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无菌实验室操作规程一、引言无菌实验室是进行微生物学研究和生物制品生产的重要场所，为了确保实验过程的准确性和结果的可靠性，制定本操作规程。
二、实验室准备1. 实验室应保持清洁整齐，无尘无杂物。
2. 实验室应进行定期消毒，确保无菌环境。
3. 实验室内应有足够的工作空间和储存设施。
三、操作前的准备1. 操作人员应佩戴干净的实验服、手套和口罩。
2. 实验器材和培养基应提前准备好，并进行必要的消毒处理。
3. 检查无菌台、培养箱、超净工作台等设备的工作状态。
四、操作步骤1. 洗手消毒：操作人员应在进入实验室前进行彻底的手部消毒，使用洗手液和消毒剂。
2. 空气净化：启动无菌台、超净工作台等设备，确保工作区域的空气质量。
3. 培养基处理：打开培养基瓶盖时，应用酒精灯或消毒棉球对瓶口进行消毒处理。
4. 无菌操作：在无菌台或超净工作台上进行实验操作，避免与非无菌物品接触。
5. 培养皿接种：用铁鏊或无菌针将微生物接种到培养基上，避免污染。
6. 培养皿密封：用无菌胶带或铝箔将培养皿密封，防止外界的污染。
7. 培养箱操作：将培养皿放入培养箱，设定适当的温度和湿度。
8. 实验结束：实验完成后，关闭设备，清理工作区域，将实验废弃物进行无菌处理。
五、实验室安全1. 操作人员应严格遵守实验室安全规定，如禁止食物和饮料进入实验室。
2. 实验室内应配备紧急处理设备和消防设备，并进行定期检查和维护。
3. 实验室内应设有明显的安全警示标识，提醒人员注意实验室安全。
六、实验记录1. 操作人员应及时、准确地记录实验过程和结果，包括实验日期、操作步骤、使用的试剂和设备等。
2. 实验记录应保存在指定的档案中，便于回顾和追溯实验过程。
七、实验室清洁1. 实验室应定期进行彻底的清洁和消毒，包括工作台、器材、储存设施等。
2. 清洁过程中应使用合适的清洁剂和消毒剂，避免对实验过程和结果产生影响。
八、质量控制1. 实验室应建立质量控制体系，对实验过程和结果进行监控和评估。
无菌实验室操作规程一、引言无菌实验室是进行微生物学实验和生物制剂研究的重要场所，为保证实验的准确性和可靠性，必须严格遵守操作规程。
本文将详细介绍无菌实验室的操作规范，包括实验室准备、操作流程、消毒措施和安全注意事项等。
二、实验室准备1. 实验室环境要求无菌实验室应设在干燥、通风良好的地方，温度控制在20-25摄氏度，相对湿度控制在50-60%。
2. 实验室设备和试剂准备（1）准备所需的实验设备，包括培养箱、培养皿、离心机、显微镜等。
（2）准备所需的试剂和培养基，确保其质量符合要求，并按照使用说明正确保存。
三、操作流程1. 个人防护（1）进入实验室前，必须穿戴干净的实验服、手套和口罩，确保个人卫生。
（2）操作过程中，避免触碰面部、眼睛和其他暴露部位，以防止交叉污染。
2. 实验台面消毒（1）每次实验前，用75%乙醇对实验台面进行彻底擦拭消毒。
（2）实验结束后，同样使用75%乙醇对实验台面进行消毒处理。
3. 培养物传递（1）使用无菌技术传递培养物时，必须在无菌实验室的无菌工作台上进行。
（2）在传递培养物之前，先将培养皿或者试管中的盖子取下，然后将传递工具在火焰中消毒，再取出所需的培养物。
4. 培养基制备（1）准备培养基前，要先将使用的培养皿或者试管用高温高压灭菌器进行灭菌处理。
（2）制备培养基时，必须按照配方准确称量试剂，并使用无菌技术进行操作。
5. 显微镜操作（1）使用显微镜前，要先将镜片用无菌棉球蘸取75%乙醇擦拭消毒。
（2）观察完毕后，将显微镜镜片再次进行消毒处理。
四、消毒措施1. 实验室常规消毒（1）每天实验结束后，对实验室内的地面、工作台、设备等进行消毒处理。
（2）使用消毒剂时，要按照说明书的要求正确配制和使用。
2. 垃圾处理（1）实验过程中产生的废弃物，如培养皿、试管等，必须放入专用的生物废弃物容器中。
（2）生物废弃物容器应定期进行高温高压灭菌处理，确保无菌处理。
五、安全注意事项1. 实验室操作时，要注意避免剧烈晃动和碰撞实验设备，以免造成设备损坏或者人身伤害。
无菌实验室操作规程一、引言无菌实验室是进行微生物学实验和研究的重要场所，为确保实验结果的准确性和可靠性，必须严格遵守操作规程。
本文档旨在规范无菌实验室的操作流程，确保实验室的无菌环境，保障实验人员的安全。
二、实验室准备1. 实验室设备准备a. 确保实验室内的工作台、试剂架等设备表面干净整洁。
