水质 叶绿素a 的测定 荧光分光光度法

⽔质叶绿素a的测定分光光度法编制说明附件3《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》（征求意见稿）编制说明《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》标准编制组⼆○⼀五年⼋⽉项⽬名称：⽔质叶绿素a的测定分光光度法项⽬统⼀编号：939承担单位：辽宁省环境监测实验中⼼编制组主要成员：王秋丽、赵丽娟、王琳、丁振军、刘畅、徐天赐、姜永伟、秦⾬、郭杨、朱⼴钦、叶明、贺业菊标准所技术管理负责⼈：周⽻化、雷晶、张虞标准处项⽬负责⼈：张朔⽬录1项⽬背景 (1)1.1任务来源 (1)1.2⼯作过程 (1)2标准制订的必要性分析 (3)2.1叶绿素A的环境危害 (3)2.2相关环保标准和环保⼯作的需要 (4)3国内外相关分析⽅法研究 (5)3.1主要国家、地区及国际组织相关分析⽅法研究 (5)3.2国内相关分析⽅法研究 (8)4标准制订的基本原则和技术路线 (10)4.1标准制订的基本原则 (10)4.2标准制订的技术路线 (10)5⽅法研究报告 (12)5.1⽅法研究的⽬标 (12)5.2⽅法原理 (13)5.3试剂和材料 (13)5.4仪器和设备 (16)5.5样品的采集和保存 (17)5.6分析步骤 (21)5.7结果计算 (31)5.8质量保证和质量控制 (34)5.9注意事项 (34)6⽅法验证 (35)6.1⽅法验证⽅案 (35)6.2⽅法验证过程 (36)7与开题报告的差异说明 (38)8本标准实施的建议 (39)9参考⽂献 (39)《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》编制说明1项⽬背景1.1任务来源（1）2006年6⽉，根据《关于下达2006年度国家环境保护标准制订项⽬计划的通知》（环办函[2006]371号），原国家环保总局办公厅下达了制订《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》国家环保标准制修订计划，项⽬统⼀编号为：939。

（2）《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》项⽬承担单位为：辽宁省环境监测实验中⼼。

1.2 ⼯作过程1.2.1 前期调研⼯作（1）成⽴标准编制组2006年7⽉，辽宁省环境监测中⼼承接了《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》制修订任务以后，成⽴了标准编制组。

叶绿素-a的测定方法原理（荧光分光光度法）用丙酮溶液提取浮游植物色素进行荧光测定，根据提取液酸化前后的荧光值，可分别计算叶绿素-a及脱镁色素的含量。

试剂及其配置1、丙酮溶液（9+1）：量取900ml丙酮与100ml水混合，保存在棕色试剂瓶中。

2、碳酸镁悬浮液（10g/L）:称取1g碳酸镁，加水至100ml，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需要再摇匀。

3、盐酸：=1.18g/ml4、盐酸溶液（5+95）：在搅拌下，将5ml盐酸缓慢的加到95ml水中，混匀，保存于滴定瓶中。

5、硅胶仪器及设备1、荧光计2、冰箱3、离心机4、电动吸引器5、过滤装置6、玻璃纤维滤膜：直径为25mm的WhatmanGF/C或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜7、具塞离心管：容量10ml8、干燥器9、棕色试剂瓶：容量100ml，1000ml10、量筒：容量100ml、200ml、1000ml11、定量加液器：容量10ml12、镊子一般实验室常用设备分析步骤1、样品制备量取一定体积海水（通常大洋水250ml-500ml，近岸或港湾水50-100ml），加2ml 碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜过滤，过滤负压不得2超过50KPa.2、样品提取将过滤了的样品的滤膜放入具塞离心管，加入10ml丙酮溶液，摇荡，放置冰箱冷藏室14-24h，提取叶绿素-a。

若虑得的样品不能及时提取，应该将滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸置于含硅胶的干燥器内，贮存在低于1摄氏度的冰箱中。

3、样品离心离心速度：（3000-4000）r/min离心时间:10min4、样品测定荧光计激发波长为436nm,发射波长670nm零点调节：用丙酮溶液调节，使荧光计指针指零。

将提取的上层提取液注入测定池。

选择相应量程，测定样品的荧光值R b。

加2滴盐酸溶液至测定池，摇匀，经30s后再测其荧光值Ra。

5、仪器校正用标准叶绿素-a校正。

用分光光度计校正：取一定体积正处于指数增长期的单细胞藻类培养液，依上述方法提取其叶绿素-a，用分光光度法测定，计算该提取液的叶绿素-a浓度。

水中葉綠素a 檢測方法－丙酮萃取／螢光分析法NIEA E509.01C一、方法概要水樣經玻璃纖維濾紙過濾後，濾紙以組織研磨器於90%丙酮溶液中研磨萃取葉綠素a，萃取液再以藍光光源的螢光儀測得螢光值，最後依製備之螢光值檢量線求得葉綠素a 濃度。

