金黄色葡萄球菌鉴别方法探讨
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实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求(1)掌握金黄色葡萄球菌的检验方法(2)了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内,可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎,还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染,甚至可发展成败血症。
此外,食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险,因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素,食用后将引起食物中毒,这在我国细菌性食物中毒事件中,仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此,检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素,菌落周围有透明的溶血圈,在厌氧条件下能分解甘露醇产酸,产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。
3 实验材料3.1 检样乳与乳制品(如奶粉、消毒乳)、肉制品、饮料3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。
3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。
3.5 仪器与其他用具无菌吸管(1mL、5、10)、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。
4 检样程序5 操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内,8000 r/min~10000 r/min 均质 1 min~2 min,或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min~2 min。
若样品为液态,吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中,振荡混匀。
5.1.2 增菌和分离培养5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h。
金黄色葡萄球菌鉴别方法探讨目的探讨金黄色葡萄球菌的检验方法,提高金黄色葡萄球菌的鉴定准确率。
方法本研究针对金黄色葡萄球菌的特异性、敏感性、准确性进行研究,比较该方法与传统国标法的检测结果。
结果在传统国标法上增加API Staph 鉴定试条试验,检测结果与国标法的显示阳性的检测结果相一致。
结论此方法可对似阳非阳的结果进行判定,甚至对假阴性进行修正,防止漏检,明显提高了金葡菌的检出水平和准确性,对日常的检验工作具有很现实的指导意义,值得推广。
标签:金黄色葡萄球菌;API Staph;鉴定The identification method of Staphylococcus aureusSONG?SongwenGuangxi Yulin Institute for Food and Drug Control, Yulin 537000, China[Abstract] Objective To probe into the test methods of Staphylococcus aureus and improve Staphylococcus aureus identification accuracy. Methods This experiment was aimed at researching the specificity, sensitivity and accuracy of Staphylococcus aureus and compares the test results of this approach with that of the traditional national standard method. Results API Staph identification cards are increased in the traditional national standard method.The test results are the same as that of national standard method, which shows positive. Conclusion The results of unclear positive can be judged by this method, even the false negative can be revised to prevent undetection. Thus obviously improves the detection level and accuracy of Staphylococcus aureus.It has practical guiding significance on the daily inspection work, and is worthy to be popularized.[Key words] Staphylococcus aureus; API Staph; Identification金黄色葡萄球菌(SA)广泛存在自然界,是一种引起食物中毒的常见致病菌之一,目前很多国家都把金黄色葡萄球菌列为药品和食品卫生的法定检测项目[1]。
