应用QC-PCR技术研究高效菌株Rhodococcus ruber Em1在废水处理中的作用

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一种赤红球菌发酵方法及其作为佐剂在动物疫苗中的应用[发明专利]

专利名称：一种赤红球菌发酵方法及其作为佐剂在动物疫苗中的应用
专利类型：发明专利
发明人：付家栋
申请号：CN201910034485.9
申请日：20190114
公开号：CN109666609A
公开日：
20190423
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种赤红球菌(CGMCC NO.17012 Rhodococcus ruber.GD0704A)的特有发酵工艺及其不同剂型佐剂制备工艺及作为佐剂在动物疫苗中的用途，该红球菌株分离自养殖场，经单菌落克隆纯化，鉴定获得，本发明提供了该菌株灭活制品作为动物疫苗佐剂应用时特有的发酵工艺，并提供了含该菌株及其制品的不同剂型佐剂制备工艺。

经动物实验证实，采用上述工艺制备的佐剂制品用于单价或多联多价动物疫苗时，特别是新城疫灭活疫苗，禽流感灭活疫苗，猪瘟活疫苗具有明确的非特异免疫增强作用，具体表现为动物疫苗诱导的抗体峰值水平显著提高，产生保护性抗体水平的时间提前，抗体维持期延长，增强动物疫苗的免疫效果。

申请人：付家栋
地址：510630 广东省广州市天河区长兴路天鹅花苑135号A10-503
国籍：CN
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一株樊庆笙氏红球菌及其获取方法与应用[发明专利]

专利名称：一株樊庆笙氏红球菌及其获取方法与应用专利类型：发明专利
发明人：刘丽,程欢,董雅凤,张东华,伍建榕,李进斌
申请号：CN202210111109.7
申请日：20220129
公开号：CN114507620A
公开日：
20220517
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一株樊庆笙氏红球菌（Rhodococcusqingshenggii）Srq‑21及其获取方法与应用，属于微生物应用技术领域。

樊庆笙氏红球菌（Rhodococcusqingshenggii）Srq‑21，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCCNo.23566，所述樊庆笙氏红球菌（Rhodococcusqingshenggii）Srq‑21属于真细菌界，放线菌门，棒杆菌目、诺卡菌科、红球菌属。

获取方法包括分离、筛选、纯化工序，应用为所述的樊庆笙氏红球菌（Rhodococcusqingshenggii）Srq‑21在制备作为促进植物生长的单一固氮菌种菌剂中的应用。

申请人：西南林业大学
地址：651709 云南省昆明市白龙寺300号
国籍：CN
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基因工程技术原理与应用

基因工程技术原理与应用(总分：1046.00，做题时间：90分钟)一、填空题(总题数：51，分数：198.00)1.BarnH Ⅰ是识别6个核苷酸的酶，其切割产物的平均长度的理论值是 1。

（分数：1.50）填空项1:__________________ （正确答案：40）解析：2.通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的大小不同的片段，可以构建显示该区域各限制酶切位点位置的 1。

（分数：1.50）填空项1:__________________ （正确答案：限制酶切图谱）解析：3.EcoK是Ⅰ类限制性内切酶，分子组成是α2β2γ。

α亚基的作用是______；β亚基的作用是______；γ亚基的作用是______。

（分数：4.50）填空项1:__________________ （正确答案：限制修饰识别）解析：4.个体之间DNA限制性片段长度的差异称为 1。

（分数：1.50）填空项1:__________________ （正确答案：限制性片段长度多态性）解析：5.限制性内切核酸酶的命名原则是：第一个字母来自______；第二、三两个字母来自______；第四个字母则表示______。

（分数：4.50）填空项1:__________________ （正确答案：属名种名菌株名）解析：6.在限制性内切核酸酶切反应管中添加各种成分后，需要离心数秒钟，其目的是______和______。

（分数：3.00）填空项1:__________________ （正确答案：混匀防止部分酶切）解析：7.为了进行部分酶切可以采用下列措施：______、______和______等。

（分数：4.50）填空项1:__________________ （正确答案：降低酶量缩短反应时间增大反应体积）解析：8.限制性内切核酸酶的识别序列分别由4、6、8对碱基组成，它们在DNA序列上的切割频率的理论值分别是______、______和______。