因使用之標準溶液葉綠素a 濃度，會受各種因子影響而衰減，每批次檢測時應以分光光度計再確認標準溶液之濃度。

二、適用範圍本方法適用於地面水體、飲用水水源水質及海域地面水體之檢測。

單一檢驗室之方法偵測極限估值為0.11 μg/L。

三、干擾(一) 萃取後的萃取液與標準溶液易受溫度、光、酸及濁度所影響，應避免強光照射或接觸酸性物質。

萃取液及標準溶液上機測試時，均須回溫至室溫。

(二) 萃取物如產生紅色光區的螢光，會干擾葉綠素a 的量測。

(三) 樣品中，其他種類葉綠素或胡蘿蔔素濃度過高會有螢光熄滅效應，可將萃取液稀釋以克服之。

四、設備及材料(一) 量筒：100、500 mL或1 L之量筒。

(二) 玻璃纖維濾紙：直徑47 mm或25 mm，平均孔徑約0.7 μm（使用Whatman GF/F或同等級產品）。

(三) 過濾裝置：薄膜過濾裝置。

(四) 真空抽氣裝置：水壓式、吸氣式或手動式，壓力差低於0.2kg/cm2（20 kPa）者。

(五) 鑷子。

(六) 鋁箔紙。

(七) 濾紙存放容器：能遮光，在運送過程及儲存時，可以存放含過濾樣本之濾紙，不受環境污染者。

(八) 運送儲存器：運送過程在4小時以內可使用如旅行冰桶，內放冰塊可維持在0～4℃；若超過4小時，需存放在低於20℃的儲存器內，如液態氮桶、乾冰桶或冰箱之冷凍櫃。

(九) 冷凍櫃：可長期維持在20℃以下。

(十) 組織研磨器：具組織研磨效果者。

(十一) 離心管：錐形底、15 mL，具螺紋蓋。

(十二) 離心機：懸臂式、可容納15 mL錐底離心管、離心力可達675 g以上（g為離心力，註1）。

(十三) 定量瓶：10、25、50或100 mL褐色定量瓶。

叶绿素测定方法一、方法选择1、分光光度计法>荧光光度法>SPAD速测法，浸提比色法>萃取比色法，常温浸提比色测定>高温速浸提比色法，如果时间条件允许，建议选择常温浸提比色法。

2、药品的选择，常用有机浸提叶绿素的试剂由甲醇、乙醇、丙酮，乙醇对身体的伤害最小，丙酮最厉害，如果通风条件不是太好，建议选择乙醇;有机试剂混合液提取具有协同优势，乙醇与丙酮的混合液比甲醇与丙酮的混合液(甲醇乙醇混合很少)浸提的要完全，而且稳定，乙醇、丙酮、水的浸提效果次之，差异不显著;综上，如果能买到丙酮的话，乙醇、丙酮以1:3的比例混合液提取最好，其次是乙醇、丙酮、水以4.5:4.5:1的比例混合液，如果不想用丙酮，可以用95%的乙醇代替，但是与混合液比，提取效率不高。

3、称样量，0.2g样品，选用20ml浸提液浸提，0.5g样品，选用50ml浸提液浸提。

二、实验原理分光光度法测定叶绿素(包括a\b\类胡萝卜素\总量) 含量的原理是，以有机溶剂在常温暗室直接提取样品中的叶绿素，测定其吸光度，根据叶绿素(包括a\b\类胡萝卜素\总量)在特定波长的吸收，用公式计算其含量。

三、器材棕色容量瓶、721型分光光度计(751型分光光度计更好，越精确越好) 四、步骤1、将叶片洗净，选取中间部分，称0.200克左右，并剪成2mm左右碎条2、将样品放入容量瓶中，加入浸提液，定容，放在暗处26h左右3、比色，如果仅仅测定叶绿素A\B总量，测定波长在665nm、649nm、652nm 处吸光度即可，如果还测定类胡萝卜素含量，再测定处波长在470nm处的吸光度即可。

目前，不同的浸提液提取方法都是在这些波长下测定的。

4、每个实验样品重复三次，空白两次重复即可(本实验中空白意义不大)五、计算Ca=13.95*A665-6.88*A649Cb= 24.96* A649-7.32* A665C类胡萝卜素= (1000*A470-2.05* Ca -114.8* Cb)/245C总= A652*50/(34.5*m)Ca 为叶绿素a的浓度M 为称样量。