b. 检查实验室内的无菌器材和试剂的有效期，并按照规定进行更换和采购。
c. 确保实验室内的培养基、试剂等储存条件符合要求。
2. 个人准备a. 实验人员应穿戴干净的实验服，佩戴口罩、手套和帽子等个人防护用品。
b. 实验人员应做好手部卫生，洗手后使用消毒剂进行消毒。
三、实验操作流程1. 准备工作a. 打开实验室门前，先进行手部消毒，然后佩戴实验服、口罩、手套和帽子等个人防护用品。
b. 检查工作台面、试剂架等设备表面是否干净，如有污染应及时清洁。
c. 检查无菌器材和试剂的有效期，如有过期应及时更换。
d. 检查培养基、试剂等储存条件是否符合要求，如有问题应及时处理。
2. 开展实验a. 打开无菌柜前，先进行手部消毒，然后佩戴手套。
b. 将所需的培养基、试剂等放置在无菌柜内，确保无菌操作环境。
c. 在无菌柜内进行培养基的制备、菌种的接种等操作，确保操作过程无菌。
d. 注意避免无菌柜内的交叉污染，每次操作前应进行必要的清洁和消毒。
3. 实验后处理a. 实验结束后，关闭无菌柜前，先进行手部消毒，然后将无菌柜内的培养基、试剂等归位。
b. 清洁无菌柜内的工作台面、试剂架等设备表面，确保无菌环境。
c. 将使用过的实验服、口罩、手套和帽子等个人防护用品进行正确处理，避免交叉污染。
d. 对无菌柜进行定期的清洁和消毒，保持其无菌环境。
四、安全注意事项1. 实验人员应定期接受无菌操作培训，熟悉无菌实验室的操作规程和安全注意事项。
2. 在无菌操作过程中，应注意避免身体接触无菌器材和试剂，以防止交叉污染。
3. 实验人员应定期检查个人防护用品的有效性，如有损坏或者过期应及时更换。
组织培养-无菌室操作规程1. 无菌室室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%；室内应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染；2. 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如75%的酒精，0.1%的新洁尔灭溶液，优氯净，碘伏等等；无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求；3. 需要带入无菌室使用的器械，玻璃器皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌（一般采用高温高压灭菌，1.2个大气压，121-126℃，30分钟）；4. 工作人员进入无菌室前，必须修剪指甲，用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作；手的清洁流程：（1）取下手上的饰物及手表，调节合适的水流，浸湿双手；（2）取肥皂或适量肥皂液液涂抹双手；（3）按“六部洗手法”顺序搓洗双手：①掌心对掌心，两手并拢相互搓擦；②手心对手背，手指交错相互搓擦（交换）；③掌心相对，手指交叉沿指缝相互搓擦；④用一只手握住另一只手拇指旋转搓擦（交换）；⑤弯曲一手手指各关节，在另一只手掌心旋转搓擦（交换）；⑥指尖在掌心转动搓擦（交换）；（4）浸湿手的前臂部分（手腕至手肘），取肥皂或适量肥皂液液涂抹前臂，用手掌认真搓擦（交换）；（5）流水冲洗，腕部略高于肘部，使污水从指尖流至手腕，防止水流入衣袖。
5. 无菌室使用前须用75%的乙醇擦拭超净工作台台面及四周，必须打开无菌室的紫外灯灭菌30分钟以上，同步开启臭氧消毒机，辅助进行臭氧消毒，同时打开超净工作台紫外灯并开启风扇按钮进行吹风。
紫外灭菌结束后，关闭紫外灯及臭氧消毒机30分钟后才能进入无菌室进行操作；6. 进入超净工作台开始工作前，必须先开启风扇及工作灯，点燃酒精灯，用75%的乙醇认真擦拭双手，之后才能进行工作；7. 操作结束后，应及时清理无菌室，进行清扫：①将使用过的操作工具及废液缸从超净工作台上取出；②先用碘伏消毒液擦拭超净工作台台面及四周，再用75%的乙醇擦拭一遍，使其恢复成使用前状态；③使用新吉尔灭液或碘伏消毒液进行地板擦拭等清洁工作，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。
无菌技术操作规程（精选五篇）第一篇：无菌技术操作规程无菌技术操作规程一、无菌技术操作原则1、环境要清洁。
进行无菌技术操作前半小时，必须停止清扫地面等工作，避免不必要的人群流动，防止尘埃飞扬。
治疗是每日用紫外线照射消毒一次。
