粪大肠菌群检测

GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。

2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。

3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。

革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。

5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30min，即成10-1稀释液。

用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。

这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。

乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。

如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。

分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。

证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。

染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。

观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。

结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。

附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。

粪大肠菌群数测量方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以描述该篇文章的研究背景以及粪大肠菌群数测量方法的重要性。

可以参考以下内容进行撰写：概述粪大肠菌群数（Fecal coliform count）是评估水体、食品和环境卫生安全的重要指标之一。

粪大肠菌群数测量方法的准确性和可靠性对于保障公众健康和环境质量至关重要。

随着生活水平的提高和环境污染问题的日益严重，对粪大肠菌群数测量方法的研究与探索变得尤为重要。

本文旨在详细介绍目前常用的三种粪大肠菌群数测量方法，即第一种测量方法、第二种测量方法和第三种测量方法。

通过比较这三种方法的原理、步骤以及各自的优缺点，可以帮助读者更全面地了解和选择合适的测量方法。

本文结构本文分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分对粪大肠菌群数测量方法的研究背景和意义进行了概述。

正文部分详细介绍了三种测量方法的原理、步骤以及优缺点。

结论部分对本文的主要观点进行总结，并对未来相关研究进行展望。

通过本文的阅读，读者可以对粪大肠菌群数测量方法有一个全面的了解，并对选择适合自己研究对象的测量方法具备一定的指导意义。

希望本文能够为相关领域的研究工作者提供有价值的信息和启示，推动粪大肠菌群数测量方法的改进和发展。

1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括对整篇文章的大致框架进行介绍，即各个章节及其内容的概览。

在文章结构部分中，可以简要介绍文章的组成和布局，以帮助读者更好地理解整篇文章的结构和内容安排。

此外，可以提及各个章节的主要目标和内容，以及各个章节之间的逻辑关系。

具体编写文章结构部分的内容如下：文章结构：本文共分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分主要概述了本文的研究背景和目的，同时简要介绍了大纲中各个章节的内容安排。

正文部分详细介绍了三种粪大肠菌群数测量方法：第一种测量方法、第二种测量方法和第三种测量方法。

每种测量方法都包括了原理、步骤和优缺点的详细介绍。

通过对这三种测量方法的讨论和比较，读者可以全面了解不同测量方法的特点和应用情况。

粪大肠菌群的测定1 卫生学意义粪大肠菌群测定的卫生学意义：一、与大肠菌群相比，粪大肠菌群在人和动物粪便中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。

因此，粪大肠菌群的存在表明食品近期内可能直接或间接的受到了粪便的污染；二、作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性；三、常用做贝类和贝类养殖用水的卫生指标。

2 检验方法2.1 术语与定义一群在44.5℃培养24h-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

卫生学概念，又称为耐热大肠菌群，主要是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属等。

2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。

（2）冰箱：2℃～5℃。

（3）恒温水浴箱：46℃±1℃。

（4）天平：感量0.1g。

（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

（6）无菌锥形瓶：容量500mL。

（7）无菌培养皿：直径90mm。

（8）pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。

2.3 培养基和试剂（1）月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：1）成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0g；氯化钠：5.0g；乳糖：5.0g；磷酸氢二钾（K2HPO4）：2.75g；磷酸二氢钾（KH2PO4）：2.75g；月桂基硫酸钠：0.1g；蒸馏水：1000mL；pH：6.8±0.22）制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。

分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。

121 ℃高压灭菌15 min。

（2）EC肉汤（E.coli，BGLB）：1）成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0 g；3号胆盐或混合胆盐：1.5 g；乳糖：5.0g；磷酸氢二钾（K2HPO4）：4.0g；磷酸二氢钾（KH2PO4）：1.5g；氯化钠：5.0g；蒸馏水：1000mL；pH：6.9±0.1。

粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作（1） 培养液初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨 10 g牛肉浸膏 3 g乳糖 5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。

