决奈达隆对新生大鼠心室肌细胞HCN通道mRNA和蛋白表达的影响

次乌头碱对心肌细胞钠通道SCN5A及钠钙交换蛋白 mRNA表达的影响李志勇;谭鹏;朱坤杰;李飞;孙建宁【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2011(32)20【摘要】目的观察次乌头碱(HA)对原代培养乳大鼠心肌细胞钠(Na)通道SCN5A 亚基、钠钙交换蛋白(NCX)mRNA表达的影响.方法体外培养乳大鼠心肌细胞,采用RT-PCR法测定Na通道SCN5A及NCX mRNA表达.结果 HA作用15 min 时,60和120 μmol/L HA均能增加心肌细胞膜Na通道SCN5A及NCX 的mRNA表达量(P<0.05);动态观察HA对心肌细胞上述基因表达的影响,60 μmol/L HA对心肌细胞作用15及60 min可引发Na通道SCN5A及NCX mRNA的表达量增多(P<0.05).结论次乌头碱(≥60 μmol/L)可通过增加心肌细胞膜Na通道SCN5A、NCX mRNA表达,激活L-Ca通道,参与细胞内钙超载及心律失常的发生过程,在乌头碱类天然药物中毒时干预上述靶点基因改变可缓解中毒性心律失常的发生.【总页数】3页(P2637-2639)【作者】李志勇;谭鹏;朱坤杰;李飞;孙建宁【作者单位】中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,北京,100081;北京中医药大学中药学院,北京,100012;齐齐哈尔医学院基础医学院机能教研室,黑龙江齐齐哈尔,161006;北京中医药大学中药学院,北京,100012;北京中医药大学中药学院,北京,100012【正文语种】中文【相关文献】1.抗钠钙交换体特异位点抗体对心肌钠钙交换电流的激活作用及其与钙通道、钠泵的交叉反应 [J], 白晓洁;吴博威2.缬沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞钙通道和钠-钙交换体电流的影响 [J], 邓春玉;林曙光;吴伟康;钱卫民;阮小薇;吴书林3.黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞钙通道及钠钙交换载体的效应 [J], 刘恭鑫;杨英珍;顾全保;郭棋;虞勇4.FK506结合蛋白12.6基因转染对心力衰竭心室肌细胞钙通道和钠-钙交换器电流的影响 [J], 李德;伍卫;黄至斌;方昶5.心肌细胞钠钙交换通道及其功能 [J], 张建保;王斯刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

核准日期：2021年12月20日修改日期：2021年12月25日盐酸决奈达隆片说明书请仔细阅读说明书并在医师指导下使用警告：在失代偿性心力衰竭或永久性心房颤动的患者中，盐酸决奈达隆片使死亡、卒中和心力衰竭的风险增加。

在症状性心力衰竭和近期有需要住院的心衰失代偿或纽约心脏学会（NYHA）IV级心力衰竭的患者中，盐酸决奈达隆片使死亡风险加倍。

盐酸决奈达隆片禁用于近期心衰失代偿需要住院或NYHA IV级的症状性心力衰竭患者。

在永久性心房颤动患者中，盐酸决奈达隆片使死亡、卒中和因心力衰竭住院的风险加倍。

盐酸决奈达隆片禁用于不打算或无法转复为正常窦性心律的心房颤动（AF）患者。

[参见禁忌和临床试验]【药品名称】通用名称：盐酸决奈达隆片英文名称：Dronedarone Hydrochloride Tablets汉语拼音：Yansuan Juenaidalong Pian【成份】本品主要成份为盐酸决奈达隆化学名称：N-{2-丁基-3- [4-（3-二丁基氨基丙氧基）苯甲酰基]苯并呋喃-5-基}甲基磺酰胺盐酸盐化学结构式：分子式：C31H44N2O5S·HCl分子量：593.2【性状】本品为白色薄膜包衣椭圆形片剂，一面刻有“4142”，另一面刻有双波标记。

除去薄膜衣后显白色。

【适应症】本品用于有阵发性或持续性心房颤动病史的窦性心律患者，减少因心房颤动（AF）住院的风险。

【规格】400 mg（按C31H44N2O5S计）【用法用量】成年人的推荐剂量为每次1片（400 mg），每日2次。

早餐和晚餐时各服一片。

开始服用本品前，必须停用Ⅰ类、Ⅲ类抗心律失常药物（例如：胺碘酮、氟卡胺、普罗帕酮、奎尼丁、丙吡胺、多非利特、索他洛尔）和CYP 3A的强效抑制剂类药物（例如：酮康唑）[参见禁忌]。

