比色法测定土壤中氨态氮有效磷速效钾

一、土壤水解性氮的测定(一)方法原理土壤水解性氮或称碱解氮包括无机态氮(铵态氮、硝态氮)及易水解的有机态氮(氨基酸、酰铵和易水解蛋白质)。

用碱液处理土壤时，易水解的有机氮及铵态氮转化为氨，硝态氮则先经硫酸亚铁转化为铵。

以硼酸吸收氨，再用标准酸滴定，计算水解性氮含量。

(二)操作步骤称取通过1毫米筛的风干土样2克(精确到0.01克)和硫酸亚铁粉剂0.2克均匀铺在扩散皿外室，水平地轻轻旋转扩散皿，使土样铺平。

在扩散皿的内室中，加入2毫升2％含指示剂的硼酸溶液，然后在皿的外室边缘涂上碱性甘油，盖上毛玻璃，并旋转之，使毛玻璃与扩散皿边缘完全粘合，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条狭缝，迅速加入10毫升1.07molL-1NaOH液于扩散皿的外室中，立即将毛玻璃旋转盖严，在实验台上水平地轻轻旋转扩散皿，使溶液与土壤充分混匀，并用橡皮筋固定；随后小心放入40℃的恒温箱中。

24小时后取出，用微量滴定管以0.005molL-1的H2SO4标准液滴定扩散皿内室硼酸液吸收的氨量，其终点为紫红色。

另取一扩散皿，做空白试验，不加土壤，其他步骤与有土壤的相同。

(三)结果计算C×(V-V0) ×14土壤中水解氮(mgkg-1)＝——-----------------———×1000WC——H2S04标准液的浓度V——样品测定时用去H2S04标准液的体积V0——空白测定时用去H2S04标准液的体积14——氮的摩尔质量1000——换算系数W——土壤重量(克)(四)注意事项在测定过程中碱的种类和浓度、土液比例、水解的温度和时间等因素对测得值的高低，都有一定的影响。

为了要得到可靠的、能相互比较的结果，必须严格按照所规定的条件进行测定。

(五)主要仪器及试剂配制1、仪器：扩散皿、半微量滴定管(5毫升)和恒温箱。

2、试剂：(1)1.07molL-1Na0H：称取42.8克NaOH溶于水中，冷却后稀释至1升。

土壤速效氮磷钾有机质测定方法土壤中的速效氮、磷、钾含量以及有机质含量对土壤肥力评价和农作物生长有重要的影响。

因此，准确快速地测定土壤中这些指标的含量是农业生产管理和土壤健康评估的关键。

测定土壤速效氮的方法1.硝态氮的测定方法：采用两步直接反应法。

首先采用无机参比品来标定硝酸根的吸光度，然后采用硝酸还原和吸收法来提取和测定硝态氮。

这种方法的优点是操作简单、准确度高，并且适用于各种土壤类型。

2.铵态氮的测定方法：采用钠水合氢化物还原法。

首先将土样置于高温高压条件下与钠水合氢化物反应，然后通过蒸馏和酸碱滴定来测定土壤中的铵态氮含量。

这种方法的优点是灵敏度高、可靠性强，适用于各种土壤类型。

测定土壤速效磷的方法1.遥感测定法：通过卫星遥感技术来估算土壤中的速效磷含量。

这种方法能够快速地获取大范围土壤状况信息，但需要有特定的卫星图像和地面验证数据来建立模型。

2.酶解法：采用酶解物理法或酶解化学法来提取土壤中的速效磷。

物理法主要是利用酶解提取，化学法主要是利用酶解溶液中酶的作用将磷转化为可溶性磷。

这种方法的优点是操作简单、准确度高，适用于不同类型的土壤。

测定土壤速效钾的方法1.钾离子选择电极法：通过钾离子选择电极和离子选择电极法来直接测定土壤中的速效钾含量。

这种方法的优点是操作简单、测量准确，适用于不同类型的土壤。

2.环己基銨法：通过环己基銨法来提取土壤中的速效钾。

首先采用銨离子形成络合物，然后通过光度计进行测定。

这种方法的优点是灵敏度高、准确度好，适用于各种土壤类型。

测定土壤有机质的方法1.官能团分析法：通过红外光谱仪来测定土壤中的有机质含量。

这种方法可以快速准确地分析土壤中有机质的类型和含量，并且不需进行复杂的预处理。

2.等温酸解法：将土壤样品与浓硫酸在恒温条件下反应，然后通过滴定法测定土壤中有机质的含量。

这种方法的优点是操作简单、快速，适用于不同类型的土壤。

在进行土壤速效氮磷钾和有机质测定时，需要注意样品的采集和保存，并且在进行测定之前进行样前处理，以保证结果的准确性。

土壤有效氮磷钾测定方法土壤速效钾的测定试剂：乙酸铵溶液，[c(ch3coonh4)=1mol2l-1]：称取77.08g乙酸铵溶近1l水中，用叶唇柱乙酸(ch3cooh)或氨水(1：1)(nh32h2o)调节ph值7.0，用水吸收至1l。

该溶液不必长摆；钾标准溶液[ρ(k)=100μg2ml-1]：称取在110℃烘2h的氯化钾(优级纯)0.1907g，用水溶解后定容至1l，贮于塑料瓶中保存。

（乙酸铵的钾标准溶液不能久放，以免长霉影响测定结果）分析步骤：称取通过2mm孔径筛的风干试样5.00g于200ml塑料瓶中，加入50.00ml乙酸铵溶液(土液比为1：10)，盖紧瓶塞，摇匀，在15℃~25℃下，150r/min~180r/min震荡30min，干活过滤器。

