主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验 第4章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备

初级检验士考试（临床免疫学和免疫检验）练习题第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备第四章单克隆抗体与基因工程抗体制备技术一、A11、多发性骨髓瘤细胞是制备B淋巴细胞杂交瘤细胞的理想细胞，其特点不包括A、稳定和易培养B、自身无分泌功能C、改变细胞恶性变化D、融合度高E、亲缘较近2、双特异性抗体分子的应用不包括A、免疫学诊断B、肿瘤放射显像C、介导药物杀伤D、介导细胞杀伤E、介导补体的生物学活性3、关于杂交瘤细胞特点的错误描述A、具备了双亲细胞的特点B、分泌人源性单克隆抗体C、分泌鼠源性单克隆抗体D、体外繁殖快速E、能分泌抗体4、制备单克隆抗体，选择培养基要选择融合的A、脾细胞与骨髓瘤细胞B、骨髓瘤细胞与淋巴瘤细胞C、脾细胞与脾细胞D、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞E、淋巴瘤细胞与淋巴瘤细胞5、HAT培养基中三种关键成分为A、次黄嘌岭、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷B、黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷C、氨基嘌岭、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷D、腺嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷E、鸟嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷6、人－鼠嵌合抗体是A、人IgV区与鼠IgC区连接B、人IgC区与鼠IgV区连接C、人Ig与鼠Ig重组D、鼠IgV与人IgV区重组E、以上都是7、小鼠骨髓瘤细胞与下列哪种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生单克隆抗体A、经过免疫的B淋巴细胞B、经过免疫的T淋巴细胞C、未经过免疫的B淋巴细胞D、未经过免疫的T淋巴细胞E、以上均不对8、生产单克隆抗体细胞最常用的培养方法为A、液体培养B、半固体培养C、固体培养D、鸡胚培养E、动物接种9、可以得到完全人源化抗体，在肿瘤的诊断与治疗中具有独特优越性的是A、嵌合抗体B、小分子抗体C、双特异性抗体D、单克隆抗体E、噬菌体抗体库技术10、双特异性抗体分子的构建是A、特异性不同的两个小分子抗体连接B、特异性相同的两个小分子抗体连接C、在小分子抗体的氨基端设计半胱氨酸残基D、提高抗体的特异性E、只能从Fab组建11、杂交瘤细胞保存最好在A、室温B、-4℃C、-20℃D、-70℃E、液氮二、B1、A.次黄嘌呤B.胸腺嘧啶核苷C.HGPRTD.甲氨蝶呤E.叶酸<1> 、次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶是A、B、C、D、E、<2> 、是叶酸的拮抗药A、B、C、D、E、答案部分一、A11、【正确答案】C【答案解析】多发性骨髓瘤是B细胞系恶性肿瘤，其特点是稳定易培养、自身不分泌免疫球蛋白及细胞因子、融合率高，是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶的缺陷株，为理想的脾细胞融合对象。

第四章单克隆抗体与基因工程抗体制备技术本章考点1.概念2.杂交瘤技术基本原理3.杂交瘤抗体的制备技术4.基因工程抗体由杂交瘤细胞产生的针对抗原分子上某一单个抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。

其理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、且来源容易。

传统的方法是将抗原注入动物，由动物体内B细胞产生的抗体。

由于多数天然的抗原分子具有多种抗原决定簇，每一种决定簇可激活具有相应抗原受体的B细胞产生针对某一抗原决定簇的抗体。

因此，将抗原注入机体后，刺激多个B细胞克隆所产生的抗体是针对多种抗原决定簇的混合抗体，故称为多克隆抗体（PoAb）。

第一节杂交瘤技术基本原理单克隆是指利用在细胞融合基础上的B细胞杂交瘤技术。

杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。

这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。

被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。

在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。

一、B细胞杂交瘤技术1.细胞的选择和融合：杂交瘤技术的目的是制备对抗原特异性的单克隆抗体，所以融合一方必须是经过抗原免疫的B细胞，通常选用被免疫动物的脾细胞，脾淋巴细胞的主要特征是抗体分泌功能。