【不良反应】1.在【注意事项】部分详细说明了下列安全性问题：新发心衰或心衰恶化；肝损伤；服用非保钾类利尿剂引起低钾血症和低镁血症的患者；QT间期延长。

HCN离子通道在心脏起搏中的作用及调控研究心脏是人类最重要的器官之一，它起着泵血和维持身体生命的作用。

而心脏能够进行正常的跳动，离不开一种重要的电生理现象——心脏起搏。

在心脏的起搏过程中，HCN离子通道起着至关重要的作用。

近年来，对于HCN离子通道的调控机制和研究也得到了广泛的关注。

首先，需要了解HCN离子通道。

HCN离子通道是一类拥有超极化激活的离子通道，也被称为“I_f”通道。

HCN离子通道主要存在于心脏的窦房结和动脉竞争孔，这些区域是心脏起搏的主要区域。

HCN离子通道也存在于其他的组织中，如大脑、视网膜和消化道，因此又被称为“甘氨酰环核苷酸”（cAMP）依赖的离子通道。

HCN离子通道主要由四个亚单位组成，即HCN1、HCN2、HCN3和HCN4。

这些亚单位不仅在心脏中表达，还在其他组织和器官中表达。

然而，HCN4是在心脏中表达最为广泛的亚单位，因此在心脏中的表达量最多。

HCN离子通道在心脏起搏中的作用主要体现在两个方面。

第一，HCN离子通道是心脏起搏的重要驱动力。

当心脏细胞处于静息状态时，HCN离子通道保持着开放状态，其中Na+离子向内流，K+离子向外流。

这个过程使心脏细胞内外的电位差逐渐减小，最终导致心脏细胞的自发去极化和起搏。

第二，HCN离子通道的活性也与心脏动作电位的维持有关。

当HCN离子通道关闭后，阻止K+和Ca2+通道的打开，从而促进心脏细胞的去极化。

事实上，HCN离子通道的开放状态和关闭状态是由激活和抑制的多种因素共同调控的，这包括了离子浓度、膜电位、效应物质浓度、心脏协同作用和基因表达等等。

其中，cAMP是调控HCN离子通道的重要因素之一。

当心脏细胞受到刺激时，cAMP浓度升高，进而促进HCN离子通道的开放，使心脏细胞产生更多的自发去极化和起搏。

最近，研究人员通过分子生物学、电生理学和蛋白质学等多种方法，对HCN 离子通道的调控机制进行了深入研究。

研究发现，HCN离子通道的调控不仅局限于单个通道分子的影响，还涉及到通道的组装和相互作用。

心脏HCN通道：从基础到临床范新荣;王超【摘要】研究表明超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN通道)大量分布于心脏及神经系统的特定部位,其介导的起搏电流引起窦房结细胞舒张期去极化,从而在心脏自主搏动及心律的调节等方面发挥着十分重要的生理功能.目前,已克隆得到4种HCN亚型基因,并通过功能表达分析指出各种HCN亚型具有不同的电生理学特性.但是目前有关HCN逶道在心脏电活动中的生理及病理生理机制仍未完全阐明.本篇综述旨在详细阐述心脏HCN通道的生物物理学特性、心脏通道蛋白表达、各种HCN通道突变引起的离子通道疾病以及几种通道阻滞药物电药理学特性的研究进展.%Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated ( HCN) channels, responsible for pacemaker current, are widely expressed in heart and nervous system, and HCN mediated currents play a key role in generation and regulation of diastolic depolarization which controls the spontaneous rate in sinoatrial node myocytes. Recently, four mammalian HCN isoforms, respectively termed HCN1-4, have been cloned. When heterologously expressed, each of the four HCN subunits has different electrophysiological properties. However, the physiological and pathophysiological mechanisms of HCN channels on cardiac electric activity have not been revealed completely. In this review we summarize recent insight into the biophysical characteristics of cardiac HCN channels, distribution of channels in heart, five kinds of HCN-related ionic channelopathies and electropharmacological properties of several If blockers.【期刊名称】《心血管病学进展》【年(卷),期】2012(033)005【总页数】7页(P660-666)【关键词】HCN通道;电生理特性;离子通道病;If阻滞剂【作者】范新荣;王超【作者单位】成都市第三人民医院心血管内科,四川成都 610031;成都市第三人民医院心血管内科,四川成都 610031【正文语种】中文【中图分类】R541.7最早于上世纪70年代末，人们发现在窦房结细胞和神经元上存在一种超极化激活电流(hyperpolarization-activated current，Ih)，其特殊的电生理学性质很快引起了大量生物学家和医学家的注意。

决奈达隆的药效学及药代动力学研究概况决奈达隆是一种有效的治疗房扑/房颤的药物，由于“去碘化”而无甲状腺和肺毒性，成为抗心律失常治疗的一个新型的更安全有效的武器。

更重要的是，决奈达隆能够显著降低房颤/房扑患者的发病率和死亡率，明显改善预后，成为抗心律失常药物中惟一一个存在独立于抗心律失常以外作用使患者获益的药物。

标签：决奈达隆；心房颤动；抗心律失常；药效学；药代动力学；决奈达隆是一种新型的Ⅲ类抗心律失常药物，由赛诺菲-安万特公司研究开发，2009年7月1日在美国批准上市（全球首次批准上市），用于急性心房纤颤（AF）与心房扑动症（AFL）。

临床研究结果显示，同时具有Ⅰ类，Ⅱ类，Ⅳ类抗心律失常药物的某些作用。

决奈达隆可抑制钠、钾、钙内流，还可拮抗α和β肾上腺素能受体。

与胺碘酮不同的是，决奈达隆很少影响甲状腺受体，治疗房颤和房扑，维持窦性心律的疗效好，患者的耐受性也较好，这一点已被大规模临床试验证实。

是美国治疗房颤和房扑使之迅速转复为窦性心律的最佳药物疗法。

目前我国临床常用的抗心律失常药物有许多潜在的毒副作用，如长期服用胺碘酮的病人中5～10%出现肺纤维化、心衰加重、甲状腺功能低下及肝毒性；伊布利特则口服生物利用度低，通常注射使用，也没有索他洛尔及普罗帕酮的毒性反应。

决奈达隆是胺碘酮的衍生物，由于它不含碘，亲脂性较低，因此其保持了胺碘酮的疗效，而没有胺碘酮的心外不良反应。

1决奈达隆的基本信息1.1化学结构决奈达隆盐酸盐化学名：N-[2-丁基-3-[4-[3-（二丁氨基）丙氧基]苯基]-5-苯并呋喃基]-甲烷磺酰胺盐酸盐化学结构式：1.2适应症决奈达隆是一种抗心律失常药物，适用于阵发性或持续性房颤或房扑患者、当前为窦性心律或需要复律的近期发生房颤或房扑并存在心血管病危险因素的患者，可减少上述患者的心血管病住院风险。