金黄色葡萄球菌检验1. 概述金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种常见的细菌,广泛存在于自然环境和人体皮肤表面。
虽然大多数的金黄色葡萄球菌对人体无害,但一些菌株具有致病性,可以引起多种感染,包括皮肤感染、肺炎、血流感染等。
因此,对金黄色葡萄球菌的检验具有重要意义,能及早发现和控制感染的传播。
本文将介绍金黄色葡萄球菌检验的一些常用方法和技术。
2. 菌种的采集和处理2.1 采集样本金黄色葡萄球菌通常从病人的感染部位或者其他潜在的感染源采集样本。
常见的样本类型包括:皮肤切口分泌物、鼻拭子、血液、尿液等。
2.2 样本处理在进行金黄色葡萄球菌的检验之前,需要对采集的样本进行适当的处理。
处理方法取决于样本的类型和检验的目的。
常见的处理步骤包括:•鼻拭子:将鼻拭子放置在含有缓冲液的管中,将管子旋紧,并轻轻摇动一段时间,使细菌尽可能地释放到缓冲液中。
•血液:采集静脉血样本,将血液转移到无菌包装的管中,并立即将管子送到实验室进行处理。
•皮肤分泌物:使用无菌棉签或拭子采集患者分泌物,放入管中并送到实验室。
3. 常用的金黄色葡萄球菌检验方法3.1 培养方法金黄色葡萄球菌通常通过培养方法来进行检验。
常用的培养基包括牛肉肝脏套,Columbia血琼脂和Mannitol盐琼脂。
在封闭器具中加热灭菌后,将菌种均匀涂布于培养基上,并在适宜的温度(通常为37摄氏度)下孵育24-48小时,观察是否有金黄色小圆菌落的形成。
3.2 利用PCR技术检测PCR(聚合酶链式反应)是一种敏感且快速的方法,可以检测金黄色葡萄球菌的DNA。
通过PCR技术,可以快速鉴定金黄色葡萄球菌的存在和菌株的特性。
这种方法特别适用于高致病性金黄色葡萄球菌的检测。
3.3 人类源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测金黄色葡萄球菌通常通过其特有的毒力基因来引起感染。
通过PCR技术,可以检测和鉴定菌株中的毒力基因。
常见的毒力基因包括PVL、TSST-1、ETA等。
浅谈猪金黄色葡萄球菌病的分析诊断和治疗猪金黄色葡萄球菌病是一种常见的动物疾病,主要感染猪只,导致猪只生长发育受阻,影响养殖效益。
本文将就猪金黄色葡萄球菌病的分析、诊断和治疗进行探讨。
一、病原学分析猪金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌,属于革兰氏阳性细菌。
该菌主要存在于猪只的皮肤、鼻腔粘膜和消化道内,具有较强的抗干燥和抗辐射能力,能在环境中长期存活。
猪只受到应激、营养不良或其他病原菌感染时,体内抵抗力下降,猪金黄色葡萄球菌便会大量繁殖,导致疾病的发生。
二、临床表现分析猪金黄色葡萄球菌引起的疾病表现多种多样,主要包括以下几个方面:1. 皮肤病变:猪只出现皮肤溃烂、疮疖、蜕皮、红肿等症状,严重者可见皮下浓黄色脓液渗出。
2. 呼吸道感染:猪只出现咳嗽、打喷嚏、流清鼻涕、鼻腔溢血等症状,严重者可发展为肺炎。
3. 消化道感染:猪只出现厌食、腹泻、黑色稀便等症状,严重者可见粪便中带血。
4. 泌尿道感染:猪只出现尿频、尿痛、尿血等症状。
以上症状并非一定同时存在,疾病的临床表现因猪只的免疫力、病原体数量以及外界环境等因素而异。
三、诊断方法分析诊断猪金黄色葡萄球菌病主要依据临床症状和实验室检查相结合,主要包括以下几个方面:1. 临床症状:根据猪只的临床表现,结合养殖环境和饲养管理情况进行综合分析,初步判断是否感染猪金黄色葡萄球菌。
2. 实验室检查:采集病猪的皮肤疮口分泌物、咽腔拭子、粪便和尿液等标本,进行细菌培养和鉴定。
猪金黄色葡萄球菌的培养特点为菌落金黄色、圆形、有规则,于血琼脂上有浅凹印,部分菌稀释后呈酒红色,可产生溶血素等。
3. 分子生物学检测:利用PCR技术对疑似病例进行猪金黄色葡萄球菌的核酸检测,检测结构基因或毒力基因的存在,增加诊断的准确性。
通过上述方法的综合运用,可以提高猪金黄色葡萄球菌病的诊断水平,为后续的治疗提供准确的依据。
四、治疗方案分析猪金黄色葡萄球菌病的治疗主要包括药物治疗和饲养管理两个方面。
金黄色葡萄球菌检测方法Document number:NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法,用纸片、膜、胶片等作为培养基载体,将特定的培养基和显色物质附着在上面,通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。
