儿童血液真菌抗原检测的应用研究

血浆(1，3)-β-D-葡聚糖检测对血液病患者侵袭性真菌病的诊断价值近年来，由于抗生素的广泛应用和免疫功能受损等因素，侵袭性真菌病（IFD）的患病率逐年增加，成为造成血液病患者死亡的主要原因之一。

IFD的诊断和治疗一直是临床医生面临的难题之一，因此研究新的诊断方法显得尤为重要。

近年来，人体内存在的某些营养物质在侵袭性真菌病的恶化过程中是否会发生变化成为了关注的焦点之一。

本文将对IFD的诊断方法进行探讨，并讨论血浆（1，3）-β-D-葡聚糖（BG）检测的诊断价值。

1. IFD的诊断方法IFD的诊断一直是临床医生面临的难题之一，传统的诊断方法主要依靠组织或体液样本的真菌培养和特异性染色，然而这些方法多存在着时间长、缺乏准确性等问题，且组织或体液样本的采集也存在操作难度大等问题。

近年来，有许多新的IFD诊断方法被提出，包括：血清（1，3）-β-D-葡聚糖测定方法（BDG）、侵袭性真菌PCR检测、CT及MRI等影像学方法。

其中，BDG作为一种新的IFD诊断方法，近几年受到了越来越多的关注。

2. BG的来源与代谢BG是葡萄糖多聚体的一种，是真菌细胞壁的重要成分，并且往往被认为是生物被攻击时真菌的一种关键源泉。

BG的来源主要包括真菌、植物和细胞。

BG在代谢中具有重要的功能，其中真菌体内的BG主要由酵母菌、念珠菌和曲霉菌产生。

3. 血浆（1，3）-β-D-葡聚糖（BG）检测BG在IFD患者的血液中含量较高，可以作为IFD诊断的一种指标。

研究表明，在IFD患者血液中BG阳性率明显高于健康人群。

BG检测采用碳水化合物的免疫测定原理。

BG检测的阳性判定通常根据本体经验和不同的测试平台。

例如，一个常用的测试平台BG test Miraclon电化学免疫测定法提供了与BG特异性抗原结合的硫酸盐酯酶标记物，将样品在金电极的表面余留。

结合的复合物可以被亚硝酸盐还原生成硫酸盐酯酶还原物。

硫酸盐酯酶还原物的电信号记录和与标准曲线的比较将被用于测量BG水平。

血液中微生物的检测及其临床应用血液检测是诊断许多疾病的重要手段，而血液中微生物的检测更是成为了现代医学中不可或缺的一部分。

微生物是指细菌、真菌、病毒等单细胞生物，其中一些可能引起人类疾病。

通过血液检测微生物的存在、种类和数量，可以有效诊断和治疗疾病，从而对患者的康复起到重要作用。

一、血液中微生物的检测方法血液中微生物的检测方法主要可以分为直接检测和间接检测两种。

1、直接检测直接检测是指直接从血液中检测微生物的存在和数量。

其中最常用的方法是血液培养，也是临床上应用最广泛的方法。

血液培养可以分为常规血培养和特殊血培养两种。

常规血培养是指将患者的静脉血标本放入一个含有适当营养物质的培养基中，培养时间通常为24-48小时。

若培养结果呈阳性，则可以得到微生物的种类和数量，从而作出诊断。

但是，常规血培养对于一些微生物的检测可能无法做出准确的判断，如难以生长的微生物、可能已经被患者抗生素所抑制的微生物等。

特殊血培养可以对某些特定的病原微生物进行高效快速的检测。

例如，对处于低水平的感染期的微生物进行检测时，需要进行体外扩增，如血液PCR检测（聚合酶链式反应）以及MALDI（基质辅助激光解析蛋白谱）等技术，可以大大提高检测的敏感性和特异性。

2、间接检测间接检测是指检测血液中的微生物产生的反应或者特定的体内免疫学反应，以推断其存在。

其中，最常用的方法是血清学检测。

鉴于人体在感染过程中会产生特定的抗体，检测血液中的血清可以确定微生物是否存在，并确定其数量。

血清学检测分为两种类型：滴度抗体检测和标记抗体检测。

由于血清学检测不能产生立即结果，因此它主要用于快速排除或确认微生物存在的情况下进行初步的筛查或作为支持性证据。

二、血液中微生物的临床应用血液中微生物检测对于疾病的诊断以及治疗的制定和实施起到至关重要的作用。

它可以帮助医生快速准确地诊断疾病，并及时采取正确的治疗措施。

1、感染性疾病的诊断感染性疾病是指由微生物感染引起的各种疾病，包括细菌感染、真菌感染和病毒感染等。

G 试验和GM 试验对儿童恶性血液病侵袭性真菌感染的诊断价值李泰阶，李萌，郭世辉，梁宏洁，李山，秦雪，刘志明（广西医科大学第一附属医院，南宁530021）摘要：目的探讨血清（1，3）-β-D-葡聚糖含量检测（G 试验）和半乳甘露聚糖含量检测（GM 试验）对儿童血液病患者侵袭性真菌感染（IFI ）的诊断价值。

