项目研究-一种治疗真菌病的基因工程药物
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新型抗真菌药物的发现博士生研究真菌感染的机制与治疗策略新型抗真菌药物的发现博士生研究真菌感染的机制与治疗策略随着人类进入21世纪,真菌感染的发病率逐渐增加,成为严重威胁公共卫生的问题之一。
为了应对这一挑战,许多科学家从事研究,旨在发现新型的抗真菌药物。
本文将重点介绍一位博士生的研究,探索真菌感染的机制并提出相应的治疗策略。
作为博士生,研究生命科学的小明意识到真菌感染在人类健康中的重要性。
他通过大量的文献调研,深入了解了真菌感染的机制,并意识到现有的抗真菌药物在抑制真菌生长和复制方面存在许多问题。
小明决定以微生物学为基础,在研究中发掘新的抗真菌药物。
他首先从公共卫生机构收集了大量的真菌分离物,并通过不同的实验方法筛选出具有抑菌活性的化合物。
随后,他对这些化合物进行了详细的生化分析和药理学研究,以确定它们的作用机制。
小明发现了一种具有潜在抗真菌活性的新化合物,该化合物能够干扰真菌的生物合成途径,引起其细胞壁的破坏。
这一发现为研发新型抗真菌药物提供了新的思路与方向。
在进一步的研究中,小明利用小鼠模型对该新化合物进行了体内评估。
结果显示,该化合物在体内具有显著的抗真菌活性,并且能有效降低真菌感染引起的病理损伤。
基于这些研究成果,小明提出了一种新的治疗策略,即使用该化合物作为抗真菌药物的候选药物,并进一步进行药物开发与临床试验。
除了对新化合物进行进一步研究外,小明还对真菌感染的机制进行了深入探究。
通过研究真菌与宿主免疫系统之间的相互作用,他发现真菌对宿主的免疫逃逸机制。
这项研究揭示了真菌感染的新机制,并为深入了解真菌感染的免疫学基础提供了新的线索。
基于这些研究成果,小明的博士论文对于新型抗真菌药物的发现和真菌感染机制的研究具有重要意义。
他的研究不仅为真菌感染的治疗策略提供了新的思路和选择,也为解决真菌感染带来的公共卫生问题提供了科学依据。
总之,博士生小明的研究在探索真菌感染的机制和新型抗真菌药物的发现方面取得了重要进展。
抗真菌药物伊曲康唑研究进展陈亮;刘力威;王志强;陈曦【摘要】伊曲康唑为三唑类抗真菌药,制剂工作者对它做了很多研究,国内外出现了很多产品和新剂型,关于其药代动力学、毒性和临床应用也出现诸多报道,本文就以上几个方面进行论述【期刊名称】《中国动物保健》【年(卷),期】2012(000)007【总页数】3页(P23-25)【关键词】抗真菌药;伊曲康唑;进展【作者】陈亮;刘力威;王志强;陈曦【作者单位】黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006;黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006;黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006;黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006【正文语种】中文伊曲康唑(itraconazole,ITZ)是第二代三唑类合成抗真菌药,它对犬小孢子菌、霉菌等真菌具有广谱抗菌活性[1]。
抗菌机理是通过阻断14α-去甲基,干扰麦角甾醇合成,使得真菌细胞膜的通透性发生改变,最终发挥抗菌作用。
本文就伊曲康唑的药代动力学、毒性、剂型、产品及临床应用作一综述,以期帮助临床医生合理用药。
1 伊曲康唑药代动力学特征伊曲康唑具有较强的亲脂性,对血浆蛋白具有特殊亲和力。
陈钧等[2]比较了3种市售伊曲康唑胶囊的生物等效性,通过单剂量口服伊曲康唑200mg,采用HPLC法测定血浆药物浓度。