融合细胞另一方则要求在培养条件下的永生性，只有肿瘤细胞才是具备这一条件，所以选择同一体系的骨髓瘤细胞，因多发性骨髓瘤是B细胞系恶性肿瘤，其特点是稳定易培养、自身不分泌免疫球蛋白及细胞因子、融合率高、是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶（HGPRT）的缺陷株，是理想的脾细胞融合对象。

2.选择培养基的应用：细胞融合的选择培养基中有三种关键成分：次黄嘌呤（H）、氨甲蝶呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T），所以取三者的字头称为HAT培养基。

临床检验技师-临床免疫学和免疫检验(2019)练习第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备12019第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备一、A11、HAT培养基中，阻断细胞DNA合成主要途径的成分是A、HB、AC、TD、H+AE、T+A2、小鼠骨髓瘤细胞与下列哪种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生单克隆抗体A、经过免疫的B淋巴细胞B、经过免疫的T淋巴细胞C、未经过免疫的B淋巴细胞D、未经过免疫的T淋巴细胞E、以上均不对3、制备单克隆抗体最常用的细胞融合剂为A、HATB、8-AGC、PEGD、PHAE、BSA4、细胞克隆化的常用技术为A、加饲养细胞B、HAT培养基培养C、有限稀释法D、软琼脂培养法E、显微操作技术5、关于杂交瘤细胞特点的错误描述A、具备了双亲细胞的特点B、分泌人源性单克隆抗体C、分泌鼠源性单克隆抗体D、体外繁殖快速E、能分泌抗体6、各种单克隆抗体分子都有的特性是A、分子量在10000以下B、具有两个完全相同的抗原结合部位C、H链与L链借非共价键相连D、能结合补体E、能产生沉淀反应7、小鼠骨髓瘤细胞与下列哪种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生单克隆抗体A、经过免疫的B淋巴细胞B、经过免疫的T淋巴细胞C、未经过免疫的B淋巴细胞D、未经过免疫的T淋巴细胞E、以上均不对8、阳性杂交瘤细胞克隆化培养时，多少细胞数才能进行克隆化培养A、单个B、多个C、双个D、混合E、没有数目限制9、人－鼠嵌合抗体是A、人IgV区与鼠IgC区连接B、人IgC区与鼠IgV区连接C、人Ig与鼠Ig重组D、鼠IgV与人IgV区重组E、以上都是10、多发性骨髓瘤细胞是B淋巴细胞杂交瘤细胞的理想细胞，其原因不包括下列哪项A、稳定和易培养B、自身无分泌功能C、改变细胞恶性变化D、融合度高E、HGPRT缺陷11、双特异性抗体分子的应用不包括A、免疫学诊断B、肿瘤放射显像C、介导药物杀伤D、介导细胞杀伤E、介导补体的生物学活性12、B细胞杂交瘤技术中细胞融合的选择培养基是A、HAT培养基B、次黄嘌呤培养基C、甲氨蝶呤培养基D、嘧啶核苷培养基E、胸腺嘧啶核苷培养基13、杂交瘤细胞保存最好在A、室温B、-4℃C、-20℃D、-70℃E、液氮14、能够在HAT培养基长期存活的细胞是A、脾-瘤融合细胞B、脾细胞C、骨髓瘤细胞D、脾-脾融合细胞E、瘤-瘤融合细胞15、HAT培养基中三种关键成分为A、次黄嘌岭、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷B、黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷C、氨基嘌岭、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷D、腺嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷E、鸟嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷16、多发性骨髓瘤细胞是制备B淋巴细胞杂交瘤细胞的理想细胞，其特点不包括A、稳定和易培养B、自身无分泌功能C、改变细胞恶性变化D、融合度高E、亲缘较近17、可以得到完全人源化抗体，在肿瘤的诊断与治疗中具有独特优越性的是A、嵌合抗体B、小分子抗体C、双特异性抗体D、单克隆抗体E、噬菌体抗体库技术18、生产单克隆抗体细胞最常用的培养方法为A、液体培养B、半固体培养C、固体培养D、鸡胚培养E、动物接种19、双特异性抗体分子的构建是A、特异性不同的两个小分子抗体连接B、特异性相同的两个小分子抗体连接C、在小分子抗体的氨基端设计半胱氨酸残基D、提高抗体的特异性E、只能从Fab组建20、制备单克隆抗体，选择培养基要选择融合的A、脾细胞与骨髓瘤细胞B、骨髓瘤细胞与淋巴瘤细胞C、脾细胞与脾细胞D、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞E、淋巴瘤细胞与淋巴瘤细胞二、B1、A.次黄嘌呤B.胸腺嘧啶核苷C.HGPRTD.甲氨蝶呤E.叶酸、次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶是A B C D E、叶酸的拮抗药是A B C D E答案部分一、A11、【正确答案】B【答案解析】杂交瘤细胞由骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成的，其合成DNA的主要途径被氨基蝶呤（A）阻断。

