一株鸭源性多杀性巴氏杆菌的分离和鉴定
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１ ． １ ０ 细菌纯化培养 挑取 单个 菌落 在 血液 琼脂 培养 基 上再 进行 分 区划线 ，３ ７℃培 养２ ４ ｈ 。连 续 纯培 养３ 代 ，得到 细菌 的 纯培 养物 ，同时进 行革 兰 氏
蒸 馏水 ３ ０ ０ ｍ ｌ ，先 将 碘 化钾 溶 解 于少 量 水 中 ，再将 碘 片 溶解 在 碘 染 色镜 检 。挑 取单个 菌落 于麦康 凯琼 脂平板 和Ｄ Ｈ Ｌ 琼 脂 平板上 ，放 入３ ７℃烘 箱倒 置培 养２ ４— ４ ８ ｈ 后 观察结 果 ， 化 钾溶 液 中 ，待碘 全部 溶解 后 ，加 足水分 即成 ）。 ②９ ５ ％的 乙醇溶 液 。 １ ． １ １ 生化 试 验 ③ 番 红 复染 液 （ 番红２ ． ５ ｇ ，乙醇 １ ０ ０ ｍｌ ；取 上述 配 好 的番 红 无菌 操作 ，用 接种 环 取纯 培养 的待 检菌 接 种于 各糖 类微 量 发
表 明可疑病原 为多杀性 巴氏杆 菌。动物试验 结果表 明，该鸭群暴发 了禽霍乱 。选择 常用抗生素 ７ 种做 了药敏 试验 ，结果显 示， 病原体对 四环素、磺 胺异恶 唑、左氟 沙星 、痢特灵 、庆 大霉素 、头孢他 啶 高度 敏感 ，对壮观霉素 中度敏感 。治疗选用磺胺五 甲
氧嘧啶 ，取得 了良好 的疗果。
［ 关键词］鸭
多杀性 巴氏杆 菌 分 离 鉴定
禽 霍乱 又 称 为禽 出 血性 败 血症 或 禽 巴 氏杆 菌病 ， 由多杀 性 巴 １ ． ６ 肝 脏 触 片 氏 杆菌 引 起 ｔ ” 。多 杀 性 巴 氏杆 菌 病 在 鸭 、鸡 、鹅 、火 鸡 等 家 禽 中 取 下肝 脏 ，先 用 镊 子 夹 持 其 中 部 ，然 后 以灭 菌 的 剪 刀 取 一 易 发 ，尤其 鸭 易 感 ，对 未接 种 禽霍 乱 疫 苗 的鸭 致病 率 很 高 ， 日死 小 块 ，夹 出后将 其 新鲜 的切 面在 玻 片上 压 印 ， 自然 干燥 ，火焰 固 亡率 可达 １ ０ ％以上 。个别 接种 禽霍乱 疫 苗的 鸭有 时仍可 以感 染多 杀 定 ，美 兰染 色 ，镜检 。 性巴氏杆菌而发病。本病常呈现急性经过，发病率和死亡率均较 １ ． ７ 细菌分离 将 剪 刀 在 酒 精 灯 上 灼 烧后 轻 触 肝 、表 面 灭 菌 ，剪 刀 再 次 消 毒 ，剪 开灭 菌 区 的肝 ，用 接 种 环 插 入 肝 组 织 内取 样 接 种 于 血 液 出现急性死亡 ，每天死亡达３ Ｏ 只左右 ，持续３ ～４ ｄ ，用环丙沙星 等药 物 无效 。经 做细 菌 分离 和 鉴定 ，依 据药 敏试 验 选 择药 物 ，病 琼 脂 平 板 上 。在有 氧 的环 境 下 ，置 于３ ７℃培 养 箱 中倒置 培 养 ， 情 得 到 了控制 。 ２ ４～ ４ ８ ｈ 后 观察结 果 。 １ ． ８ 革 兰 氏染 色 镜 检 １ 材料 与方法 用 接 种 环 挑 取 一 环 生 理盐 水 蘸 于 洁 净玻 片 上 ，再 用 接 种 环 １ ． １ 培养基 （ １ ）麦 康 凯 琼 脂 （ Ｍａ ｃ ｋ ｏ ｎ ｋ ｅ ｙ ａ ｇ ａ ｒ ，蛋 白胨 ２ ０ ｇ ，乳 糖 １ Ｏ 挑 取少 量 纯 培养 的 细菌 与玻 片 上 的生 理盐 水 混合 ，并均 匀涂 布 于 ｇ ，氯 化钠 ５ ｇ ，牛 胆盐 ５ ｇ ，中性 红 ０ ． ０ ２ ５ ｇ ，琼 脂粉 ２ ０ ｇ ，加 蒸 玻 片上 ， 自然 干燥 ；待 干燥 后 ，在 玻 片上 滴 加草 酸铵 结 晶紫 染 色 液 ，作 用 １ ～ ３ ｍ ｉ ｎ ，水洗 ；后 加 革兰 氏碘 液于 玻 片上媒 染 ，作用 １ 馏水１ ０ ０ ０ ｍ ｌ ，ｐ Ｈ ７ ． ３ ＋ ０ ． ２ ）。 （ ２ ）Ｄ Ｈ Ｌ 琼脂 （ 蛋 白胨 ２ ０ ｇ ，牛肉 膏３ ｇ ，乳糖 １ ０ ｇ ，蔗 糖 １ ０ ｒ ａ ｉ ｎ ，水洗 ；再加 ９ ５ ％酒精脱 色 ，作 用 ｌ ５— ３ ０ ｓ ，水 洗 ； ． 最后 加番红 ｇ 。去 氧胆酸 钠 １ ｇ ，硫 代硫 酸钠 ２ ． ３ ｇ ，柠檬 酸钠 １ ｇ ，柠檬 酸铁 铵 １ 复染 液复染 １ ｒ ｎ ｉ ｎ ，水洗 ， 自然干燥后 镜检 ，观察 细菌形态特 征 。 ｇ ， 中性 红０ ． ０ ３ ｇ ，琼ａ ｎ １ ８ —２ ０ ｇ ，蒸馏 水 １ ｏ ｏ ｏ ｍ １ ）。 １ ． ９ 美 兰 染 色 （ ３） 血 琼脂 （ ｐ Ｈ ７ ． ４ ～７ ． ６ 豆 粉琼 ］ ￣ １ ０ ０ ｍ ｌ ，脱 纤 维羊 血 （ 或 用 接种 环 挑取 一 环生 理 盐水 蘸 于洁 净玻 片上 ，再 用接 种 环挑 兔血 ） ５～１ ０ｍ ｌ ，加 热溶 化 琼脂 ，冷至 ５ ０℃ ，以灭 菌 手续 加 入脱 取 少量 纯 培养 的细菌 与 玻片 上 的生 理盐 水 混合 ，并 均匀 涂布 于玻 片 上 ， 自然 干 燥 ；在 已 干燥 固定 好 的玻 片 上 ，滴加 适 量 的美 兰染 纤 维羊 血 ，摇 匀 ，倾 注 平板 ）。 １ ． ２ 试剂 （ １ ）革兰 氏染 色液 ： ① 草 酸 铵 结 晶紫 染 液 （ Ａ 液 ：结 晶紫 （ ｃ ｒ ｙ ｓ ｔ ａ ｌ ｖ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ） ２ ｇ ， ９ ５ ％乙 ｇ２ ｏ ｍ ｌ ；Ｂ 液 ：卢 戈 （ Ｌ ｕ ｇ ｏ １ ）碘液 （ 碘片１ ｇ ，碘化 钾２ ｇ ， 色液 ，经 过 １ ～ ２ ａ ｒ ｉ ｎ ，水洗 ，干燥 ，镜 检 。 高 。２ ０ ０ ７ 年９ 月 ，沛县 某养 殖 户共 饲 养麻 鸭 约 １ Ｏ ｏ ０只 ，３ ８ 日龄 ，
中国畜牧 兽医文摘
２ ０ １ ４ 年
３ ０ 卷
第５ 期
基 础 科 学
一ห้องสมุดไป่ตู้
株 鸭 源 性 多 杀性 巴氏杆 菌 的分 离和 鉴 定
刘爱武 耿 松
２ ２ １ ６ ０ ０ ） （ 沛县畜 牧兽医站 ，江苏徐州
［ 摘 要］ 采集疑似禽霍乱病死鸭的新鲜肝脏，接种血液琼脂培养基，３ ７ ℃培养２ ４ ～ ４ ８ ｈ ，可见培养基上出现淡灰色小茵 落 ，呈 湿润水珠 样 ，边缘整 齐，表 面光滑 。经革 兰氏染 色，镜检 ，可见典 型两极浓染的细 小短杆 菌。纯培养后 ，生化 试验 结果