2、进行无菌操作时，衣帽穿戴要整洁。
帽子要把全部头发遮盖，口罩须遮住口鼻，并修剪指甲，洗手。
3、无菌物品与非无菌物品应分别放置，无菌物品不可暴露在空气中，必须存放于无菌包或无菌容器内，无菌包应注明无菌名称，消毒灭菌日期，并按日期先后顺序排放，以便取用，放在固定的地方。
无菌包在未被污染的情况下，可保存7天，过期应重新灭菌。
4、工作人员面向无菌区域，用无菌取无菌物品，手臂须保持在腰部水平以上，不可触及无菌物或跨越无菌区，从无菌容器中取出的物品，虽未使用，也不可放回无菌容器内。
5进行无菌操作时不可面对无菌区讲话、打喷嚏。
怀疑无菌物品被污染，不可使用。
6进行无菌操作时如器械、用物疑有污染或已被污染，即不可使用可，应更换或重新灭菌。
7、一套无菌物品，只能供一个病人用，以免发生交叉感染。
二、准备质量标准1、工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲。
2、备齐用物。
3、治疗盘、无菌持物钳或镊，浸泡于消毒液溶液内，无菌溶液、无菌包布、无菌容器及物品、无菌手套、弯盘、75％酒精、无菌棉签。
4、查对无菌物品、灭菌日期及手套好。
5用物排放有序，符合无菌操作要求。
三、操作流程质量标准1、选择清洁、干燥、宽阔的场所进行操作。
2无菌持物钳使用法：无菌持物钳须置于无菌容器内，有效期限4小时；取、放无菌持物钳时，应将盖打开，钳端闭合，不可在盖孔中取、放；如需取远处物品时，应连同容器一起搬移，就地取出无菌物品。
3、无菌包使用法：1）、查看无菌包的名称、灭菌日期，查看化学指示胶带粘贴。
2）、将无菌包放在清洁、干燥处，撕开粘贴。
3）、用拇指和食指先揭开左右两角，最后揭开内角，注意手不可触及包布的内面。
4）、用无菌钳（镊）取出（首先查看化学指示卡是否合格）所需物品，放在事先备好的无菌区域内，剩余部分按原痕包起扎好，并注明开包时间，24小时内可在使用。
无菌操作规程无菌操作是在医疗、实验室等领域中进行的一种重要操作。
它的目的是保持环境的无菌状态，防止外界的污染，保证实验结果的可靠性。
本文将介绍无菌操作的一般规程和注意事项，以期帮助读者正确地进行无菌操作。
一、准备工作在进行无菌操作前，需要进行一系列的准备工作。
首先，要确保操作的场所清洁整齐，并保持室温适宜。
其次，要准备好所需的无菌器械和培养基等物品，并对其进行必要的消毒。
再次，要对自己进行全面的消毒，包括洗手、穿戴无菌衣物和戴上无菌手套等。
二、无菌操作步骤1. 打开试验台：在无菌试验台上进行操作时，首先应按照操作规程打开试验台，确保室内的无菌环境。
2. 洗手消毒：在进行无菌操作前，必须进行彻底的洗手消毒。
先用流动水洗手，然后使用无菌洗手液进行洗手，并用流动水彻底冲洗干净。
最后，用无菌酒精进行手部消毒。
3. 穿戴无菌衣物：完成洗手消毒后，接下来要穿戴无菌衣物。
无菌衣物包括无菌帽、无菌口罩、无菌手套和无菌鞋套等。
穿戴时要注意不要碰触到其他物品，以免引入污染源。
4. 开始操作：在穿戴好无菌衣物后，可以开始进行无菌操作了。
操作前要将所需的器械和试剂置于无菌台上，避免污染。
5. 使用无菌器械：在进行无菌操作时，务必使用无菌器械。
无菌器械是经过高温高压灭菌处理的，可以保证其无菌状态。
使用时要注意不要碰触其他非无菌物品，同时注意不要使器械碰撞，以免影响无菌性。
6. 注意无菌培养基的使用：无菌培养基是进行微生物培养的基础，使用前要检查培养基是否有变色、变质等情况，同时要注意不要碰触到其他物品，以免引入污染。
7. 触摸操作：在触摸培养基或其他无菌物品时，要注意手部的无菌性。
当需要触摸无菌物品时，要用无菌手套轻柔地触摸，避免使用指尖接触，以免杂菌附着。
8. 包装无菌物品：当需要将培养基或其他无菌物品包装时，要使用专门的无菌包装袋或容器，并在包装过程中保持手部的无菌性。
三、注意事项1. 避免大面积的污染：在进行无菌操作时，要避免大面积的污染，尽可能将无菌区域与非无菌区域分隔开来，防止跨区域传播。
无菌实验室操作规程一、引言无菌实验室是进行微生物学研究和实验的重要场所，为确保实验结果的准确性和可靠性，必须严格遵守无菌实验室操作规程。
本文将详细介绍无菌实验室的操作标准，包括实验室准备、个人卫生、实验器材准备、无菌操作技术等方面的内容。
二、实验室准备1. 实验室环境无菌实验室应保持清洁、干燥和无尘的环境，确保实验操作不受外界污染。
实验室内应定期进行消毒和清洁，保持良好的通风。