采用快速测试片检测具有显着的优点:可测定少量检品,不需要配制试剂,不需要大量的玻璃器皿,操作简便迅速;易于消毒保存,便于运输携带方便,价格低廉;除纸片外无其他任何废液废物,大大减少了工作量;可以在取样时同时接种,结果更能反映当时样本中真实细菌数,防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。
技术优点:操作简单使用方便,避免了繁琐的操作。
技术缺点:用时间比较长,无法准确定性及计数。
此方法现在应用于快速检测领域,美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。
但其也存在一些问题:Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜,当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合,影响计数;Petrifilm测试片面积较小,当菌量大于250cfu时,准确计数较困难;待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。
使目视效果下降,导致计数偏低。
2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。
抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。
金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。
在免疫检测中,可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原,也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体,两种方法均能判断机体的感染状况。
目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定,方法以酶联免疫吸附实验为主,有胶体金方法,也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验,但都有一定的局限性。
免疫学方法包括下面两个部分:(1)抗原抗体技术分析:抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分,对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情,现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体,金黄色葡萄球菌毒素有12种,军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下:
1. 培养:将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。
金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。
2. 鉴定:通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。
金黄色葡萄球菌一般具有以下特征:
- 革兰氏染色:呈阳性,即菌体呈紫色。
- 非运动性:无鞭毛或鞭毛不活跃。
- 产生黄色色素:金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素,使得菌落呈现金黄色。
3. 确认:通过进一步的检测,如凝胶酶试验和DNA鉴定等,来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌,可以引起多种感染,如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。
通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。
方法验证报告公共场所卫生检验方法第4部分:公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013(5)胰酪胨(或胰蛋白胨17g 植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3g 氯化钠 100g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖 2.5g蒸馏水1000m L制法:将上述成分混合后,加热溶解,调pH 为7.2~7.3,分装,121C 、20min高压灭菌。
2.1.2氯化钠肉汤(75g/L)成分: 蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 氯化钠 75g 蒸馏水1000mL制法:将上述成分加热溶解,调pH 为7.4,分装,121°C 、20min 高压灭菌。
2.1.3BairdParker 平板成胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 酵母浸膏1g 丙酮酸钠 10g甘氨酸 12g1. 目的验证平皿鉴定法测定公共用品用具微生物中的金黄色葡萄球菌,来判断在本实验室此方法的适用性。