单克隆抗体与基因工程抗体的制备技术掌握：1.杂交瘤技术的基本原理2.抗体工程的基本技术一、单克隆抗体技术（Monoclonal antibody，McAb）（一）概述：克隆（clone）：由单个细胞繁殖、扩增而形成性状均一的细胞集落的过程称为克隆。

多克隆抗体（polyclonal antibody，PcAb）：大多数抗原分子具有多个表位，每一种表位均可刺激机体一个B细胞克隆产生一种特异性抗体。

传统制备抗体的方法是用包含多种表位的抗原物质免疫动物，从而刺激多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。

因此，所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，称为多克隆抗体。

单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）：由一个仅识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体，称为单克隆抗体−−→单个克隆→B−）淋巴细胞化学性质单一、特异性强的抗体（单克隆抗体细胞群①哺乳动物在感染病原体后，体内会形成多种相应的B淋巴细胞（浆细胞），因而产生多种特异性抗体。

②每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。

多克隆抗体：劣势：均一性差、特异性低、排斥副反应强。

单克隆抗体：优势：活性专一、特异性强、纯度高、副反应弱。

（二）杂交瘤技术的基本原理1.杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞后同时保持两者的主要特性。

2.细胞的选择与融合：(1)亲本1：经过抗原免疫的B细胞，通常来源于免疫动物的脾细胞。

(2)亲本2：肿瘤细胞，通常选择多发性骨髓瘤细胞（Sp2/0）。

其具备以下特点为：①与B细胞为同一体系，可增加融合的成功率②稳定、易培养③自身不分泌Ig或CK④融合率高⑤是HGPRT缺陷株3.融合剂（fusogen）①引起融合的病毒：副粘病毒②化学制剂：聚乙二醇（PEG）③细胞电融合技术：电脉冲（三）选择培养基的应用1.细胞融合是一个随机的物理过程。

融合后可能出现以下情况：①脾细胞与瘤细胞②瘤细胞与瘤细胞③脾细胞与脾细胞④未融合的瘤细胞⑤未融合的脾细胞⑥细胞多聚体形式2.杂交瘤细胞的选择性培养基——HAT培养基细胞的DNA合成一般有两条途径：(1)主要途径：糖和氨基酸→核苷酸→DNA(2) 替代途径：1) 细胞融合的选择培养基中有三种关键成分：①次黄嘌呤（hypoxanthine，H）②甲氨蝶呤（aminopoterin，A）③胸腺嘧啶核苷（thymidine，T）2)三者取前缀缩写为HAT培养基3)原理：叶酸作为重要的辅酶参与DNA主要合成过程，氨基喋呤是叶酸的拮抗剂，能阻断该主要合成途径。

第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备第一节杂交瘤技术的基本原理第二节单克隆抗体的制备第三节基因工程抗体制备第四节单克隆抗体的应用将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。

