刺革菌科4种药用真菌的ITS区序列分析

I TS 序列分析在药品微生物检验中真菌鉴定与控制中的应用研究房蕊,蒋波,范一灵,鲍英,徐伟东第一作者 Te:l (021)38839900-26204;E-m ai:l ru if ang1@126.co m(上海市食品药品检验所,上海201203)摘要 目的:通过ITS 序列相似性分析、系统发育关系分析和形态分类方法对无菌检验样品检出的两株真菌F162(GU 724349)和F927(GU 724350)进行了种类鉴定,并与实验室的环境真菌407(GU 724347)、413(GU724348)进行同源性分析。

方法:对样品的DNA 进行扩增和测序,获得真菌I T S 基因序列,并与G enBank 中相应的序列进行比对分析。

结果:真菌F162(GU 724349)和F927(GU 724350)的I T S 基因序列与G enBank 中P enicilli um sp .的序列相似性均为100%,与实验室的环境真菌407(GU 724347)、413(GU724348)的I T S 基因序列相似性均分别为93 80%,93 80%,93 63%,93 63%。

以N J 法构建的系统发育树显示无菌抽验样品检出的两株真菌与本实验室环境真菌同源性低,两者位于不同亚组。

结论:根据I T S 序列相似性分析、系统发育关系分析和形态特征观察的结果,将无菌检出菌鉴定为P enicilli um sp .。

关键词:青霉菌属;序列分析;系统发育关系;鉴定中图分类号:R 917文献标识码:A文章编号:0254-1793(2011)02-0302-04Application of I TS se quences i n identificati on andcontrol of fungi in phar m ace uticalm icrobi al testFANG Ru,i JI A NG Bo ,F AN Y i-ling ,BAO Y ing ,XU W e i-dong(Shanghai I n stitute f or Food and Drug Con tro,l Sh anghai 201203,Ch i na)Abst ract Objec tive :To i d entify t h e species of fung i F162(GU724349)and F927(GU724350)found i n phar m a ceuticalm icr obial test and analysis the i n ternal transcribed spacer (I TS)sequence si m ilarity bet w een the m w ith 407(GU724347)and 413(GU 724348)found i n the m icr obial laborator y .M et hod :The I T S sequence of the sa m ples w ere a mp lified and sequenced to analysis the si m ilarity w it h P enicillium sp .i n Genbank.R esults :The result o f sequence a nalysis showed that the si m ilarity o f I T S gene sequence is 100%bet w een F162(GU724349)and F927(GU724350)w ith Penicilli u m sp .i n Genbank ,and sequence si m ilarity of 93 80%,93 80%,93 63%and 93 63%w ith 407(GU724347)and 413(GU724348),respecti v e l y .The phylogenetic relationsh i p tree fr o m I TS gene sequence revealed t h e 407and 413w ere i n the different subgroup .Conclusion :The F162and F927were i d entifi e d as P enicillium sp .based on the m orpholog ical characteristics ,sequence analysis and phy l o genetic relationsh i p s .K ey w ords :P enicilliu m sp .;sequence analysis ;phy l o genetic re lationsh i p ;identification 在药品的无菌检测霉菌检测项目中,微生物实验室的环境洁净程度直接关系到检验结果的有效性和准确性。

