下载文档原格式
下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴应激反应的中枢控制摘要应激反应是所有生物对紧张性事件的适应性反应，对生物的存活具有十分重要的意义。
应激反应的主要特征是下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴激活。
HPA轴激活的中枢控制十分复杂。
海马参与整合感知的信息、解释环境信息的意义及定调行为反应和神经内分泌反应。
杏仁核是应激性行为反应以及自主神经和神经内分泌反应的执行部位。
下丘脑室旁核则有直接激活HPA轴的作用。
负反馈机制、下丘脑局部回路和细胞因子也可能参与了调节HPA轴活动。
应激反应见于各类生物，人类的应激反应尤为精细和重要。
接受或感知到环境或躯体变化，不管是负面的如威胁生命的情境，还是积极的如受到奖赏，都可以引起机体发生相应的行为和生理变化。
应激反应引起的生理变化包括自主神经活动改变如交感神经活动增强和神经内分泌活动改变如下丘脑多个内分泌轴的激活。
下丘脑-垂体-肾上腺皮质（HPA）轴激活及由此引起糖皮质类固醇（GC）分泌增加，是应激反应的最重要特征。
HPA轴激活是机体对应激的最重要的适应性反应，GC的分泌有利于机体动员能量和保持内环境的稳定。
然而，慢性应激有很多病理效应，很多躯体疾病如高血压、哮喘和结肠炎等以及很多精神障碍如创伤后应激障碍、抑郁症、神经性厌食、精神分裂症、焦虑症和阿尔采末病等的发病与慢性应激有关。
用大鼠研究结果表明，慢性应激可引起海马损害，其主要机制是长期高GC血症的神经毒性作用［1，2］。
一、室旁核——HPA轴激活的直接控制部位下丘脑的室旁核（PVN）是HPA轴活动的直接控制部位。
在受到应激刺激时，PVN的小细胞神经元分泌多种促进促肾上腺皮质激素分泌的激素，其中最重要的是促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）和精氨酸加压素（AVP）。
CRH和AVP经垂体门脉血流到达垂体，并刺激垂体分泌促肾上腺皮质激素（ACTH）；后者经血液循环到达肾上腺，刺激肾上腺皮质合成和分泌GC。
PVN在启动HPA轴活动中的作用为很多研究所证实。
CRH在发热中调节作用的研究进展李妍;赵书芬【期刊名称】《解剖科学进展》【年(卷),期】2004(10)4【摘要】CRH是下丘脑分泌的由 4 1个氨基酸组成的神经内分泌激素 ,广泛分布于神经系统及其它组织中。
继Vale等 (1981)首次测出其氨基酸序列后 ,人们认识到CRH具有广泛的生物学活性 ,尤其在体温调节方面CRH作为中枢介质在发热过程中发挥双重调节作用。
一方面 ,CRH参与细胞因子(IL 1β、 6 )性发热、应激性发热、以及其它致热性物质 (5 TH、含血清素物质、PFPF及EGTA)的生热作用。
另一方面 ,CRH也具有解热作用 ,可促进内源性解热肽ACTH及α MSH的释放。
阐明CRH在发热中的调节作用对进一步认识发热和寻找解热途径将提供新的思路。
【总页数】4页(P318-321)【关键词】CRH;发热;调节作用;解热作用;中枢;首次;ACTH;氨基酸序列;α-MSH;应激性【作者】李妍;赵书芬【作者单位】中国医科大学生理教研室【正文语种】中文【中图分类】Q575;R714【相关文献】1.瞬发裂变中子铀矿测井中超热中子探测器的优化研究 [J], 王新光;刘丹;王国保2.疏肝饮对肝郁脾虚大鼠CRH和NT的调节作用 [J], 潘相学3.用于核素在线瞬发伽马数据测量的热中子源设计 [J], 江新标;邬泽鹏;苏春磊;张文首;于青玉4.有缓发中子的均匀弥散型反应堆内热中子有效增殖系数的求解方法的介绍 [J], 裴德强5.中医药治疗原发免疫性血小板减少症免疫细胞调节作用的研究进展 [J], 李晓靖;鲍计章;朱文伟;邵雅聪;汪凯;李捷凯;周永明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同血型大鼠电刺激后c-fos基因表达的差异李伟;于建设;辛学东;韩志强;王茂春【期刊名称】《临床麻醉学杂志》【年(卷),期】2012(28)8【摘要】目的研究不同血型大鼠电刺激后c-fos基因表达的差异.方法选取雄性Wistar大鼠40只,类人A血型和类人B血型各20只,均分别有10只大鼠以2mA 直流电行电刺激,刺激时限1 s,间隔30 s,持续15 min.采用免疫组化方法和实时荧光定量RT-PCR方法分别检测大鼠脑内c-fos蛋白的分布以及mRNA水平相对表达量.结果电刺激后大鼠c-fos阳性信号均呈增强趋势,且类人A血型大鼠强于类人B血型大鼠(P＜0.05).电刺激后类人A血型大鼠脑c-fos mRNA表达明显低于类人B血型大鼠(P＜0.05).