溶液配制
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溶液配制1.50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2.PBS(0.1M,pH 7.4)贮存液配方(10倍浓缩)A.152g NaCl24g无水NaH2PO41600ml水用NaOH调整pH约6.7加水至2L室温保存(至少稳定1个月)1×溶液pH应当为7.3~7.5.终浓度为130mmol/L NaCl和10mmol/L磷酸钠B.NaCl 80gNa2HPO4.12H2O 32.3gNaH2PO4.2H2O 4.5g加蒸馏水至1000mlC .NaCl 80gNa2HPO4.2H2O 11.5gKH2PO4 2gKCl 2g加蒸馏水至1000ml贮存液室温下保存一个月3.3 M 醋酸钠组份浓度3 M 醋酸钠(pH5.2),配制量100mLA.配置方法 a. 称取40.8gNaAc•3H2O 置于100~200mL 烧杯中,加入约40mL 的去离子水搅拌溶解。
b. 加入冰乙酸调节pH 值至5.2。
c. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
d. 高温高压灭菌后,室温保存。
B. 配置方法:取408g三水合乙酸钠(NaC2H3O2)溶于800ml水,用3mol/乙酸调至Ph4.8、5.0或5.2(按要求),加水至1L,高压灭菌。
4.乙酸钾(5mol/L)5mol/L 乙酸钾60ml冰乙酸(!)11.5 ml水28.5 ml所得溶液的钾的浓度为3 mol/L,乙酸浓度为5 mol/L。
室温保存。
5. HEPES溶液A.1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH 调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
B.500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2),然后用蒸馏水定容至500ml,于4摄氏度保存。
C.加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml)HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值,最后定容。
D.2×HEPES缓冲盐溶液的配制将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可E.HEPES缓冲液,不含(Ca,Mg)(HCMF),PH7.4的配置:8g NaCl (终浓度0.137mmol/L)0.4g NaCl (终浓度5.4mmol/L)0.12g Na2HPO4 (终浓度0.347mmol/L)1.0g葡萄糖2.38g N-2羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES,;终浓度10mmol/L)加水至1L用孔径0.45μm的滤器过滤,去除所有杂质4℃可储存数月F.HEPES缓冲液1L HCMF1ml 1mol/L CaCl21ml 1mol/MgCl2用孔径0.45μm的滤器过滤,去除所有杂质4℃可储存数月G.HeBS(HEPES缓冲盐溶液)溶液,2×16.4g NaCl11.9g HEPES酸0.21g Na2HPO4800ml用5mol/L NaOH滴定至pH7.05加水至1L0.45μm滤器过滤消毒50ml分装,-20℃储存溶液用于转染时,pH应在7.05~7.12并检测转染效率H.HEPES缓冲液,不含Mg(HMF)1L HCMF1ml 1mol/CaCl2用0.45μm滤器过滤,去除所有杂质4℃可储存数月I.HEPES缓冲盐溶液(HeBS),Ph7.05要制备500ml的HeBS,加2.5g的HEPES(终浓度20mmol/L).用5mol/L NaOH将pH调至7.05.J.HEPES-KOH,Ph7.2,1mol/L238.3 HEPES,游离酸加水至800ml用10mol/L的KOH调节Ph至7.2加水至1L过滤除菌1ml分装,-20度储存2年6.EDTA(乙二胺四乙酸)A. EDTA(乙二胺四乙酸),0.5mol/L(Ph8.0)溶解186.1gNa2EDTA.2H2O与700ml水中,用10mol/LNaOH(约50ml;缓慢加入)将pH调至8.0,加水至1L,过滤除菌。
(在样品完全溶解之前开始滴定,因为除非将pH调到7.0~8.0,EDTA即使以二纳盐的形式在此浓度下也很难溶解) B.EDTA,2%(w/v)2g Na2EDTA加水至100ml用NsOH 将pH调至7.0室温保存(可调定数月)溶解的时候需要滴定,如果不加入NaOH,即使是使用二钠盐,EDTA也溶解。
7. 10 M醋酸铵组份浓度10 M醋酸铵,配制量100mL配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100~200 mL烧杯中,加入约30 mL 的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
(注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
)8.HCl,1mol/L按以下顺序混合:913.8ml86.2ml浓盐酸9. Triton X-100溶液A.Triton X-100,10%(w/v)1g Triton X-100加水至10ml搅拌溶解用0.45μm滤膜过滤除菌室温避光保存,期限6个月B. Triton X-100溶液,20%(w/v)3g Triton X-10012ml H2O37℃水浴使Triton X-100充分溶解4℃保存(可稳定保存约2周)10. HCl/Triton X-10017.4ml 11.5mol/L HC(终浓度2mmol/L)0.5g Triton X-100 (终浓度0.5%w/v)82ml 双蒸馏水新选配制11. 6×loading buffer6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)12. 10mg/ml 蛋白酶K (proteinase K ):将100mg 的蛋白酶L 加入到9.5ml 水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K 完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml ,然后分装成小份贮存于-20℃。
13. 胰酶A.胰酶/EDTA (Trypsin ):①胰酶(1:250) 2.5 克②EDTA-Na 0.2克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.01克⑦Water 1000 mL 磁力搅拌2-3小时,调pH 7.8-8.0,用0.2μm 滤膜过滤除菌过滤除菌。
(-20度可保存3个月)B.胰酶溶液,0.1%(w/v )10mg 结晶胰酶(SIGMA )加HCMF 至10ml1ml 分装-20度保存小于1个月成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50%甘油 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0) 3ml 3.9ml14. Ampicillin □组份浓度100mg/ml Ampicillin(100mg/ml)□配制量50mL□配置方法1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
15. G418A.配的时候就是用配好的HEPES溶G418,然后过滤,不用高压灭菌了,配好后分装,-20度保存,用的时候取一管放4度100mM HEPES(pH7.3)缓冲液(500ml)ddH2O 490mlNacl 4gNa2HPO4-12H2O 0.1357gKcl 0.185gGlu 0.5gHEPES 2.5g用氢氧化钠调PH至7.3 ,定容至500mlB. G418溶液,20mg/ml用10mmol/LHEPES配置20mg/ml的G418溶液,Ph7.2,用0.22μm滤膜过滤除菌.分装成0.5ml,储存于-20℃C.G418贮存液(50mg/ml)的配制G418(merck分装),效价大于等于700U/mg.按实际效价配制G418solution.1g G418粉加14ml 100mM HEPES(PH7.3)溶解16.卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
17.、LB 培养基A.配制方法:每升含:a.10g 胰蛋白胨;b.5g 酵母提取物;c. NaCl;d. 1ml1mol/L NaOH.高压灭菌20Min(即使pH用NaOH调整到7.0,培养基也没有很高的缓冲能力。
在培养过程中当培养基物接近饱和时,PH会下降;高压灭菌后,培养基也可以加入抗生素,半乳糖苷或其他的营养添加物;配制用于制备LB平板的LB琼脂,每升加入5g琼脂或琼脂糖。
)B.配制方法:组份浓度1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeastExtract,1%(W/V)NaCl配制量1L1. 称量下列试剂,置于1L 烧杯中Tryptone 10gYeast Extract 5gNaCl 10g2. 加入约800mL 的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH(约0.2mL),调节pH 值至7.0。
4. 高温高压灭菌后,4℃保存。