单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。

共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。

双月10个地表水，2个创业。

共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。

创业的水一个月采两次水样复发酵 EC 培养液胰胨 20 g乳糖 5 g胆盐三号 1.5 g磷酸氢二钾 4 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。

三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml（2）做样初发酵：地表水15根管为一个水样。

5根为一组。

第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。

（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。

同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。

将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。

观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。

复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。

粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作（1） 培养液初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨 10 g牛肉浸膏 3 g乳糖 5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。

单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。

共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。

双月10个地表水，2个创业。

共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。

创业的水一个月采两次水样复发酵 EC 培养液胰胨 20 g乳糖 5 g胆盐三号 1.5 g磷酸氢二钾 4 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。

三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml（2）做样初发酵：地表水15根管为一个水样。

5根为一组。

第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。

（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。

同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。

将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。

观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。

复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。

方法验证报告项目名称：粪大肠菌群的测定方法名称：GB 18466-2005粪大肠菌群的检测方法报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1人员情况表1参加验证的人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2使用仪器情况登记表1.3 检测用试剂情况表3使用试剂登记表1.4 环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度18⁓26℃，湿度45%⁓65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行监控。

另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。

2 实验室检测技术能力2.1样品采集与保存按照HJ 91.1的相关规定进行水样的采集。

采集样品时，采样瓶不得用样品洗涤，采集样品于灭菌的采样瓶中。

水体采样量不低于200 ml。

样品采集完毕后，迅速扎上无菌包装纸。

采集废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用采样装置采样。

如果采集的是含有活性氯的样品，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液，以除去活性氯对细菌的抑制作用（每125mL容积加入0.1g/ml的硫代硫酸钠0.1mL）。

采样后应在2 h内检测，否则，应10⁓以下冷藏但不得超过6 h。

实验室接样后，不能立即开展检测的，将样品于4⁓以下冷藏并在2 h内检测。

2.2 检测步骤2.2.1样品准备污水样品至少取200ml，使用前应充分混匀。

根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确认污水样品接种量。

粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为10、1、0.1ml。

粪大肠菌群较多时接种量为1、0.1、0.01ml或0.1、0.01、0.001ml等。

接种量少于1ml时，水样应制成稀释样品后供发酵实验使用。

接种量为0.1、0.01ml时，取稀释比分别为1:10、1:100.其他接种量的稀释比依此类推。

1:10稀释样品的制作方法为：吸取1ml水样，注入盛有9ml灭菌水的试管中，混匀，制成1:10稀释样品。

耐热⼤肠菌群粪⼤肠菌群快速检测（酶底物法）1 适⽤范围本⽅法适⽤于⽣活饮⽤⽔及其⽔源⽔、地表⽔、污⽔、废⽔等⽔中粪⼤肠菌群（耐热⼤肠菌群）的定性检测、定量检测2 ⽅法原理固定底物酶底物法（DST）采⽤⼤肠菌群细菌能产⽣β-半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄⾊的原理，来判断⽔样中是否含粪⼤肠菌群（耐热⼤肠菌群），粪⼤肠的培养温度是44.5℃。

3 仪器设备3.1 程控定量封⼝机3.2电热恒温培养箱3.3 冰箱3.4 51孔定量盘、97孔定量盘3.5 100ml⽆菌⽔样瓶3.6 ⾼压蒸汽灭菌锅3.7 ⼲热灭菌器3.8 量筒3.9 吸管3.10 试管4 培养基和试剂4.1 科⽴得（固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基4.2 ⽆菌⽔5 样品的采集和保存5.1采样前准备：5.1.1 采样瓶：采⽤IDEXX公司科⽴得系统配套的灭菌100毫升消毒带刻度容器。

5.2 样品采样及注意事项5.2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，⽆论在什么条件下采样时，均要⼩⼼开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶⼦颈部受杂菌污染，并注意在使⽤船只或附带的采样绳等附加设备采样时可能造成的污染。