结论电刺激后大鼠c-fos基因表达增强,类人A血型大鼠更加明显.%Objective To study the expression of c fos after electrical stimulation in different blood type rats. Methods Ten similar human A and 10 human B blood type male Wistar rats were stimulated by eleclricity for 15 minC2 mA for 1 s, interval SO s) and another 10 type A ,-ind another 10 typc B rats were as control. Immunohistochemistry and real time RT-PCR were used in this study for the c-fos expression at different Mood type rats. Results There was an increasing trend of positive c fox expression after electric stimulation. The expression of c-fos was more obvious in blood type A rats than in blood type B rats. In addition, the mRNA levels of c-fos showed significant dedine in hoth electrical stimulation groups(P<0. 05).Conclusion The expression of c-fos will be increased after electric stimulation, with more significance in blood type A rats【总页数】2页(P807-808)【作者】李伟;于建设;辛学东;韩志强;王茂春【作者单位】010050 内蒙古医学院第一附属医院麻醉科;010050 内蒙古医学院第一附属医院麻醉科;010050 内蒙古医学院第一附属医院麻醉科;010050 内蒙古医学院第一附属医院麻醉科;010050 内蒙古医学院第一附属医院外科【正文语种】中文【相关文献】1.愈风汤对大鼠不同时程脑缺血后大脑新皮质、尾壳核、海马及下丘脑室旁核c-fos基因表达的影响 [J], 许沛虎;涂晋文2.出生后不同鼠龄大鼠视皮质差异基因表达谱分析 [J], 杨柳;瞿远珍;李岱;吴开力3.电刺激隐神经对大鼠脊髓c-fos基因表达的影响 [J], 杨宇;杨静玉;郭丽;商丽宏;陈魁敏;吴敏范;韩清4.吗啡对电刺激隐神经诱发大鼠扣带回前部神经元c-fos基因表达的影响 [J], 吴敏范;王策;杨宇;郭丽;商丽宏;陈魁敏;李娜然5.大鼠内脏大神经电刺激后C－Fos在中枢神经系统中的表达 [J], 王宏琰;李宽;黄显奋;黄登凯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
下丘脑-垂体-肾上腺轴大鼠下丘脑CRH mRNA表达钟历勇＊ 沈自尹＊＊ 郑仲承＊＊＊ 陈晓红＊＊(＊南京铁道医学院 南京,210009) (＊＊上海医科大学华山医院 上海,200040) (＊＊＊中国科学院上海生化研究所 上海,200050)摘要 目的 探讨下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)受抑状态下下丘脑CRH mRNA的表达。
方法 本研究采用较新颖的逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)化学发光定量法,检测了HPA轴受抑大鼠下丘脑室旁核CRH m RNA的表达。
结果 HPA轴受抑大鼠下丘脑室旁核CRH m RNA的表达量明显比正常对照组减少,且RT-P CR化学发光定量法能较灵敏地检测出CRH mRNA低水平表达含量。
结论 这种新的P CR定量分析技术为在分子水平研究神经内分泌功能紊乱提供了灵敏、准确、可靠的方法。
关键词 促肾上腺皮质激素释放激素;信使核糖核酸;逆转录多聚酶链反应化学发光定量法;大鼠 分类号 R453.9 神经内分泌免疫网络是维持机体稳定的重要调控系统。
HPA轴功能受抑与应激、衰老以及医源性糖皮质激素的大量应用所引起的神经内分泌免疫功能紊乱疾病密切相关〔1〕。