1.3用法用量口服。

对成人的唯一推荐剂量为每次一片（400mg），每日2次，于早、晚餐时服用。

决奈达隆治疗心血管疾病安全性的 Meta 分析张长江;马瑞松;张旭涛;李元红【期刊名称】《疑难病杂志》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】Objective To systemic review the safety of dronedarone therapy on cardiovascular diseases .Methods Using computer retrieval PubMed , Embase, Cochrane Collaboration database to find out published randomized controlled trials (RCT) of dronedarone therapy for cardiovascular diseases and search from start of the database to August 31, 2014.Accor-ding to the inclusion and exclusion criteria for quality evaluation of literature screening , data extraction method , Meta-analysis was carried out using RevMan 5.2 software.Results Ultimately this study included 7 RCT with 10 205 cases.The Meta-anal-ysis results showed that:(1) hospitalization and mortality rate, compared with placebo, dronedarone may increase cardiovas-cular events hospitalization rate (OR=1.82, 95%CI 1.42-2.34, P <0.000 01), incident of heart failure hospitalization rate (OR=1.50, 95%CI 1.05-2.14, P =0.03), the total mortality (OR=1.95, 95%CI 1.25-3.04, P =0.03), car-diovascular events and mortality (OR=2.44, 95%CI 1.44-4.14, P =0.000 9) and arrhythmia mortality (OR=3.21, 95%CI 1.28-8.07, P =0.01).(2) the incidence of adverse reaction: compared with placebo, dronedarone will increase the overall incidence of adverse reaction (OR=1.34, 95%CI 0.97-1.86, P =0.08), serious adversereaction incidence (OR=1.25, 95%CI 0.92-1.70, P =0.16) and serious cardiovascular adverse reaction rate (OR=1.37,95%CI 0.98-1.91, P =0.07), but there were no significant differences of these indices .Conclusion Dronedarone may increase the risk of cardiovascular events , while not significantly increase the adverse reactions of patients .%目的：评价决奈达隆治疗心血管疾病的安全性。

益气温阳活血利水法对心衰大鼠水通道蛋白2 mRNA表达的影响张晓华;隋殿军;刘淑荣;刘新宇;邸琳【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2013(033)019【摘要】目的探讨益气温阳活血利水法对心衰大鼠血管加压素V2受体、水通道蛋白2 mRNA表达的影响.方法选择健康Wistar大鼠,应用腹腔注射阿霉素(3 mg/kg,1次/w,连续6 w)及睡眠剥夺,造成心衰大鼠模型,然后分为对照组、模型组,芪苈强心组、中药高剂量、中剂量、低剂量6组,服药4w后观察6组大鼠服药后血管加压素V2受体、水通道蛋白2 mRNA相对表达量的变化.结果益气温阳活血利水法可减弱肾脏组织V2受体、水通道蛋白2 mRNA相对表达量,结果优于模型组,以中、高剂量组为著.结论益气温阳活血利水法通过下调血管加压素V2受体、水通道蛋白2 mRNA表达而改善心衰水潴留状态.【总页数】2页(P4785-4786)【作者】张晓华;隋殿军;刘淑荣;刘新宇;邸琳【作者单位】吉林省中医药科学院,吉林长春 130021;吉林省卫生厅;吉林省中医药科学院,吉林长春 130021;吉林省中医药科学院,吉林长春 130021;吉林省中医药科学院,吉林长春 130021【正文语种】中文【中图分类】R541.6【相关文献】1.左肾静脉不全结扎对大鼠肾水通道蛋白1和水通道蛋白2 mRNA表达的影响[J], 王蔚东;田长生;李杨;李春凌;赵丹;赵雪俭;杨宝学2.温阳益气、活血利水法对冠脉结扎心肌梗死后心衰大鼠NT-proBNP的影响 [J], 王建湘;谭元生;邓满霞3.益气温阳活血利水药对心肌梗死后心力衰竭大鼠心功能和脑钠肽的影响 [J], 黄平东;罗懿明;刘煜德;黄衍寿4.益气温阳活血利水组方对充血性心力衰竭大鼠血流动力学及血浆内皮素的影响[J], 符惠娟;邵南齐;张琪5.益气温阳活血利水法对慢性肺源性心脏病大鼠水通道蛋白4表达的影响及机制研究 [J], 杨静; 马泉; 张元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