2. 实验室设备实验室应配备必要的设备和仪器，如无菌工作台、高温高压灭菌器、培养箱等。
这些设备应定期进行维护和检修，确保其正常运行。
3. 实验室材料实验室应存放一定数量的无菌培养基、培养皿、试管、移液器等实验材料，以备实验需要。
这些材料应在使用前进行灭菌处理，确保无菌操作的可行性。
三、个人卫生1. 穿戴实验服进入无菌实验室前，必须穿戴干净的实验服，并佩戴帽子、口罩和手套。
实验服应定期更换，并保持清洁。
2. 洗手进入无菌实验室前，必须彻底洗手，并使用洗手液进行消毒。
洗手过程中应注意彻底清洗指缝和指甲。
3. 禁止进食进入无菌实验室后，禁止进食、饮水和吸烟。
这些行为可能会引入外界细菌，影响实验结果的准确性。
四、实验器材准备1. 灭菌处理所有进入无菌实验室的器材和材料，包括培养基、培养皿、试管等，必须进行灭菌处理。
常用的灭菌方法有高温高压灭菌、紫外线照射等。
2. 器材摆放实验室内的器材和材料应按照一定的规则摆放，保持整齐。
不同材料之间应有一定的距离，避免交叉污染。
3. 器材标识实验室内的器材和材料应进行明确的标识，包括名称、批号、灭菌日期等信息。
标识应清晰可见，避免混淆和误用。
五、无菌操作技术1. 环境消毒进行无菌操作前，必须对实验室环境进行消毒处理。
可以使用酒精或消毒剂对实验台面、工作台、试验器皿等进行擦拭消毒。
2. 灭菌操作进行无菌操作前，必须对操作台面、手套、工具等进行灭菌处理。
可以使用酒精灯、高温高压灭菌器等设备进行灭菌。
无菌操作技术植物组织培养要求严格的无菌条件及无菌操作技术。
无菌操作技术如下：一、接种室的无菌技术无菌操作室或接种室除用甲醛和高锰酸钾按2比1的比例定期熏蒸灭菌，在实验室用甲醛和高锰酸钾封闭消毒器具，不宜进入消毒空间。
消毒后通风换气，等气味散尽后再出入。
使用前用20%新洁尔灭（苯扎溴铵溶液）对接种室内墙壁、地板及设备擦洗，用70%酒精喷雾（使灰尘迅速沉淀），用紫外线灭菌20分钟或更长，照射期间接种室门要关严。
当接种室紫外线消毒期间，工作人员不要处于正消毒的空间内，更不要用眼睛注视紫外灯，也要避免长时间在开着紫外灯的超净工作台内进行操作。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。
应在关闭紫外线灯15-20分钟后再进入室内。
二、工作人员的无菌技术工作人员要经常洗头、洗澡、剪指甲，保持个人清洁卫生。
在接种室穿医护用的特制工作衣帽。
工作衣、帽、口罩也要经常清洗，洗净晾干后用纸包好进行高温高压消毒。
工作衣使用前后挂于预备间，并用紫外线照射灭菌。
接种前洗手，最好用肥皂水或新洁尔灭、洗手液等清洗，然后用酒精擦洗或喷洒。
三、接种器械无菌技术接种时首先要用紫外线照射超净工作台面后，用70%酒精喷雾或擦洗工作台面。
工作前送风15-30分钟左右。
首先对器械支架进行灼烧消毒，然后对接种工具如手术剪、手术刀、镊子等进行灼烧消毒，方法一般是用70%酒精浸渍、擦拭或喷洒后再酒精灯上灼烧。
接种工具灼烧后放在器械支架上冷却待用。
接种一定数量材料后，接种器械要重新灼烧灭菌，避免因沾有植物材料或琼脂等引起双重污染和交叉污染。
通常采用两套接种工具，使用一套时，另一套灼烧后冷却。
对于较大的器械如显微镜等，可用70%酒精擦洗表面，然后用紫外线照射灭菌。
继代转接时，要注意对待转接的培养物进行仔细观察挑选，防止将已经污染的培养物继代扩增；放置了很久的试管或三角瓶表面和瓶塞宜用70%酒精棉擦洗。
无菌实验室操作规程一、引言无菌实验室是进行微生物学研究和生物制品生产的重要场所，为了保证实验结果的准确性和生物制品的质量安全，需要严格遵守操作规程。
本文将详细介绍无菌实验室的操作规程，包括实验室准备、操作流程、消毒程序等内容。
二、实验室准备1. 实验室环境无菌实验室应具备良好的通风设施，保持恒定的温度和湿度，以及适当的洁净度。
实验室内的工作台、仪器设备和容器应经过高温高压灭菌处理。
2. 实验室器材和试剂实验室应配备无菌操作所需的器材和试剂，如培养基、培养皿、试管、移液器等。
这些器材和试剂应经过严格的消毒和灭菌处理。
三、操作流程1. 穿戴防护装备进入无菌实验室前，必须穿戴干净的实验服、手套、面罩和鞋套。
确保防护装备无菌并且完整。
2. 洗手消毒进入实验室后，首先进行洗手消毒。
使用肥皂和流动水充分洗手，然后使用含酒精的消毒液彻底消毒双手。
3. 准备培养基和培养皿根据实验需要，准备好所需的培养基和培养皿。
注意不要触碰培养基和培养皿的内表面，以免污染。