由于本研究神经内分泌功能紊乱的动物模型属HPA轴受抑,长期以来一直是用常规的核酸检测实验方法如原位杂交、Northern印迹杂交等技术较难检出HPA轴受抑状态下CRH mRNA的表达含量,现改用较为新颖的逆转录多聚酶链反应化学发光定量法,较灵敏地定量研究了HPA轴受抑大鼠下丘脑CRH mR-NA的表达,为在分子水平研究神经内分泌功能紊乱奠定了基础。
1 材料与方法1.1 动物模型的建立 雄性SD大鼠20只,体重230250g,由上海医科大学动物中心提供,室温22±1℃,光照与黑暗时间为每12h更替,随机分为两组,模型组按10mg/kg皮下注射溶于灭菌豆油的皮质酮,每天1次,连续14d,对照组以等体积灭菌豆油皮下注射。
促皮质素释放激素（CRH）兴奋试验
促皮质素释放激素（CRH）兴奋试验介绍：
促皮质素释放激素(CRH)兴奋试验是检查促皮质素释放激素分泌是否正常，判断被检查的人是否有肾上腺皮质机能减退,下丘脑病变,原发性肾上腺皮质功能减退,异位ACTH分泌综合征等病变。
促皮质素释放激素（CRH）兴奋试验正常值：
正常人15分钟可出现ACTH分泌增高，皮质醇高峰在30～60分钟。
促皮质素释放激素（CRH）兴奋试验临床意义：
异常结果：垂体ACTH分泌细胞破坏所臻继发性肾上腺皮质机能减退患者对CRH 兴奋试验无反应;下丘脑病变患者为延迟反应;原发性肾上腺皮质功能减退时ACTH基础值增高，并对CRH刺激反应过强;异位ACTH分泌综合征时肿瘤自主性分泌ACTH，可对本试验无反应。
需要检查的人群：疑似肾上腺皮质机能减退、下丘脑病变、原发性肾上腺皮质功能减退、异位ACTH分泌综合征等症状患者。
促皮质素释放激素（CRH）兴奋试验注意事项：
不合宜人群：暂时不明
检查前禁忌：注意正常的饮食，注意正常的作息，防止内分泌混乱。
检查时要求：积极配合医生的要求。
①部分患者注射后出现颜面潮红，或呼吸急促，脉搏增快及低血压等。
②试验前2周停用肾上腺皮质激素或影响肾上腺、脑垂体分泌功能的药物。
促皮质素释放激素（CRH）兴奋试验检查过程：
方法：
①清晨空腹安静状态下抽血查ACTH和皮质醇，然后给予CRH1μg/kg体重静脉注射。
②注射后15、30、60和90分钟抽血查ACTH和皮质醇。
针刺镇痛机制中内源性CRH对中枢5-HT含量的影响陈新勇;王健;张皓;蓝竹梅【期刊名称】《山东中医杂志》【年(卷),期】2011(30)9【摘要】目的:探讨内源性促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)参与针刺镇痛可能的中枢作用机制。
方法:以佐剂性关节炎(AA)大鼠为炎症痛模型,以痛阈为指标观察AA大鼠鞘内注射抗CRH血清对电针镇痛的影响,用高效液相电化学法检测AA大鼠下丘脑5-羟色胺(5-HT)含量,观察电针夹脊穴时鞘内注射抗CRH血清对下丘脑5-HT含量的影响。
结果:电针夹脊穴时AA大鼠鞘内注射抗CRH血清可明显降低痛阈和下丘脑5-HT含量(P<0.05)。
结论:内源性CRH参与电针镇痛的机制可能和中枢5-HT含量有密切关系。
【总页数】3页(P654-656)【关键词】电针;夹脊穴;促肾上腺皮质激素释放激素;5-羟色胺【作者】陈新勇;王健;张皓;蓝竹梅【作者单位】山东中医药大学【正文语种】中文【中图分类】R246.9【相关文献】1.滋水清肝饮对围绝经期抑郁模型大鼠下丘脑CRH mRNA及5-HT含量的影响[J], 冯秋霞;韩献琴;李永乐;金季玲2.嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中5-HT及5-HIAA含量的影响及其机制 [J], 李鸿梅;何海涛;李昆;刘剑凯;洪敏3.针刺对5-HT7R跨膜信号通路的影响与其改善PCPA失眠中枢5-HT障碍机制的关联性探讨 [J], 罗本华;黄羽;吴小玲;李玉秋4.大鼠杏仁中央核内注射CRH对血压的影响及其中枢机制初探 [J], 郭涓;殷伟平;黄伟秋;徐斌;钱忠明5.中枢及外周5-HT、5-HIAA在针刺镇痛后效应中的作用 [J], 陈瑾;刘光谱;唐勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中枢CRH在大鼠应激性体温升高和LPS性发热机制中的作用王华东1, 屈 洋1, 王彦平1, 严玉霞2, 付咏梅1, 陆大祥1, 李楚杰1(暨南大学医学院1病理生理教研室,2生物化学教研室,广东广州510632)[摘要] 目的:进一步观察中枢促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)在大鼠应激性体温升高和脂多糖(LPS)性发热中枢机制中的作用。
方法:第三脑室微量注射C RH受体拮抗剂 -helical CRH(9-41)和LPS,测定大鼠结肠温度及脑腹中隔区精氨酸加压素(AVP)含量。
结果:生理盐水对照组大鼠体温明显升高,最大升幅为(0 88 0 31)。