滤液轻易在火焰光度计上测量或经适度吸收后用原子稀释分光光度计测量。

同时搞空白试验。

（若样品含量过低须要吸收时，应当使用乙酸铵金属粉末剂吸收定容，以消解基体效应）标准曲线的绘制：分别吸取100μg2ml-1的钾标准溶液0.00、3.00、6.00、9.00、12.00、15.00ml于50ml容量瓶中，用乙酸铵溶液定容，即为浓度0、6、12、18、24、30μg2ml-1的钾标准系列溶液。

以钾浓度为零的溶液调节仪器零点，用火焰光度计或原子吸收分光光度计测定，绘制标准曲线或求回归方程。

土壤有效率磷测量试剂：无磷活性碳粉：例如所用活性含磷，应先用1：1盐酸溶液煮沸24h，然后移往平板圆柱形抽气过滤器，用水热解至并无cl-年才(约4~5次)，再用碳酸氢钠金属粉末剂煮沸24h，在平板圆柱形上抽气过滤器，用水洗天下碳酸氢钠，并至无磷年才，研磨水泵；氢氧化钠溶液[ρ(naoh)=100g2l-1]：称取10g氢氧化钠溶于100ml水中；碳酸氢钠浸提剂[ρ(nahco3)=0.5mol2l-1，ph=8.5]称取42.0g碳酸氢钠(nahco3)溶于约950ml水中，用100g2l-1氢氧化钠溶液调节ph至8.5(用酸度计测定)，用水稀释至1l。

比色法测定土壤中氨态氮、有效磷、速效钾1.实验仪器及药品1.1实验仪器：可见分光光度计、磁力搅拌仪、pH计、滴管。

2.2所需药品：浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、无水硫酸钠、碳酸氢钠、无磷活性炭、酒石酸钾钠、阿拉伯胶、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、酒石酸钠、钼酸铵、氯化亚锡、甘油、五水硫酸铜、酒石酸、EDTA-Na2、四笨硼钠、磷酸二氢钾、硫酸氨、硝酸钾、硫酸钾。

2.实验试剂配制：2.1 (1+9）硫酸溶液：1体积硫酸+9体积水2.2 (1+1)盐酸溶液：盐酸与水1:1混合2.3氢氧化钠溶液：100g/L2.4联合浸提剂：称取无水硫酸钠53.12g，碳酸氢钠37.8g，溶于800mL水中，用（1+9）硫酸或氢氧化钠溶液将pH值调至8.5，蒸馏水定容至1000mL。

2.5无磷活性炭2.6氨态氮掩蔽剂：400g/L酒石酸钾钠溶液。

2.7氨态氮助色剂：50g/L阿拉伯胶溶液。

2.8氨态氮显色剂：称取碘化钾50g溶于50mL水中，边搅拌边加入饱和氯化汞溶液，直至出现少量的紫红色沉淀充分搅拌后不溶解为止。

缓缓加入氢氧化钾150g，搅拌使其溶解，定容至1000mL，转移到大烧杯中静置过夜，取上清液。

2.9氨态氮强色剂：300g/L氢氧化钠溶液。

2.10有效磷掩蔽剂：10g/L酒石酸钠溶液。

2.11有效磷显色剂：35g/L钼酸铵溶液:量取146mL浓硫酸，溶于500mL水中，冷却；另取35g钼酸铵溶于200mL 水中；将硫酸缓缓倒入钼酸铵溶液中，边加边搅拌，最后加水定容至1000mL。

2.12有效磷还原剂：20g/L氯化亚锡甘油溶液：称取氯化亚锡20g溶于100mL盐酸中，充分溶解后转入1000mL容量瓶中，用甘油定容至1000mL。

2.13速效钾掩蔽剂：称取五水硫酸铜5g，酒石酸12g，溶于500mL水中，加入浓硫酸200mL，冷却后定容至1000mL。

2.14速效钾助掩剂：75g/LEDTA-Na2溶液。

2.15速效钾浊度剂：62.5g/L四笨硼钠溶液：称取氢氧化钠8g溶于80mL水中，冷却后定容至100mL，即得2mol/LNaOH 溶液，备用；另取四笨硼钠62.5g，溶于900mL水中，加入0.5mL 2mol/L NaOH 溶液，摇匀，定容至1000mL，过滤至溶液澄清。

我国为与国际接轨，1996年国家将配方施肥改称为平衡配套施肥。

平衡配套施肥是在施用农家肥、秸秆还田培肥地力的基础上，根据目标产量需肥量，土壤供肥能力，肥料效益，科学地搭配N,P,K肥及微肥，提出合理的施用时期，方法，达到高产，同时提高土壤肥力，是农业部“九五”期末“沃土工程”的重要内容之一。

普及平衡施肥技术的关键是解决快速测定出不同土壤的有机质、速效磷、速效钾等养分数据，掌握土壤供肥能力，以作为确定水稻施用肥料的种类、数量、施肥方法的重要依据。

采用目前国内的土壤常规分析法测定土壤养分，尽管分析结果的可靠性、准确性、再现性，精密度都好。

但是，一是需要精密的仪器设备和大量的化学试剂，投资大；二是全过程分析的技术性强，须具有一定专业文化水平且经专门培训后，才能独立掌握；三是分析程序烦琐、费时，不能解决快速测定大批土样的问题。