试验显示,口服两种制剂和参比制剂后的峰时分别为4.17±1.25、4.27±1.16和4.00±1.07h,峰浓度分别为197±9ng·mL-1、216±7ng·mL-16 和272±109ng·mL-1,半衰期为25.2±4.9h、24.6±5.5h 和24.9±3.9h,AUC0→72h分别为3231±1195 ng·h·mL-1、3038±980ng·h·mL-1和4297±1299ng·h·mL-1,实验表明两种制剂与参比制剂并不等效。
真菌发酵法生物合成抗癌药物紫杉醇的研究真菌发酵法生物合成抗癌药物紫杉醇的研究一、引言癌症是当今世界严重威胁人类健康的重大疾病之一,寻找有效的抗癌药物一直是医学和生物学领域的研究热点。
紫杉醇作为一种重要的抗癌药物,具有独特的作用机制和显著的临床疗效。
传统的紫杉醇提取方法主要依赖于从红豆杉属植物中提取,然而红豆杉生长缓慢,资源有限,这限制了紫杉醇的大量生产。
因此,探索新的紫杉醇生产方法具有重要的现实意义。
真菌发酵法生物合成紫杉醇作为一种有潜力的替代方法,受到了广泛的关注。
二、紫杉醇的结构与作用机制1. 紫杉醇的化学结构紫杉醇是一种复杂的二萜类化合物,其分子结构包含多个手性中心和独特的官能团。
它的基本结构由紫杉烷环和侧链组成,紫杉烷环是一个刚性的四环结构,侧链则连接在紫杉烷环的特定位置上。
这种复杂的结构赋予了紫杉醇独特的物理和化学性质。
2. 紫杉醇的抗癌作用机制紫杉醇主要通过促进微管蛋白聚合,抑制微管解聚,从而稳定微管结构来发挥抗癌作用。
在细胞分裂过程中,微管是构成纺锤体的重要成分,紫杉醇稳定微管的作用会导致纺锤体无法正常形成,进而阻断细胞的有丝分裂过程,使癌细胞停止增殖并最终死亡。
此外,紫杉醇还可能通过其他机制影响癌细胞的生物学行为,如调节细胞信号传导通路、诱导细胞凋亡等。
三、真菌发酵法生物合成紫杉醇的研究进展1. 产紫杉醇真菌的筛选与鉴定研究人员从自然界中广泛筛选能够产生紫杉醇的真菌。
通过对不同环境样本(如土壤、植物组织等)进行分离培养,然后利用高效液相色谱(HPLC)等分析方法检测培养物中是否含有紫杉醇。
经过大量的筛选工作,已经发现了一些能够产生紫杉醇的真菌菌株,如紫杉霉属(Taxomyces)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)等。
对这些产紫杉醇真菌进行准确的分类鉴定,有助于深入了解它们的生物学特性和代谢途径。
2. 真菌发酵条件的优化为了提高真菌发酵生产紫杉醇的产量,需要对发酵条件进行优化。
一、基因工程应用于动植物方面农业领域是目前转基因技术应用最为广泛的领域之一。
农作物生物技术的目的是提高作物产量,改善品质,增强作物抗逆性、抗病虫害的能力。
基因工程在这些领域已取得了令人瞩目的成就。
目前全世界正重视发展永续性农业(sustainable agriculture),希望农业除了具有经济效益,还要生生不息,不破坏生态环境。
基因工程正可帮忙解决这类问题。
基因工程可以改良农粮作物的营养成分或增强抗病抗虫特性。
可以增加畜禽类的生长速率、牛羊的泌乳量、改良肉质及脂肪含量等。
英国爱丁堡科学家已经可以使绵羊分泌含有人类抗胰蛋白(α-1-antitryspin)的羊奶。
抗胰蛋白可以治疗遗传性肺气肿,价格很昂贵。
若以后能由羊奶大量制造,将变得很便宜。
但是目前以基因工程开发培育基因转殖绵羊的过程,仍是很费时费钱的。
基因转殖的细菌用处也很大,如改造细菌可以消化垃圾废纸,而这些细菌又可成为一种蛋白质的营养来源。
基因转殖的细菌可带有人类基因,以生产医疗用的胰岛素及生长激素等。
其实基因工程在农业上的应用,在某些方面而言并不稀奇。
自古以来,人们即努力而有计划地进行育种,譬如一个新种小麦,乃是经过上千代重复杂交育成的。
目前的小麦含有许多源自野生黑麦的基因。
农人早在基因工程技术发明以前,就知道将基因由一种生物转移至另一生物。
传统的育种也可大量提高产量。