第一节杂交瘤技术的基本原理杂交瘤技术的原理是使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，成为杂交瘤细胞，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。

将这种杂交瘤细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。

一、杂交瘤技术包括两种亲本细胞的选择与制备，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选与克隆化。

（一）小鼠骨髓瘤细胞细胞株稳定，易于传代培养。

细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子。

该细胞是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶（HGPRT）的缺陷株。

（二）免疫脾细胞免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法。

如为珍贵微量抗原，可用脾脏内直接注射法进行免疫。

（三）细胞融合PEG（聚乙二醇）可能导致细胞膜上脂类物质的物理结构重排，使细胞膜容易打开而有助于细胞融合。

（四）杂交瘤细胞的选择性培养HAT培养液，是在基础细胞培养液内添加次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷。

1.脾细胞（指B细胞）在一般培养基中不能生长繁殖。

2.骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT而合成DNA，骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能增殖而死亡。

3.杂交瘤细胞由骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成的杂交瘤细胞。

由于与脾细胞融合，可获得其HGPRT，可以合成DNA。

因此，杂交瘤细胞在选择性培养得以生存而被筛选出来。

二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养单个细胞培养又称克隆化。

细胞克隆化有以下几种方法：1.有限稀释法；2.显微操作法；3.荧光激活细胞分选仪；4.软琼脂平板法。

三、阳性杂交瘤细胞的冻存目前均采用液氮保存细胞。

细胞放入液氮前，需要逐步降温。

复苏细胞时，从液氮罐内取出冻存管，立即浸入37℃水浴。

第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备一、A11、阳性杂交瘤细胞常用的保存方法是（）。

A、4℃冰箱保存B、37℃保存C、-20℃保存D、-30℃保存E、液氮（-196℃）保存2、培养骨髓细胞时为避免返祖，定期用于处理细胞的是（）。

A、PEGB、TKC、8-AGD、HATE、ConA3、制备单克隆抗体时为获得经过抗原免疫的B细胞通常采用（）。

A、B细胞体外培养B、小鼠腹腔内接种抗原C、大白鼠体内接种抗原D、小鼠肌肉内接种抗原E、小鼠皮下注射B细胞4、能在HAT培养基生长繁殖的细胞是（）。

A、小鼠脾细胞B、小鼠骨髓瘤细胞C、饲养细胞D、杂交瘤细胞E、以上都可以5、免疫治疗中，同时具有特异性结合Tc和肿瘤细胞的抗体是（）。

A、单链抗体B、人源化抗体C、双价抗体D、嵌和抗体E、双特异性抗体6、单克隆抗体制备过程中用于阻断瘤细胞通过正常途径合成DNA的化合物是（）。

A、次黄嘌呤B、胸腺嘧啶核苷C、叶酸D、聚乙二醇E、甲氨蝶呤7、人源化抗体是（）。

A、由鼠抗体的Fc与人抗体的Fab组成B、由鼠体内编码人抗体的基因指导合成的抗体C、由2个相串联的人抗体Fab段连接而成D、用鼠抗体CDR嵌如人抗体可变区而成E、完全的人体合成抗体8、制备单克隆抗体常选用小鼠的哪类细胞作为饲养细胞（）。

A、中性粒细胞B、K细胞C、肥大细胞D、成纤维细胞E、腹腔细胞9、单克隆抗体的应用不包括（）。

A、肿瘤的诊断B、肿瘤的定位C、血清Cl-含量测定D、激素水平检测E、抗原物质的提取及纯化10、单克隆抗体制备时作为细胞融合剂的是（）。

A、HATB、PEGC、TKD、DNAE、ConA答案部分一、A11、【正确答案】E【答案解析】克隆化培养后的阳性杂交瘤细胞应及时冻存，最好保存在-196℃液氮中。

【答疑编号100065709】2、【正确答案】C【答案解析】细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，应定期用8-氮鸟嘌呤（8-AG）进行处理，使生存的细胞对HAT呈均一的敏感性。