因此进行了土壤速测法的筛选与应用。

1 土壤有机质、速效钾、酸碱度速测方法的筛选 有机质、速效钾、酸碱度3个项目都有两种以上速测法，究竟哪一方法适宜？有机质有重铬酸钾氧化比色法和铬合碱溶比色法。

速测法选用了重铬酸钾氧化比色法，因为它具有操作简便，色阶色调变化明显，易于分辨，制作的标准色阶适用于各种土类的优点，而铬合碱溶比色法用EDTA浸提剂浸提不同土类时，腐殖的浸出量并不一致，而且浸出液的色调也有差别，因此不能用统一的标准色阶来速测不同土类的有机质含量。

遵义市有5个土类，贵州省有8个土类，按每个土类制作标准色阶很麻烦，再说贵州是山区，耕地土壤分散、零碎、土壤类型交错分布，速测土壤有机质之前须划分和判别出土壤类型，花工费时。

速效钾有四苯硼钠比浊法和亚硝酸钴比浊法两种，选用前者。

因为，一是四苯硼钠与待测液中的钾离子在pH8的碱性介质中，形成溶解度极低（1.8×10-5mol/L）的四苯硼钾白色微细颗粒，溶解度极低。

微细颗粒在液体中就获稳定，即浑浊度稳定，比浊测定结果就获稳定；二是四苯硼钾通常不受室温变化的影响，在不同季节的常温下均可进行测定。

1土壤碱解氮的测定（包括硝态氮，扩散法）
一．试剂：
1.甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：0.099g溴甲酚绿和0.066g甲基红放到玛瑙研钵中混合加入100mL乙醇（95%乙醇），研磨至指示剂全部溶解。（装滴瓶）
2. 2%硼酸溶液：20g硼酸溶于1L水中（PH4.5—5.5之间）。
3. 1.07N氢氧化钠：42.8g氢氧化钠溶于1L水中。
吸取滤液10mL置于50mL容量瓶中，加少量水，再加2，6一二硝基酚指示剂2滴，用4N氢氧化钠和2N硫酸调至微黄色，加钼锑抗溶液5mL，用水定溶。摇匀，同时做空白试验。在300C的条件下放置半小时后，在分光光度计上波长700nm处和1cm光径的比色杯进行比色测定。
三 .工作曲线绘制：
准确吸取5PPm磷标准溶液0 0.5 1 2 34 56mL分别吸入50mL容量瓶里，加少量水,加2，6一二硝基酚指示剂2滴，用4N氢氧化钠和2N硫酸调至微黄色，加钼锑抗溶液5mL，用水定溶。
8. 0.01139N硫酸氮标液：吸取0.2279N硫酸氮标液50mL置于1L容量瓶中，用蒸馏水定容。（一般用这个浓度的滴定）
9. 0.02279N硫酸氮标液：吸取0.2279N硫酸氮标液100mL置于1L容量瓶中，用蒸馏水定容。（这个浓度的一般不需要配）
二．标准溶液的计算公式：
m
(V1-V2) × 0.05299
二．工作曲线的绘制：
准确吸取100PPm钾标准溶液2 2.5 5 7.5 10 15 20mL分别吸入50mL容量瓶中，用1N中性醋酸铵定容。
四．仪器：
50mL容量瓶火焰光度计塑料瓶或三角瓶漏斗滤纸振荡机
五．计算：
测得显色液中钾质量浓度×加入浸体剂ml数×水分系数
风干样品重
测得显色液中磷质量浓度×50×水分系数

土壤铵态氮的测定方法土壤铵态氮等测定方法原理:用2mol/L KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH+4及水溶性NH+4浸提出来。

土壤浸出液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。

在含氮0.05~0.5mg/L的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

实验步骤：（1）称取10.00g新鲜土样（精确到0.01g），置于200ml 三角瓶中，加入KCl溶液100ml，在摇床里振荡30min，取出静置后，取上清液过滤；（2）吸取浸提液5ml放入50ml容量瓶中，后加入KCl 溶液10ml、苯酚溶液5ml、次氯酸钠碱性溶液5ml,摇匀；（3）在25℃左右室温下放置1小时后，加入掩蔽剂1ml,然后用水定容至刻度，在625nm波长处进行比色。

工作曲线绘制：分别取0.00 ，0.50 ，1.00 ，2.00 ，3.00 ，4.00 ，5.00ml 铵态氮标准溶液于50ml容量瓶中，各加入10ml KCl溶液,然后同(2) (3)步骤进行。

试剂配制：【2mol/L KCl溶液】: 称取149.1g KCl(分析纯)溶入水中，稀释至1L。

【苯酚溶液】：称取苯酚（分析纯）10g、NaOH （分析纯）5g和消极铁氰化钠(分析纯)0.1g稀释至1L。

（此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在冰箱中4℃保存，使用时用酸调节PH酸性）【次氯酸钠碱性溶液】：称取NaOH（分析纯）10g、磷酸氢二钠（分析纯）7.06g、磷酸钠（分析纯）31.8g和52.5g/L 次氯酸钠（分析纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10mL 溶于水中，稀释至1L.(贮于棕色瓶中，在冰箱中4℃保存，使用时放置至室温)【掩蔽剂】: 将400g/L的酒石酸钾钠（分析纯）与100g/L 的EDTA二钠盐溶液等体积混合。