基于ITS序列鉴别真菌类药材马勃及其混伪品张嘉丽;黄宇航;宋明;任阳阳;张梦婷;刘霞;孙伟;陈士林【摘要】目的:运用ITS序列鉴别真菌类药材马勃Lasiosphaera calvatia及其混伪品.方法:收集来自重庆、北京等9个地方的21份脱皮马勃、大马勃、紫色马勃样品,提取基因组DNA,经PCR扩增后双向测序.同时从GenBank上下载常见马勃药材混伪品的序列.将所有序列进行剪切校准拼接后分析,基于K2P(Kimura 2-Parameter)模型计算马勃及其混伪品的种内和种间遗传距离,并构建Neighbor-Joining(NJ)系统聚类树.结果:大马勃的ITS序列种内最大K2P遗传距离为0;脱皮马勃的ITS序列种内最大K2P遗传距离为0.003;紫色马勃的ITS序列种内最大遗传距离为0.003.大马勃与混伪品种间最小K2P遗传距离为0.019,脱皮马勃与混伪品种间最小K2P遗传距离为0.031,紫色马勃与混伪品种间最小K2P遗传距离为0.634.大马勃、脱皮马勃、紫色马勃的种内最大遗传距离均小于它们与混伪品的种间最小遗传距离.NJ树结果显示大马勃、紫色马勃、脱皮马勃各自聚为一支,表现出良好的单系性,能够与混伪品明显的区别开来.结论:基于ITS序列的条形码技术可以将马勃药材及其混伪品有效进行鉴别.【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2016(011)005【总页数】5页(P777-780,785)【关键词】马勃;混伪品;ITS;条形码【作者】张嘉丽;黄宇航;宋明;任阳阳;张梦婷;刘霞;孙伟;陈士林【作者单位】武汉理工大学化学化工与生命科学学院,武汉,430070;中国中医科学院中药研究所,北京,100700;武汉理工大学化学化工与生命科学学院,武汉,430070;安利(中国)植物研发中心,无锡,214145;武汉理工大学化学化工与生命科学学院,武汉,430070;武汉理工大学化学化工与生命科学学院,武汉,430070;武汉理工大学化学化工与生命科学学院,武汉,430070;中国中医科学院中药研究所,北京,100700;武汉理工大学化学化工与生命科学学院,武汉,430070;中国中医科学院中药研究所,北京,100700【正文语种】中文【中图分类】R282马勃Lasiosphaera calvatia为灰包科真菌脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii Reich.、大马勃Calvatia gigantea(Batsch ex Pers.)Lloyd、紫色马勃Calvatialilacina(Mont.et Berk.)Lloyd的干燥子实体，能够清肺利咽、止血，用于治疗风热郁肺咽痛，音哑，咳嗽；外治鼻衄，创伤出血[1]。

[基金项目] 浙江省档案局科研项目(2007-9)[作者简介] 燕勇(1974-),男,学士,主管技师,主要从事微生物检验工作。

=论著>r DNA -I TS 序列分析在真菌鉴定中的应用燕勇,李卫平,高雯洁,沈志英,王恒辉,陈黎霞(浙江省嘉兴市疾病预防控制中心,浙江嘉兴 314050)[摘要] 目的:通过对3株真菌的rDNA -I T S 序列进行分析,以探讨、说明基于核糖体RNA 基因(即rDNA )内转录间隔区(In ternal T ranscribed Spacer ,I T S)的多态性的序列分析(rDNA -I T S 序列分析)在真菌鉴定中的应用。

方法:通过PCR扩增与测序的方法测得待检真菌菌株的rDNA -ITS 序列,从GENBANK 获取相似序列,使用BLA S T 和DNAMAN 工具对r DNA -I TS 序列进行比对分析。

结果:1号真菌菌株与X y l a riales sp 1LM 40(属炭角菌目)同源性高,但尚不能鉴定到具体的属、种;2号真菌菌株可鉴定到种,为草酸青霉Penic illi u m oxa li cu m;3号真菌菌株可鉴定到种内组水平,为近平滑假丝酵母III 组(最新命名为Candida m etaps il o si s)。

结论:相对于传统的真菌形态学鉴定方法,rDNA -ITS 序列分析用于真菌鉴定更客观、省时、简便、快速,但目前也存在一定的应用限制(受基因库的完善程度、高度同源性序列的多少以及具体物种ITS 区的可变程度等影响)并不能鉴定出所有真菌,宜与传统的形态学鉴定方法相结合用于真菌鉴定。