但是传统的育种过程缓慢,结果常常难以预料。
基因工程可选择特定基因送入生物体内,大大提高育种效率,更可把基因送入分类上相差很远的生物,这是传统的育种做不到的。
不久,在美国即将有基因工程培育出来的西红柿要上市了。
这种西红柿含有反意基因(antisense gene),能使西红柿成熟时不会变软易烂。
基因工程也生产抗病抗虫作物,使作物本身制造出“杀虫剂”。
如此农夫就不需费力喷洒农药,使我们有健康的生活环境。
也可培育出抗旱耐盐作物以适合生长在恶劣的环境下,如此可克服第三世界的粮食短缺问题。
抗真菌药物研究进展摘要:由于抗生素、激素和免疫抑制剂的大量应用,肿瘤患者的放疗、化疗,艾滋病患者的增加以及人口老年化等原因导致免疫系统功能低下者增多,机会真菌感染也随之增加。
另一方面随着临床用抗真菌药物的广泛使用,又导致真菌病原菌的耐药菌株的不断出现,这两方面的因素使其开发新的安全和有效的抗真菌药物成为一个亟待解决的难题。
关键词:抗真菌药物氨基酸核酸虽然在发现和发展新的抗真菌药物研究项目上进行的非常活跃,但是,在世界范围内,真菌感染的机会如曲霉菌、念珠菌(白色念珠菌和其他念珠菌种)和新型隐球菌的发病率仍在不断增加。
一方面在有效治疗机会真菌感染,特别是由癌症化疗、器官移植、外科手术以及感染HIV/AIDS或其他一些免疫功能疾病引起的免疫系统损伤的病人感染上描绘了有效的治疗效果。
另一方面值得增加关注力度的是真菌病原菌对目前临床上所用已知种类的抗真菌药物的耐药性问题。
这两方面的因素增加了在研发过程中建立能迅速鉴别有开发价值的抗真菌药物的紧迫性,进而研发出更安全和更有效的治疗药物,以及发现新的化学实体以用于目前机会真菌感染和耐药性真菌感染的治疗。
下面着重讨论一些精选现有抗真菌药物的调查情况及已知作用机制的抗真菌药物研发的最新进展。
1.现有抗真菌化合物和技术(1)β氨基酸类化合物环状:β氨基酸类化合物具双重作用机制,其一,在集中吸收后能够抑制蛋白质的合成;其二,干扰氨基酸代谢的自身调节。
2一氨基环己一3一烯羧酸为吡多醛磷酸盐抑制剂,而cispentacin是天然β氨基酸,这2个化合物都具有抗白色念珠菌的活性。
PLD一118是新的口服β氨基酸,体外抗白色念珠菌的活性IC50为O.13mg/mL,目前正在进行Ⅱ期临床试验,在由白色念珠菌引起的致命全身性感染模型或由平滑念珠菌或克鲁斯念珠菌引起的非致命肾脏感染小鼠模型中,口服PLD一118其体内疗效呈正值,PLD—118也对由耐氟康唑菌株引起的感染有效。
(2)核苷类抗真菌药物:核苷类抗真菌药物有灰黄霉素和氟胞嘧啶。
新型抗真菌药简介当前真菌感染治疗面临很多挑战,侵袭性真菌感染死亡率居高不下、抗真菌药物的耐药性逐渐上升、多重耐药和高致死率的“超级真菌”的出现、抗真菌治疗疗程长、可选用的联合治疗方案有限以及抗真菌药物的安全性及药物相互作用问题等等。
再加上抗真菌药物的可及性相对较差,新型抗真菌药物具有巨大市场需求。
抗真菌药物近些年来有较好的发展,全球范围内新作用机制及新型抗真菌药物不断出现。
王明贵教授谈到,在中国,近年上市或即将上市的抗真菌药物也相对较多。
近年中国上市的抗真菌新药原研泊沙康唑在2022年之前的适应证为预防真菌感染,其混悬液、片剂和注射剂分别于2013、2018和2021年上市。
2022年3月原研泊沙康唑的片剂及注射剂被批准用于治疗侵袭性曲霉菌病。
国产泊沙康唑于2021年4月上市了片剂和注射剂,用于预防曲霉及念珠菌感染。
原研艾沙康唑胶囊于2021年12月被批准上市,用于治疗侵袭性曲霉病、毛霉病。
注射用艾沙康唑也于2022年6月获批上市。
除了艾沙康唑,毛霉病也可选择两性霉素B类进行药物治疗。
两性霉素B去氧胆酸盐不良反应较大,两性霉素B含脂制剂可使与输注相关的不良反应和肾毒性明显减少。
国产两性霉素B胆固醇硫酸酯复合物(ABCD)于2021年3月正式上市,用于治疗各类真菌病,同年该药进入医保国谈品种。