4. 开展实验操作a. 将待处理的样品放在无菌工作台上，用酒精灯或紫外线灯对工作台进行消毒。
b. 使用无菌技术将样品转移到培养皿或试管中，注意避免污染。
c. 在培养皿或试管中加入适量的培养基，确保培养基的无菌。
d. 将培养皿密封，并在适当的温度下进行培养。
e. 在操作过程中，避免直接接触培养皿或试管的内表面，以免污染。
5. 实验后处理a. 实验结束后，将使用过的培养皿和试管进行高温高压灭菌处理。
b. 清洁实验台面和仪器设备，使用含酒精的消毒液进行彻底消毒。
c. 将防护装备进行消毒处理，并妥善存放。
四、消毒程序1. 实验室消毒a. 每天开始工作前，对无菌实验室进行彻底清洁和消毒。
b. 使用含酒精的消毒液擦拭实验台面、仪器设备和容器。
c. 使用紫外线灯对实验室进行照射，消毒空气中的微生物。
2. 器材和试剂消毒a. 所有使用过的器材和试剂必须进行高温高压灭菌处理。
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌一、目的要求1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。
2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。
3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。
二、仪器与用具1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。
2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。
三、方法步骤（一）植物组织培养室的灭菌1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。
（1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。
（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。
（3）注意事项：①墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏；②注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。
（2）方法：首先房子要密封。
然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。
（3）注意事项：①操作前要戴好口罩及手套；②倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。
操作时人要迅速避开烟雾；③3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。
3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。
4、用紫外灯照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。
（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）（1）洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。
自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。
（3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。
（切忌干烧！）（4）装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。
植物无菌操作技术操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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植物组培无菌操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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第1篇一、准备阶段1. 查阅相关文献，根据已成功培养相近植物资料，结合实际制定切实可行的培养方案。