HJ897-2017水质叶绿素a的测定分光光度法Water quality—Determination of chlorophyll a—Spectrophotometric method（发布稿）本电子版为发布稿。

请以中国环境出版社出版的正式标准文本为准。

2017-12-21发布2018-02-01实施环境保护部发布目次前言 (ii)1适用范围 (1)2规范性引用文件 (1)3方法原理 (1)4试剂和材料 (1)5仪器和设备 (2)6样品 (2)7分析步骤 (3)8结果计算与表示 (4)9精密度和准确度 (4)10质量保证和质量控制 (5)11废物处理 (5)i前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护环境，保障人体健康，规范水中叶绿素a的测定方法，制定本标准。

本标准规定了测定地表水中叶绿素a的分光光度法。

本标准为首次发布。

本标准由环境保护部环境监测司和科技标准司组织制订。

本标准起草单位：辽宁省环境监测实验中心。

本标准验证单位：上海市环境监测中心、大连市环境监测中心、丹东市环境监测中心站、辽阳市环境监测站、朝阳市环境监测中心站和辽宁北方环境检测技术有限公司。

本标准环境保护部2017年12月21日批准。

本标准自2018年2月1日起实施。

本标准由环境保护部解释。

ii水质叶绿素a的测定分光光度法警告：丙酮对人体健康有一定危害，操作时应在通风橱中进行，佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。

1适用范围本标准规定了测定水中叶绿素a的分光光度法。

本标准适用于地表水中叶绿素a的测定。

本标准测定丙酮提取液中叶绿素a的检出限为0.04mg/L。

当取样体积为200ml，丙酮提取液体积为10ml时，本方法的检出限为2μg/L，测定下限为8μg/L。

2规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。

凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。

GB/T14581水质湖泊和水库采样技术指导HJ494水质采样技术指导HJ/T91地表水和污水监测技术规范3方法原理将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm和630nm波长处测定提取液吸光度，根据公式计算水中叶绿素a的浓度。

叶绿素a的测定原理叶绿素a是一种存在于植物和藻类细胞叶绿体中的绿色色素，它起到了光合作用中接受和传递光能的关键作用。

测定叶绿素a的浓度对于研究光合作用的机制以及评估植物和藻类的生长状态具有重要意义。

在实验室中，存在多种方法来测定叶绿素a的浓度，其中包括光度法、荧光法和高效液相色谱法。

下面将重点介绍常用的光度法测定叶绿素a的原理和步骤。

光度法是一种通过测量溶液对特定波长的光的吸收来确定溶液中某种组分浓度的方法。

对于叶绿素a的测定，通常使用的波长为650nm或663nm。

叶绿素a在这两个波长的光下有很强的吸收能力，而溶液中的其他组分对该波长的光吸收较小。

因此，测定叶绿素a的浓度可以通过测量溶液对650nm或663nm光的吸光度来间接确定。

下面是光度法测定叶绿素a浓度的一般步骤：1. 样品制备：将待测样品中的叶绿素a提取到有机溶剂中，一般使用甲醇、乙醇或二氯甲烷等极性较强的有机溶剂作为提取剂。

提取的方法可以根据需求选择，包括搅拌法、超声波法或研磨法等。

提取过程需要避光，以防叶绿素a被光降解。

2. 溶液制备：将提取出的叶绿素a溶解在适当的溶剂中，一般使用甲醇或乙醇等有机溶剂。

溶液中的叶绿素a浓度可以通过分光光度计测定吸光度来确定。

3. 吸光度测定：使用分光光度计，在650nm或663nm的波长下测量样品吸光度。

为了获得准确的测量结果，一般需要对比测量待测样品和纯溶剂的吸光度，以消除对溶剂的吸光干扰。

4. 计算叶绿素a浓度：根据比色法或校正曲线法，将测得的吸光度转换为叶绿素a的浓度。

比色法是通过比较待测样品吸光度与已知浓度叶绿素a标准溶液吸光度的关系，进行定量测定。

校正曲线法是首先制备不同浓度的叶绿素a标准溶液，然后测定它们的吸光度并绘制出吸光度与浓度的标准曲线，通过待测样品的吸光度在标准曲线上插值得到其浓度。

需要强调的是，在测定叶绿素a浓度时，有几个实验注意事项需要注意。

首先，提取过程需要避光，以免叶绿素a被光降解，影响测量结果。

分光光度法测定叶绿素a方法比较王康1，凌彦群2（1.四川省乐山井研县环境监测站，四川乐山613100；2.四川省乐山市环境监测站，四川乐山616400）摘要：叶绿素a作为评价水体富营养化程度的重要指标之一，探讨其监测分析方法的实用性具有重要的现实意义。