5.2.2 在采集江、河、湖、库、地表⽔样时，可握住瓶⼦底部直接将采样瓶插⼊⽔中，约距⽔⾯10~15厘⽶处，瓶⼝朝来⽔⽅向，使⽔样灌⼊瓶内。

如果没有⽔流，可握住瓶⼦⽔平前推，直⾄充满⽔样为⽌。

采好样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。

采样后，采样瓶内上部应留有⼀些空隙，以便检验前充分混匀⽔样。

5.2.3 ⽤采样器采样时，将⽆菌的⽔样瓶放⼊架内。

将采样装置放⼊⽔中。

到达预定深度后，打开瓶塞，待⽔样灌好后，松开瓶塞的软绳，盖上瓶盖。

再将整个装置提出⽔⾯。

5.2.4 从⾃来⽔龙头采集样品时，不要选⽤漏⽔的龙头，采⽔前可先将⽔龙头⽤酒精灯⽕焰灼烧灭菌或⽤70%的酒精溶液消毒⽔龙头及采样瓶⼝，然后将⽔龙头完全打开，放⽔数分钟后除去⽔管中的滞留杂质。

采⽔时控制⽔流速度⼩⼼接⼊瓶内。

粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是指对人体粪便中的大肠菌群进行检测分析，以了解肠道微生态的状况。

粪大肠菌群的平衡与人体健康密切相关，因此对其进行检测具有重要意义。

目前，有多种方法可用于粪大肠菌群检测，本文将对常见的几种方法进行介绍和比较。

首先，传统的培养法是一种常见的粪大肠菌群检测方法。

该方法通过在特定培养基上培养粪便样本中的细菌，然后根据形态、生理生化特性进行鉴定和计数。

这种方法简单易行，能够得到各种细菌的数量和种类，但是需要较长的培养周期，且无法培养一些难以培养的菌种，因此在一定程度上存在局限性。

其次，分子生物学方法在粪大肠菌群检测中得到了广泛应用。

其中，16SrRNA基因测序是一种常用的方法，通过对粪便样本中的细菌DNA进行测序，可以得到细菌的种类和数量信息。

这种方法具有高通量、高灵敏度的特点，能够检测到微生物群落的整体结构，但是需要较高的技术水平和设备支持。

另外，代谢组学方法也被应用于粪大肠菌群检测。

这种方法通过检测粪便样本中的代谢产物，了解肠道微生物的代谢活动情况，从而推断微生物群落的组成和功能。

代谢组学方法能够直观地反映微生物群落的代谢活动，但是受到代谢产物的多样性和复杂性的限制，需要较高的分析技术和数据处理能力。

此外，基于人工智能的分析方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。

这种方法通过建立粪便微生物组的数据库和模型，利用人工智能算法对样本数据进行分析和预测，从而实现对微生物群落的快速、准确的检测。

人工智能方法具有高效、自动化的特点，但是需要大量的数据支持和算法优化。

综上所述，粪大肠菌群检测方法多种多样，各有优缺点。

在实际应用中，可以根据具体需求和条件选择合适的方法进行检测。

随着科技的不断发展，相信粪大肠菌群检测方法会越来越完善，为人体健康提供更多的帮助。

LPEMS⁄ZYA-43-2011生活饮用水中耐热大肠菌群、总大肠菌群、大肠埃希氏菌的测定——酶底物法一、实验原理该革新的检测技术利用分别由大肠菌群β-半乳糖苷酶及大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶代谢的两种「营养剂─指示剂」：邻硝基苯-β-D-半乳派喃糖（ONPG）及甲基香豆基葡糖醛酸苷（MUG），作为Colilert试剂的主要碳源。

1、利用大肠菌群细菌能产生β2 半乳糖苷酶分解ONPG 使培养液呈黄色，检测大肠菌群；2、利用大肠埃希氏菌产生β2 葡萄糖醛酸酶分解MUG 使培养液在波长366nm 紫外光下产生蓝色荧光，检测大肠埃希氏菌；3、改变培养温度，可检测耐热大肠菌群。