2. 根据实验方案配制适宜的消毒剂及同培养阶段所需培养基，并经高压灭菌或滤除菌备用。
二、外植体选择与消毒1. 选择合适部位作外植体，如茎尖、叶片、花药等。
2. 对外植体进行预处理，如切割、剥离等。
3. 将外植体用75%乙醇消毒1分钟，再用0.1%升汞消毒5-6分钟，最后用无菌水冲洗3-5次。
三、初代培养1. 将消毒后的外植体接种到初代培养基上。
2. 将接种好的培养基置于培养室或光照培养箱中，温度控制在25-28℃，光照时间12-16小时。
3. 观察外植体生长情况，如脱分化、愈伤组织形成、芽萌发等。
四、继代培养1. 当外植体形成愈伤组织或芽时，将其切割成小块，接种到继代培养基上。
2. 继代培养基的激素配比可根据实际情况进行调整，如增加细胞分裂素或生长素浓度。
3. 继代培养条件同初代培养。
五、根培养1. 当芽长到一定长度时，将其转移到生根培养基上。
2. 生根培养基的激素配比应适当降低细胞分裂素浓度，提高生长素浓度。
3. 生根培养条件同初代培养。
六、炼苗移栽1. 选择健壮的根苗进行室外炼苗。
2. 炼苗期间注意保温、保湿、遮荫，防止病虫害。
3. 待苗适应外部环境后，移栽到疏松透气的基质中。
4. 移栽后加强管理，如浇水、施肥、防治病虫害等。
七、注意事项1. 培养基的配制和灭菌要严格按照操作规程进行。
2. 消毒剂的使用要适量，避免对外植体造成伤害。
3. 培养环境要适宜，温度、光照、湿度等条件要稳定。
4. 观察外植体生长情况，及时调整培养方案。
5. 操作过程中要穿戴无菌手套，避免污染。
通过以上操作规程，您可以根据实验需求进行组织培养。
在实际操作过程中，请根据具体情况调整方案，以确保实验成功。
第2篇一、准备阶段1. 查阅相关文献，了解植物组织培养的基本原理和操作流程。
2. 根据已成功培养相近植物资料，结合实际情况，制定切实可行的培养方案。
实验一植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌（3学时）一、目的要求1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识；2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。
3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。
二、仪器与用具1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等；2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。
三、方法步骤（一）植物组织培养室的灭菌1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。
（1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。
（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。
（3）注意事项：①墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏；②注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。
（2）方法：首先房子要密封。
然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。
（3）注意事项：①操作前要戴好口罩及手套；②倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。
操作时人要迅速避开烟雾；③3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。
3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。
4、用紫外灯照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。
（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）（1）洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。