每100ml混合液中加入10mol/L NaOH溶液0.5ml。

【铵态氮标准溶液】：称取0.4717g于105℃烘2小时的(NH4)2SO4(分析纯)溶于水，定容至1L。

离心替代过滤，酶标仪替代分光光度计的土壤全磷测试方法1.用万分之一天平，称取1g左右的风干土，记录下重量。

2.加入8ml浓硫酸，放置过夜后加入10滴高氯酸，消煮至白色。

3.在50ml消煮管中定容，可以先加水1/3，混匀后再加水至刻度线附近，放置过夜后再加水至刻度线，摇匀。

4.吸取1ml消煮液到1.5ml离心管中，10000rpm，离心1分钟。

5.吸取50ul上清液+750ul H2O+100ul NaOH(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离心管中。

6.摇匀后，14000rcf离心一分钟，室温高于15℃情况下，30min后，吸取300ul至酶标板比色备注：5.中吸取的上清液的量可根据显色状况调整，相应地NaOH的量也要做出调整，保证比色体系体积为1ml，氢离子浓度为0.55mol/L左右，每个样品做三个重复，重复间允许误差<0.005%即50mg/kg。

磷酸二氢钾工作曲线制做方法1.先将100mg/L(0.4394g KH2PO4(烘干2小时)先加水300ml，再加5ml浓硫酸，再定容到1L)的磷标贮液(磷酸二氢钾溶液)稀释20倍，比如吸取5ml定容到100ml2.配制3.摇匀后，10000rpm离心一分钟，室温高于15℃情况下，30min后，吸取300ul至酶标板比色备注：利用散点图绘制曲线，添加趋势线和r值，r^2要大于0.999。

利用forecast.line函数计算比色液磷含量钼锑抗配制方法1.浓硫酸153ml加入500ml左右H2O(用1L的烧杯)，用磁力搅拌器搅匀2. 1L烧杯中加入10g 钼酸铵,用磁力搅拌器融化3. 0.5g酒石酸锑钾加入100ml左右H2O(用100ml的烧杯)，用磁力搅拌器溶化4. 步骤3所得溶液倒入1L烧杯，在磁力搅拌器上混合均匀，定容到1L备注：避光储存，使用时每10ml 加入0.15g抗坏血酸二硝基酚溶液：0.2g 二硝基酚溶于100ml水中离心替代过滤，酶标仪替代分光光度计的土壤有效磷(碳酸氢钠浸提)测定方法1. 42g碳酸氢钠定容到1L，用4mol/L NaOH溶液(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)调节pH至8.5，得到浸提剂2. 1.00g风干土加入50ml塑料管中，再加入0.1g活性炭粉，再加入20ml碳酸氢钠溶液，20~25℃，180rpm，震荡30min3.吸取1ml浸提液到1.5ml离心管中，10000rpm，离心1分钟4.吸取200ul上清液+700ul H2O+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离心管中5.摇匀后，14000rcf，离心一分钟，室温高于15℃情况下，30min后，吸取300ul至酶标板比色备注：吸取的上清液体积可以根据显色情况调整，保证比色体系1ml，每个样品做三个重复植物组织全磷含量快速测定1.将烘干后的植物组织样品磨碎，再将样品粉末继续烘干至恒重。

土壤碱解氮的测定（碱解扩散法）一、仪器与试剂1、主要仪器百分之一天平；滴管，恒温箱；扩散皿2、试剂（1）1.0mol/L NAOH溶液：称取化学纯氢氧化钠40克，用水溶解，冷却后定容至1L。

（2）甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：称取甲基红0.066克，溴甲酚绿0.099克，溶解在100ml 95%酒精中，用稀氢氧化钠或盐酸调节溶液呈紫红色。

此时溶液PH值应为4.5（3）2%硼酸溶液：称取分析纯硼酸20克，溶解于1L蒸馏水中。

（4）0.01mol/L（1/2H2SO4）标准溶液：量取密度1.84g/ml浓硫酸0.28ml，注入1L蒸馏水中，用标准硼砂溶液标定之。

标定方法如下：在分析天平上准确称取硼砂Na2B4O7.10H2O 1.9071g，溶于蒸馏水中，转移至1000ml容量瓶中，用水定容，摇匀，即为0.01mol/L的标准溶液。

吸取该溶液3份，各25.00ml，分别放入3个100-150ml三角瓶中，以甲基红作指示剂，用上述标准硫酸溶液滴定至由黄色变为红色为终点。

设硫酸溶液用量3份重复的平均值为V毫升，则c（1/2H2SO4）=0.01×25/V（5）碱性甘油：在100ml甘油中加入固体氢氧化钠1-2克，隔一定时间后搅动一次，使其达到饱和为止（使甘油变稠2-3天后即可使用）。