ERIC-PCR技术在平菇菌株鉴定中的应用

ＨＥＰｉｘｎｅ — ｉ，ＬＩＷｅ，ＣＨＥＮＧｎＧＵＯｎ，ＨＥＮｉ — ｎＵｉＹａ，ＨｅｇＳＪｎｗｅ
（．ｏｌｇｆＦｏｎｏｎｉｅｒｇ，ＺｅｇｈｕＩｓｉｔｏｉｈｎｕｔ，Ｚｅｇｈｕ４００１ＣｌｅｏｏｄａｄＢｉｅｇｎｅｉｅｎｈｎｚｏｎｔｕｅｆＬｇｔｌｄｓｔ￣ｈｎｚｏ５０２，Ｃｉａｈｎ；
２．ｏｏｙＩｓｉｕｅｏｅａａｅｙｏｃｅｃｓＢｉｌｇｎｔｔｔｆＨｎｎＡｃｄｍｆＳｉｎｅ，Ｚｈｎｚｕ４５０８，Ｃｈｎｅｇｈｏ００ｉａ；
３ＣｌｇｆＬｆｃｅｃｓ．ｏｌｅｏｉＳｉｎｅ，Ｈｅａｇｉｕｔｒｌｉｅｓｙｈｎｚｏ５０２，ＣｉａｅｅｎｎＡｒｌａｖｒｉ，Ｚｅｇｈｕ４００ｃｕＵｎｔｈｎ）
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＴｈｐｌｃｔｏｆＥＲＩＰＣＲｎｉｅｉｉａｉｎｏｕｔａｅｔａｎｓｏｙｔｒｍｕｈｒｏｗａｅａｐｉａｉｎｏＣ— ｏｄｎｔｃｔｆｃｌｉｔｄｓｒｉｆｏｓｅｓｏｍｓｆｏｖｓｕｅｔｄｉｄ．ＴｈｅｕｔｕｇｓｅｈｔｔｍｐｉｅｎｆＥＲＩＰＣＲｆ２ｕｔｖｔｄｓｒｉｆｏｓｅｅｒｓｌｓｓｇｅｔｄｔａｈｅａｌｄｂａｄｓｏｉｆＣ— ｏ２ｃｌｉａｅｔａｎｓｏｙｔｒｍｕｈｏｍｎｎｔａｎｏｅｔｎｌｄｏｅｒｌａｎｄｓａｌｔｉｈｒｐｔｔｎａｄｈｇｌ— ｓｒｏａｄｏｅｓｒｉｆＬｎｉｕａｅｄｓｗｅｅｃｅｒａｔｂｅｗｉｈｇｅｅｉｉｎｉｈｐｏｙｈｏｍｏｐｓｓＡｔｌｖｌ１ｏｅｃｌｄｄｓａｃｌｔｒｃｍｂｉｅｏｌｓｅｎｌｓｓ３ｔｓｅｔａｎｒｒｈｉｍ．ｅｅ５ｆｒｓａｅｉｔｎｅｃｕｓｅｏｎｆｃｕｔｒａａｙｉ，２ｅｔｄｓｒｉｓｗｅｅｃｕｔｒｄｉｔｒｕｓ：ｓｒｉｓｏｅｒｔｓｓｒａｕｒｌｓｅｅｎｏｔｅｆｒｔａｄｓｃｎｒｕ，ｌｓｅｅｎｏ８ｇｏｐｔａｎｆＰｌｕｏｕｏｔｅｔｓｗｅｅｃｕｔｒｄｉｔｈｓｎｅｏｄｇｏｐｓｉ

牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表达及活性分析

牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表达及活性分析付世新;齐长学;罗春海;张丽;王瑶【摘要】为真核表达牛乳溶菌酶,本研究在通过酵母偏爱密码子改造并人工合成LYZ1基因的基础上,将LYZ1基因经克隆构建了高效表达具有生物活性牛乳溶菌酶的分泌型表达载体pPICZα-A-LYZ1,将其经Sac Ⅰ酶切线性化后电转化毕赤酵母菌株GS115中,通过Zeocin筛选和PCR鉴定后的阳性重组菌用甲醇诱导60 h后,进行SDS-PAGE和western blot鉴定,用溶壁微球菌对其进行活性检测,并对其进行体外抑菌效果检测分析.结果表明:分泌表达的重组目的蛋白约16 km,而且抗血清具有良好的反应原性.活性检测表明,培养液中重组溶菌酶活性达到2 842 u/mL.体外抑菌试验结果表明,重组牛乳溶菌酶对标准葡萄球菌及大肠杆菌菌株具有较好的抗菌作用,而对无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌作用较弱.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2010(032)006【总页数】5页(P428-431,454)【关键词】牛乳溶菌酶;毕赤酵母;分泌表达;抗菌活性【作者】付世新;齐长学;罗春海;张丽;王瑶【作者单位】黑龙江八一农垦大学,动物科技学院,黑龙江,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学,动物科技学院,黑龙江,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学,动物科技学院,黑龙江,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学,动物科技学院,黑龙江,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学,动物科技学院,黑龙江,大庆,163319【正文语种】中文【中图分类】S852.42;S858.31溶菌酶(lysozyme)作为天然非特异性抗菌物质，广泛分布于植物、动物和微生物中[1]。