自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。
（3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。
（切忌干烧！）（4）装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。
植物组织培养无菌技术的一般流程Plant tissue culture is a process in which plants are grown from a small piece of tissue in a sterile, controlled environment. This technique allows scientists to study and manipulate plant growth and development in a controlled setting. 植物组织培养是一种通过在无菌、受控环境中种植植物的组织小片的过程。
这种技术允许科学家在受控的环境中研究和操纵植物的生长和发育。
One of the key steps in plant tissue culture is establishing a sterile environment. This is critical to prevent contamination of the plant samples by bacteria, fungi, or other pathogens. To achieve sterility, the equipment, media, and work surfaces must be properly sterilized using methods such as autoclaving or chemical disinfection. 植物组织培养中的一个关键步骤是建立无菌环境。
这对于防止植物样本被细菌、真菌或其他病原体污染至关重要。
为了实现无菌，设备、培养基和工作表面必须通过自动消毒或化学消毒等方法得到适当灭菌。
Once the sterile environment is established, the plant tissue is collected and prepared for culture. This typically involves taking small explants from the plant, such as leaf or stem segments, andplacing them onto a suitable medium that contains nutrients and growth regulators. The explants are then incubated under controlled conditions of light, temperature, and humidity to stimulate growth and development. 一旦建立了无菌环境，就可以收集和准备植物组织进行培养。
无菌实验室操作规程一、引言无菌实验室是进行微生物学研究和实验的重要场所，为确保实验结果的准确性和可靠性，必须严格遵守相关的操作规程。
本文将详细介绍无菌实验室的操作规程，包括实验室的准备工作、操作步骤、设备使用和消毒方法等。
二、实验室准备工作1. 实验室环境要求- 实验室应位于干燥、通风良好的地方，远离噪音和震动源。
- 温度应控制在20-25摄氏度，相对湿度不超过60%。
- 实验室内应无尘、无杂物，地面、工作台面和设备应保持清洁。
2. 实验室设备和试剂准备- 检查实验室设备的完好性和功能性，确保设备正常工作。
- 准备所需的试剂和培养基，确保其有效期未过期。
三、操作步骤1. 穿戴个人防护装备- 操作前应穿戴实验服、手套、口罩和护目镜等个人防护装备，保护自己免受实验物质的污染。
2. 操作前消毒- 使用70%乙醇或者其他合适的消毒剂对实验台面、设备和工具进行消毒，确保无菌状态。
3. 无菌操作- 在无菌操作台上进行实验，确保操作环境的无菌性。
- 手部消毒后，将所需实验物品放置在无菌操作台上，避免与非无菌物品接触。
4. 培养基制备- 按照实验要求准备培养基，确保培养基的配制准确无误。