[关键词] r DNA;内转录间隔区(ITS);PCR;测序;真菌;鉴定[中图分类号] R 44615 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2008)10-1958-04Application of r DNA I TS sequence analysis in fungus identificationYan Yong,L iW ei -p ing ,Gao W ei -jie ,Shen Zhi -y in g,W ang H eng-hui ,Chen L i -x iao (Jiax ing Cente r for D i sease Contro l and P reventi on ,Ji ax i ng 314050,Chi na)[Abstract] O bjective :T o introduce and illu m i nate t he applicati on o f r DNA I T S sequence ana l ysis i n f ungus i dentifica ti on on basis o f sequence and l eng t h poly m orph i s m s o f i nterna l transcr i bed spacer(I TS)i n ri bosoma l RNA gene(rDNA )1M ethods :T he three pend i ng fungus stra i ns c rDNA I T S sequences tested by PCR a m plifi cati on and sequenc i ng m e t hods were analyzed and co m-pared w ith si m ilar sequences fro m G E N BANK by N CB I BLAST on li ne too l and DNAMAN so ft w are 1Resu lts :N o 11f ungus stra i n had a h i gh hom ology w it h X y l a riales sp 1L M 40,bu t w as no t yet i den tifiab le on genus or spec ies l eve l o f taxonom ic c l assifi ca -ti on 1N o 12strai n w as i den tified as P en icilliu m oxalicu m,a genus l eve l 1N o 13strai n w as i dentified as Cand i da m etapsil os i s ,ne w desi gnati on of Candida parapsilosis group III ,a g roup l eve l i n spec ies re l a ti ve l y 1Conc l u si on :Compared w ith the traditiona lm or -pho l og ical i den tificati on m ethods ,the r DNA ITS sequence ana lysis i s m ore ob j ective ,ti m e-sav ing ,convenient ,and fast for fun -gus identificati on ,butw it h so m e appli ed li m its currently 1D epended on the perfecti on deg ree o f gene database ,the nu m ber o f h i gh-deg ree homo l ogy sequence ,t he var i ability ex tent of ITS reg i on of biolog ical i nd i v i duals and so on it can be app lied 1T hen ,it does not identif y all f ung ,i and shoul d be co m bi ned w ith the trad iti ona lm orpho l og i ca l identificati on m et hods for f ungus identificati on 1[K ey words] r DNA;Inte rnal transcr i bed spacer(ITS);PCR;Sequenc i ng ;F ungus ;Identifi cation 真核生物基因组中编码核糖体的基因包括28S r DNA 、5S r DNA 、18S rDNA 和518S r DNA 4种,它们在染色体上头尾相连、串联排列,相互之间由间隔区分隔。

ITS序列分析在真菌分类鉴定和分子检测中的应用
白树猛;田黎
【期刊名称】《畜牧与饲料科学》
【年(卷),期】2009(030)001
【摘要】笔者介绍了ITS序列结构特点,综述了ITS序列在植物病原真菌分类鏊定和分子检测中的应用,并对其应用前景进行了展望.
【总页数】3页(P52-53,189)
【作者】白树猛;田黎
【作者单位】青岛科技大学生物系,山东,青岛,266042;青岛科技大学生物系,山东,青岛,266042
【正文语种】中文
【中图分类】Q949.32;Q522.6
【相关文献】
1.ITS序列分析在真菌分类鉴定中的应用 [J], 陈剑山;郑服丛
2.ITS序列分析及其在植物真菌病害分子检测中的应用 [J], 赵杰
3.rDNA-ITS序列分析在植物病原真菌分类鉴定中的应用 [J], 李依韦;银玲
4.rDNA-ITS序列分析法与传统分类法相结合在真菌鉴定中的应用 [J], 朱洪庆;王盼盼;张萌;陈嘉慧;丁祥
5.ITS序列分析鉴定大型真菌在生物学野外实习中的应用 [J], 俞皓鸣;蔡毅鸣;王珂;程源九;肖义平;王英明;张文驹;乔守怡
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I T S序列分析在真菌分类鉴定中的应用陈剑山1,2,郑服丛1,2*(1.华南热带农业大学环境与植物保护学院,海南儋州571737;2.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南儋州571737)摘要综述了IT S序列分析技术的原理、特点及近年来在病原真菌分类鉴定上的应用,同时对IT S序列分析技术在真菌分类鉴定研究领域中的前景进行了展望。

关键词IT S;分类;鉴定中图分类号Q789文献标识码 A 文章编号0517-6611(2007)13-03785-02A pp lic a t ion o f I T S S e qu en c e s in F un g i C la ss ific a tio n an d Id e n t ific a tionCHEN J ia n-sh an e t a l(E n v ironm en t an d P lan t P ro tection C o llege,SCU T A,D an zh ou,H a i n an571737)A b s tra c t T h e pr in cip le,ch a racte r is tics an d th e app lica tion o f IT Ssequ en ce s infun g i class ifica tion an d iden tifica tion inrecen t ye ar s w ere sum m a rized.A nd its p rospe ct w a s pu t fo rw a rd.K e y w o rd s IT S;C la ssifica tion;Iden tifica tion真菌的分类鉴定是一项浩大的系统工程。