除此之外,原研脂质体两性霉素B(L-AMB)目前也处于审批当中。
正在进行或即将开展Ⅲ期临床试验的抗真菌新药目前也有一些其他药物在中国正在进行或者即将进入Ⅲ期临床试验中。
Rezafungin属于棘白菌素类药物,在国内的临床试验已经开展一段时间。
Ibrexafungerp(艾瑞芬净,IBX)作为首个全新三萜类结构的糖原合成酶抑制剂,其虽然为棘白菌素的衍生物,但IBX也可视为新作用机制的第四代抗真菌类药物。
IBX治疗念珠菌阴道炎疗效好,复发率低。
Fosmanogepix是一种新作用机制的抗真菌药物,对于曲霉病和毛霉病都可起到治疗效果,未来也将在中国开展临床试验。
基因工程制药(一) (二) (三) (四) (五) (六) (七) (八) (九) (十)概述 基因工程药物生产的基本过程 目的基因的获得 基因表达 基因工程菌的稳定性 基因工程菌生长代谢的特点 基因工程菌发酵 基因工程药物的分离纯化 基因工程药物的质量控制 基因工程药物制造实例(九)基因工程药物的质量控制原核生物表达的重组蛋白质量检测重组蛋白的质量控制指标包括:重组蛋白的鉴别(序列) 重组蛋白的纯度(杂质的类型) 重组蛋白的活性(检测方法) 重组蛋白的安全性 重组蛋白的稳定性 重组蛋白的一致性(构象与构型)原核细菌表达的重组蛋白产物的质量检测项目与方法检测项目 检测项目 检测方法 检测方法产品是否含内毒素 产品是否含内毒素 蛋白质是否变异 蛋白质是否变异 甲硫氨酸是否被甲酰化 甲硫氨酸是否被甲酰化家兔热原法 家兔热原法 肽谱、HPLC、等电聚焦、毛细管电泳 肽谱、HPLC、等电聚焦、毛细管电泳 肽谱、质谱、HPLC、Edman分析 肽谱、质谱、HPLC、Edman分析蛋白质是否变性、聚合、脱氨基 SDS-PAGE、凝胶层析、等电聚焦、质 蛋白质是否变性、聚合、脱氨基 SDS-PAGE、凝胶层析、等电聚焦、质 谱、HPLC、毛细管电泳、Edman分析 谱、HPLC、毛细管电泳、Edman分析 配体是否脱落 配体是否脱落 氨基酸是否发生取代 氨基酸是否发生取代 SDS-PAGE、免疫分析 SDS-PAGE、免疫分析 氨基酸分析、肽谱、质谱、毛细管电泳 氨基酸分析、肽谱、质谱、毛细管电泳是否被细菌、病毒、支原体等污染 微生物学检测 是否被细菌、病毒、支原体等污染 微生物学检测药物的特点 含量少 活性高 安全、可靠 有效基因工程药物研发过程临床前 临床实验 新药申请 批准投放市场新药研究进度表临床前试验 年数 1 2 3 期 4 5 期 6 7 ~ 期 8 批准 9 10人数-20~80人100~300人1000~3000人动物 实验安全性 剂量 70疗效长期毒性通过率(%)30-3520-3020IND (Investigational New Drug Application) NDA (New Drug Application) PLA (Production License Application)基因工程药物(1)活细胞作为表达系统 (2)化学性质:活性蛋白质或多肽; 相对分子量 较大,结构复杂;性质或剂量,对理化条件的 要求高 (3)全过程严格控制、鉴定质量基因工程药物生产工艺过程 种子的贮存培养种子细胞株分离纯化除菌过滤半成品检定成品检定基因工程药物质量控制 原材料的质量控制培养过程质量控制分离纯化过程的质量控制 目标产品的质量控制一、原材料的质量控制确保编码药品的DNA序列的正确性,重组微生物来自单一克隆,所用质粒纯而稳定,以保证产品质量的安全性和一致性。
酵母分子生物学与基因工程研究酵母是一种单细胞真菌,广泛存在于自然界中,是一种极其重要的生物资源。
在生命科学中,酵母因具有不同寻常的遗传和分子生物学特性而成为一个实验科学家和生物技术研究人员的常用模型。
酵母分子生物学和遗传学的研究已经深化了对细胞周期、蛋白合成、遗传调控和细胞衰老等基本问题的理解。