心房颤动大鼠心房肌HCN2、HCN4表达及青山健心片的干预作用焦华琛1,郑书敏2,李运伦2,高金超2,张辛欣2,钟霞2摘要:目的分析心房肌超极化激活环核苷酸门控阳离子通道2(HCN2)及超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)基因在心房颤动大鼠心肌中的表达,观察青山健心片对HCN2㊁HCN4mRNA及蛋白表达的干预作用,揭示其治疗心房颤动的机制㊂方法取阵发性心房颤动大鼠心房组织,采用蛋白免疫印迹法(Western-Blot)及荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测HCN2㊁HCN4的表达,分析青山健心片的干预作用㊂结果阵发性心房颤动大鼠HCN2㊁HCN4mRNA及蛋白表达量均高于对照组,青山健心片及美托洛尔均能降低HCN2㊁HCN4mRNA及蛋白表达㊂结论青山健心片通过下调HCN2㊁HCN4表达,影响超极化激活阳离子电流(If),从而减少心房颤动发作㊂关键词:心房颤动;超极化激活环核苷酸门控阳离子通道2;超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4;青山健心片;蛋白表达中图分类号:R541.7 R256.2文献标识码:A d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2020.14.008The Expression of HCN2,HCN4in Atrial Fibrillation Rats and the Intervention Effect of Qingshan Jianxin TabletJIAO Huachen,ZHENG Shumin,LI Yunlun,GAO Jinchao,ZHANG Xinxin,ZHONG XiaAffiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan250014,Shandong,ChinaAbstract:Objective To analyze the synergistic expression of HCN2and HCN4genes in the myocardium of rats with atrial fibrillation, and observe the effect of Qingshan Jianxin Tablet on the expression of HCN2,HCN4,reveal the mechanism of Qingshan Jianxin T ablet in the treatment of atrial fibrillation.Methods The expression of HCN2and HCN4were detected by Western-blot and RT-PCR in atrial tissue of rats with paroxysmal atrial fibrillation.Results The results of Western-blot and RT-PCR showed that the mRNA and protein expression levels of HCN2and HCN4in the atrial fibrillation group were higher than those in control group.Both Qingshan Jianxin Tablet and metoprolol could reduce mRNA and protein expression.Conclusion Qingshan Jianxin Tablet can reduce the incidence of atrial fibrillation by down-regulating the expression of HCN2and HCN4and affecting If current.Keywords:atrial fibrillation;HCN2;HCN4;Qingshan Jianxin Tablet;protein expression超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel,HCN)是一类新近发现的由HCN1-4基因家族编码的离子通道[1]㊂HCN通道由4个不同的亚基构成复合体[2],参与编码超极化激活阳离子电流(If)通道结构蛋白[3],是心脏动作电位缓慢舒张期自动去极化的重要部分,具有调控心脏起搏的功能㊂前期研究显示,If与心房颤基金项目国家自然科学青年基金(No.81603609);山东省重点研发计划(No.2017GSF19103);山东省泰山学者建设工程专项资助;丁书文全国名中医工作室资助项目作者单位 1.山东中医药大学附属医院(济南250014),E-mail:liyixu-**************;2.山东中医药大学引用信息焦华琛,郑书敏,李运伦,等.心房颤动大鼠心房肌HCN2㊁HCN4表达及青山健心片的干预作用[J].中西医结合心脑血管病杂志, 2020,18(14):2230-2233.动的发生及维持关系密切[4]㊂本研究观察心房颤动大鼠心房肌HCN2㊁HCN4蛋白及其mRNA表达,以及青山健心片对两种通道蛋白的干预作用㊂1材料与方法1.1实验动物SPF级健康雄性Wistar大鼠80只,8周龄,体重(200ʃ20)g,由山东大学动物中心提供,动物合格证号20184897㊂于山东省动物中心实验动物室饲养㊂1.2药物青山健心片购自山东中医药大学附属医院㊂将青蒿㊁常山按3ʒ1比例加入8倍重水两次水提,浓缩,醇沉24h,每毫升含生药7.1g,制成浸膏片,每片0.3g,给药时按比例进行稀释㊂酒石酸美托洛尔,批号1704A13,阿斯利康制药有限公司生产,规格:每片25mg㊂1.3主要试剂与仪器[5]RNA提取液,购自Servicebio 公司,批号G3013;HyPure Molecular Biology GradeWater,购自HyClone公司,批号SH30538.02;RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit,购自Thermo公司,批号#K1622;三氯甲烷,国药集团化学试剂有限公司生产,批号10006818;异丙醇,国药集团化学试剂有限公司生产,批号80109218;无水乙醇,国药集团化学试剂有限公司生产,批号10009218㊂酶标检测仪(Rt2100c,Rayto公司);磁力搅拌器(MS-PB,Servicebio公司);匀浆仪(KZ-Ⅱ,康涛科技);双垂直电泳仪(DYCZ-24DN,北京六一仪器厂);台式高速冷冻型微量离心机(D3024R,DragonLab公司);荧光定量PCR仪(Stepone plus,ABI公司);超微量分光光度计(NanoDrop2000,Thermo公司);标准试剂型纯水仪(FBZ2001-up-p,青岛富勒姆科技有限公司)㊂1.4模型制备㊁分组及干预方法[6]大鼠80只,随机分为对照组㊁模型组㊁青山健心片组㊁美托洛尔组,每组20只㊂通过乙酰胆碱(Ach)-氯化钙溶液多次给药诱发大鼠阵发性心房颤动,模型组㊁青山健心片组㊁美托洛尔组每日舌下静脉注射混合药液0.1mL/100g(内含CaCl25~10mg/mL,Ach33~66μg/mL),隔日给药1次,共14次㊂对照组大鼠每日静脉注射等体积的生理盐水㊂造模时以心电图显示出现心房颤动为造模成功判定标准㊂造模成功后开始灌胃,对照组㊁模型组予以等体积的蒸馏水灌胃,青山健心片组㊁美托洛尔组剂量按照人-大鼠体表面积换算(1ʒ6.25),青山健心片组灌胃剂量为2.01g/kg,美托洛尔组灌胃剂量为0.52 mg/kg,共4周㊂给药及造模过程中,模型组5只大鼠,对照组㊁青山健心片组㊁美托洛尔组各2只大鼠因心律失常死亡,总死亡率为13.70%㊂实验时处死动物,取各组动物的左心房㊁左心室组织㊂1.5引物设计[7-8]使用Primer Premier5.0软件设计引物见表1㊂表1HCN2、HCN4基因PCR引物设计名称长度引物序列HCN2314bp上游:5'-GGACCATCGGGAAGAAGATGTA-3'下游:5'-GCTGAGATCATGCTGAACCTTG-3' HCN4369bp上游:5'-CTCTTGCCCTCCTCTAGCTCTT-3'下游:5'-GGGTCTCTCTGGTGTACTTGGT-3' GAPDH610bp上游:5-GTGCTGAGTATGTCGTGGAGTCT-3'下游:5'-GTGGAAGAATGGGAGTTGCTGT-3'1.6观察指标1.6.1实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HCN2㊁HCN4mRNA表达[9]1.6.1.1总RNA提取大鼠心房肌提取总RNA,溶解于焦碳酸二乙酯(DEPC)处理水,紫外分光光度计检测吸光度(OD值),A260/A280均在1.8~2.0,记录总RNA浓度㊂1.6.1.2PCR扩增按照TaKaRa RNA PCR Kit (AMV)Ver.3.0操作㊂反转录反应,①按下列组成配制反转录反应液:MgCl22μL㊁10ˑRT Buffer1μL㊁RNase Freed H2O 3.75μL㊁dNTP Mixture(各10 mmol)1μL㊁RNase In-hibitor0.25μL㊁AMV Reverse Transcriptase0.5μL㊁Oligo dT-Ada-ptor Primer0.5μL㊁RNA1μL,总体积为10μL㊂②按以下条件进行反转录反应:42ħ30min㊁95ħ5min㊁5ħ5min,循环1次㊂1.6.1.3PCR反应 ①按下列组成配制PCR反应液: 5ˑPCR Buffer10μL㊁灭菌蒸馏水28.75μL㊁TaKaRa Ex Taq HS0.25μL㊁上游特异性PCR引物0.5μL㊁下游特异性PCR引物0.5μL,总体积为40μL㊂②将PCR反应液加入反转录反应结束后的PCR反应管中,轻轻混匀㊂③按以下条件进行PCR反应:94ħ3 min㊁94ħ30s㊁57ħ30s㊁72ħ1min,共35个循环;72ħ10min㊂电泳检测:100V电泳40min,用Quantity Qne软件对PCR产物条带进行定量分析㊂1.6.2蛋白免疫印迹法(Western-Blot)检测HCN2㊁HCN4蛋白表达1.6.2.1蛋白提取用预冷的磷酸缓冲盐溶液(PBS)将心脏组织块洗涤2~3次,彻底匀浆,样本管冰浴30 min,每间隔5min震荡1次㊂12000r/min离心10min,收集上清液,即为总蛋白溶液㊂将蛋白溶液按照4ʒ1的比例加入蛋白上样缓冲液,沸水浴变性15min,放入-20ħ冰箱中保存备用[10]㊂1.6.2.2SDS-PAGE电泳按照上述方法步骤配制5%的浓缩胶,最后将四甲基乙二胺(TEMED)加入,立即摇匀并迅速灌胶㊂电泳过程中发现溴酚蓝析出即可终止电泳,开始进行转膜工作㊂1.6.2.3转膜转膜条件采用湿转的方式,先快转后慢转,快转采用300mA恒流30min,或者200mA恒流1h,时间长短可做略微调节,电流也做相应的调节㊂慢转采用25V的恒压转膜过夜㊂1.6.2.4免疫反应用0.5%TBST和脱脂奶粉配置5%的脱脂牛奶,充分混匀㊂将转好的膜放入脱脂牛奶中,在室温条件下,放置于脱色摇床上,封闭1h㊂将一抗用TBST溶解的5%脱脂牛奶进行稀释,4ħ条件下孵育抗体过夜㊂洗涤3次,每次5min㊂将二抗用TBST稀释3000倍,室温条件下,孵育30min,之后再洗涤3次,每次5min㊂1.6.2.5化学发光及凝胶图像分析用显影和定影试剂对曝光后的胶片进行显影和定影,用PhotoShop软件对其整理去色,用Alpha软件处理系统对目标带的光密度值进行分析和处理㊂1.7统计学处理采用SPSS19.0软件进行统计分析㊂计量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,采用t检验;采用Graph Pad Prism5.0绘制实验结果㊂以P< 0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1PCR结果与对照组相比,模型组HCN2mRNA 表达水平升高,在应用美托洛尔㊁青山健心片治疗后HCN2mRNA表达水平均降低,其中美托洛尔组HCN2mRNA表达水平较青山健心片组降低明显㊂详见图1㊂与对照组相比,模型组HCN4mRNA表达水平升高,应用美托洛尔㊁青山健心片治疗后HCN4mRNA 表达水平明显降低,其中美托洛尔组较青山健心片组HCN4mRNA表达水平降低明显㊂详见图2㊂图1各组HCN2mRNA 表达水平比较图2各组HCN4mRNA表达水平比较2.2Western-Blot结果与对照组相比,模型组HCN2㊁HCN4蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)㊂美托洛尔组㊁青山健心片组与模型组相比,HCN2㊁HCN4蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)㊂青山健心片组HCN2㊁HCN4蛋白表达水平与美托洛尔组比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)㊂详见表2㊁图3㊁图4㊂表2各组大鼠心肌HCN2、HCN4蛋白表达水平比较(xʃs)组别只数HCN2HCN4对照组100.08ʃ0.020.07ʃ0.01模型组80.11ʃ0.01①0.10ʃ0.01①美托洛尔组100.05ʃ0.02②0.06ʃ0.01②青山健心片组90.05ʃ0.02②0.05ʃ0.01②与对照组比较,①P<0.05;与模型组比较,②P<0.05㊂图3各组HCN2蛋白表达灰度图图4各组HCN4蛋白表达灰度图3讨论If电流又称为起搏电流,是公认的心脏自律活动的最重要离子流[11]㊂HCN有HCN1㊁HCN2㊁HCN3和HCN4四种亚型,普通动物心室肌中主要表达HCN2,少量表达HCN4[12]㊂HCN2和HCN4在多种心脏疾病后的心室肌表达变化可能导致心室电重构,引起普通心室肌的电不稳定性增加[13],与各种心脏疾病的致死性并发症室性心律失常关系密切㊂正常生理情况下,心室肌细胞中的HCN通道密度相对低,且激活阈值比正常静息电位更负,因此,工作心肌细胞不产生If电流,但病理状态下HCN的表达增加或者减少都会直接引起普通心肌细胞兴奋性的改变[14]㊂HCN在窦房结起搏电流节律和频率调控及电流水平的维持方面起着重要的作用[15],与If有着密切关系[16],当HCN表达受抑制时If低;当表达上调时,If增大可诱发心律失常㊂本研究发现阵发性心房颤动大鼠HCN2㊁HCN4蛋白及mRNA水平表达增加,说明HCN通道的表达及活性增加是心房颤动的重要原因㊂青山健心片和美托洛尔都具有降低HCN2㊁HCN4mRNA及蛋白表达的作用㊂青山健心片对HCN2㊁HCN4蛋白及mRNA 的过度表达均有抑制作用,推测青山健心片是通过下调HCN2㊁HCN4表达影响If电流,从而减少心房颤动发作㊂参考文献:[1]BENARROCH E E.HCN channels:function and clinical implications[J].Neurology,2013,80(3):304-310.[2]EMERY E C,YOUNG G T,MCNAUGHTON P A.HCN2ion channels:an emerging role as the pacemakers of pain[J].T rends PharmacolSci,2012,33(8):456-463.[3]SCICCHITANO P,CARBONARA S,RICCI G,et al.HCN channelsand heart rate[J].Molecules,2012,17(4):4225-4235.[4]MACRI V,MAHIDA S N,ZHANG M L,et al.A novel trafficking-defectiveHCN4mutation is associated with early-onset atrial fibrillation[J].Heart Rhythm,2014,11(6):1055-1062.[5]孙宇,刘文洲,冯旭,等.风湿性瓣膜病心房颤动患者心房肌HCN2基因mRNA及蛋白的表达[J].中国心脏起搏与心电生理杂志,2014,28(3):246-248.[6]NAKASHIMA N,NAKASHIMA K,NAKAYAMA T,et al.Dual expression ofconstitutively active Gαs-protein-coupled receptors differentiallyestablishes the resting activity of the cAMP-gated HCN2channelin a single compartment[J].Biochem Biophys Res Commun,2017,494(1/2):76-81.[7]刘慧,于风旭,毛亮,等.风湿性心脏病心房颤动患者HCN2mRNA的表达[J].中国心脏起搏与心电生理杂志,2013,27(1):36-37. [8]张玉,佘强.大鼠急性心肌梗死后梗死周边区HCN通道蛋白表达的动态变化[J].中国动脉硬化杂志,2009,17(9):719-722. [9]王菲菲,王学淳,孔庆暖,等.HCN2基因和ANK2基因在心源性猝死病人窦房结细胞的表达变化[J].中国心脏起搏与心电生理杂志,2017,31(1):44-47.[10]张健,李发鹏,何卫,等.持续性心房颤动模型犬左心房肌HCN2和HCN4通道表达变化[J].中国老年学杂志,2018,38(20):5002-5005.[11]王庆志,周立,王志勇,等.1型糖尿病大鼠左心室HCN2和HCN4重构[J].中国临床解剖学杂志,2011,29(3):321-324. [12]BARUSCOTTI M,BOTTELLI G,MILANESI R,et al.HCN-relatedchannelopathies[J].Pflugers Arch,2010,460(2):405-415. [13]付勇,刘慧,毛亮,等.miR-133调控靶基因HCN2在风湿性心脏病心房颤动中的作用机制[J].临床心血管病杂志,2014,30(10):890-893.[14]孙宇,刘文洲,冯旭,等.风湿性瓣膜病心房颤动患者心房肌HCN2基因mRNA及蛋白的表达[J].中国心脏起搏与心电生理杂志,2014,28(3):246-248.[15]刘文洲,周华富,孙宇,等.HCN2与HCN4在风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动中的协同表达[J].临床心血管病杂志,2014,30(3):198-200.[16]FRYKMAN S,INOUE M,IKEDA A,et al.Maturation and processingof the amyloid precursor protein is regulated by the potassium/sodium hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated ionchannel2(HCN2)[J].Biochem Biophys Res Commun,2017,483(1):352-358.(收稿日期:2019-03-06)(本文编辑王丽)。