2.培养基和试剂2.1培养基和试剂2.1.1胰酪胨大豆肉汤成分:氯化锂(LiCl.6H2O)琼脂5g 20g蒸馏水950mL增菌剂的配制:卵黄盐水(30%,体积分数)50mL与除菌过滤的亚碲酸钾溶液(质量浓度=1%)10mL混合,保存于冰箱内。
制法:将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸完全溶解,冷至25°C校正pH至7.0±0.2。
分每瓶95mL,121C高压灭菌15min,临用时加热熔化琼脂,每95mL加入预热至50C的卵黄亚碲酸钾增菌5mL,摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存,不得超过48h。
2.1.4血琼脂培养基成分:营养琼脂100mL脱纤维羊血(或兔血)10mL制法:将营养琼脂加热溶化,待冷至50C左右以无菌方法加人脱纤维羊血摇匀,制成平板,置冰箱内备用。
2.1.5革兰氏染色液2.1.5.1结晶紫染色液成分:结晶紫1g乙醇(95%,体积分数)20mL草酸铵水溶液(质量浓度=1%)80mL制法:将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合2.1.5.2革兰氏碘液成分:碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL制法:将碘与碘化钾先进行混合,加人蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌,它是引起人体多种感染的病原菌之一。
金黄色葡萄球菌检验技术是通过分离、培养和鉴定来检测和确定金黄色葡萄球菌的存在与类型。
以下是金黄色葡萄球菌检验技术的介绍及分析。
金黄色葡萄球菌的分离是检验的第一步。
样品通常是从患者的伤口、分泌物或体液中获取的,也可以从环境中收集。
分离可以通过将样品涂抹到适当的察尔染色的琼脂平板上,然后进行培养和鉴定来完成。
金黄色葡萄球菌会在琼脂平板上形成金黄色的菌落。
培养是金黄色葡萄球菌检验的关键步骤。
常用的培养基包括牛肉蛋白胨琼脂、亚洲互联网的Tag:脑心制剂琼脂、亚洲互联网的Tag:镜光菌属琼脂等。
金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌,它可以在各种营养富集培养基中生长,但最好使用富含血液、蛋白质和碳水化合物的培养基。
培养的时间通常为24小时,金黄色葡萄球菌菌落会呈现金黄色且凸起。
鉴定是确认金黄色葡萄球菌的类型的步骤。
鉴定方法包括形态学观察、生化试验和分子生物学方法。
形态学观察是通过显微镜观察菌落和细胞形态来判断。
金黄色葡萄球菌是圆形或椭圆形的,常呈簇状分布。
生化试验可以通过检测金黄色葡萄球菌对特定底物的代谢能力来进行鉴定。
一些常用的测试包括氧化酶试验、半乳糖发酵试验等。
分子生物学方法可以通过检测特定基因或DNA序列来鉴定金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌检验技术的分析主要集中在以下几个方面。
金黄色葡萄球菌的检验可以帮助医生确定感染的病原菌,从而指导合理的治疗方案。
金黄色葡萄球菌是耐药菌中的重要成员,对多种抗生素具有耐药性,因此及早检测和鉴定金黄色葡萄球菌可以避免无效的药物治疗。
金黄色葡萄球菌还可以引起食物中毒和医院相关感染等,检验技术的应用可以有助于减少相关疾病的发生。
1.血浆凝固酶试验:原理:金黄色葡萄球菌能产生结合型血浆凝固酶,可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白,附着于细菌表面,在玻片上形成凝集颗粒;游离型的血浆凝固酶则可使试管中血浆发生凝固。
大多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶,而非致病株一般不产生。
因此,血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。
葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种,一种是结合凝固酶(用玻片法测试),另一种是游离凝固酶(用试管法检测)。
方法:(1)玻片法:在1张洁净玻片中央加1滴9g/L氯化钠(生理盐水)溶液,用接种环取待检培养物与其混合(设阳性和阴性对照)制成菌悬液,若经10~20s内无自凝现象发生,则加入兔新鲜血浆1环,与菌悬液混合,观察结果。
(如出现颗粒状凝集现象即为阳性。
如不立即发生凝集,可稍待一,二分钟,并轻轻摇动玻片,加速反应,若无凝集时则为阴性。
)(2)试管法:用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释,取0.5ml于试管再加0.5ml 待测菌浓菌悬液(需做阳性对照及阴性对照。
),混匀后置37℃水浴中,每30min 观察1次结果。
若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固,阴性对照管(即浓菌液管)不凝固,为阳性;若阴性,继续观察到24小时,不凝固者为阴性。
(观察结果,将试管微微倾斜,血浆成冻胶样凝块者为阳性,血浆仍为液状者为阴性。
)【结果判断】(1)玻片法:5~10s内出现凝集者为阳性。