同时,经过多年的研究,我们也发现,酵母很容易进行基因工程,因而被广泛应用于基因工程研究中。
一、酵母分子生物学研究在酵母分子生物学领域的研究中,人们主要关注酵母的遗传和生化特性,实现对酵母细胞的细致控制和扰动。
其中最重要的研究方向是研究细胞周期、蛋白合成、遗传调控和细胞衰老等基本问题。
1. 细胞周期细胞周期是细胞分裂和增殖的基本过程。
在酵母中,细胞周期通过调节细胞分裂周期的步骤来进行。
酵母细胞在离子和氧气充足的情况下生长很快,其细胞周期仅为2至4小时。
如果细胞受到应激,细胞周期的长度可能会变长,这是因为生长阶段被严重延迟,同时分裂阶段也需要时间来进行。
因此,酵母的细胞周期可以被建模和对其进行数据分析。
这有助于把酵母作为一个模型细胞使用,并对细胞分裂周期进行研究。
2. 蛋白合成蛋白合成是细胞生命周期中最重要的基本过程之一。
酵母呈现了很多不同类型的蛋白质合成模式,包括编码激活特定结构的蛋白质,以及在酵母细胞死亡、肿瘤和其他疾病中起作用的重要酶类的合成。
因此,进行酵母蛋白质合成研究能够进一步加深对细胞生长和分裂的理解。
3. 遗传调控酵母被广泛地应用于生物学研究的原因之一就在于它们的积累很快。
通过遗传杂交和新基因引入等方案,可以确保酵母具有人工引入的基因。
基因诱变和细胞群集分析在酵母敲除和过度表达中也被广泛应用。
因此,酵母的研究有助于理解遗传调控的机制。
4. 细胞衰老酵母的寿命很短,通常仅为数天或数周。
它们的寿命不受疾病、能量饥饿和其他外部因素的干扰。
因此,研究酵母序列和药物等因素对细胞衰老的影响可以为人类提供有关寿命和衰老机制的信息。
基因工程抗体的研究进展及临床应用单克隆抗体技术自1975年问世至今,已被广泛地应用于疾病的诊断及治疗中,但是,目前应用的单克隆抗体绝大数是鼠源性的,临床重复给药时机体会产生免疫反应。
应用于临床的理想抗体应该是人源性的,而人-人杂交瘤技术目前进展缓慢,即使研制成功,仍存在杂交瘤细胞体外传代不稳定,产量不高及抗体亲合力低等缺陷。
迄今为止,解决这一问题最理想的途径就是研制基因工程抗体。
基因工程抗体的研究兴起于20世纪80年代早期,这一技术是将对免疫球蛋白(immunogloblin,简称Ig)基因结构与功能的认识与DNA重组技术有机结合,在基因水平上对Ig分子进行重组后导入受体细胞表达出来的,继多克隆血清和单克隆抗体之后,基因工程抗体也被称为第三代抗体。
1 基因工程抗体的研究进展基因工程抗体按分子结构可以分为嵌合抗体、重构抗体、单链抗体及单域抗体等。
其中以嵌合抗体研究的较多,技术也较为成熟。
而单链抗体、单区抗体等小分子抗体,具有结构简单、分子小、免疫源性低的优点,虽然技术还不够成熟,但其临床应用前景十分广阔。
抗体基因组文库技术的出现,从根本上改变了单抗的制备流程,操作简便、成本低、产量大,被称为抗体发展史上的一次革命。
各种基因工程抗体各具特点,下以我们分类加以介绍。
1.1 完整抗体此类抗体结构与天然抗体相似,具有完整的轻链和重链,只是将抗体中部分鼠源性成分人源化,从而降低其免疫源性。
目前研究较多的是嵌合抗体和重构抗体。
1.1.1 嵌合抗体在基因水平上连接鼠抗体可变区(variable region,简称V区)和人抗体稳定区(constant region,简称C区),插入表达质粒在转染细胞表达所产生的抗体,称之为嵌合抗体[1](chimeric antibody)。
其中V区具有结合抗原的功能,而C区则具有抗体效应功能、免疫原性和种属特异性。
在构建嵌合抗体时,要有目的地选择抗体C区,这是因为每种Ig亚类与可形成蛋白结晶片段(fragmentcrystazable,简称Fc)受体和补体作用,触发细胞溶解的功能不同。
真菌生物技术在生物制药中的应用随着生物技术的发展,生物制药已经成为重要的治疗手段。