大鼠心肌细胞结缔组织生长因子的诱导表达及RNA干扰研究郎明健;杨汉东;闵新文;曾秋棠;郭敏;李健【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2009(025)003【摘要】目的:探讨心肌细胞对结缔组织生长因子(CTGF)的基础表达及转化生长因子β1(TGF-β1)对其分泌的诱导作用,并进一步研究以RNA干扰(RNAi)技术靶向抑制CTGF对下游纤维化因子的影响.方法:实验分为以下5组: 组Ⅰ:单纯心肌细胞组;组Ⅱ:TGF-β1诱导组;组Ⅲ:阴性质粒组;组Ⅳ:RNAi组;组Ⅴ:脂质体组.分离培养Sprague Dawley(SD)大鼠乳鼠心肌细胞,以5 μg/L终浓度的TGF-β1对培养的心肌细胞进行诱导,再通过脂质体法将靶向大鼠CTGF的短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染入心肌细胞,流式细胞技术分选出成功转染的细胞.通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)技术进一步研究各实验组心肌细胞CTGF、纤维连接蛋白(FN)mRNA及蛋白的表达水平.结果:单纯心肌细胞组对CTGF、FN均有低水平的基础分泌,在予以TGF-β1诱导后表达水平显著升高(P＜0.01);而在靶向特异性RNAi后,上述因子的表达均被显著抑制(P＜0.01);并且纤维化因子FN的表达水平与促纤维化因子CTGF的表达显著相关.结论:心肌细胞可自主低水平分泌或诱导后高表达CTGF及下游纤维化因子FN,提示心肌细胞主动参与了心肌纤维化及心脏重塑过程;而通过RNAi靶向抑制CTGF后可阻抑心肌细胞分泌下游纤维化因子,进一步提示CTGF是促心肌纤维化的关键性细胞因子,而RNAi 是一种特异高效的很有前途的干预手段.【总页数】5页(P422-426)【作者】郎明健;杨汉东;闵新文;曾秋棠;郭敏;李健【作者单位】郧阳医学院附属东风医院心内科,湖北,十堰,442008;郧阳医学院附属东风医院心内科,湖北,十堰,442008;郧阳医学院附属东风医院心内科,湖北,十堰,442008;华中科技大学同济医学院协和医院心内科,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院协和医院心内科,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院协和医院心内科,湖北,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R542.2+3【相关文献】1.心肌细胞结缔组织生长因子的表达及TGF-β1对其表达的影响 [J], 郭敏;郎明健;曾秋棠;杨汉东;闵新文2.腺病毒载体RNA干扰抑制结缔组织生长因子表达及其抗纤维化作用 [J], 郝春秋;贾战生;彭梅娟;谢玉梅;周云;魏欣;马力;王九萍;张岩;白雪帆3.辛伐他汀对结缔组织生长因子诱导大鼠心肌细胞肥大的影响及其与ERK1/2的关系 [J], 刘慧;卢少平;尚福军;牛晓琳;艾永飞;赵连友4.结缔组织生长因子、血管内皮生长因子、缺氧诱导因子-1α在胰腺癌中的表达及临床意义 [J], 郑刚;刘建生;智仁厚5.结缔组织生长因子诱导大鼠心肌细胞肥大的作用及其与细胞外信号调节激酶1/2的关系 [J], 刘慧;赵连友;郑强荪;薛玉生;尚福军;刘少伟;张丽娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HCN离子通道对Fontan循环下发生房性心动过速的作用周万平;吴近近;鲁亚南;钱咿娇;李奋【摘要】目的:探讨HCN离子通道对Fontan循环下发生房性心动过速的作用.方法:通过外科手术建立Fontan比格犬模型,术前及术后1周行心脏超声测量右心房大小,穿刺测量右心房和肺动脉压力,行右心房组织病理学检查观察右心房组织的纤维化程度.使用TaqMan实时定量PCR检测右心房肌细胞中HCN2和HCN4 mRNA表达水平,Western blot 检测右心房肌细胞中 HCN2和HCN4蛋白表达水平,全细胞膜片钳技术检测右心房肌细胞If通道电流.结果:共18只犬进行手术,其中存活5只,Fontan术后存活1周犬右心房内径较术前增加[(17.08±1.73) mm对(13.90±1.25) mm, P<0.01],右心房压力增高[(17.80±2.39) mmHg对(8.40±1.14) mmHg, P<0.01],肺动脉压力无明显变化[(12.60±2.41) mmHg对(13.00±2.74) mmHg, P>0.05].模型犬右心房组织纤维化程度较对照组增加(P<0.05);模型犬术后右心房心肌细胞HCN2和HCN4 mRNA表达水平均较对照组升高(P均<0.05),HCN2和HCN4的蛋白表达水平均较对照组升高(P均<0.05);HCN通道电流较正常对照组增大,钳制电压为-140 mV时,模型组和对照组电流密度分别为(-1.98±0.14) pA/pF和(-1.09±0.09) pA/pF, P<0.01.结论:Fontan循环下心房肌细胞HCN离子通道表达上调,HCN电流增大,可能参与房性心动过速的发生.%Objective:To explore the role of HCN channel in the mechanism of atrial tachycardia in Fontan circulation.Methods:The Fontan canine model was created by surgical procedure.Subjected to open-chest study, the size of right atrium, right atrial pressure and pulmonary artery pressure were observed before and 1 week after operation.The fibrosis of right atrium was assessed by histopathology.HCN2 and HCN4 mRNA and proteinexpression of right atrial myocytes was detected by Taqman real-time RT-PCR and western blot.Whole cell patch-clamp technique was used to detect the If channel current of right atrial myocytes.Results:Eighteen dogs received the operation, and 5 dogs survived from Fontan operation.The atrial diameter [(17.08±1.73) mm vs.(13.90±1.25) mm, P<0.01] and right atrial pressure [(17.80±2.39) mmHg vs.(8.40±1.14) mmHg, P<0.01] increased in dogs survived 1 week after Fontan operation, while pulmonary artery pressure had no obvious change [(12.60±2.41) mmHgvs.(13.00±2.74) mmHg, P>0.05].The right atrial fibrosis of model group was more severe than the control group (P<0.05).The expressions of HCN2 and HCN4 mRNA and protein in right atrial myocytes of model group were higher than those of control group (all P<0.05).The whole cell patch-clamp recording demonstrated that If increased in the model group compared to the control group [(-1.98±0.14) pA/pF vs.(-1.09±0.09) pA/pF, HP=-140 mV, P<0.01].Conclusion:Increased If caused by upregulation of HCN channel may promote atrial tachycardia in Fontan circulation.【期刊名称】《国际心血管病杂志》【年(卷),期】2017(044)004【总页数】6页(P215-220)【关键词】HCN离子通道;Fontan循环;房性心动过速【作者】周万平;吴近近;鲁亚南;钱咿娇;李奋【作者单位】200127 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心脏中心;200127 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心脏中心;200127 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心脏中心;200127 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心脏中心;200127 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心脏中心【正文语种】中文Fontan即右房-肺动脉连接术，是治疗三尖瓣闭锁、单心室等复杂紫绀型心脏病的首选治疗方案，因Fontan医生发明此术式而得名[1]。