传统的真菌分类学主要按照真菌的形态学、生理生化特点、抗原构造等特征。

由于真菌的种类众多、个体多态性明显,因此传统的分类学指标常会得出假阳性或假阴性结果,给真菌的分类鉴定带来了一定的难度。

利⽤ITS序列鉴定真菌利⽤ITS序列鉴定真菌摘要：采⽤蘑菇提取的DNA及琼脂糖凝胶电泳检测，以ITS1和ITS2为引物构成的PCR反应体系对⽬的DNA⽚段（ITS1区）进⾏扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测后进⾏分析照相，测序。

随着核糖体Rdna ITS序列分析技术在菌物研究中的应⽤，⼀些分类地位不明确、亲缘关系不清楚的物种通过该技术得到了解决，⼀些重要的菌物遗传信息的到阐明。

关键词：ITS序列酵母菌 PCR 菌种鉴定1 材料与⽅法1.1材料与试剂：真菌组织（蘑菇）、菌丝体或孢⼦、氯仿-异戊醇（24：1）：现配现⽤。

70%⼄醇：⽤95%⼄醇配制，现配现⽤。

10×TAE溶液：1L溶液中含Tris1.2114g，EDTA29.22g，⽤HCl调pH⾄8.0。

1%琼脂糖凝胶：取1g琼脂糖溶于100ml1×TAE溶液中，微波炉加热⾄沸腾三次，CTAB 溶液、异丙醇，双蒸⽔，3MNaAc，PH5.2 20ug/RNaseA，特异性⽚段PCR扩增，ITS引物（F:CCGTAGGTGAACCTGCGG,R:TCCTCCGCTTATTGATATGC）。

1.2主要仪器与设备表⼀实验中使⽤的主要仪器仪器名称型号产地⽴式⾃控⾼压蒸汽灭菌器LDZX-40SSI 上海申安医疗器械⼚数显HH-4 国华电器有限公司电泳仪DYY-12 北京市六⼀仪器⼚制冰机AF200PSC50R ΜSA⽣物安全柜HFsafe 1200/C 上海⼒申科学仪器有限公司电冰箱BCD-219D 青岛海尔股份有限公司Sigma⾼速离⼼机3K30 Germany电⼦精密天平HR-200 上海精科天平酸度计DELTA302 上海电⼦可调电炉101RF-3 天津市泰斯特仪器有限公司双层恒温振荡器THZ-9511K 太仓市实验设备⼚紫外分析仪WD-9403C 北京市六⼀仪器⼚台式常温⾼速离⼼机Centrifuge 5415D Germany恒温⽔浴锅多型号Germany⽣化培养箱LRH-250 上海⼀恒科技有限公司基因扩增仪Palm-Cyeler Aµstralia电泳槽DYCZ-24A 北京六⼀仪器⼚1.3实验⽅法：真菌基因组DNA的提取（1）CTAB溶液在65℃⽔浴中预热（使⽤前加⼊1％巯基⼄醇），取适量（2）取适量蘑菇置于研钵中，加⼊液氮，⽤⼩杵磨制粉状，研磨期间及时添加液氮防⽌⾼温氧化。

4种乳菇属真菌的形态学与rDNA-ITS鉴定作者：田慧敏李江来源：《中国瓜菜》2024年第01期摘要：为明确内蒙古赤峰地区常见有毒乳菇种类，准确、快速地识别有毒乳菇，将采集的4个乳菇属Lactarius真菌标本采用传统形态学分类方法进行鉴定，同时提取子实体DNA，使用真菌通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增，用Blast对扩增产物纯化测序所得的序列进行比对，采用MEGA5.1软件构建系统发育树确定属和种。