普遍存在于哺乳动物的泪液、唾液、血浆、乳汁、体液、组织细胞内以及胎盘中。

不仅具有杀菌作用，还具有增强免疫力、减缓炎症[2]、促进组织修复[3]等多种功能。

溶菌酶在细菌性疾病的防治过程中取得了较好的预防和治疗效果，与抗生素相比显示出疗效高、无毒副作用、不产生耐药性等优势，成为研发抗生素替代制剂的热点。

qc微生物试题及答案

qc微生物试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 微生物学是研究（）的科学。

A. 微生物的形态和结构B. 微生物的生理和代谢C. 微生物的分类和进化D. 以上都是答案：D2. 细菌的基本形态有（）。

A. 球状、杆状、螺旋状B. 球状、杆状、链状C. 球状、杆状、棒状D. 球状、杆状、线状答案：A3. 病毒的复制方式是（）。

A. 二分裂B. 有丝分裂C. 无丝分裂D. 复制答案：D4. 真菌的细胞壁主要由（）组成。

A. 纤维素B. 几丁质C. 肽聚糖D. 木质素答案：B5. 以下哪种微生物不属于原核生物（）。

A. 细菌B. 放线菌C. 支原体D. 酵母菌答案：D6. 微生物的培养基中通常需要添加（）。

A. 碳源B. 氮源C. 无机盐D. 以上都是答案：D7. 微生物的耐热性与其（）有关。

A. 细胞壁结构B. 细胞膜结构C. 蛋白质结构D. 核酸结构答案：A8. 微生物的致病性与其（）有关。

A. 毒素的产生B. 侵袭力C. 黏附能力D. 以上都是答案：D9. 微生物的分类依据包括（）。

A. 形态特征B. 生理生化特性C. 遗传特性D. 以上都是答案：D10. 微生物的鉴定方法包括（）。

A. 形态学鉴定B. 生化鉴定C. 分子生物学鉴定D. 以上都是答案：D二、填空题（每题2分，共20分）1. 微生物的分类单位从大到小依次为：__________、__________、__________、__________、__________。