决奈达隆和胺碘酮对大鼠肝脏功能及组织的影响赵圣刚;陈善浆;张冉;赵侠;江力勤【期刊名称】《中国心脏起搏与心电生理杂志》【年(卷),期】2013(027)005【摘要】目的研究决奈达隆、胺碘酮对大鼠肝脏功能和组织的影响.方法随机选择雄性SD大鼠30只,分为对照(NC)组,决奈达隆(DR50)组,胺碘酮(AM50)组,每组10只.每天专业灌胃器给药1次,DR50组和AM50组给药剂量均为50 mg·kg-1·d-1,对照组给予等容积生理盐水,给药14周.给药期间观察SD大鼠一般状况,每周测体重,于2周,10周,14周末抽取静脉血检测谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(AKP),总蛋白(TP),甘油三酯(TG)的变化.14周末处死称取肝脏重量,计算脏器系数,并行肝脏病理组织检查.结果三组体重增长速度相当,AM50组肝脏重量及脏器系数大于其他两组.实验过程中AM50组和DR50组ALT,AST均小于NC 组,10周可见NC组AKP水平小于其他两组;AM50组TP水平于14周轻度大于其他两组;DR50组TG水平2周高于其他两组,10周TG水平较前升高,大于其他两组;14周可见三组TG水平较前明显降低,以DR50组为著.病理检查可见AM50组肝脏部分空泡样变性,DR50组脂肪样变性,电镜检查可见线粒体损伤.结论胺碘酮和决奈达隆未引起体重下降和明显肝功能变化,但可导致肝细胞的线粒体微小变化.胺碘酮可造成肝脏重量增加,胆汁分泌障碍,决奈达隆可引起脂质淤积.【总页数】4页(P441-444)【作者】赵圣刚;陈善浆;张冉;赵侠;江力勤【作者单位】浙江省嘉兴市第二医院心内科,浙江嘉兴314000;浙江省温州市第二人民医院心内科,浙江温州325000;浙江省嘉兴市第二医院心内科,浙江嘉兴314000;浙江省嘉兴市第二医院心内科,浙江嘉兴314000;浙江省嘉兴市第二医院心内科,浙江嘉兴314000【正文语种】中文【中图分类】R972+2【相关文献】1.盐酸决奈达隆对家兔体重和甲状腺功能及肝功能的影响 [J], 陈善浆;赵圣刚;张玲玮;蒋芬芬;张冉;江力勤2.多烯磷脂酰胆碱逆转胺碘酮与决奈达隆诱发肝功能异常的实验研究 [J], 赵圣刚;许建江;张祥宇;张冉;江力勤3.胺碘酮与决奈达隆诱发脂质代谢紊乱的机制研究 [J], 赵圣刚;许建江;孙凤娟;张祥宇;张冉;江力勤4.胺碘酮与决奈达隆诱发脂质代谢紊乱的机制研究 [J], 赵圣刚;许建江;孙凤娟;张祥宇;张冉;江力勤5.决奈达隆与胺碘酮对心房颤动射频消融术后窦性心律的维持作用比较 [J], 宋昆鹏;孙漾丽;石海莉;陈珂;郭素萍;张晶晶;李艳;秦立;韩凌;陈瑞雪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠心肌梗死后HCN表达的变化及普伐他汀的干预刘廷容;余强;吴雪晖【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2008(30)14【摘要】目的了解急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后心室肌HCN2、HCN4的mRNA和蛋白质表达的变化趋势,探讨普伐他汀对AMI后心室肌HCN2、HCN4变化的影响。