结果表明，2种方法鉴定结果一致，标本CFSZ10167为毛头乳菇[Lactarius torminosus （Schaeff.）Pers.]，标本CFSZ10216为绒边乳菇[Lactarius pubescens（Fr. ex Kronbh.）Fr.]，标本CFSZ13021为灰褐乳菇[Lactarius pyrogalus （Bull.）Fr.]，3种均为胃肠炎型毒菌，CFSZ10044为皱乳菇（Lactarius ruginosus Romagn），为中国新记录种，主要特点是菌盖棕褐色、浅褐色，有绒质感，盖缘呈齿状，孢子球形具小刺，食毒不明。

对4个种的形态学特征进行了详细描述，并附有生境图片和显微图像，研究结果为乳菇属物种鉴定和资源分布提供了重要补充，并为常见毒菌识别提供了理论依据。

关键词：乳菇属；毒菌；形态学；rDNA-ITS测序鉴定；系统发育树中图分类号：Q939.5 文献标志码：A 文章编号：1673-2871（2024）01-056-08Morphologal and rDNA-ITS identification of four fungi in LactariusTIAN Huimin， LI Jiang（College of Chemical and Life Science， Chifeng University， Chifeng 024000， Inner Mongolia， China ）Abstract： Four unkown poisonous mushrooms of Lactarius from the city of Chifeng in Inner Mongolia were collected and identified by morphology classification to identify the genera and species， the fungal DNA were extracted from the fruiting bodies， amplified by PCR using fungal universal primers ITS1/ITS4， the sequences obtained from purification and sequencing of amplification products were compared by blast， a phylogenetic tree was constructed usingMEGA5.1 software to identify the genera and species as auxiliary mean. The results of the two methods are consistent， Specimen CFSZ 10167， CFSZ10216 and CFSZ13021 are Lactarius torminosus（Schaeff.） Pers.， Lactarius pubescens（Fr. Ex Kronbh.）Fr. and Lactarius pyrogalus （Bull.） Fr. respectively， which are all gastroenteritis poisonous mushrooms， CFSZ10044 is Lactarius ruginosus Romagn， new to China. The main features include that the cap is tan or light brown， with a velvety texture and toothed margin， the spores are spherical with small spines，edible or poisonous unkown. The morphological characteristics of the four species were described in detail， and the habitat picture and micrograph were attached， and the result provided an important supplement to the species identification and resource distribution of Lactarius and a theoretical basis for the identification of common poisonous fungus.Key words： Species of Lactarius; Poisonous fungi; Morphology; rDNA-ITS sequencing; Phylogenetic tree毒菌亦稱毒蕈、毒蘑菇，是指大型真菌的子实体食用后对人或畜禽产生中毒反应的物种，绝大部分属于伞菌，少部分为子囊菌[1]。

利用ITS 进行菌种鉴定是目前较多采用的方法。

ITS 是内源转录间隔区( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。

其优点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600～800 bp，利用rDNA通用引物能够很容易被扩增出来；同时包含保守与变异序列, 能根据保守序列中的变异位点设计特殊引物进行特异性扩增比较，rRNA基因(rDNA)在微生物的鉴定应用中，具有检测微生物种水平的多态性特征。

这些rDNA高度保守地分布在染色体的不同位置，在每个单倍染色体基因组中的拷贝数超过200个,这使得保守区域能够很容易被扩增出来。

每个重复的rDNA 序列的存在方式为由一前一后的18S rDNA 小亚基单元(SSU) , 5.8S rDNA, 28S rDNA大亚基单元(LSU)组成,已设计出通用引物来扩增ITS序列分析相关真菌种水平之间的差异。

本研究通过丝状真菌ITS保守序列的扩增, 同源序列的对比分析,结合传统鉴定方法,对从土壤中分离筛选的一株丝状真菌进行了分析鉴定,并对鉴定结果和方法进行了比较分析。

种内变异还显示在rDNA基因间内转录间隔区Ⅰ和Ⅱ（分别为ITSⅠ和ITSⅡ）的片段大小上。

ITS区在核糖DNA中进化较快，可在同一属间甚至群体间发生变化。

其中ITSⅡ区在种间变异性较高（22％），种内变异性较低（＜3％）。

选择的两对引物均以ITS区的序列为靶目标，其中引物①（ITS1和ITS4）扩增的是ITSⅠ区、5.8SrDNA和ITSⅡ区的基因序列，可以鉴别出念珠菌属的3个菌种；引物②（ITS4和ITS86）扩增的是5.8S rDNA和28S rDNA之间的ITSⅡ区的保守顺序，可以鉴别出念珠菌属的7个菌种。