生物制药包括蛋白质药物、抗体药物等,其生产方式有多种,其中真菌生物技术生产方式已经广泛应用于生物制药领域。
本文将对真菌生物技术在生物制药中的应用进行探讨。
一、真菌生物技术的概述真菌生物技术是应用真菌于工业生产的一种新兴技术,主要应用于生物制药、食品工业和化学工业等多个领域。
真菌能够改良其生产代谢产物的能力,这不仅包括代谢生长激素、抗生素、植物激素、抗菌物质等有用的代谢产物,还包括如基因工程等其他生产方法。
在真菌生物技术中,真菌被用来生产核酸、蛋白质和多糖体等有用的代谢产物。
真菌生物技术通过一个包含真菌共生的生物过程,对真菌进行操作,以生产出所需要的代谢产物。
二、1.生产抗生素真菌生产抗生素是一种普遍的应用,目前已有多种抗生素成功生产。
抗生素扮演着治疗细菌感染最重要的角色。
新型抗生素通常是由真菌生物技术生产来的,这些抗生素在制药领域中发挥着重要作用。
提高生产率并保证品质和产量一致,是生产新型抗生素的必要步骤。
真菌生物技术使得抗生素的生产周期及成本大幅降低,大大加速了抗生素研发的进程。
2.生产基因工程药物真菌生物技术在基因工程药物的生产中也起到了非常重要的作用。
基因工程药物是由基因重组DNA技术产生的药物,早期主要是由真菌制造,如克隆因子和可达菌素。
真菌生物技术生产基因工程药物的过程复杂且需要很高的技术水平,但在研究和生产基因工程药物中,真菌生物技术已被广泛运用。
3.生产单克隆抗体单克隆抗体的生产目前主要是在真菌中进行,已成为很多疾病的治疗方法,如癌症、心血管疾病等。
单克隆抗体的生产流程比较复杂,主要包括细胞培养、分离操作、纯化等多个步骤。
真菌生物技术的应用,能够更加高效地生产单克隆抗体。
三、真菌生物技术在生物制药中的优势及发展趋势真菌生物技术具有生产能力高、成本低、产品质量好、生产过程环保等优势。
随着生物技术的不断发展,真菌生物技术的应用在生物制药中的地位不断得到提升。
生物技术概论_上海交通大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.以下不属于生物质能源的是_____。
参考答案:锂电池2.微生物采油中的生物技术不包含下列哪项技术_____。
参考答案:细胞工程技术3.白腐真菌是属于担子菌亚门的一类真菌,因腐朽木材呈白色而得名,是能够降解木材主要成分的微生物之一,因此称其白腐真菌。
白腐真菌是生物学术语中的一种真菌。
参考答案:错误4.中国在乳腺生物反应器的研究上起步较晚。
参考答案:错误5.DNA指纹图谱具有高度的变异性和稳定的遗传性,且仍按简单的孟德尔方式遗传,成为目前最具吸引力的遗传标记。
参考答案:正确6.曾溢滔院士创建了以“整合胚移植”为技术基础的转基因羊的全新技术路线,这项技术的优点包括:。
参考答案:用体外受精卵作外源目的基因的显微注射_以非剖腹手术的胚胎移植技术来提高动物妊娠率_对胚胎是否整合了外源基因作植入前的分子鉴定7.世界上第一只能从乳汁中分泌α1-抗胰蛋白酶(AAT)的转基因绵羊在诞生。
参考答案:英国8.巴氏灭菌法发明时,杀死乳酸杆菌的温度是。
参考答案:50℃-60℃9.维生素C的工业生产中,一个关键难点在于将转化为L-山梨糖,其他的步骤都可以通过化学法来实现参考答案:D-山梨醇10.赖希斯坦发现果蝇的一条腿上有L-山梨糖的结晶,是因为果蝇的腿上有一株细菌-氧化葡萄糖酸杆菌,这种细菌中包含一种参考答案:D-山梨醇脱氢酶11.狭义的生物修复,是指通过微生物的作用清除土壤和水体中的污染物,或是使污染物无害化的过程。
参考答案:正确12.下面哪个不是生物技术包括的基本内容_________。
参考答案:遗传工程13.第一种基因工程药物是由生产的?参考答案:细菌14.中国发明的二步发酵法,技术的关键突破在参考答案:第二步发酵法15.脑黄金是一种不饱和脂肪酸,它的双键位置是从脂肪酸分子结构的前端的第个碳原子开始出现,因此称其为ω-3不饱和脂肪酸。