本文通过实验分析比较了叶绿素a测定中的两种样品处理方法——研磨萃取法和反复冻融-浸提法的优缺点；采用分析实验数据统计处理方法评价叶绿素a的测定值。

结果表明：用反复冻融-浸提法处理水样具有安全、高效特性，750nm处吸光度值容易达到0.005；两种分析方法得到的结果无显著性差异；由此两法在室内所获得的分析结果具有可比性。

关键词：分光光度法；叶绿素a；研磨萃取法；反复冻融-浸提法Comparison of the Analysis Methods for Chlorophyll-a bySpectrophotometryWANG Kang1，LING Y anqun2（1.Environmental monitoring station of Jingyan, Leshan, 613100, China；2.Environmental monitoringstation of Leshan, Leshan, 614000, China）Abstract:Chlorophyll-a is one of index in eutrophication for water. Grinding extraction method and repeated freeze-thaw extraction method is the two methods for sample pretreatment in Determination of chlorophyll-a by spectrophotometry. The experiment showed that repeated freeze-thaw extraction method is increase efficiency and safer. The absorbance is less than 0.005 in 750nm. There was no difference of Two computing formulae results.Keywords:spectrophotometry, chlorophyll-a, grinding extraction method, repeated freeze-thaw extraction method叶绿素a是衡量湖泊、水库、河流等水体富营养化程度的重要指标之一。

分光光度法测定水中的叶绿素a分光光度法测定水中的叶绿素a1 检出限水样体积300 mL、使用1 cm比色皿时，叶绿素a的检出限为0.11 μg/L，测定下限为0.5 μg/L；叶绿素b的检出限为0.25 μg/L，测定下限为1.0 μg/L；叶绿素c的检出限为0.25 μg/L，测定下限为1.0 μg/L。

2 方法原理将一定量水样用玻璃纤维膜过滤，收集藻类，使用反复冻融法对藻类细胞进行破碎，用90%丙酮溶液提取叶绿素，根据叶绿素光谱依次测定750 nm、664 nm、647 nm、630 nm波长下的吸光度，计算叶绿素含量。

3 试剂和材料3.1 碳酸镁悬浊液：ω（MgCO3）= 1%，1.0 gMgCO3 100 mL纯水3.2 丙酮溶液：ψ（C3H6O）= 90%，900 mL丙酮加100 mL纯水3.3 盐酸溶液：c（HCl）=0.1 mol/L。

8.5 mL浓盐酸加入500 mL纯水，冷却后稀释至1000 mL。

4 仪器和设备4.1 抽滤装置4.2 滤膜4.3 具塞玻璃离心管4.4 水浴锅4.5 离心机：转速3000 ~ 4000 r/min4.6 分光光度计4.7 比色杯：3 cm5 水样采集5.1 水样采集采集500 ~ 1000 mL 水样于棕色玻璃瓶或深色塑料瓶中。

5.2 保存避光保存，低温运输，在-20℃以下的冰箱内保存，在25 d 内分析测试。

6 分析步骤6.1 清洗玻璃仪器所有玻璃仪器应该清洗干净，尤其避免酸性条件下引起的叶绿素a 的分解。

6.2 滤膜过滤每种测定水样取300 mL ，加入0.6 mLMgCO 3悬浊液，用滤膜过滤。

6.3 提取将滤膜转移至具塞试管，加少量碳酸镁粉末和10 mL 已水浴加热至50℃的90%丙酮溶液。

塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分震荡，避光提取4 h 。

6.4 离心提取完毕后，离心管置于离心机上4000 r/min 离心20 min ，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞紧塞子，4000 r/min 再离心10 min 。