方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立AMI模型,将存活的20只大鼠按随机数字表法分为24h组、1周组、4周组和普伐他汀组,每组5只,同时于各时间点均设立假手术组,每组5只。

取右室心肌组织样本,用Real-timePCR检测HCN2、HCN4 mRNA的表达,用Western blot检测HCN2、HCN4蛋白质表达。

结果4周组和普伐他汀组HCN2 mRNA及蛋白质表达,HCN4 mRNA表达均高于假手术组(P<0.05);普伐他汀组HCN2 mRNA及蛋白质表达明显低于4周组(P<0.05)。

各组均未检测到HCN4蛋白质表达。

结论AMI 后4周心室肌HCN2、HCN4表达增高;普伐他汀能抑制AMI后HCN2表达的上调,而对HCN4无明显影响。

【总页数】3页(P1346-1348)【关键词】心肌梗死;普伐他汀;起搏电流【作者】刘廷容;余强;吴雪晖【作者单位】重庆医科大学附属第二医院心血管内科,重庆400010;第三军医大学西南医院骨科,全军矫形外科中心,重庆400038【正文语种】中文【中图分类】R394.2;R542.22【相关文献】1.大鼠小肠缺血改变后电生理及HCN-1表达的变化 [J], 章鹏宇;朱琳;王景杰2.犬急性心肌梗死后起搏通道HCN表达动态变化及胺碘酮对其表达的影响 [J], 蔡贤刚;周芳;彭贤波3.生脉散、越鞠丸、失笑散加减后中药复方干预心肌梗死大鼠心室肌血管紧张素Ⅱ和醛固酮含量及血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA表达的变化 [J], 周迎春;吴依芬;张学森4.心房颤动大鼠心房肌HCN2、HCN4表达及青山健心片的干预作用 [J], 焦华琛;郑书敏;李运伦;高金超;张辛欣;钟霞5.大鼠急性心肌梗死后梗死周边区HCN通道蛋白表达的动态变化 [J], 张玉;佘强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

决奈达隆的药动学及临床研究概况
孟祥业;金仲品
【期刊名称】《当代医学》
【年(卷),期】2010(016)033
【摘要】决奈达隆是新抗心律失常药,为新型苯并呋喃衍生物,具有多通道阻滞的电生理特性.大规模Ⅲ期临床试验证实,决奈达隆能使心房颤动(Af)或心房扑动(AF)的复发时间延长、复发率降低,并使Af或心房扑动的心室率减慢,降低心血管发病率及病死率.该药酎受性好,QTc间期延长不明显,对肺,甲状腺,肝、眼和神经系统无毒性反应,常见的不良反应为消化系统症状.决奈达隆可选择性用于Af/AF的治疗.但可使重度心力衰竭及左室功能不全患者病死率升高,可致胎儿畸形和乳儿生长迟缓,因此,对心力衰竭,左心室功能不全以及孕妇,哺乳妇属忌用.
【总页数】2页(P32-33)
【作者】孟祥业;金仲品
【作者单位】256200,山东省邹平县计划生育妇幼保健服务中;256600,山东省滨州职业学院
【正文语种】中文
【相关文献】
1.胺碘酮与决奈达隆诱发脂质代谢紊乱的机制研究 [J], 赵圣刚;许建江;孙凤娟;张祥宇;张冉;江力勤
2.决奈达隆治疗心房颤动应用进展 [J], 黄勇淇
3.胺碘酮与决奈达隆诱发脂质代谢紊乱的机制研究 [J], 赵圣刚;许建江;孙凤娟;张
祥宇;张冉;江力勤
4.原料药粒径对盐酸决奈达隆片体外溶出行为的影响 [J], 张卫香;徐艳;章剑虹;王兵
5.决奈达隆与胺碘酮对心房颤动射频消融术后窦性心律的维持作用比较 [J], 宋昆鹏;孙漾丽;石海莉;陈珂;郭素萍;张晶晶;李艳;秦立;韩凌;陈瑞雪
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