(2)试管法:如有凝块或整管凝集出现为阳性。
4h后无上述现象出现,则放置过夜后再观察。
【注意事项】(1)最好使用EDTA抗凝的兔血浆,因为如果使用枸缘酸盐抗凝血浆会产生假阳性结果(2)玻片法:10秒内观察结果,如超过10 秒可出现假阳性,因此必须用试管法验证凝聚因子试验。
2. 耐热核酸酶试验原理:致病性葡萄球菌能产生一种耐热核酸酶,它能分解DNA,使含甲苯胺蓝核酸琼脂显示粉红色玻片法:取融化好的甲苯胺蓝DNA琼脂3ml均匀浇在载玻片上,待琼脂凝固后打上6-8个孔径为2-5mm的小孔,各孔分别加一滴经沸水浴3分钟处理过的待检葡萄球菌和阳性阴性对照葡萄球菌培养物,35℃大气环境孵育3小时,观察有无粉红色圈及其大小。
食品中金黄色葡萄球菌的检验要点探讨摘要:金黄色的金黄色葡萄球菌较为常见,并能污染食品,人们在食用后出现细菌性中毒,所以需要能加强对金黄色葡萄球菌的检验,从而保证食品安全。
当前,针对金黄色葡萄球菌的检验方式主要分为PCR、反向胶乳凝结法等,需要检验人员能真正了解金黄色葡萄球菌的生物学特点、流行病学特点等,这样才能确保检验取得理想效果。
关键词:食品;金黄色葡萄球菌;检验要点随着当前社会经济水平提高,人们的生活质量也越来越高,在这种情况下对于食品要求严格。
所以,食品安全在当前被重视,相关部门就需要能根据食品情况来做好检验,进一步提高检验水平,以此来确保食品的安全。
金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的病菌,在相应环境下金黄色葡萄球菌会合成肠毒素,从而导致人在食用后出现中毒情况,严重影响人身体健康。
一、金黄色葡萄球菌内容(一)生物学特点金黄色葡萄球菌典型形状为球型,在显微镜下呈现葡萄串排列。
金黄色葡萄球菌没有芽孢,大多都是无荚膜。
金黄色葡萄球菌的营养价值并不大,能很好生长在普通培养基上,并需要兼性厌氧或者有氧,适合在37℃的温度下生长,酸碱值7.4最为适合。
在平板上有关则,并凸起圆形,直径为2mm左右[1]。
在血平板下会在周围形成溶血环。
因为金黄色葡萄球菌具有较高耐盐性,所以能在15%deNaC1中生存,并从中分解乳糖、蔗糖、麦芽糖等,针对红霉素、青霉素等敏感。
(二)流行病学特点因为在人们日常生活中金黄色葡萄球菌随处可见,因此很容易污染食品。
导致食品中毒有很多不同原因,同时对应的也有很多食品会引起人们中毒,比如肉蛋奶及其制品,同时剩饭也可能引起中毒。
在国外因为金黄色葡萄球菌导致出现食物中毒的占据细菌性食品中毒的30%左右。
我国也曾出现过这一类问题,而肠毒素是因为金黄色葡萄球菌引起食物中毒的主要致病因子,并自身结构稳定,呈现季节性分布,通过加热后依然能保持稳定[2]。
而金黄色葡萄球菌肠毒素在当前属于世界性难题,因为人和牲畜都能患病,并引起的疾病对身体危害较大,比如肺炎、心包炎等,严重的甚至会出现脓毒症、败血症等,有着非常严重的后果。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种常见的致病菌,广泛存在于环境中和人体的皮肤黏膜上。
它是一种革兰氏阳性球菌,通过空气、飞沫、直接接触等途径传播。
金黄色葡萄球菌引起的感染包括皮肤感染、呼吸道感染、骨髓炎、心内膜炎等,严重时还可以导致败血症和中毒性休克。
为了诊断金黄色葡萄球菌感染,需要进行相关的检验技术。
以下是金黄色葡萄球菌检验的常用技术介绍及分析:1. 细菌培养:将样品(如血液、脓液、分泌物等)接种到适当的培养基上,利用培养器将细菌培养在适当的温度和湿度下。
金黄色葡萄球菌能够在常规寒温培养基上生长,并产生特征性的金黄色色素。
2. 葡萄糖发酵试验:用含葡萄糖的培养基培养金黄色葡萄球菌,通过观察培养基的酸碱指示剂变化,如果培养基变为黄色,则说明金黄色葡萄球菌能够发酵葡萄糖产生酸。
3. 凝固酶试验:用凝固酶试剂与金黄色葡萄球菌接触,在一定时间内观察是否发生凝固反应。
凝固酶是金黄色葡萄球菌特有的酶,可以将凝血蛋白原转化为凝血蛋白,从而导致液体凝固。
4. 硝酸盐还原试验:将含有硝酸盐的培养基与金黄色葡萄球菌接触,观察是否产生还原反应。
正常情况下,金黄色葡萄球菌可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐和硝酸,导致培养基变为红色。
5. 蛋白酶试验:用含有牛血清蛋白的培养基培养金黄色葡萄球菌,观察是否溶解蛋白质。
金黄色葡萄球菌能够产生多种蛋白酶,可以分解牛血清蛋白,形成溶解区。
通过以上的检验技术,可以初步判断金黄色葡萄球菌的存在和性质。
这些检验方法并不是专门针对金黄色葡萄球菌的,也不能确定金黄色葡萄球菌的毒力和抗药性等重要特征。
要做进一步的分析和确认,需要使用专门的分子生物学方法,如聚合酶链反应(PCR)和基因测序等。
浅谈猪金黄色葡萄球菌病的分析诊断和治疗猪金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种常见的猪类病原菌,引起的疾病称为猪金黄色葡萄球菌病。
该病对猪的生长发育产生不良影响,给养殖业造成严重的经济损失。
在养殖过程中,对猪金黄色葡萄球菌病的分析诊断和治疗显得十分重要。
一、猪金黄色葡萄球菌病的病原学分析猪金黄色葡萄球菌是一种革兰氏阳性球菌,具有金黄色的特征性菌落。
该菌主要通过空气、粪便、食物等途径传播,易在猪圈内和猪体表面寄生。