附件3《水质叶绿素a的测定分光光度法》（征求意见稿）编制说明《水质叶绿素a的测定分光光度法》标准编制组二○一五年八月项目名称：水质叶绿素a的测定分光光度法项目统一编号：939承担单位：辽宁省环境监测实验中心编制组主要成员：王秋丽、赵丽娟、王琳、丁振军、刘畅、徐天赐、姜永伟、秦雨、郭杨、朱广钦、叶明、贺业菊标准所技术管理负责人：周羽化、雷晶、张虞标准处项目负责人：张朔目录1项目背景 (1)1.1任务来源 (1)1.2工作过程 (1)2标准制订的必要性分析 (3)2.1叶绿素A的环境危害 (3)2.2相关环保标准和环保工作的需要 (4)3国内外相关分析方法研究 (5)3.1主要国家、地区及国际组织相关分析方法研究 (5)3.2国内相关分析方法研究 (8)4标准制订的基本原则和技术路线 (10)4.1标准制订的基本原则 (10)4.2标准制订的技术路线 (10)5方法研究报告 (12)5.1方法研究的目标 (12)5.2方法原理 (13)5.3试剂和材料 (13)5.4仪器和设备 (16)5.5样品的采集和保存 (17)5.6分析步骤 (21)5.7结果计算 (31)5.8质量保证和质量控制 (34)5.9注意事项 (34)6方法验证 (35)6.1方法验证方案 (35)6.2方法验证过程 (36)7与开题报告的差异说明 (38)8本标准实施的建议 (39)9参考文献 (39)《水质叶绿素a的测定分光光度法》编制说明1项目背景1.1任务来源（1）2006年6月，根据《关于下达2006年度国家环境保护标准制订项目计划的通知》（环办函[2006]371号），原国家环保总局办公厅下达了制订《水质叶绿素a的测定分光光度法》国家环保标准制修订计划，项目统一编号为：939。

（2）《水质叶绿素a的测定分光光度法》项目承担单位为：辽宁省环境监测实验中心。

1.2工作过程1.2.1前期调研工作（1）成立标准编制组2006年7月，辽宁省环境监测中心承接了《水质叶绿素a的测定分光光度法》制修订任务以后，成立了标准编制组。

水体叶绿素a浓度的激光探测方法探究随着环境污染和气候变化的日益严重，如何实现水环境质量监测已成为全球关注的热点问题。

水体中的叶绿素a（Chlorophyll-a）是水体生产力的一个重要指标，也是水生态系统健康状况的主要指标。

因此，研究水体叶绿素a浓度的探测方法，对于保障水环境的安全和保护水生态系统具有重要的意义。

本文就深入探究水体叶绿素a浓度的激光探测方法。

一、传统监测方法及其局限性传统的水体叶绿素a浓度监测方法主要有分光光度法、荧光法、高效液相色谱法等。

这些方法是基于实验室分析和经验公式计算得出的，在一定程度上可以反映出水体叶绿素a浓度的变化趋势。

但是，传统的监测方法存在许多局限性，如需要进行多次现场采样和分析，测量时间长、周期长，操作繁琐，成本高，且只能测量离线数据。

另外，传统监测方法产生的数据不具有实时性，无法动态反映水体叶绿素a浓度的变化情况，因此对于现场监测和水环境管理存在一定的不足。

二、激光探测方法的原理激光探测方法是近年来发展迅速的一种水体叶绿素a浓度探测新技术。

其原理是利用激光产生的光束通过水体，测量激光透过水体后剩余光强的变化，从而推算出水体中叶绿素a的浓度。

具体来说，激光探测系统会发射一束激光束，经过水体后，激光束会被水体中的颗粒、生物等物质散射和吸收，激光透过水体后的光强会发生变化，这种变化与水体中的叶绿素a浓度相关。

通过对激光透过水体后光强变化的测量和分析，就可以推算出水体叶绿素a的浓度。

三、激光探测方法的优势和应用相对于传统监测方法，激光探测方法具有许多优势。

首先，激光探测方法可以实时地、动态地监测水体叶绿素a浓度的变化，能够快速地反映出水环境中的变化趋势。

其次，激光探测方法可以对大面积水体进行探测，减少人力和物力的投入。

第三，该技术可以在远距离、大面积范围内进行探测，避免了传统采样和实验的局限性。

目前，激光探测方法已经被广泛应用于水体叶绿素a浓度的监测和研究。

例如，在航空遥感和卫星遥感领域，激光探测技术可以通过对水体反射光谱数据的分析，对水体叶绿素a浓度进行反演，实现对大面积水体叶绿素a的监测。

实验14 叶绿素a 和b 含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。

二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：D 665=83.31Ca+18.60C b (1)D 649=24.54Ca+44.24 C b (2)(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。

为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。

82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。

16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。

解方程式(1)(2)，则得 ：C A =13.7 D 665—5.76 D 649 (3)C B =25.8 D 649—7.6 D 665 (4)G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。

四、方法步骤1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml 。

2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。

计算结果：叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=2.01100025⨯⨯A C 叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯G五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。

叶绿素a分光光度法..分光光度法检测叶绿素a叶绿素是植物光合作用中的重要色素。

通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。

在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。

一、水样的采集和保存可根据工作需要进行分层采样。

湖泊、水库采样500ml，池塘300ml，采样量视浮游植物分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000ml。