第三脑室注射CRH受体拮抗剂 -helical CRH(9-41)10min后再注射生理盐水组,90min内大鼠结肠温度未见明显波动,90min后体温开始上升,1 5h体温反应指数(TRI1 5)明显低于生理盐水对照组,而脑腹中隔区AVP含量和TRI3 5与对照组比较均没有明显差别。
第三脑室注射300ng的LPS引起大鼠结肠温度双相性升高,其TRI3 5明显高于生理盐水对照组。
事先向第三脑室注射 -helical CRH(9-41)(5 g)再注射LPS组,TRI3 5明显高于LPS组,而脑腹中隔区AVP含量明显低于LPS组。
结论:CRH介导应激诱导的早期体温升高。
C RH可能通过诱导脑腹中隔区AVP的生成限制大鼠LPS性发热。
在大鼠LPS性发热中,CRH可能是一种双相作用分子,一方面本身介导发热体温升高,另一方面又诱生发热体温负调节介质而限制发热体温的升高。
[主题词] 促肾上腺皮质激素释放激素;精氨酸加压素;脂多糖;发热;体温调节[中图分类号] R364 6 [文献标识码] A近年来的研究表明,中枢促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)在发热体温调节的中枢机制中发挥重要的作用。
致热性细胞因子白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、I L-6能刺激下丘脑合成释放CR H,第三脑室注射C RH可引起实验动物体温明显升高,阻断中枢CRH的作用可完全抑制IL-1、IL-6、I L-8诱导的发热反应[1,2],表明中枢C RH是一种重要的中枢发热介质,介导发热时的升温反应。
摘要摘要目的：探讨迷走神经电刺激（Vagus nerve stimulation,VNS）对脑外伤（Traumatic brain injury,TBI）昏迷大鼠的促醒效果及Orexins在上述效应中的调节机制。
方法：将120只SD大鼠随机分为四组：空白对照组、TBI组、刺激组(TBI+VNS)和拮抗剂组(TBI+VNS+SB334867)。
通过VN S刺激脑外伤后昏迷大鼠，通过意识状态六级评分法评估大鼠的行为学变化，并于刺激结束后6h、12h、24h，用ELISA、Western-blot、免疫组织化学技术检测各组大鼠前额叶皮质Orexin-A和OX1R的表达。
结果：TBI组中8只（8/30）大鼠出现翻正反射，刺激组中20只（20/30）大鼠出现翻正反射，拮抗剂组中12只（12/30）大鼠出现翻正反射；Orexin-A的含量在各时间点中呈现：拮抗剂组<空白对照组<TBI组<刺激组（P<0.05），而OX1R的表达在各时间点缺乏一致性，6h:空白对照组<拮抗剂组<TBI组<刺激组（P<0.05）;12h:空白对照组<TBI<拮抗剂组<刺激组（P<0.05）;24h:拮抗剂组<空白对照组<TBI组<刺激组（P<0.05）。
结论：VNS可改善脑外伤昏迷大鼠意识状态水平，其作用机制可能与上调前额叶皮层中Orexin-A和OX1R表达水平有关。
关键词：Orexin-A；OX1R;迷走神经电刺激；脑外伤；昏迷促醒；前额叶皮层AbstractABSTRACTObjective:To investigate the wake-promoting effects of vagus nerve stimulation (VNS)in comatose rats caused by Traumatic brain injury(TBI)and its mechanisms. Method:SD rats were randomly assigned to four different groups:control, sham-stimulated(TBI),stimulated(TBI+VNS),and an antagonist (TBI+SB334867+VNS)group.The effects of VNS in a rat model of TBI-induced coma were observed.Additionally,ELISA,western blot,and immunohistochemistry techniques were used to detect the levels of Orexin-A and orexin1receptor(OX1R) expression in prefrontal cortex(PFC)tissue.Result:Results have shown that8of30rats were awakened in the TBI group,20of 30awakened in the stimulated group