在养猪过程中,猪经常受到各种应激因素的影响,包括气候变化、饲料变化、疫苗注射等,使猪的身体免疫力下降,从而使得猪更容易感染猪金黄色葡萄球菌。
猪金黄色葡萄球菌引起的疾病包括皮肤病、呼吸道感染、乳腺炎等,主要表现为发热、厌食、呼吸困难、乳房肿胀等症状。
猪圈内出现猪金黄色葡萄球菌病疫情后,会导致群体性感染,造成严重的经济损失。
1. 临床症状:猪金黄色葡萄球菌感染后,猪可能出现发热、精神萎靡、厌食、呼吸困难等症状。
对于乳猪,可能会出现腹泻、呼吸困难等现象。
乳猪乳源肿胀、发热,哺乳母猪乳房肿胀、出现分泌物。
2. 细菌学检查:对于疑似感染猪,可从患病部位取样,进行细菌培养和鉴定。
在培养基上观察,猪金黄色葡萄球菌将形成金黄色的葡萄簇状菌落,有特殊气味。
3. 分子生物学检查:通过PCR、酶联免疫吸附检测等方法,可以检测出猪金黄色葡萄球菌的DNA序列,帮助明确诊断。
4. 免疫学检查:检测疑似感染猪的血清中猪金黄色葡萄球菌抗体水平,有助于明确诊断。
以上方法可以相互结合,帮助诊断猪金黄色葡萄球菌病,明确疾病的类型和严重程度。
1. 抗生素治疗:对于猪金黄色葡萄球菌感染,抗生素是治疗的主要手段。
常用的抗生素包括青霉素、头孢菌素、利福平等,可通过注射、饲料添加等方式给予猪使用。
但是需要注意的是,抗生素的使用需要根据感染菌株的药敏试验结果确定,避免滥用导致耐药性的产生。
2. 免疫增强治疗:在治疗可以通过饲料添加多种维生素和微量元素,提高猪的免疫力,加快病情的康复。
食品中金黄色葡萄球菌检验(一)原理金黄色葡萄球菌进入人体内,可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎,还可引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染,甚至可发展成败血症。
此外,食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险,因为金黄色葡萄球菌在食品中会产生肠毒素,食用后将引起食物中毒,这在我国细菌性食物中毒事件中,仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此,检验食品中金黄色葡萄球菌有实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素,菌落周围有透明的溶血圈,在厌氧条件下能分解甘露醇产酸,产生血浆凝固酶和耐热性的DNA 酶。
(二)仪器和设备(1)显微镜(2)培养箱:(36±1)℃(3)离心机(4)灭菌吸管:1mL、10mL(5)灭菌小试管(6)培养皿:皿底直径9cm(7)均质机(8)载玻片(10)酒精灯(11)水浴锅(三)培养基和试剂(1)胰酪胨大豆肉汤培养基成分:胰酪胨(或胰蛋白胨)17g 磷酸氢二钾 2.5g植物蛋白胨(或大豆蛋白胨)3g 葡萄糖 2.5 g氯化钠100g 蒸馏水1000mL 制法:将上述各成分混合,加热时轻轻搅拌使之溶解,分装三角瓶后,于121℃下高压灭菌15min。
最终pH为7.3±0.2。
(2)7.5%的氯化钠肉汤培养基成分:蛋白胨10g 蒸馏水1000mL 牛肉膏3g pH=7.4 氯化钠75g 制法:将上述各成分加热溶解,校正pH,分装于三角瓶中,在121℃下高压灭菌15min。
(3)黄豆粉浸液取黄豆粉5g、氯化钠10g,加入蒸馏水100mL。
置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜。
吸取上清液即为黄豆浸液。
(4)牛肉消化汤成分:绞碎牛肉1000g 15%氢氧化钠溶液27mL胰蛋白酶40mL 三氯甲烷1mL氯化钠10g 蒸馏水2000mL 制法:①称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min。
②加氢氧化钠溶液,pH试纸呈弱碱性,冷至40℃。
金黄色葡萄球菌肺炎的鉴别诊断金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌,可以引起多种感染,包括肺炎。
金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的疾病,正确的鉴别诊断对于及时治疗至关重要。
下面将介绍金黄色葡萄球菌肺炎的鉴别诊断方法。
症状金黄色葡萄球菌肺炎的症状可以包括:•发热•咯痰•咳嗽•胸痛•呼吸困难这些症状也可能出现在其他呼吸系统感染中,因此需要进一步的鉴别诊断。
临床表现金黄色葡萄球菌肺炎患者常有肺实变的体征,如叩诊浊音、气管移位及胸膜叩击痛等。
另外,患者可能出现胸部X线片上的阳性表现,包括肺实变灶或渗出影。
实验室检查金黄色葡萄球菌肺炎的确诊通常需要从痰液或血液中分离出金黄色葡萄球菌。
痰培养和血培养是常用的方法,通常在细菌培养基上施加青霉素试验可以确定金黄色葡萄球菌。
诊断注意事项金黄色葡萄球菌肺炎的鉴别诊断中需注意以下几点:•与其他细菌性肺炎病原菌进行鉴别,如军团菌、肺炎链球菌等。
•注意与病毒性肺炎的区分,病毒性肺炎患者常出现明显的呼吸道症状,如流感样症状、喉炎等。
•考虑与肺结核、真菌感染等进行鉴别,这些疾病也可能引起相似的症状。
治疗金黄色葡萄球菌肺炎的治疗通常包括使用青霉素类抗生素,如青霉素G或青霉素V。