因而笔者更推荐采用引物②，它不仅有很强的通用性，能识别更多菌种，而且具有更高的属种特异性。

1、通用引物①：ITS1 5'-TCCG TAGG TGAA CCTG CGG一3’ITS4 5'-TCCT CCGC TTAT TGAT ATGC一3’通用引物②ITS4 5'-TCCT CCGC TTAT TGAT ATGC一3’ITS86 5'-GTGA ATCA TCGA ATCT TTGA AC一3’。

东北地区4种兰科植物及其菌根ITS序列分析与其培养体系的建立的开题报告题目：东北地区4种兰科植物及其菌根ITS序列分析与其培养体系的建立摘要：兰科植物在观赏价值和药用价值方面均具有重要意义，但其繁殖困难，生长缓慢，生态环境要求高等问题是限制其应用的瓶颈。

而菌根技术可以有效提高兰科植物的生长速度和养分吸收能力，因此开展兰科植物与其菌根关系的研究具有重要的意义。

本研究选取东北地区4种兰科植物进行菌根ITS序列分析，同时建立适合其生长的培养体系，为进一步研究兰科植物的菌根生长提供理论基础和技术支持。

关键词：兰科植物；菌根；ITS序列；培养体系一、研究背景与意义兰科植物是一类具有重要观赏和药用价值的植物，但由于其繁殖困难、生长速度缓慢、对环境要求较高等问题，限制了其应用范围。

而菌根技术可以有效提高植物的生长速度和养分吸收能力，尤其是对于兰科植物，菌根技术的应用更为重要。

因此，开展兰科植物与其菌根关系的研究，对于兰科植物的生产和应用具有重要意义。

二、研究内容与方法1. 研究对象本研究选取东北地区4种兰科植物作为研究对象，分别为：大花蕙兰（Phalaenopsis amabilis）、文心兰（Paphiopedilum armeniacum）、蝴蝶兰（Cymbidium aloifolium）、斑叶兰（Dendrobium nobile）。

2. 菌根ITS序列分析利用PCR技术对4种兰科植物的根系进行扩增，并对扩增产物进行测序，得到其ITS序列。

对ITS序列进行比对和系统发育树构建，分析不同兰科植物与其菌根的亲缘关系。

3. 培养体系建立根据不同兰科植物的特性和菌根要求，设计合适的培养基和生长条件，建立适合兰科植物菌根生长的培养体系。

三、研究预期成果1. 确定4种兰科植物与其菌根的亲缘关系，为了解兰科植物的菌根生长提供理论基础。

2. 为不同兰科植物菌根培养提供技术支持和指导，建立适合兰科植物菌根的培养体系，提高兰科植物的生长速度和养分吸收能力。

四个红菇科菌株的ｒＤＮＡＩＴＳ序列分析和系统发育研究以采自浙江省丽水山区的4个红菇科菌株作为研究材料，进行rDNA ITS （Internal Transcribed Spacer）区段克隆测序和序列特征比较分析，并对ITS序列进行核酸序列数据库GenBank同源性检索比对，将从GenBank检索获得的15个最相似物种的ITS序列连同4个红菇科菌株的ITS序列一起用于系统发育分析。

序列比较结果表明，4个红菇科菌株的rDNA ITS序列长度为673 bp～766 bp，GC含量为47.4%～49.48%，其中2个红菇属（Russula）菌株R32和R57间的ITS序列长度和GC含量差异极小，而与血红乳菇（Lactarius sanguifluus）菌株L37间的ITS序列长度和GC含量差异较大。

系统发育分析表明，R57为花盖红菇（R. cyanoxantha）的一个菌株，红菇属的赭盖红菇（R. mustelina）、绿菇（R. virescens）和青灰红菇（R. parazurea）三者间的序列差异较小，亲缘关系较近；乳菇属(Lactarius)的血红乳菇同鲑色乳菇（L. salmonicolor）种间的序列差异较小，亲缘关系较近。