and12of30rats were awakened in the antagonist group.ELISA results indicated that the concentration of orexin-A in the different groups showed the following trend:antagonist group<control group< model group<stimulated group at6,12,and24hours(P<0.05).However,The relative levels of OX1R expression are different in each time point,at6hours:control group<antagonist group<model group<stimulated group(P<0.05);at12hours: control group<model group<antagonist group<stimulated group(P<0.05);at24 hours:antagonist group<control group<model group<stimulated group(P<0.05). Conclusion:Our findings suggest that VNS can promote consciousness recovery in rats which are comatose due to a traumatic brain injury.Additionally,upregulation of OX1R and orexin-A expression in the prefrontal cortex may be one mechanism involved in the consciousness-promoting effects of VNS.Key words:orexin-A;OX1R;vagus nerve stimulation;traumatic brain injury; wake-promoting;prefrontal cortex.目录目录第1章引言 (1)1.1脑外伤的概述 (1)1.2昏迷的主要发病机制 (1)1.3Orexin-A及OX1R对睡眠-觉醒的影响 (2)1.4迷走神经电刺激 (2)第2章材料与方法 (4)2.1一般资料 (4)2.1.1主要仪器 (4)2.1.2主要试剂及材料 (4)2.1.3主要试剂配方 (6)2.2实验方法 (7)2.2.1实验动物及分组 (7)2.2.2建立脑外伤后昏迷动物模型 (7)2.2.3侧脑室注射 (8)2.2.4迷走神经电刺激方法 (8)2.2.5组织蛋白提取 (9)2.2.6酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测前额叶皮层orexin-A表达变化 (9)2.2.7Western-blot技术检测大鼠前额叶皮层的OXIR表达 (11)2.2.8免疫组织化学技术检测大鼠前额叶皮层的OXIR表达 (12)2.2.9数据统计与分析 (14)第3章结果 (15)3.1大鼠的行为学变化 (15)3.2ELISA分析 (16)3.3Western-blot分析 (17)3.4免疫组织化学分析 (18)第4章讨论 (19)目录4.1VNS与昏迷促醒 (19)4.2Orexins与昏迷/觉醒 (19)4.3VNS促醒作用机制 (21)第5章结论与展望 (23)5.1结论 (23)5.2进一步研究方向 (23)致谢 (24)参考文献 (25)攻读学位期间的研究成果 (28)综述 (30)中英文缩略词表中英文缩略词表缩写英文全称中文全称TBI MNS OX1R OX2R PFC SCN ARAS TMN BF LHA NE PB GLU LDT PPT cSCS TMS tDCS DBS REM Traumatic Brain InjuryVagus Nerve StimulationOrexin Receptor1Orexin Receptor2Prefrontal CortexSuperchiasmatic nucleusAscending reticular activatingTuberomammillary NucleusBasal ForebrainLateral Hypothalamus AreaNoradrenalineParabrachial nucleusGlutamateLaterodorsal tegmental nucleiPedunculopontine tegmental nucleiCervical spinal