参考答案:316.复杂系统去偶合是将一个复杂的问题分解成若干可操作的独立的简单问题。
专题1 §1.3 基因工程的应用知识目标:举例说出基因工程应用及取得的丰硕成果。
能力目标:关注基因工程的进展,认同基因工程的应用促进生产力的提高。
学习重点:基因工程在农业和医疗等方面的应用。
学习难点:基因治疗。
预习导学:一、植物基因工程的成果植物基因工程技术主要用于提高农作物的能力、以及改良农作物的和利用植物产生等方面。
(一)抗虫转基因植物1、杀虫基因:、、、。
2、成果:抗虫植物如水稻、棉、玉米、马铃薯、番茄等。
3、好处:减轻、有利人类、可以降低生产等。
练习:转基因抗虫棉可以有效地用于棉铃虫的也应当。
在大田中种植转基因抗虫棉的同时,间隔种植少量非转基因的棉花或其他作物,供棉铃虫取食。
这种做法的主要目的是()A、维持棉田物种多样性B、减缓棉铃虫抗性基因频率增加的速度C、使食虫鸟有虫可食D、维持棉田生态系统中的能量流动(二)抗病转基因植物1、病原微生物:、、等。
2、抗病基因种类:(1)抗病毒基因:、等。
(2)抗真菌基因:、等。
3、成果:抗烟草花叶病毒的转基因烟草和抗病毒的转基因小麦、甜椒、番茄等。
(三)抗逆转基因植物1、抗逆基因:调节细胞的基因使作物抗碱、抗旱;鱼的使作物耐寒能力提高;使作物抗除草剂等。
2、成果:具抗寒能力的烟草、番茄,具抗除草剂的大豆、玉米等。
练习:为了培育节水高产品种,科学家将大麦中与抗旱节水有关的基因导入小麦,其水分利用率提高了20%。
这项技术的遗传学原理是()A.基因突变 B.基因重组 C.基因复制 D.基因分离(四)利用转基因改良植物品质1、优良基因:必需氨基酸的蛋白质编码基因、控制番茄果实成熟的基因和植物花青素代谢有关的基因等。
2、成果:转基因玉米、转基因延熟番茄、转基因矮牵牛花等。
二、动物基因工程的成果(一)提高动物的生长速度1、生长基因:外源基因2、成果:转基因绵羊、转基因鲤鱼等。
(二)改善畜产品的品质1、优良基因:肠基因。
2、成果:转基因奶牛分泌的牛奶中减少。
一种治疗真菌病的基因工程药物
——赛内汀的研制
病原微生物是危害人类健康的一大杀手,千百年来人类为此付出了巨大的代价。
真菌病,尤其是浅部真菌病,在我国较为常见。
近几年来,随着免疫抑制剂的广泛应用,烧伤抢救、放射治疗、器官移植的广泛进行,特别是免疫缺陷患者,尤其是艾滋病患者的不断增加,真菌病的发病率有逐渐增加的趋势。
据报道艾滋病患者中约有1/3并发各种真菌病而致死。
目前临床上应用的抗真菌药物主要有2大类,一类是化学制剂:包括染料类制剂,如龙胆紫、结晶紫;碘制剂,如碘化钾、聚维酮;脂肪酸类制剂,如十一烯酸、十一烯酥锌;咪唑类药物,如克霉唑、咪康唑;丙烯胺类制剂,如萘替芬、特比萘芬;以及其他化学制剂,如土槿酸、氟胞嘧啶等。
另一类是抗生素类药物:包括多烯类抗真菌抗生素,如制霉菌素、碘古霉素等;非多烯类抗真菌抗生素,如灰黄霉素、萨拉霉素。
近几年来,也出现了一些新的抗真菌新药如阿莫芬类、两性霉素B脂质体、萨普康唑、β-1,3葡聚糖合成酶抑制剂等等。
这些抗真菌药物大都是通过破坏真菌的代谢途径或阻断大分子的生物合成来达到抗真菌效果,这样就容易使病原真菌产生抗药性;同时对宿主细胞也产生了一定的毒性。
目前临床上对病原细菌的防治也仍然局限于抗生素类药物。
抗生素类药物的使用对抑杀细菌起了极其重要的作用,但同时也造成了耐药性菌株的产生和人体的过敏反应。
随着生物工程特别是基因工程技术的迅猛发展,蛋白质及多肽类药物不断问世。
蛋白质及多肽类药物是当今生物技术及制药工业中最为活跃的领域之一,已经显示出了巨大的社会效益和经济效益。
美国FDA已批准的蛋白质及多肽类药物就有人胰岛素、人生长激素、干扰素(INF-α、β、γ)、组织纤溶酶原激活剂(t-PA)、促红细胞生成素(EPO)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、白细胞介素-2(IL-2)等。