答案：界、门、纲、目、种2. 微生物的培养方法包括：__________培养、__________培养、__________培养。

答案：液体、固体、半固体3. 微生物的纯种分离方法包括：__________、__________、__________。

答案：稀释涂布法、平板划线法、稀释摇管法4. 微生物的计数方法包括：__________、__________、__________。

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作者简介：黄
玲（’<-# = ），女，湖南人，硕士研究生，从事环境微生物学研究。 0123+,：6439>,+9>7 23+, : +2: 3;: ;9
其他作者：谭周亮接受日期：#$$.1$-1##；修回日期：#$$.1’’1$< 收稿日期：#$$.1$.1’.；
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（$&&0）（$） *0 9\:25 7E?@ *, 2. ] F =%,2 >/%(#)/#.#:/%2 ?/1/%2
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!
!"!
材料和方法
材料
收集沉淀，溶解于 /& （ #&""ABF7 3GE<， #&"E?， 7 3! ! 缓冲液中。+:2 经过稀释后 #""ABF7 !+32， H9 IJ&）用于 R(6>(8 分析。采取基因组 +:2 纯化试 !"#"$ 粗提 +:2 的纯化：剂盒纯化粗提 +:2。 !"$ 引物设计利用 >GE"=G >G="E=G /J& 软件设计基于 !"# 菌株 #-, G8:2 基因序列的通用引物和特异引物。 9SL 前 $# 个碱基对应于 !"# 菌株 !"#T 为杂合引物，后 #. 个碱基对 #-, G8:2 基因的 #%. U #/.VH 位点，应于 %&/ U %$%VH 位点。试验所设计的引物如表 # 所示。
加入 #J&"7 提取液（ #&&""ABF7 3GE<， &J/@ 污泥， #&&""ABF7 !+32， #&&""ABF7 :;(B， #K HABNOE?NBHNGG6 和 &J/@ 玻璃珠（直径 *-& ；漩涡 ABEPA?=， $K ,+,） "） ! 每振荡 #"E? 于冰上静置 #"E?，在仪剧烈振荡 /"E?，取上清，加入 #F#& 体积冰冷 #%&&&GF"E? 下离心 /"E?，的乙酸钠（ /"ABF7），冰上放置 #&"E? 后，在 #*&&&GF 取上清，等体积酚：氯仿：异戊醇抽 "E? 离心 #&"E?，提，弃下层取上清，加入 #$&&&GF"E?， *Q 离心 #&"E?，等体积的异丙醇，沉淀 %&"E?， #$&&&GF"E? 离心 !")
!" 卷 # 期 #$$" 年 ! 月 ! 日
微生物学报 !"#$ %&"’()&(*(+&"$ ,&-&"$
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竞争性模板的构建
3W= <DG;D=@N A[ YA?<DGCYDE?@ YA"H=DEDAG ]
标准曲线的构建
将不同浓度的 !"# 细胞悬液加入到 &J$@ 无菌污泥中，使其终浓度分别达到 #J*I M #&I ， /J.* M #&I ， $J%I M #&. ， .J/ M #&. ， #J. M #&#& 和 $JI/ M #&#& (T\F@，
基金项目：国家 “-.% 计划” （#$$#((.$’’/$）
" 通讯作者。 0123+,： ,+456)7 849 : +2: 3;: ;9
本研究利用竞争性定量 ?@A 技术对南充炼油废水处理系统中投加的高效菌数量动态变化进行定量分析，结合处理效果如 @LE 去除量，进而分析该菌株在处理系统中发挥的作用。为生物强化技术处理炼油厂废水污染实时监控和高效菌株作用的发挥提供了可靠依据。
应用 !"#$"% 技术研究高效菌株 ./(0("(""12 ’1)3’ &’( 在废水处理中的作用
% 黄玲’，，李习武’ ，李旭东# ，刘双江’ ，刘志培’" （’ 中国科学院微生物研究所（中国科学院成都生物研究所
#
北京
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’$$$-$）北京 ’$$$%<）
成都
.’$$!’）（中国科学院研究生院
摘
要：应用竞争性定量 ?@A （ B@1?@A）技术，对石化废水处理系统中投加的高效芳烃降解菌株 !"#$#%#%%&’ (&)*(
进行 02’ 菌株定量 02’ 数量变化趋势及其作用进行了分析。持续 / 个月从处理系统中不定期采集活性污泥样品，测定和处理系统的效果分析。结果表明，基于 ’.C *AD( 基因的特异引物具菌种水平的特异性，用其扩增污泥总并对产物克隆测序，所扩增的产物中 .#F#G 为 02’ 菌株 ’.C *AD( 基因片段。检测得到活性污泥样品中含 ED(，表明所投加的高效降解菌在处理系统中长期稳定存活并繁殖； 02’ 菌株数量范围为 %F! H ’$/ & !F% H ’$- @IJK>， 02’ 菌量与 @LE 去除量之间的相关性系数（ !# ）高达 $F-<，表明 02’ 菌量与系统的处理效果具有明显的正相关性。这些结果说明，投加的 02’ 菌株在高浓度多环芳烃等污染物存在的条件和复杂菌群环境中，仍能长期稳定地存活并繁殖，在废水处理系统中发挥重要的作用。关键词：废水处理；高效菌；生物强化技术；B@1?@A；作用分析中图分类号： B<%文献标识码： ( 文章编号： $$$’1.#$<（#$$"）$#1$%$"1$.
检测和定量的有效方法。竞争性定量 ?@A （ @N2)OP+P+TO B439P+P3P+TO ?N,Q2O*38O @63+9 AO3;P+N9，技术是基于某一细菌所特有的 ED( 序列 B@1?@A）进行细菌定量的分子生物学方法。已经被国外许多研究者应用于环境微生物群体的绝对组成和结构的