cord stimulation,Transcranial Magnetic StimulationTranscranial direct current stimulationDeep brain stimulationrapid eye movement创伤性脑损伤正中神经电刺激安立新1受体安立新2受体前额叶皮质视交叉上核脑干上行网状激活系统乳头体核基底前脑下丘脑外侧区去甲肾上腺素臂旁核谷氨酸背外侧背盖核脑桥背盖核颈部脊髓硬膜外刺激经颅磁刺激经颅直流电刺激深部脑刺激快动眼睡眠周期第1章引言第1章引言1.1脑外伤的概述据统计调查，我国颅脑损伤（traumatic brain injury,TBI）的年发生率为100-200/10万人,且TBI发病率以每年4.67%速度增加，同时专家也预测，TBI 在2020年将成为全球第三大疾病负担[1]。
大鼠重型颅脑损伤后早期下丘脑CRH表达增加及其意义杨雷;赵建华;柏顺明;钱希颖;金立德;官从锦【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2012(020)009【摘要】目的探讨在大鼠重度颅脑损伤后下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的表达和分泌.方法应用多功能小型生物撞击机致大鼠重度颅脑损伤,采用免疫组化和PCR等技术进行检测下丘脑CRH表达的变化和规律.结果重度颅脑损伤后1h CRH表达明显增加,主要分布于室旁核和视上核,且表达呈逐渐增加的趋势,在伤后2-6h表达增高显著.结论重度颅脑损伤后早期炎症、应激反应中,下丘脑产生的CRH存在明显的增加,可能参与全身免疫炎症反应.【总页数】3页(P5-6,11)【作者】杨雷;赵建华;柏顺明;钱希颖;金立德;官从锦【作者单位】昆明理工大学附属昆华医院暨云南省第一人民医院神经外科,云南昆明650032;昆明理工大学附属昆华医院暨云南省第一人民医院神经外科,云南昆明650032;昆明理工大学附属昆华医院暨云南省第一人民医院神经外科,云南昆明650032;昆明理工大学附属昆华医院暨云南省第一人民医院神经外科,云南昆明650032;昆明理工大学附属昆华医院暨云南省第一人民医院神经外科,云南昆明650032;昆明理工大学附属昆华医院暨云南省第一人民医院神经外科,云南昆明650032【正文语种】中文【中图分类】R651.15【相关文献】1.大鼠肺部严重创伤后早期下丘脑c-fos和CRH1受体的表达 [J], 张云东;朱佩芳;王正国;赵继宗;周继红;许民辉;邹咏文;黄显凯;粟永萍;吴海2.大鼠胸部严重创伤后早期下丘脑CRH表达的实验研究 [J], 张云东;朱佩芳;王正国;周继红;许民辉;邹咏文;黄显凯;粟永萍;赵继宗3.大鼠严重创伤后早期下丘脑c-fos和CRH mRNA的表达 [J], 张云东;朱佩芳;王正国;周继红;许民辉;邹咏文;黄显凯;粟永萍;赵继宗4.大鼠严重创伤后早期下丘脑CRH的表达 [J], 张云东;朱佩芳;王正国;赵继宗;周继红;许民辉;邹咏文;黄显凯;粟永萍5.CRH刺激大鼠下丘脑脑片CRH及CRH1R的表达研究 [J], 陈立朝;许民辉;周继红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
文章编号:100025404(2004)1321161204 论著CRH刺激大鼠下丘脑脑片CRH及CRH1R的表达研究陈立朝1,许民辉2,周继红1 (第三军医大学大坪医院野战外科研究所:1第四研究室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室, 2神经外科,重庆400042) 提 要:目的 通过CRH刺激大鼠下丘脑脑片,探讨下丘脑CRH和CRH1R在下丘脑中的分布和表达规律。
方法 采用大鼠下丘脑脑片实验模型,运用免疫组织化学技术,观察CRH刺激大鼠下丘脑脑片后CRH和CRH1R在下丘脑中的分布和表达规律。
结果 CRH刺激下丘脑脑片后下丘脑CRH和CRHlR含量明显增多,而CP2154526、H89可显著抑制CRH 和CRHlR的增加。
结论 CRH刺激下丘脑脑片后增多的CRH与CRHlR结合后进一步引起下丘脑神经元CRH和CRHlR 表达增加。
提示在严重创伤应激反应中,CRH通过PK A途径实现对下丘脑神经元CRH的表达的超短正反馈调节。
