开电脑，待电脑完全打开后打开荧光定量机器，预热十分钟，期间布板子2 File-new 新建一个程序，进入界面做绝对定量时ASSay 选择Standard Curve（Absolote Quantitation）做相对定量时选择ddCt（Relative Quantitation）Plate做完相对定量时分析数据选择ddCt（Relative Quantitation）Study其他不用改Plate Name 一栏给板子命名点击“下一步”不要点击“完成”3初次做时选择“New Detector”添加引物Name 一栏命名基因的名字Reporter Dye 一栏选择FAM Quencher Dye一栏选择noneColor一栏自己选颜色其他内容不选选择Add 将命名的引物添加进去以后做实验就可以直接添加了右上角的Passive Reference 选择none (切记)点击“下一步”4 布板样品选择UnKnown标准质粒选择Standard点击完成4进入界面点击Setup-Plate 双击样品加样孔同理双击标准质粒加样孔Sample Name 对质粒命名注意在Quantity一栏写上质粒的拷贝数（切记）5 完成后点击Insteument步骤程序第一步95摄氏度十分钟第二步95摄氏度5秒65摄氏度34秒循环40次第三步溶解曲线修改Sample V olume 为20ulDateCollection 为Stage2，Step2（65 0:34）（荧光收集信号切记要从循环那步开始，切记切记）6设好之后将程序保存7 整完之后开始Start待出现运行时间后方可离开8 运行结束后分析数据点击Results 里的Standard Curve 看标准曲线可以将不正常的样舍弃打开Results里的Plate 点击要舍弃的样点击Analysis里的Omit Wells 舍弃样点击绿色按钮进行分析。