二、步骤1、准确称取通过100目筛(0.15mm)的风干土壤样品2.00克，均匀铺在扩散皿外室中，水平地轻轻转动扩散皿，使样品铺平。

2、在扩散皿（使用前在稀酸中浸泡）的内室中加入2ml 2%硼酸溶液，并加一滴混合指示剂，然后在皿的外室边缘上涂上碱性甘油，盖上毛玻璃盖并旋转，使之密合。

在慢慢转动毛玻璃盖使外室的一边在毛玻璃盖小缺口处露出。

3、用移液管由小缺口处向外室加入10ml 1.0mol/L NaOH溶液，立即盖严。

小心地水平转动扩散皿，使溶液与土壤充分混匀，用橡皮筋扎好，放入40℃温箱中，恒温24小时后取出，再以0.01 mol/L 1/2H2SO4标准溶液滴定硼酸溶液中所吸收的氨，溶液颜色由蓝绿变为微红色为终点。

土壤速效N、P、K含量测定1.实验目的检测土壤养分中速效N、P、K的含量变化，研究促生机理。

2.材料方法2.1土壤采集从供试植株根部周围收集面层土壤（深度为0-10cm），-20℃保存。

2.2 土壤中铵态氮的测定方法：取3平勺土样（4克）放入试剂箱中写有土样的塑料瓶中，用注射器加水２０毫升，加1平勺把1号粉（１g左右）盖上瓶盖，摇动10分钟过滤，此为氮、钾待测液。

空白液：用一只干净的塑料吸管向一个玻璃比色皿内加水至三分之二位置,作为空白液。

标准液：用塑料吸管向另一个玻璃比色皿中滴入18滴水，再从箱中找到“氮标准液”，滴入2滴标液，然后摇匀。

此标准液浓度为20mg/kg（20ppm）。

待测液：用塑料吸管吸取氮、钾待测液向第三个玻璃比色皿中滴入20滴。

向装有标准液和待测液的玻璃比色皿内分别加入2滴氮1号试剂，摇匀，再加入2滴氮2号试剂，摇匀。

停放10分钟，再各滴入10滴水，摇匀，立即上仪器测试，直接从仪器上读出速效氮含量。

2.3 土壤中有效钾的测定方法：取3平勺土样（4克）放入试剂箱中写有土样的塑料瓶中，用注射器加水２０毫升，加1小勺把1号粉（１g左右）盖上瓶盖，摇动10分钟过滤，此为氮、钾待测液。

空白液：用一只干净的塑料吸管向一个玻璃比色皿内加水至三分之二位置,作为空白液。

标准液：用塑料吸管向另一个玻璃比色皿中滴入18滴水，再从箱中找到“钾的标准液”，滴入2滴标液，然后摇匀。

此标准液浓度为100mg/kg（100ppm）。

待测液：用塑料吸管吸取氮、钾待测液向第三个玻璃比色皿中滴入20滴。

向装有标准液和待测液的玻璃比色皿内分别加入2滴钾1号试剂，摇匀，再加入2滴钾2号试剂，摇匀，再各滴入10滴水，摇匀，立即上仪器测试，直接从仪器上读出速效钾含量。

2.4 土壤中速效磷的测定方法：取3平勺土样（4克）放入试剂箱中写有土样的塑料瓶中，用注射器加水２０毫升，加1小勺把2号粉（0.5g左右）盖上瓶盖，摇动20分钟过滤，注意（如果被测的土层属于酸性土壤就不加2号粉，需向瓶内滴入10滴3号试剂）。

土壤里氮磷钾的检测方法一、土壤样品的采集与处理为了能使测定的样品代表田间的养分状况，要求必须多点混合取样，切忌在田边、路边、沟边、粪堆旁或放化肥的地方等地点取样。

取样的方法可采用对角线法、五点取样法、棋盘式取样法等。

一般每块地至少要取五个样点，地块大时可多取些，取样深度一般以耕层（0—20cm）为准，多点取到的样品应充分混合，按四分法弃去多余的部分，保留约半斤，拣去枯枝落叶、残根、石硕等杂质，如有土块应研碎，作为分析化验的待测样品。

一般土壤养分的快速测定以新鲜土样为宜。

1.土壤铵态氮的测定用吸管分别吸取浸提剂2mL（作空白），浸提剂2mL+1 滴土壤养分混合标准储备液（作标准用），土壤待测液2mL 于三个小试管中，分别依次加入：土壤铵态氮1 号试剂4 滴土壤铵态氮2 号试剂4 滴土壤铵态氮3 号试剂4 滴摇匀，5 分钟后分别转移到比色皿中上机测定：①拨动滤光片左轮使数值置1，置空白液于光路中，按“比色”键，功能号切换至1，按“调整＋”键或“调整－”键，使仪器显示100％。

②将标准液置于光路中，按“比色”键，功能号切换至3，按调整键，使仪器显示值为48.0。

③再将待测液置于光路中，此时仪器读数即为土壤中铵态氮含量（mg/kg）。

2.土壤硝态氮的测定用吸管分别吸取浸提剂2mL（作空白），浸提剂2mL+1 滴土壤养分混合标准储备液（作标准用），土壤待测液2mL 于三个小试管中，分别依次加入：硝态氮1 号试剂4 滴（逐渐加入并摇动）硝态氮2 号试剂10 滴硝态氮3 号试剂1 滴（使用前剧烈摇动或70℃左右热水水浴3 分钟后摇动几下，使沉积物充分悬浮后加用）振荡一分钟，静置15 分钟后分别转移到比色皿中，上机测定。