方法选择儿童血液病患儿246例，根据是否诊断IFI 分为感染组27例和非感染组219例。

采用动态试管比浊法和酶联免疫吸附法检测患者血清（1，3）-β-D-葡聚糖含量和半乳甘露聚糖含量。

计算G 试验、GM 试验单独和联合应用诊断IFI 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。

结果G试验诊断儿童血液病IFI 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别是88．89%、91．78%、57．14%和98．53%；GM 试验分别是66．67%、71．23%、22．22%和94．55%；G 试验、GM 试验并联分别是100%、65．75%、26．47%和100%；G 试验、GM 试验串联分别是55．56%、97．26%、71．43%和94．67%。

G 试验、GM 试验串联诊断IFI 特异性和阳性预测值与其他试验比较有统计学差异（P 均＜0．05）。

结论G 试验、GM 试验对儿童血液病患者IFI 具有一定的诊断价值，G 试验和GM 试验串联分析对IFI 的诊断价值更高。

关键词：血液病，儿童；侵袭性真菌感染；（1，3）-β-D-葡聚糖；半乳甘露聚糖doi ：10．3969/j．issn．1002-266X．2015．05．002中图分类号：Ｒ725．2文献标志码：A文章编号：1002-266X （2015）05-0004-03Diagnostic value of G /GM assay for invasive fungal infections in pediatric patients with hematological malignanciesLI Tai-jie ，LI Meng ，GUO Shi-hui ，LIANG Hong-jie ，LI Shan ，QIN Xue ，LIU Zhi-ming （The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University ，Nanning 530021，China ）Abstract ：ObjectiveTo evaluate the diagnostic value of serum （1，3）-β-D-glucan （G assay ）and galactomannan （GM assay ）for invasive fungal infections in pediatric patients with hematological malignancies．MethodsTotally 246pe-diatric patients with hematological malignancies were selected to our study．According to invasive fungal infections diagnos-tic criteria ，they were divided into two groups ：infection group （n =27），non-infected group （n =219）．The concentration of serum （1，3）-β-D-glucan and galactomannan was detected by kinetic turbidimetric limulus test and ELISA．The sensi-tivity ，specificity ，positive predictive value and negative predictive value of GM test and G test and the combination of GM and G tests were calculated in diagnosing IFI．ＲesultsThe sensitivity ，specificity ，positive predictive value and negativepredictive values of G assay for the diagnosis of pediatric patients with invasive fungal infections were 88．89%，91．78%，57．14%and 98．53%，respectively ；GM assay results were 66．67%，71．23%，22．22%and 94．55%，respectively ；The results of G assay with GM assay using parallel analysis were 100%，65．75%，26．47%%and 100%，respectively ；Using series analysis were 55．56%，97．26%，71．43%and 94．67%，respectively．ConclusionsThe G assay and GMassay were both useful in diagnosis of invasive fungal infections in pediatric patients with hematological malignancies．Using series analysis of G assay and GM assay can improve diagnostic specificity and positive predictive value．Key words ：hematological malignancies ，pediatric ；invasive fungal infections ；（1，3）-β-D-glucan ；galactomannan 基金项目：广西壮族自治区卫生厅资助项目（桂卫Z2012092）；广西壮族自治区卫生厅资助项目（桂卫Z2013014）。

一类特制
10
非培养方法优点
快速报告结果 敏感性提高 取材简便 多以真菌在致病状态产生的物质为检
测标志物，结果阳性提示有致病性 定量检测可判断感染严重程度及疗效
评估
一类特制
11
非培养诊断的方法简介
真菌细胞壁成分
（1-3） - β- D-葡聚糖检测（G试验）
真菌抗原检查
半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原 （GM)
β1,3
b1,6 葡聚糖
磷脂 双分 子层
b1,3葡聚糖 合成酶
几丁质
麦角固 醇
一类特制
羊毛固醇C－14去甲基化酶
14位还原和7－8位异构酶
角鲨烯环氧化酶
17
1,3-β-D-葡聚糖结构
➢ 葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁
糖蛋白类
中
➢ 1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成
葡聚糖
分50%以上，是真菌细胞壁
几丁质
上的特有成分 ➢ 以1,3-β-糖苷键连接的葡萄糖
一类特制
30
小结
1,3-β-D-葡聚糖是侵袭性真菌感染早期 诊断、疗效观察、预后评估有价值的实 验诊断。
1,3-β-D-葡聚糖检验其敏感性优于GM 侵袭性真菌感染的诊断与治疗是一个复
杂过程，实验室与临床应密切联系，为 临床医生提供诸如显微镜检查、真菌培 养、血清学标志物等多方面信息。
一类特制
一类特制
22
1,3-β-D-葡聚糖相关影响因素
以下情况可出现假阳性：
➢ 使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其 他含有葡聚糖的材料；
➢ 静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品； ➢ 链球菌血症； ➢ 操作者处理标本时存在污染； ➢ 使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食