对于对青霉素耐药的金黄色葡萄球菌感染则需要选择其他抗生素治疗。
结语金黄色葡萄球菌肺炎的鉴别诊断对于及时治疗和防止病情加重至关重要。
医生需要根据患者的症状、临床表现和实验室检查结果来进行综合判断,明确诊断并制定合理的治疗方案。
平时要注意保持良好的卫生习惯,及时就医,有助于预防金黄色葡萄球菌肺炎等呼吸系统感染疾病的发生。
金黄色葡萄球菌鉴别方法探讨目的探讨金黄色葡萄球菌的检验方法,提高金黄色葡萄球菌的鉴定准确率。
方法本研究针对金黄色葡萄球菌的特异性、敏感性、准确性进行研究,比较该方法与传统国标法的检测结果。
结果在传统国标法上增加API Staph 鉴定试条试验,检测结果与国标法的显示阳性的检测结果相一致。
结论此方法可对似阳非阳的结果进行判定,甚至对假阴性进行修正,防止漏检,明显提高了金葡菌的检出水平和准确性,对日常的检验工作具有很现实的指导意义,值得推广。
标签:金黄色葡萄球菌;API Staph;鉴定The identification method of Staphylococcus aureusSONG?SongwenGuangxi Yulin Institute for Food and Drug Control, Yulin 537000, China[Abstract] Objective To probe into the test methods of Staphylococcus aureus and improve Staphylococcus aureus identification accuracy. Methods This experiment was aimed at researching the specificity, sensitivity and accuracy of Staphylococcus aureus and compares the test results of this approach with that of the traditional national standard method. Results API Staph identification cards are increased in the traditional national standard method.The test results are the same as that of national standard method, which shows positive. Conclusion The results of unclear positive can be judged by this method, even the false negative can be revised to prevent undetection. Thus obviously improves the detection level and accuracy of Staphylococcus aureus.It has practical guiding significance on the daily inspection work, and is worthy to be popularized.[Key words] Staphylococcus aureus; API Staph; Identification金黄色葡萄球菌(SA)广泛存在自然界,是一种引起食物中毒的常见致病菌之一,目前很多国家都把金黄色葡萄球菌列为药品和食品卫生的法定检测项目[1]。
对金黄色葡萄球菌检验目前采用的方法是以《中国药典》2010年版及食品安全国家标准GB4789.10-2010[2-3]。
然而,SA在特殊环境中,可产生变异性,使细菌形态及典型的生化反应有所改变,在检验中常有假阳性发生,影响判断结果。
本实验在常规方法的基础上增加API鉴定系统确认,能显著提高金黄色葡萄球菌检出率。
因食品和药品对金黄色葡萄球菌检验方法类同,且食品相对于药品而言污染机率较大,杂菌较多,故实验以9批试验结果革兰染色镜检均为阳性的食品样品更具代表性。
1?材料与方法1.1?材料1.1.1?对照用菌株?金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003];样品菌株:两批生食鱼片(批号:SP20110189、SP20110212)、三批熟肉制品(批号:SP20110151、SP20110182、SP20110745)、两批豆制品(SP20110740、SP20110847)和两批盒饭(批号:SP20110108、SP20110073)共9个批次,革兰染色镜检试验均显阳性,计划监管中抽取于市场。
1.1.2?培养基和试剂?7.5%氯化钠肉汤;Baird-Parker培养基(B-P);血琼脂平板;脑心浸出液(BHI)肉汤;营养琼脂斜面;冻干血浆;革兰染色试剂,广州环凯生物技术有限公司。
API Staph 鉴定试条,法国生物梅里埃公司。
1.1.3?主要仪器设备?恒温培养箱,涡旋振荡器,显微镜,ATB-new微生物鉴定系统(法国生物梅里埃公司)。
1.2?方法1.2.1?分离培养?按GB/T4789.10-2010方法,无菌称取25 g样品加入225 mL 灭菌的7.5%氯化钠肉汤中,均质后,(36±1)℃培养24 h,用取上述培养物,分别接种于Baird-Parker琼脂平板和血琼脂平板上,(36±1)℃培养24 h,培养结束后观察菌落生长特征。