利用基因工程手段,在宿主生物中表达生产重组蛋白及多肽,然后分离纯化表达产物,用于药物的研制及开发,已成为生物制药的重要组成部分。
抗菌肽是生物体免疫诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽,分子量在2000-7000D左右,由20-60个氨基酸残基组成。
目前报道的抗菌肽类,大多对细菌具有广谱的抗性。
但对丝状病原真菌无明显的抑杀作用。
令人欣喜的是,Pascale Fehlbaum等在E.coli 诱导的斑腹刺益蝽(Podisus.maculiventris)的血淋巴中分离了一种21aa的多肽-Thanatin,研究发现,Thanatin对细菌和真菌都具有广谱抗性。
它抑制的细菌包括革兰氏阳性菌:浅绿气杆菌
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(Aerococcus viridans),枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium);革兰氏阴性菌:大肠杆菌(E.coli),鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella trphimurium),肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae);抑制的真菌有:粗糙脉孢菌(Neurospora crassa),灰色葡萄孢菌(Botrytis cinerea),绿色木霉(Trichoderma viride),黄色镰孢菌(Fusarium culmorum),烟曲霉(Aspergillus fumigatus),从赤霉菌(Nectria haematococca),甘蓝链孢菌(Alteranria brasstcola),须发癣菌(Trechophyton mentagrophytes)等.致病真菌流行病学动态研究表明,最近几年来,须发癣菌一直保持着较高的发病率,占真菌病的10-20%,丝状病原真菌也具有较高的发病率,而抗真菌肽Thanatin对须发癣菌和丝状病原真菌都具有较强的抑杀作用。
本设计利用基因工程方法,构建了Thanatin 同向串联四拷贝基因,将其转化到酵母中表达,然后将分离纯化的活性成份研制成抗真菌的基因工程药物-赛内汀(Thanatin的谐音)。
同时对药物的活性、稳定性、代谢及安全性等进行检测与分析。
目前,关于抗真菌的多肽及蛋白质药物,研究较少,还未见相应的产品投放市场,希望本研究能在此领域填补国内空白,开发出我国具用自主知识产权的基因工程药物,用于临床真菌病及细菌病的防治。
第一章Thanatin 同向串联四拷贝基因的构建
小分子多肽在基因工程表达中,存在着表达量低,表达产物易降解,检测和纯化困难等缺点。
多拷贝基因融合表达,将会大大克服上述缺点,既能增加表达量,又能使表达产物不易被降解,同时又便于检测及表达产物的纯化。
但并非外源基因拷贝数越多越好,高水平的表达还会阻碍产物的分泌。
对此,本设计构建了Thanatin 同向串联四拷贝基因,进行融合表达,以期提高分泌表达水平。
根据毕赤酵母喜好的高表达优越密码子,设计了Thanatin基因两条链的碱基序列,在其5‘端分别加上了多肽切割中溴化氰识别的蛋氨酸密码子(ATG/TAC),作为粘性末端。
同时设计了含有Eco RI 和Xho I酶切位点的接头,既用于串联四拷贝基因的连接,又方便以后的克隆和表达。
1方法
1.1基因片断及接头的设计
基因片断1:
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