因为大多数非─大肠杆菌属菌类没有这些酶，所以无法在Colilert试剂里生长及干涉这些物质。

而有这些酶的少数非─大肠杆菌属菌类会受到Colilert 特殊配方的基质选择性的抑制作用（专利技术）。

二、仪器和试剂耗材1、检测设备—程控定量封口机Quanti-TraySealer Model 2X 美国IDEXX；2、可充电紫外灯，6W，220V，366nm；3、紫外线防护镜；4、DST酶底物法24小时Colilert试剂美程控定量封口机国IDEXX；5、51孔定量盘（无菌）；97孔定量盘（无菌）6、阳性标准比色瓶，阳性51孔标准比色盘；7、100mL含硫代硫酸钠无菌取样袋/瓶；M U G试剂（科立得）定量盘（51孔或者97孔）取样瓶8.记号笔；9.无菌剪刀；10.无菌夹子；11.一次性医用无菌手套。

四、实验步骤1.操作流程图酶底物法即可以作定性又可以作定量分析，同时检测两个指标，总大肠菌群（total coli）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli），方法简便，快速，结果准确。

2.操作说明注意：如果不按照说明使用机器，可能会有人员伤害、机器损害、其他财产损害以及出现检测结果不准确。

（1）操作前后或离开实验室必须用肥皂或消毒液洗手。

粪大肠菌群国家标准粪大肠菌群是指存在于人和动物的胃肠道内的一类细菌群，其中包括了大肠杆菌等多种细菌。

这些细菌在人体内起着重要的生理功能，但同时也可能引发多种疾病。

因此，制定粪大肠菌群国家标准对于保障公共卫生安全、食品安全和环境卫生具有重要意义。

首先，粪大肠菌群国家标准应明确细菌的检测方法和标准。

目前，常用的检测方法包括培养法、PCR法等，国家标准应明确不同检测方法的适用范围和标准要求，确保检测结果的准确性和可比性。

同时，国家标准还应规定细菌的允许浓度范围，以便监管部门对食品、饮用水、环境卫生等方面进行监测和管理。

其次，国家标准应规定粪大肠菌群在不同环境中的允许浓度限值。

比如在饮用水中，粪大肠菌群的允许浓度应严格控制，以保障民众饮用水的安全。

在食品加工环节，也应规定粪大肠菌群的允许浓度限值，以确保食品的卫生安全。

此外，在环境卫生监测中，国家标准也应规定粪大肠菌群的允许浓度限值，以保障公共环境的卫生与安全。

再次，国家标准还应明确粪大肠菌群的防控措施和应急处置措施。

一旦发现粪大肠菌群超标，应该采取哪些措施来防止疫情扩散，保障公共卫生安全？国家标准应对此进行详细规定，以提供参考依据。

同时，应急处置措施也应该在国家标准中得到规范，以便相关部门在突发事件中能够迅速、有效地处置。

最后，国家标准的制定还需要考虑国际标准的趋势和发展。

粪大肠菌群国家标准应与国际标准保持一致，以便我国在国际贸易中能够顺利对接。

同时，国家标准也应不断更新和完善，以适应不断变化的国内外环境和需求。

综上所述，粪大肠菌群国家标准的制定对于保障公共卫生安全、食品安全和环境卫生具有重要意义。

国家标准的制定需要明确细菌的检测方法和标准、规定允许浓度限值、明确防控措施和应急处置措施，并与国际标准保持一致。

希望相关部门能够加强标准的制定和监管，确保粪大肠菌群在合理范围内，以保障公众的健康和安全。

方法验证报告测试方法：HJ 347.2-2018测试项目：水质粪大肠菌群编写：日期：审核：日期：批准：日期：水质粪大肠菌群的方法验证1.目的确认所采用的方法适合于在本实验室进行对水质的粪大肠菌群的测定，照此方法检测和检验条件进行水样的粪大肠菌群检测，能保证检验结果的准确、可靠。