挑取1~2个可疑菌落,分别接种致营养琼脂斜面和BHI 肉汤培养基中,置(36±1)℃培养24 h,同时进行革兰染色镜检。
1.2.2?血浆凝固酶试验?取冻干血浆1支,加入革兰染色镜检试验均显阳性的培养24 h的BHI肉汤培养物0.5 mL,振荡摇匀,放置于37℃恒温培养箱中培养,每半小时观察1次,至少观察6 h。
观察是否有凝块形成,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。
同时用金黄色葡萄球菌及肉汤做对照试验。
1.2.3?API Staph 鉴定试条试验?取API Staph 鉴定试条,从营养琼脂斜面分离菌落,调节成相当于0.5麦氏标准浊度的均匀菌悬液,注入已有底物的各试管。
并在装有精氨酸双水解酶(ADH)和尿酶(URE)管的杯内注入矿物油,用以隔绝空气保持厌氧环境。
盖上培养盒,在(36±1)℃培养24 h后经ATB-new微生物鉴定系统鉴定。
2?结果根据分离菌株的培养特性和革兰染色形态学观察、镜检、纯培养特性的观察、血浆凝固酶试验以及最终的API Staph鉴定条试验,确定样品中金黄色葡萄球菌阳性。
见表1。
2.1?典型的金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上培养特性菌落直径为2~3 mm,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围有一条混浊带,在其外层有一透明圈,用接种针触动时,菌落有似奶油至树胶样硬度。
2.2?典型的金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上培养特性菌落较大,呈圆形,光滑突起、湿润,金黄色、光滑湿润、菌落周围可见完全透明的溶血圈。
2.3?典型的金黄色葡萄球菌革兰氏染色形态特征革兰阳性球菌,圆形,呈单个短链和葡萄簇状或串状排列,无鞭毛、无芽孢、无荚膜。
2.4?典型的金黄色葡萄球菌纯培养生长特征典型的金黄色葡萄球菌在脑心浸出液(BHI)肉汤中纯培养后呈混浊生长。
2.5?血浆凝固酶试验典型的金黄色葡萄球菌能使血浆呈胶胨状凝固,将试管倾斜或倒置时,不能倒出,而阴性菌株和肉汤培养基均无凝固现象,以此来判定分离菌株血浆凝固酶试验为阳性。
3?讨论金黄色葡萄球菌在适宜的条件下会产生一系列特征性的接触酶,其中包括纤维朊溶酶、玻璃酸溶酶、凝固酶和核酸酶。
通过检测细菌是否分泌这些酶,可作为判断该菌株属种的重要指标之一[4]。
传统的金黄色葡萄球菌鉴定是通过对样品增菌处理后,进行平板划线,然后,挑取可疑菌落进行形态、染色及血浆凝固酶试验后,进行判定。
就血浆凝固酶试验而言,凝固酶基因曾被认为是鉴定金葡菌的特异性基因,但后来发现有少数金葡菌并不产生凝固酶[5]。
据高屹[6]报道,血浆凝固酶试验呈阳性反应的有金黄色葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施莱福葡萄球菌凝固亚种、部分中间型葡萄球菌、海豚葡萄球菌及部分猪葡萄球菌等。
凝固酶试验的血浆标准是必须含有足够浓度的凝固酶、反应因子和纤维蛋白原,必须无溶纤维蛋白活性和无抑制剂[7],条件相对苛刻,并且多种因素对血浆凝固酶试验结果有一定的影响,如:培养物培养时间、血浆凝固酶的反应时间、所加培养物量的不同等,都会对血浆凝固酶的反应结果产生误差,当血浆凝固酶试验出现未完全凝集时,也不容易准确判定,容易造成漏检。
据报导,使用API Staph 鉴定试条鉴定金黄色葡萄球菌,可使鉴定结果的准确性提高为93.6%[7]。
表1实验结果表明,通过增加对分离的可疑金黄色葡萄球菌进行API Staph 鉴定试条试验,检测结果不但与国标法的显示阳性的检测结果是相一致的,还可对似阳非阳的结果进行判定,甚至对假阴性进行修正,防止漏检,明显提高了金葡菌的检出水平和准确性,对日常的检验工作具有很现实的指导意义,值得推广。
[参考文献][1] 陈彬,黄晓蓉,汤敏英,等.基因探针法快速检测食品中金黄色葡萄球菌的研究[J].现代预防医学,2007,34(6):1017-1021.[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(2010年版)[S].北京:中华医药科技出版社,2010:附录112-113.[3] 食品安全国家标准,食品微生物学检验GB 4789.10-2010[S].中华人民共和国卫生部,2010.[4] 吴美云,敖日格乐,王纯洁,等.牛粪中致病性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药物试验[J].江苏农业科学,2009(3):250-251.[5] 姜延龙,张宇,田波,等.PCR技术检测金黄色葡萄球菌进展[J].食品科学,2006,27(5):265-269.[6] 高屹.细菌血浆凝固醉试验有几种?如何使用?[J]中华检验医学杂志,1999,22:35.[7] 方晓霞,陈维媚,王文天,等.Slidex Staph-kit和血浆凝固酶试验在金葡菌鉴定中的应用[J].中国微生态学杂志,2007,19(4):393.。