采样点及采样时间同浮游植物的采样或按需要进行。

水样采集后应放阴凉处，避免日光直射。

最好立即进行测定的预处理，如需经过一段时间（4-48h）方可进行预处理，则应将水样保存在低温（0~4℃）避光处。

在每升水样中加入1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。

预处理后的水样在冰冻情况下（-20℃）最长可保存30d。

二、仪器与试剂仪器 1)分光光度计2)真空泵3)离心机4)乙酸纤维薄膜（孔径0.45μm）5)抽滤器6)刻度离心管（10ml）试剂1)1%碳酸镁溶液：称取1.0g细粉末碳酸镁（MgCO）悬浮于100mL蒸馏水中。

3每次使用时要充分摇匀2)90%丙酮：丙酮和蒸馏水按照9:1混合，每次实验前现配现用（否则会出现悬浮物）。

三、实验流程1)以离心或过滤浓缩水样。

在抽滤器上贴好乙酸纤维薄膜，用少量水将其湿润以便将薄膜固定在抽滤器上，倒入定量体积的水样（湖泊水样一般为500ml）进行抽滤，抽滤时负压不能过大（约为50kPa），水样接近抽滤完成时，在抽滤器的水样中滴入1-2滴1%碳酸镁悬浊液，水样抽完后继续保持一段时间，以减少滤膜上的水分，放入4℃冰箱干燥24小时供下一步使用。

如需长期保存（30d），则应放入低温冰箱（-20℃）保存。

2)取出低温干燥后的带有浮游植物的滤膜，用90%丙酮定容到10ml，进行叶绿素萃取，静置20min，摇匀，使带有浮游植物的滤膜均匀溶解，用离心机（3000~4000r/min）离心10min。

3)以90%丙酮作为空白吸光度测定，放入1cm光程的比色皿中对样品吸光度进行校正。

水质叶绿素 a 的测定分光光度法以水质叶绿素 a 的测定分光光度法为标题叶绿素是植物和藻类等光合生物中的一种重要色素，它在光合作用中起到接收和转换光能的作用。

因此，叶绿素的测定对于研究光合作用、水质监测以及环境保护等方面具有重要意义。

本文将介绍一种常用的测定叶绿素 a 含量的方法——分光光度法。

分光光度法是通过测量样品在不同波长下的吸光度来确定其中叶绿素 a 的含量。

首先，我们需要准备一定浓度的叶绿素 a 标准溶液作为参照物。

然后，将待测样品中的叶绿素 a 提取出来，通常采用酒精提取法或醚提取法。

提取后的溶液中，叶绿素 a 会表现出特定的吸光度谱，即在特定波长下吸收特定的光线。

接下来，我们需要使用分光光度计来测定叶绿素 a 的吸光度。

首先，调节分光光度计到叶绿素 a 吸收峰值波长，通常为665 nm。

然后，将标准溶液和待测样品溶液分别放入光度计的比色皿中，设置比色皿为空白。

在特定波长下测量样品的吸光度，并记录下数值。

在得到吸光度数值后，我们可以利用标准曲线来计算出样品中叶绿素 a 的浓度。

标准曲线是通过制备一系列已知浓度的叶绿素 a 标准溶液，并测定它们的吸光度得到的。

通过绘制标准曲线，我们可以根据待测样品的吸光度数值，在曲线上找到相应的浓度值。

需要注意的是，分光光度法测定叶绿素 a 的时候，样品中可能存在其他物质的干扰，这会导致测定结果的误差。

为了减小干扰，我们可以采用去色处理，即利用活性炭或其他吸附剂去除样品中的色素。

此外，为了保证测定结果的准确性，我们需要进行多次测定，并计算平均值。

总结起来，分光光度法是一种常用的测定叶绿素 a 含量的方法。

通过分光光度计测量样品在特定波长下的吸光度，并利用标准曲线计算出叶绿素 a 的浓度。

该方法简单、快速，并且具有较高的准确性和重复性。

在水质监测、环境保护和光合作用研究等领域，分光光度法都发挥着重要的作用。

通过准确测定叶绿素 a 的含量，我们可以更好地了解光合生物的生长状况和环境状况，为相关研究和应用提供可靠的数据基础。

提取测定淡水藻中叶绿素a的方法研究Study on the Method of Extraction and Determination ofChlorophyll-a in Freshwater Algae环境工程， 2011，硕士【摘要】由于受到水源富营养化的影响,我国许多以湖泊水库为水源的给水厂原水含有不同程度的藻类,藻类会释放藻毒素,威胁供水水质的安全。