- 使用无菌技术将培养基倒入培养皿或者试管中，避免细菌污染。
5. 样品处理- 使用无菌技术将待处理样品转移到培养皿或者试管中，避免细菌污染。
- 注意避免样品的交叉污染，使用专用工具进行样品处理。
6. 培养与孵育- 将培养皿或者试管放入恒温培养箱中，按照实验要求设置合适的温度和时间。
- 定期观察培养物的生长情况，并记录相关数据。
四、设备使用与维护1. 无菌操作台的使用- 使用前应检查无菌操作台的工作状态，确保其正常运行。
- 操作过程中应避免蓦地挪移或者震动无菌操作台，以免影响实验结果。
2. 培养箱的使用- 使用前应检查培养箱的温度控制和通风系统，确保其正常工作。
- 操作过程中应避免频繁开启培养箱，以免影响培养物的生长。
3. 设备维护- 定期对实验室设备进行维护和保养，确保其正常运行。
无菌操作
一、接种室的消毒
1、每天开始工作前用75%酒精喷雾自己周围环境。
2、一天的工作结束后，值日、值班人员要对培养基储存间、三个接种室、两个培养室及风淋室进行紫外灯及臭氧灭菌20~30min。
3、风淋室两个门随时关紧，灭菌间和储存间之间的门除了放培养基外不得随意开门。
风淋室与接种间之间的门要随时关闭！接种四人间对着的门绝对不允许开！
二、无菌操作要求
1、在一楼换各自的护士鞋。
1、进实验室首先要穿过风淋室吹风，换工作服，换拖鞋，戴好帽子、把头发全部包进去、不许有头发留在外面，之后进入实验室。
2、自己的工作服、帽子一周清洗一次。
口罩要保持干净。
4、必须剪除长指甲，接种时用75%酒精擦洗。
5、接种时禁止谈话并戴上口罩。
6、接种过程尽量减少工作人员在接种室的走动。
三、接种前应做好相应的准备工作
1、超净台紫外灯灭菌20min，值日值班人员提前10min 开台子。
2、打开高温灭菌消毒器，温度达到200℃左右时可以使用。
3、此时将当天或某时间段所需要的原瓶苗、培养基、盘子、一瓶无菌水及放置瓶盖的空框子准备好，待紫外灯关闭5min后进入接种室，
4、将事先准备好的原瓶苗及其他物品放到医用小推车上（有条理的
摆放，便于在操作时使用）。
5、于8：20之前和14:50之前进入操作室超净台前进行接种工作。
四、具体的无菌操作步骤如下：
1、首先要拉下超净台挡风板，隔离人体和无菌苗，减少菌的发生。
2、操作前要用酒精喷壶喷洒超净台并用抹布擦干净。
3、将两把解剖刀和镊子放入灭菌消毒器内进行2~3min灭菌，之后放在灭菌支架上，冷却或不烫手的情况下使用。
每做完一瓶无菌分化材料，都应将刀子镊子进行灭菌，否则会引起交叉污染。
3、器具及用品（盘子、培养基、原瓶苗）用酒精喷壶消毒之后，放在超净工作台面上待用（台内只放无菌器具和用品）。
盘子在酒精消毒后，小心地打开报纸，反扣在台面上，手不要触碰碟子，否则碟子会积聚菌，导致瓶苗污染。
4、操作前要检查好所取苗子是否为无菌苗，在发生真菌性污染（在培养基表面有粉状、毛状菌）、细菌性污染（在培养基表面有油状、浓状菌斑）时要将瓶苗放在一边，不可以打开瓶盖，以免发生超净台环境污染。
5、用镊子夹无菌碟并小心放到酒精灯右前方（忌用手拿碟子）。
6、将消毒后的镊子（左）和刀子（右）架在无菌碟上
7、打开瓶盖对无菌分化苗瓶口进行火焰灭菌（打开的瓶盖右手扔进空框里），左手托着瓶身，瓶口斜对着酒精灯火焰，瓶身由里向外旋转2~3圈即可。
8、用镊子夹分化苗放入无菌碟中。
分化苗多的情况下可以分两次放
入碟内切割。
若不慎把分化苗掉到台面上，可以舍弃或者接入另外的培养瓶中，并做记号。
有时，在接种过程中，不小心把镊子或刀子掉在台面，应进行灭菌后才可以使用。
9、分化苗切分。
在切分过程中，接种刀和镊子始终与碟子呈45°以下夹角，不得大于45°，否则手上的杂菌会掉进无菌碟中引起污染。
人体不和超净台桌面紧挨着，碟子在超净台里，不能到台边上。
10、把切分后的苗接入新的培养基。
打开瓶盖，注意瓶口始终倾斜对着酒精灯火焰，瓶盖倒放在桌面上，手尽量不要在瓶盖上边碰，否则杂菌掉在瓶盖上会引起污染。
11、盖瓶盖。
把瓶盖放到酒精灯火焰上烘烤1~2S，盖上瓶口即可。
12、（1）接种完一瓶时若碟内还有剩余的分化苗，再将其接入新的培养瓶中。
（2）若接不满一瓶时，拧紧瓶盖放置在超净台的一边，下次继续用。
13、完成一个接种过程后，右手把镊子刀子灭菌的同时，左手拿一瓶原瓶苗准备下一个接种环节。
14、接种完毕后清理工作台的废物，保持台面整洁。
15、接种结束后，拿出所有用具、容器，关闭超净台并关闭电源。