①拨动滤光片左轮使数值置2，置空白液于光路中，按“比色”键，功能号切换至1，按“调整＋”键或“调整－”键，使仪器显示100％。

②将标准液置于光路中，按“比色”键，功能号切换至3，按调整键，使仪器显示值为48.0。

以下实验步骤的适用原则“样品量大，测定快速，数据准确”一、土壤全N、P、K测定方法土样粒径采用：2mm母液制取：步骤：称取0.5g土样于100ml三角瓶中，分别加入5ml浓硫酸和0.2ml高氯酸（不需准确），盖上小漏斗，于红外消解仪上消解直至灰白色。

取下三角瓶，冷却后全量转入50ml 容量瓶中定容。

注：1、尽量不要使土壤附着在瓶壁上，以免损失。

2、母液静置澄清后再使用。

3、消解时高氯酸要尽量赶完，后侧会影响后续测定。

4、消解20后若土样还没有变白，可以适量加入1~2滴高氯酸，切勿多加。

5、消解总时间大概40~60分钟，黑色碳渣粒无法变白，可不用管它。

6、全量测定顺序，全P和全K可同时测定，全N最后测定。

（一）全N步骤：倒取摇匀后的母液25ml（用25ml量筒量取即可），加入15ml 40%氢氧化钠（大概）蒸馏，溜液进入装有7ml硼酸吸收液的100ml三角瓶中，溶液变蓝，总体积在40~50ml 即可，最后用标准酸（高浓度/低浓度）滴定。

注：1、氢氧化钠加入后溶液会变成棕红色（高氯酸没有赶完时，加入氢氧化钠后管中溶液不会变色，此时应注意控制氢氧化钠加入量）。

2、控制管中液体总量在50ml以内。

3、40%氢氧化钠：用一整瓶均分成两份，分别在氢氧化钠的塑料瓶中配制，加水至满即可。

4、记录标准酸浓度。

5、蒸馏时前面滴出来的溜液是最重要的，所以一定不能损失。

（二）全P步骤：吸取母液1ml于25ml容量瓶中，加水至1/3处，加入两滴二-六（或二-四）二硝基酚，然后用40%氢氧化钠（浓度自定，可高可低）调色至微黄（注意颜色的统一性），加入2.5ml显色剂后定容，定容显色半小时后进行测定。

注：1、钼锑抗储备液：称取20g钼酸铵放入1L烧杯中，加入200~300ml纯水溶解，然后加入180ml浓硫酸。

待上述溶液冷却后用量筒量取准确体积转移至另外一个1L烧杯中（转移时要把原烧杯洗净，洗液也全量转入，计算总体积）。

称取0.5g酒石酸锑钾于量筒中，加入100ml纯水溶解（体积准确），待全部溶解后全量转入前面的1L烧杯中（计算总转入体积），最终控制溶液体积在1L，搅拌均匀后倒入棕色玻璃瓶中备用。

土壤铵态氮的测定(KCl浸提—靛酚蓝比色法)方法原理：用2mol/L KCl 溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+浸提出来。

土壤浸出液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。

在含氮0.05-0.5mg/L的范围内，吸光度与铵态氮含量称正比，可用比色法测定。

主要仪器：往复震荡机分光光度计试剂配制：1. 2mol/L KCl 溶液:称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1000ml。

2. 苯酚溶液：称10g苯酚和亚硝基铁氰化钠100mg稀释至1000ml。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，4℃冰箱保存。

3.次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠10g、Na2HPO4.7H2O 7.06g、Na3PO4.12H2O 31.8g和52.5g/L次氯酸钠（即含5%有效氯的漂白粉溶剂）10ml 溶于水中，稀释至1000ml，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱保存。

4. 掩蔽剂：将400g/L的酒石酸钾钠与100g/L的EDTA二钠盐溶液等体积混合。

每100ml混合液中加入10mol/L氢氧化钠溶液0.5ml。

5.铵态氮标准液配制：称取干燥的硫酸铵0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1000ml，制备成含铵态氮100ug/mL 的贮存溶液；使用前加水稀释40倍，得2.5 ug/mL标准溶液。

操作步骤：称取过20目筛的风干土样5g，加入氯化钾溶液50ml，振荡1小时，取出静置，吸取上清液10ml进行分析（如果不能在24h内进行分析，用滤纸过滤悬浊液储存在冰箱中备用）。

将10ml上清液吸入50ml试管内，加5ml苯酚溶液，5ml次氯酸钠碱性溶液，摇匀。

在20℃室温下放置1小时，加掩蔽剂1ml以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度，在625纳米处比色，读取吸光值。

标准曲线绘制：分别吸取0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml铵态氮标准液于50ml试管中，各加10ml氯化钾溶液，加5ml苯酚溶液，5ml次氯酸钠碱性溶液，摇匀。

土壤速效氮、磷、钾的测定一. 土壤速效N 的测定（碱解扩散法）1、原理：用1.0N 氢氧化钠水解土壤样品，使土壤潜在有效氮，转化为氨气状态，不断逸出，由硼酸吸收，用标准酸滴定，然后计算出水解性氮的含量。

2、仪器及试剂配制主要仪器：扩散皿、半微量滴定管、恒温箱试剂配制：（1）1.0N 氢氧化钠 称取化学纯氢氧化钠40克，用水解溶解后冷却定容1升。

（2）硼酸指示剂液 称取硼酸（H 3BO 3）20克加水900毫升稍稍加热溶解，冷却，加混合指示剂（0.099克溴甲酚绿和0.066克甲基红溶于100毫升乙醇中）20毫升，然后以0.1N 氢氧化钠调节溶液至红紫色（PH 约5.0）最后加入水稀疏至1000毫升，使溶液混合均匀，贮存于塑料瓶中。