叶绿素是藻类的主要光合色素,常见的是叶绿素a,其含量大约是藻干重的1%-2%,是藻类生物量的重要指标。

目前国内在该领域采用的叶绿素a测定方法多采用分光光度法和荧光法,因分光光度法不如荧光法灵敏,现在多采用荧光法。

本文是在前人研究的基础上,针对鹊山水库的主要水藻类型,以实验室研究为依托,从提取方式,提取剂,监测方法等方面研究了淡水藻中叶绿素a的最佳提取及荧光测定方案。

本论文主要研究成果如下：1.以绿藻中的小球藻为研究对象,从提取能力、保真性、广泛适用性、准确性、简单和安全六个方面进行评价,得到适合淡水水藻的最佳提取方法。

研究结果表明,用丙酮：乙醇=1：1混合液做提取剂,在21℃,超声波提取,提取效果好。

和《水和废水监测分析方法》中的提取方法比较,超声波提取法具有提取速度快、时间短、提取率高、环保等优点。

2.针对绿藻,采用超声波提取,以荧光激发-发射波长差216nm,建立了同步荧光法测定绿藻叶绿素a含量的新方法,其线性范围为0.02-1.25mg/L,检出限为1.6μg... 更多还原【Abstract】 Due to the impact of many of our lakes andreservoirs water eutrophication for water to give raw water containing different levels of algae, algae algal toxins are released, threatening the safety of water quality. Chlorophyll is the main photosynthetic pigment of algae, often, chlorophyll a, the content of algae dry weight is about 1% to 2%, which is an important indicator of algal biomass. Currently used in the field of chlorophyll a determination to use more spectrophotometry and fluorescence... 更多还原【关键词】淡水藻；叶绿素a；分光光度法；同步荧光法；导数-同步荧光法；【Key words】freshwater algae；chlorophyll A；spectrophotometry；synchronous fluorescence spectrometry；derivative-synchronous fluorescence spectrometry；摘要 4-5ABSTRACT 5-6第1章绪论 9-231.1 概述 9-101.2 叶绿素a提取及测定方法进展 10-191.2.1 叶绿素a提取方法进展 10-151.2.2 叶绿素a测定方法研究现状 15-191.3 选题依据以及研究的主要内容和目的 19-211.3.1 选题依据 19-201.3.2 课题研究的主要内容 201.3.3 课题研究的目的 20-211.4 技术路线 21-23第2章淡水藻中叶绿素a提取方法研究 23-452.1 引言 23-242.2 实验部分 24-312.2.1 实验仪器与试剂 242.2.2 水藻的培养 24-272.2.3 水藻中叶绿素a的提取条件研究 27-312.3 结果与讨论 31-422.3.1 不同提取剂提取叶绿素光谱图 31-332.3.2 不同提取剂提取叶绿素a的计算公式确定 33-34 2.3.3 叶绿素a提取条件的确定 34-402.3.4 提取叶绿素a各种组合方法的比较 40-422.4 实际水样的测定 42-432.5 本章小结 43-45第3章同步荧光法测定绿藻中叶绿素a含量的研究 45-513.1 实验部分 463.1.1 供试生物材料与培养方法 463.1.2 仪器与试剂 463.1.3 实验方法 463.2 结果与讨论 46-493.2.1 萃取方式对叶绿素提取效果的影响 46-473.2.2 荧光光谱谱图 47-483.2.3 叶绿素b干扰考察 483.2.4 工作曲线及检出限 48-493.2.5 加标回收实验 493.2.6 同步荧光法与分光光度法测定结果的比较 49 3.3 本章小结 49-51第4章导数同步荧光法测定绿藻叶绿素a浓度的研究 51-57 4.1 实验部分 524.1.1 材料与方法 524.1.2 仪器与试剂 524.1.3 实验方法 524.2 结果与讨论 52-554.2.1 荧光光谱谱图 52-534.2.2 导数同步荧光光谱图 53-544.2.3 叶绿素b干扰考察 54-554.2.4 线性范围、检出限及回收率 554.3 本章小结 55-57第5章结论 57-59 参考文献。

叶绿素a的测定叶绿素a是一种广泛存在于植物、藻类和某些细菌中的绿色色素。

它在光合作用中起着至关重要的作用，能够吸收光能并将其转化成化学能，为生物体提供能量。

因此，对叶绿素a的测定具有重要的科研和应用价值。

叶绿素a的测定方法有很多种，其中比较常用的包括光度法、荧光法和高效液相色谱法等。

下面我将分别介绍这几种测定方法的原理和步骤。

光度法是一种通过测量叶绿素a溶液对特定波长光线的吸光度来确定其浓度的方法。

具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液与一定体积的溶剂混合均匀，然后使用分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度。