关键词:应激反应;下丘脑脑片;促肾上腺皮质激素释放激素;蛋白激酶A;cAMP反应元件结合蛋白;CP2154526;H89;大鼠 中图法分类号:R338.27;R392.2;R977.11 文献标识码:AExpression of corticotropin2releasing hormone and corticotropin2releasing hormone type 1receptor in rat hypothalamic slice after stimulation with corticotropin2releasing hor2 mone stimulation in vitroCHE N Li2zhao,X U Min2hui,ZH OU Ji2hong(S tate K ey Laboratory of T rauma,Burns and C ombined Injury,1Department4,Institute of Surgery Research,2Department of Neurosurgery,Daping H ospital,Third Military Medical University,Chongqing400042,China) Abstract:Objective T o investigate the distribution and expressions of corticotropin2releasing horm one(CRH) and corticotropin2releasing horm one type1receptor(CRH1R)in rat hypothalamus after CRH stimulation of hypotha2 lamic slices in rats in vitro.Methods M odel of rat hypothalamic slices was em ployed in this study.The distribution and expressions of corticotropin2releasing horm one and corticotropin2releasing horm one type1receptor in rats hypo2 thalamus after CRH stimulation of the hypothalamic slices in rats in vitro were observed by immunocytochemical meth2 od.Re sults An increased intracellular concentration of CRH and CRH1R in the hypothalamus was observed after CRH stimulation of the hypothalamic slices in rats.CP2154526or H89significantly inhibited the expressions of CRH and CRH1R.Conclusion An increased concentration of CRH conjugated with CRH1R can induce m ore expressions of CRH and CRH1R in rats hypothalamus after CRH stimulation of the hypothalamic slices in rats in vitro,suggesting that the expression of CRH in hypothalamic neuron may have regulatory effect on the ultrashort positive feedback through PK A pathway. K ey w ords:stress;hypothalamic slice;corticotropin2releasing horm one;protein kinase A;cAMP response ele2 ment2binding protein;CP2154526;H89;rat 目前国内外对应激反应研究最多的是温度(热、冷)、束缚与制动、条件反射性电击足、母性行为应激(妊娠、生育、哺乳等)、疼痛、心理社会应激(如拥挤、剥 基金项目:国家重点基础研究发展规划资助项目(“973”项目)(G1999054201) Supported by the National K ey Basic Research and Development Plan of China(“973”Projects)(G1999054201) 作者简介:陈立朝(1971-),男,湖南省沅江市人,硕士,主治医师,主要从事严重创伤早期下丘脑的应激调控机制方面的研究,发表论文8篇。