2.原理和范围2.1原理将样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产生的酸使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。

44℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为是粪大肠菌群。

通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。

2.2范围本法适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。

3.主要仪器3.1 净化工作台。

3.2 立式高压蒸汽灭菌器。

3.3恒温恒湿培养箱。

3.4电热恒温鼓风干燥箱。

3.5电子天平。

3.6酒精灯、试管架、试管（带塞子）、平皿、小倒管、三角烧瓶（带塞子）、刻度吸管、采样瓶、接种环。

4.主要试剂乳糖蛋白胨培养液、EC培养液。

5.检验步骤5.1样品稀释与接种5.1.1 15管法将样品充分混匀后，在5支装有已灭菌5ml三倍乳糖蛋白胨培养液的大试管中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品1ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品0.1ml。

对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样品稀释104倍，然后按照上述操作步骤分别接种10ml 、1ml 、0.1ml 。

当样品接种量小于1ml 时，应将样品制成稀释样品后使用。

按无菌操作要求方式吸取10ml 充分混匀的样品，注入盛有90ml 无菌水的三角烧瓶中，混匀成1：10稀释样品。

粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一种常用的微生物检测方法，用于评估肠道内大肠埃希杆菌等菌群的数量和组成。

以下介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法：
1. 传统培养法：该方法通过将粪便样本接种在含有特定培养基的培养皿中，利用培养皿中的营养物质、温度等条件，使大肠菌群等菌种在培养基上生长。

然后通过观察培养皿中的菌落形态、颜色等特征，或进行进一步的生化试验，来鉴定和计数菌群。

这种方法操作简便，但需要较长时间（通常需要2-3天）。

2. PCR法：PCR（聚合酶链反应）是一种快速、高效的核酸扩增技术，可用于检测微生物的DNA或RNA。

在粪大肠菌群检测中，可以选择一种或多种特异引物，通过PCR扩增粪便样
本中的大肠菌群DNA片段。

扩增后的产物可以进行电泳分析，根据特定的条带模式来鉴定和计数菌群。

相比传统培养法，PCR法的优势在于快速、高灵敏度和特异性。

3. 16S rRNA测序法：16S rRNA是细菌基因组中高保守的区域，其序列具有物种特异性。

基于16S rRNA序列的差异，可以通
过测序技术快速准确地鉴定粪大肠菌群的组成。

该方法可通过提取粪便样本中的总DNA，进行PCR扩增和纯化后，进行高
通量测序。

测序结果可以使用相应的数据库比对，识别和计数样本中的各种大肠菌群。

总结来说，传统培养法、PCR法和16S rRNA测序法是常见的
粪大肠菌群检测方法。

其中，PCR法和16S rRNA测序法更加
快速、准确，逐渐成为主流的检测方法。

这些方法的应用有助于揭示肠道微生物群落的组成和功能，为相关疾病的诊断和治疗提供依据。

G B T肥料中粪大肠菌群的测定集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。

2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。

3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。

革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。

5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200r/min充分振荡30min，即成10-1稀释液。

用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。

这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。

乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。

如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。

分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。

证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。

染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。

观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。

结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。

附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。

粪大肠菌群酶底物法
粪大肠菌群酶底物法是一种通过检测粪便中大肠菌群的酶活性来评估肠道菌群组成和功能的方法。

粪便中的大肠菌群是肠道中常见的一类细菌群落，对肠道的健康和功能有重要的影响。

大肠菌群酶底物法通过添加特定的底物到粪便样品中，检测粪便中的大肠菌群所产生的酶活性。

常用的底物包括羧甲基纤维素(CMC)、乳糖、氨苯酚、硫酸盐等。

通过测定底物在一定时间内被粪菌酶水解的程度来评估粪便中大肠菌群的酶活性。

酶活性水平可以反映大肠菌群的代谢活性和功能状态。

例如，乳糖酶底物法可以评估粪便中乳糖酶的活性，从而判断乳糖不耐受或乳糖酶缺乏的情况。

粪大肠菌群酶底物法可以用于研究肠道菌群的结构和功能的变化，如肠道菌群的失调、肠炎、肠道感染等情况。

它可以为评估肠道健康和指导肠道疾病的治疗提供参考。

大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识总结1、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检验方法（1）大肠菌群（colifoms）在36°C培养48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。