根据比色法原理，吸光度与溶液中叶绿素a的浓度成正比，通过与标准曲线对比，可以得出待测溶液中叶绿素a的浓度。

荧光法是一种通过测量叶绿素a溶液在受到激发光后发射的荧光强度来确定其浓度的方法。

具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液置于荧光测量仪器中，通过激发光源激发溶液中的叶绿素a分子，叶绿素a分子吸收光能后会发出特定波长的荧光。

测量仪器会记录下荧光的强度，根据荧光强度与叶绿素a浓度之间的关系，可以确定待测溶液中叶绿素a的浓度。

高效液相色谱法是一种通过将待测叶绿素a溶液进行色谱分离并测定其峰面积来确定其浓度的方法。

具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液注入高效液相色谱仪中，通过色谱柱的分离作用，将溶液中的叶绿素a与其他组分分离开来。

然后，通过检测器检测叶绿素a的吸光度，并计算出其峰面积。

根据标准曲线可以得出待测溶液中叶绿素a的浓度。

除了上述几种常用的测定方法外，还有一些其他的测定方法，如超声波法、电化学法等。

这些方法在特定的研究领域或实际应用中具有一定的优势和适用性。

叶绿素a的测定是研究光合作用和植物生长发育等领域的基础工作。

不同的测定方法在原理和步骤上存在一定的差异，但都能够准确地测定叶绿素a的浓度。

科研工作者和应用人员可以根据实际需要选择合适的测定方法，并结合其他相关指标对叶绿素a进行综合分析和评估，为科学研究和实践应用提供有力的支撑。

检测认证分光光度法测定湖泊水中叶绿素a含量的研究■ 赵荣龙1 梁欣欣1 吴玉萍2 崔 丹1 张 玲3（1. 昆明滇池水务环境监测有限公司；2. 贵州省环境监测中心站；3. 昆明滇池物流有限责任公司）摘 要：叶绿素a含量是评价水体富营养化水平的重要依据，水体营养化程度过高会影响水生生物的生存和繁殖，导致水体生态系统紊乱，生物多样性受到破坏。

叶绿素a几乎是所有浮游植物类别都含有的叶绿素类型。

所以，叶绿素a含量既是水体富营养化的判断标准，又是浮游植物现存量的重要推断依据。

水体富营养化是我国当前水环境面临的主要问题。

为阐明分光光度法测定水体中叶绿素a含量结果的快速性和准确性，本研究用研磨机代替手工研磨进行样品制备，用标准物质进行加标测定。

结果显示叶绿素a检测值符合标准要求。

关键词：分光光度法，水体，叶绿素aDOI编码：10.3969/j.issn.1002-5944.2024.07.041Determination of Chlorophyll A Content in Lake Water bySpectrophotometryZHAO Rong-long1 LIANG Xin-xin1 WU Yu-ping2 CUI Dan1 ZHANG Ling3（1. Kunming Dianchi Water Environmental Monitoring Co., Ltd.; 2. Guizhou Environmental Monitoring Center;3. Kunming Dianchi Logistics Co., Ltd.）Abstract:The content of chlorophyll a is an important basis for evaluating the level of eutrophication in water bodies, and excessive nutrient degree of water bodies will affect the survival and reproduction of aquatic organisms, resulting in disturbance of aquatic ecosystems and destruction of biodiversity. Chlorophyll a is the type of chlorophyll found in almost all types of phytoplankton. Therefore, chlorophyll a content is not only the criterion of water eutrophication, but also an important inference basis for the existing stock of phytoplankton. Water eutrophication is the main problem faced by China’s current water environment. In order to elaborate on the rapidity and accuracy of spectrophotometric determination of chlorophyll a content in water, a grinder is used instead of manual grinding for sample preparation, and standard materials are used for standard addition determination. The results show that the detection value of chlorophyll a meets the requirements of standards.Keywords: spectrophotometry, water body, chlorophyll a0 引 言叶绿素a的含量是评价水体富营养化水平的重要依据，通过叶绿素a的含量可以估算出水体中浮游植物生物量[1-2]。

实验14 叶绿素a 和b 含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。

二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：D 665=83.31Ca+18.60C b (1)D 649=24.54Ca+44.24 C b (2)(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。

为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。

82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。

16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。

解方程式(1)(2)，则得 ：C A =13.7 D 665—5.76 D 649 (3)C B =25.8 D 649—7.6 D 665 (4)G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。

四、方法步骤1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml 。

2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。

计算结果：叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=2.01100025⨯⨯A C 叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯G五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。