红菇；rDNA；内转录间隔区(ITS)；序列分析；系统发育；大型真菌S646.101A红菇科（Russulaceae）隶属担子菌亚门（Basidiomycotina），层菌纲（Hymenomycetes），伞菌目（Agaricales），包括红菇属（Russula）和乳菇属（Lactarius）两大类。

国际上已报道的红菇属真菌有300多种，我国有记载的为90余种[1]，乳菇属真菌全世界已知的约400种，其中被描述的有150多种[2]。

浙江省西南部的丽水山区大型真菌资源丰富，仅庆元县境内的野生真菌就有911种，其中隶属红菇科的有43种[3]。

多数红菇可食用且具有药用功能。

文章编号：1001－4829（2012）04－1414－03收稿日期：2012－02－20基金项目：科技部国际合作资助项目（2010DFA32080）；四川省科技厅国合项目（2011HH0025）；国家食用菌产业技术体系栽培与设施研究室岗位（毛木耳和药用菌栽培）；国家食用菌产业技术体系成都综合试验站；四川食用菌产业技术体系创新团队；四川省财政基因工程资助项目作者简介：贾定洪（1977－），男，助理研究员，主要从事食用菌分子生物学和遗传育种研究，*为通讯作者。

4个野生灵芝菌株的ITS 序列分析贾定洪，王波，彭卫红，黄忠乾，谭伟，甘炳成，郑林用*（四川省农业科学院土壤肥料研究所，四川成都610066）摘要：以4个野生灵芝菌株为研究材料，以6个外源菌株为参考菌株，采用MEGA4软件对ITS 序列进行NJ 法聚类分析，构建系统发育树。

结果显示4个灵芝菌株ITS 序列与另外6个参考菌株对齐序列长度在357 369bp 之间，G /C 含量变化为43．4% 57．7%；德昌灵芝1#、德昌灵芝4#和通江灵芝亲缘关系最近，遗传距离为0，德昌灵芝3#与它们的遗传距离为0．0029；与4个野生灵芝菌株亲缘关系由近到远分别是韩芝、红芝、灵芝（中国科学院微生物研究所）、黑灵芝、血芝、云芝；结合4个野生菌株的ITS 序列分析结果和形态特征，4个菌株被鉴定为灵芝（Ganoderma lucidum ）种类的不同株系。

关键词：灵芝；ITS ；系统发育中图分类号：S567．4+1文献标识码：AAnalysis of ITS Sequences in 4Wild Ganoderma lucidum StrainsJIA Ding-hong ，WANG Bo ，PENG Wei-hong ，HUANG Zhong-qian ，TAN Wei ，GAN Bing-cheng ，ZHENG Lin-yong *（Soil and Fertilizer Institute ，Sichuan Academy of Agricultural Sciences ，Sichuan Chengdu 610066，China ）Abstract ：With the bio-software of MEGA4，the ITS sequences of 4wild Ganoderma lucidum strains and their 6reference strains were stud-ied by using NJ method to construct the phylogenetic tree．The results showed that the ITS lengths of their strains ranged from 357to 369bp ，and G /C contents from 43．4%to 57．7%．There were the closest relationships among Dechang lingzhi1#，Dechang lingzhi4#and Tongjiang lingzhi ，and their strains ’genetic distance was merely 0，while there was a genetic distance of 0．0029between Dechang lingzhi3#and them．Strains ，from the close genetic relationships to the farther relationships with the 4wild Ganoderma lucidum strains ，were in order of Hanzhi ，Hongzhi ，Lingzhi （The Institute of Microbiology ，Chinese Academy of Sciences ），Heilingzhi ，Xiezhi ，Yunzhi ，respectively．Comparative study of ITS sequences and morphic characteristics indicated that 4wild strains were subject to different strains of Ganoderma lu-cidum ．Key words ：Ganoderma lucidum ；ITS ；Phylogeny灵芝为多孔菌科真菌赤芝（Ganoderma lucidum ）或紫芝（Ganoderma sinense ）的干燥子实体。

内蒙古4种白粉菌的 ITS 序列分析
文静;刘铁志;赵冰
【期刊名称】《江苏农业科学》
【年(卷),期】2014(000)012
【摘要】采用chelex－100法提取内蒙古地区4种白粉菌的基因组DNA，扩增其rDNA内转录间隔区序列ITS，连接载体测序，并基于ITS序列进行亲缘关系分析。