（2）粪大肠菌群（Fecal colifoms）也称耐热大肠菌群。

指大肠菌群中能在44.5℃生长、发酵乳糖产生气体的一群细菌。

与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某-一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的-组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。

食品卫生学意义：作为粪便污染食品的指标菌，MPN值愈低则说明食品受粪便污染程度及对人体健康危害程度愈低。

作为肠道致病菌污染食品的指针，大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系。

（3）大肠埃希氏菌（Escherichia coli）分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属。

是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。

一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。

主要有：O抗原(菌体抗原，150个)；K抗原(荚膜抗原，90个)；H抗原( 鞭毛抗原，50个)（4）致泻性大肠埃希氏菌能侵入肠粘膜上皮细胞,引起食物中毒的大肠埃希氏菌。

产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)-肠胃炎、旅行性腹泻。

致病性大肠埃希氏菌(EPEC)-婴儿腹泻；肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)--出血性结肠炎；(O157：H7；O104：H4；O111；O126等)侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)—杆菌性痢疾；粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)—急慢性腹泻。

2、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的关系3、相关检验方法标准GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数GB 4789.39- -2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数GB4789.6- 2016 食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB4789.36-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏O157:H7/NM检验。

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在本文中，我将对这一主题进行全面评估，并给出我的个人观点和理解。

1. 什么是粪大肠菌群？粪大肠菌群是指属于大肠埃希菌科、大肠杆菌属的一类细菌群体。

在人类肠道中，大肠菌群扮演着重要的角色，它们能够合成维生素、帮助消化食物、提供益生菌等益处。

粪大肠菌群的检测对于了解肠道健康非常重要。

2. 检出限对粪大肠菌群检测的影响粪大肠菌群检测结果通常以检出限表示。

检出限是指检测方法能够可靠地区分出阳性和阴性结果的最低限度。

当检测结果低于检出限时，通常会被标记为“未检出”或“<检出限”。

这就意味着在该样本中，粪大肠菌群的数量在检出限以下，因此无法确定其确切数量。

3. 对检出限的合理报出粪大肠菌群等检测结果的报出方式应符合科学可靠性和客观性的要求。

在实践中，有两种常见的报出方式：a. 报告数量范围：有些实验室会报告数量范围，例如“100-1000 CFU/g”。

这种报出方式可供参考，但并不能确切反映样本中粪大肠菌群的数量，仅表示数量处于这个范围之间。

b. 定量报出：另一种方式是使用定量方法确切报告粪大肠菌群的数量，例如“500 CFU/g”。

这种报出方式更准确，但需要检测方法具备足够的灵敏度和高质量的标准曲线才能进行。

4. 粪大肠菌群检出限的意义与应用粪大肠菌群检出限之所以被引入，是因为在某些意义上，较低的检出量对于衡量肠道健康并不具备重要意义。

无论是数量较低还是高，其关键是保持肠道菌群的平衡。

我们不应仅仅关注检出限以下的结果，而是要结合其他指标和临床情况进行综合分析。

5. 我的观点和理解在我看来，粪大肠菌群等检出限及结果报出问题并不应该被过于夸大或过于简化。

在进行相关检测时，我们要有清醒的认识，了解检测方法和结果的局限性，并将其融入到更全面的分析框架中。

总结及回顾：通过本文，我们总结了粪大肠菌群等检出限及结果报出问题，并探讨了其意义和应用。