电话:(023)68757243 收稿日期:2003207211;修回日期:2003210205夺控制权)等在体模型,应激后促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin2releasing horm one,CRH)在下丘脑2垂体2肾上腺皮质轴(hypothalamus2pituitary2adrenal axis, HPA)中发挥重要作用,它刺激垂体前叶合成和释放促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic horm one, ACTH)1,2。
HPA激活的中枢控制是十分复杂的,在这一系列神经内分泌调节过程中,下丘脑合成和释放的CRH起着关键的作用,它控制着HPA的兴奋水平。
随着对应激反应研究的深入,需要建立可控性和重复性1611第26卷第13期2004年7月 第 三 军 医 大 学 学 报ACT A AC ADE MI AE ME DICI NAE MI LIT ARIS TERTI AEV ol.26,N o.13Jul.2004较好的体外实验模型模仿在体创伤应激反应,研究HPA激活的关键因素CRH刺激下丘脑。
自从20世纪60年代Y amam oto等首次在嗅皮层脑片上记录到突触电位以来3,哺乳动物离体脑片技术有了很大发展,引起越来越多学者的关注.研究对象由早期的嗅皮层、新皮层、海马扩展到下丘脑、脑干、脊髓等部位。
本研究采用离体下丘脑脑片培养技术,通过CRH刺激大鼠下丘脑脑片,探讨CRH和促肾上腺皮质激素释放激素受体(corticotropin2releasing horm one type1receptor,CRH1R)在下丘脑中的表达,为深入研究严重创伤后应激反应奠定较好的动物模型基础。
1 材料与方法111 试剂 多聚甲醛(S igma);二氨基联苯胺(DAB)(S igma);T ritonx2100 (G ibco);脱氧锇胆酸钠(Serva);羊抗鼠CRH抗体(Santa Cruz);羊抗鼠CRHl受体抗体(Santa Cruz);HRP标记二抗(兔IgG)(北京中山生物技术公司);HRP标记二抗(山羊IgG)(S igma);SP 免疫组化试剂盒(北京中山生物技术公司);ABC免疫组化试剂盒(北京中山生物技术公司);CP154526(P fizer公司,Y uhpyng Chen博士惠赠);H89(Calbiochem)。
112 方法1.2.1 脑片模型的制作4 选用体质量180～250g雄性Wistar大鼠48只(由第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心提供),将大鼠快速断头,沿矢状缝剪开皮肤,剥去两侧顶骨、颞骨和硬脑膜,取出脑组织,置于0～4℃预先充氧(95%O2和5%C O2)饱和的人工脑脊液(ACSF)中.根据解剖标志(视交叉、乳头体为前后界,左右下丘脑沟为侧界,深约4 mm),制备含有下丘脑的脑组织块约4mm×4mm×4mm,用一种对组织无损伤的快速粘合剂将其粘于振动切片机推进台上,切片槽内倒入ACSF,浸没脑组织块,调整好切片刀的角度和振幅,沿冠状面切得约500μm厚的脑片。
人工脑脊液的成分:实验用ACSF为改良Y amam oto溶液,其中含有:NaC l124mm olΠL,K C l5mm olΠL,K H2P O41124mm olΠL,MgS O4 113mm olΠL,CaC l2211mm olΠL,NaHC O320mm olΠL和葡萄糖10 mm olΠL.该溶液经氧(95%O2和5%C O2)饱和后pH为713～715。
灌流装置及方法:灌流用浴槽的外槽内盛有自来水,经由直流恒温仪使水温保持在所需水平。
内槽为1个1ml的小室,内有水平放置的尼龙细丝网。
实验中,脑片置于尼龙网上,氧合的ACSF经蠕动泵以1～115ml/min恒速推动,由入水口进入内槽,浸没脑片;再由对侧的出口流出。
脑片在室温的人工脑脊液(ACSF)中平衡90min后移入内槽的小室中,缓慢升温至32～35℃,32～35℃的ACSF灌流(1～115ml/min)孵育60min后,用含刺激因素的ACSF灌流;或用含拮抗因素的ACSF灌流,30 min后用含拮抗因素及刺激因素的ACSF灌流。
实验期间始终向ACSF中通混合氧。
ACSF(脑片)温度由两台循环水浴调控(K F22,辽阳,C ole&Parmer,U1K)。
温度变化速率为(115±013)℃/min。
11212 动物及分组1121211 实验动物 成年雄性Wistar大鼠20只(由第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心提供),体质量180～250g,大鼠分笼饲养(6只/笼)于设定温度和定时光照(光照8:00～20:00)的房间,食物和水可自由摄取。