结果表明，4种白粉菌形成3个进化距离较远的分支；寄生在豌豆和田旋花上的豌豆白粉菌和旋花白粉菌的ITS序列紧密聚在1支，其亲缘关系较近，同属白粉菌属；寄生在紫花苜蓿上的托罗斯内丝白粉菌和寄生在山桃上的三指单囊白粉菌各自成1支，与形态学分类结果相一致。

ITS序列可用于内蒙古地区白粉菌分类鉴定研究。

【总页数】3页(P50-52)
【作者】文静;刘铁志;赵冰
【作者单位】赤峰学院生命科学学院，内蒙古赤峰 024000;赤峰学院生命科学学院，内蒙古赤峰 024000;赤峰学院生命科学学院，内蒙古赤峰 024000
【正文语种】中文
【中图分类】S432.4+4
【相关文献】
1.河南省几种白粉菌的ITS序列分析 [J], 马原松;裴冬丽;王文静;李成伟
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5.内蒙古赤峰地区的白粉菌Ⅱ──白粉菌属 [J], 刘铁志;秦晓春;王迎春
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一种用ITS1区测序鉴定独活药材的方法最近省食品药品检验研究院的一位老师想知道一些栽培的独活药材经过长期的人工种植是否产生了变种（药材成品的外观上差异确实挺大的），于是请我们的实验室尝试了一次从分子生物学角度来探索这些药材是否已经产生了变化。

一、实验目的鉴定6种独活药材的亲缘关系。

二、实验材料1.对照独活DH-0、待测样本DH-1、DH-7、DH-10、DH-14、DH-18药材图片如下：2.研钵、1.5ml离心管、2ml离心管若干。

3.植物/真菌DNA试剂盒（Simgen Cat.No.3200050）4.2×PCR Mix（Simgen Cat.No.7003100）5.ITS1区引物（F:CGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAA/R:GCTACGTTCTTCATCGAT）6.超微量电子天平（DENVER INSTRUMENT,TP-213）、电子恒温不锈钢水浴锅（上海宜昌仪器纱筛厂）、旋涡振荡器（越新仪器，XH-C）、台式离心机（eppendorf centrifuge5415D）、超微量分光光度计（Simgen Cat.No.sim100）、电泳仪（北京六一仪器厂，DYY-6C型）、PCR仪（Techne FPROG5Y Progene Thermal）三、实验方法（一）DNA提取1.称取50mg样本于研钵中，加入200μl65℃预热的Buffer PD和2μlβ-巯基乙醇，用力研磨至匀浆状。

2.研磨充分后加入800μl65℃预热的Buffer PD，继续研磨1分钟，使组织完全裂解。

3.转移800μl裂解产物至2ml离心管中，将离心管置65℃水浴30分钟。

水浴期间每隔5~10分钟翻转离心管数次以帮助DNA的释放。

4.加入800μl Buffer EX，用力混合均匀，12000rpm离心5分钟。

5.小心吸取上清，转入一个新的1.5ml管中。

6.在上清中加入等体积的Buffer GP，混合均匀。

真菌ITS区序列结构及其应用
陈凤毛
【期刊名称】《林业科技开发》
【年(卷),期】2007(021)002
【摘要】分析了真核生物以及原核生物核糖体基因内部转录间隔区序列结构.核rDNA的内转录间隔区ITS序列包含被5.8S rDNA所分隔的ITS1和ITS2两个片段.列举了根据真菌ITS区序列设计的扩增通用引物与特异引物.在此基础上,综述了真菌ITS序列结构在种间亲缘关系研究、植物病原真菌的检测、未知病原真菌的鉴定、近似种或疑难种的确定等方面的应用.
【总页数】3页(P5-7)
【作者】陈凤毛
【作者单位】南京林业大学森林资源与环境学院;安徽省森林病虫防治总站
【正文语种】中文
【中图分类】S7
【相关文献】
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3.4株水果采后链格孢属真菌的rDNA ITS区序列与碳源代谢指纹图谱差异性分析[J], 任向峰;姚婷;张萌;张燕;王友升
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友雄;陈天生;许莉萍;张木清
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