（3）0.005mol/L （1/2H 2SO 4）标准溶液 量取H 2SO 4（化学纯）2.83mL ，加蒸馏水稀释至5000mL ，然后用标准碱或硼酸标定之，此为0.020mol/L （1/2H 2SO 4）标准溶液，再将此标准液准确地稀释4倍，即得0.005mol/L （1/2H 2SO 4）标准液。

（4）碱性胶液 取阿拉伯胶40.0g 和水50mL 在烧杯中热温至70～80℃。

搅拌促溶，约1h 后放冷。

加入甘油20mL 和饱和K 2CO 3水溶液20mL ，搅拌、放冷。

离心除去泡沫和不溶物，清液贮于具塞玻瓶中备用。

3、操作步骤：取通过60号筛的风干样品2.00克于扩散皿外室，水平的轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。

在扩散皿内室加入2%硼酸指示剂液2毫升，然后在扩散皿外室边缘涂上碱性甘油，盖上毛玻璃，并旋转数次，以使毛玻璃与皿边完全粘住，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿漏出一条缝，迅速加入1.0N 氢氧化钠5毫升于扩散皿外室，立即用毛玻璃盖好。

水平轻轻旋转扩散皿，使溶液与土壤充分混匀，用橡皮筋固定，随后小心的放入40度的恒温箱中24小时取出，以0.01N 硫酸标准溶液滴定扩散皿内室硼酸溶液吸收的氨量，终点是由蓝绿色转变红紫色，记下所用的标准酸量（V ）4、计算结果：3c V-V N mg kg 10m⨯⨯-10（）14.0碱解氮（）含量 （）=式中；c —0.005mol/L （1/2H 2SO 4）标准溶液的浓度； V —样品滴定时用去0.005mol/L （1/2H 2SO 4）标准溶液体积（mL ） ； V 0—空白试验滴定时用去标准液体积（mL ）14.0—氮原子的摩尔质量（g·mol -1）W —样品质量（g ）；103—换算系数二. 土壤速效P的测定中性和石灰性土壤速效磷的测定（0.5M碳酸氢钠法）1、原理: 石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在,不能用酸溶液提取有效磷.一般用碳酸盐的碱溶液.由于碳酸根的同离子效应, 碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度就有利于磷酸钙盐的提取，同时碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。

土壤有效磷、速效钾联合测定1.土壤有效磷测定：碳酸氢钠溶液除可提取水溶性磷外，也可抑制钙离子的活性，使一定量活性较大的Ca-P盐类中的磷被浸出，也可使一定量活性Fe-P和Al-P盐类中的磷通过水解作用而浸出。

由于浸出液中的Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再沉淀。

浸出液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。

本法严格规定土液比为1:20，浸提液温度为25℃±1℃，振荡时间为30min。

本方法适用于石灰性土壤有效磷含量的测定，中性土及水稻土也可参照适用。

①试剂配制：0.5mol/L NaHCO3溶液（称取化学纯碳酸氢钠42g，溶于800ml蒸馏氢氧化钠溶液调制PH为8.5，洗入1000ml 容量瓶中，定容至刻度，贮存于试剂瓶中。

）7.5 mol/L 1/2 H2SO4钼锑贮存液（取蒸馏水约400ml，放于1000ml烧208.3ml并不断搅拌，冷却至室温。

另称取分析纯钼酸铵20g，溶于50℃的200ml 蒸馏水中，冷却。

然后将硫酸溶液徐徐倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌，再加入100 ml 0.5%酒石酸锑钾溶液【5g/L】，转移到1000ml容量瓶中，摇匀，贮存到棕色试剂瓶中。

）钼锑抗混合显色剂（于100ml钼锑贮存液中，加入0.5g左旋抗坏血酸，摇匀，贮于试剂瓶中，该液应现用现配）5ug/ml磷标准溶液（准确称取经105℃烘干两小时的优级纯磷酸二氢钾（KH2PO4）0.2195g溶于水，移入1000ml容量瓶中，加水至约400ml，加浓硫酸5ml，用水定容，即得到50ug/ml 磷标准溶液，准确吸取50ml 该溶液，用蒸馏水定容至500ml容量瓶中，摇匀定容即可得到5ug/ml 磷标准溶液，此液不能长时间保留，应该现用现配）0.5 mol/L NaOH溶液（称取氢氧化钠2g于100ml蒸馏水中，搅拌均匀即可使用）②土壤浸提：用百分之一天平称取过1mm筛孔的风干土2.5g，置于浸提瓶中，准确加入0.5mol/L NaHCO3溶液50ml，加盖后在振荡机上振荡30min，然后使用定性滤纸过滤于胶卷盒中，假若滤液不清，需重新进行过滤。

土壤铵态氮‎测定方法原理:用2mol‎/L KCl溶液‎浸提土壤，把吸附在土‎壤胶体上的‎N H+4及水溶性‎NH+4浸提出来土壤浸出液‎中的铵态氮‎在强碱性介‎质中与次氯‎酸盐和苯酚‎‎。

