富马酸测定方法（标准曲线法）
标准曲线测定方法：
1.精确称取0.5000g富马酸用水溶解定容至1000ml，配置成0.5mg/ml的母液，混合均匀。
2.分别吸取母液1，2，3，4，5ml定容至100ml, 即成5，10，15，20，25mg/l(ug/ml)的富马酸标准溶液，用紫外分光光度计于240nm下测各自吸光值。
做标准曲线。
为方便计算，标准曲线以0D位横坐标，C为纵坐标。
可以得到0D-C线性关系方程。
下图为以水为溶媒测定的富马酸标准曲线
富马酸浓度测定
发酵液中富马酸浓度较低，离心后发酵液稀释200倍（或适当倍数，保证吸光值在0.1-1.3之间，测定较为准确），于240nm下测吸光值，根据公式转换并乘以稀释倍数即为富马酸含量。
（注意单位换算）。
食品中己二酸、富马酸等酸度调节剂的测定（食品安全国家标准）食品安全国家标准食品中己二酸、富马酸等酸度调节剂的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了食品中酒石酸、乳酸、L-苹果酸、柠檬酸、丁二酸、富马酸和己二酸的测定方法。
本标准适用于果蔬汁饮料、碳酸饮料、固体饮料、胶基糖果、饼干、糕点、果冻、水果罐头等食品中7种酸度调节剂的测定。
2 原理试样直接用水稀释或用乙醇溶液提取后，经强阴离子交换固相萃取柱净化，注入高效液相色谱仪，经反相色谱柱分离，根据保留时间定性，外标法定量。
3 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.2无水乙醇（CH3CH2OH）。
3.1.3磷酸（H3PO4）：色谱纯。
3.1.4氢氧化钠（NaOH）。
3.1.5聚酰胺粉：柱层析用，100目～200目。
3.1.6强阴离子固相萃取柱（SAX）：1 000 mg，6 mL。
使用前依次用5 mL甲醇、5 mL水活化。
3.2 试剂配制3.2.1氢氧化钠溶液（0.1 mol/L）：称取4 g氢氧化钠，加水至1 000 mL，溶解，混匀。
3.2.2乙醇溶液（20+80）：量取乙醇20 mL，加水80 mL，混匀。
3.2.3 乙醇溶液（40+60）：量取乙醇40 mL，加水60 mL，混匀。
3.2.4 甲醇溶液（5+95）：量取甲醇5 mL，加水95 mL，混匀。
3.2.5 磷酸-甲醇溶液（2%）：量取磷酸2 mL，加甲醇至100 mL，混匀。
3.2.6 磷酸溶液（0.1%）：量取磷酸0.1 mL，加水至100 mL，混匀。
3.3 标准品3.3.1 乳酸标准品（C3H6O3），纯度≥99%。
3.3.2 酒石酸标准品（C4H6O6），纯度≥99%。
3.3.3 L-苹果酸标准品（C4H6O5），纯度≥99%。
3.3.4 柠檬酸标准品（C6H8N7），纯度≥98%。