作用，生成水溶性‎染料靛酚蓝‎，溶液的颜色‎很稳定。

在含氮0.05~0.5mg/L的范围内‎，吸光度与铵‎态氮含量成‎正比，可用比色法‎测定。

实验步骤：（1）称取10.00g新鲜‎土样（精确到0.01g），置于200‎m l三角瓶‎中，加入KCl‎溶液100‎m l，在摇床里振‎荡30mi‎n，取出静置后‎，取上清液过‎滤；（2）吸取浸提液‎5m l放入‎50m l容‎量瓶中，后加入KC‎l溶液10‎m l、苯酚溶液5‎m l、次氯酸钠碱‎性溶液5m‎l,摇匀；（3）在25℃左右室温下‎放置1小时‎后，加入掩蔽剂‎1m l,然后用水定‎容至刻度，在625n‎m波长处进‎行比色。

工作曲线绘‎制：分别取0.00 ，0.50 ，1.00 ，2.00 ，3.00 ，4.00 ，5.00ml铵‎态氮标准溶‎液于50m‎l容量瓶中‎，各加入10‎m l KCl溶液‎,然后同(2) (3)步骤进行。

试剂配制：【2mol/L KCl溶液‎】:称取149‎.1g KCl(分析纯)溶入水中，稀释至1L‎。

【苯酚溶液】：称取苯酚（分析纯）10g、NaOH（分析纯）5g和消极‎铁氰化钠(分析纯)0.1g稀释至‎1L。

（此试剂不稳‎定，须贮于棕色‎瓶中，在冰箱中4‎℃保存，使用时用酸‎调节PH酸‎性）【次氯酸钠碱‎性溶液】：称取NaO‎H（分析纯）10g、磷酸氢二钠‎（分析纯）7.06g、磷酸钠（分析纯）31.8g和52‎.5g/L次氯酸钠‎（分析纯，即含5%有效氯的漂‎白粉溶液）10mL溶‎于水中，稀释至1L‎.(贮于棕色瓶‎中，在冰箱中4‎℃保存，使用时放置‎至室温)【掩蔽剂】: 将400g‎/L的酒石酸‎钾钠（分析纯）与100g‎/L的EDT‎A二钠盐溶‎液等体积混‎合。

⼟壤全磷、速效磷、速效钾含量,植物组织全磷、全氮含量快速测试⽅法离⼼替代过滤，酶标仪替代分光光度计的⼟壤全磷测试⽅法1.⽤万分之⼀天平，称取1g左右的风⼲⼟，记录下重量。

2.加⼊8ml浓硫酸，放置过夜后加⼊10滴⾼氯酸，消煮⾄⽩⾊。

3.在50ml消煮管中定容，可以先加⽔1/3，混匀后再加⽔⾄刻度线附近，放置过夜后再加⽔⾄刻度线，摇匀。

4.吸取1ml消煮液到1.5ml离⼼管中，10000rpm，离⼼1分钟。

5.吸取50ul上清液+750ul H2O+100ul NaOH(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离⼼管中。

6.摇匀后，14000rcf离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：5.中吸取的上清液的量可根据显⾊状况调整，相应地NaOH的量也要做出调整，保证⽐⾊体系体积为1ml，氢离⼦浓度为0.55mol/L左右，每个样品做三个重复，重复间允许误差<0.005%即50mg/kg。

磷酸⼆氢钾⼯作曲线制做⽅法1.先将100mg/L(0.4394g KH2PO4(烘⼲2⼩时)先加⽔300ml，再加5ml浓硫酸，再定容到1L)的磷标贮液(磷酸⼆氢钾溶液)稀释20倍，⽐如吸取5ml定容到100ml2.配制3.摇匀后，10000rpm离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：利⽤散点图绘制曲线，添加趋势线和r值，r^2要⼤于0.999。

利⽤forecast.line函数计算⽐⾊液磷含量钼锑抗配制⽅法1.浓硫酸153ml加⼊500ml左右H2O(⽤1L的烧杯)，⽤磁⼒搅拌器搅匀2. 1L烧杯中加⼊10g 钼酸铵,⽤磁⼒搅拌器融化3. 0.5g酒⽯酸锑钾加⼊100ml左右H2O(⽤100ml的烧杯)，⽤磁⼒搅拌器溶化4. 步骤3所得溶液倒⼊1L烧杯，在磁⼒搅拌器上混合均匀，定容到1L备注：避光储存，使⽤时每10ml 加⼊0.15g抗坏⾎酸⼆硝基酚溶液：0.2g ⼆硝基酚溶于100ml⽔中离⼼替代过滤，酶标仪替代分光光度计的⼟壤有效磷(碳酸氢钠浸提)测定⽅法1. 42g碳酸氢钠定容到1L，⽤4mol/L NaOH溶液(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)调节pH⾄8.5，得到浸提剂2. 1.00g风⼲⼟加⼊50ml塑料管中，再加⼊0.1g活性炭粉，再加⼊20ml碳酸氢钠溶液，20~25℃，180rpm，震荡30min3.吸取1ml浸提液到1.5ml离⼼管中，10000rpm，离⼼1分钟4.吸取200ul上清液+700ul H2O+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离⼼管中5.摇匀后，14000rcf，离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：吸取的上清液体积可以根据显⾊情况调整，保证⽐⾊体系1ml，每个样品做三个重复植物组织全磷含量快速测定1.将烘⼲后的植物组织样品磨碎，再将样品粉末继续烘⼲⾄恒重。