仪器分析(大连理工大学)4.2高效液相色谱仪

（一）高效液相色谱仪(二极管阵列检测器+荧光检测器+双泵柱后衍生）一、配置清单：1.液相色谱主机（主机包括：梯度系统，自动进样器，1台在线柱塞清洗装置，在线脱气机，柱温箱）2.荧光检测器1台3.二极管阵列检测器1台4.柱后衍生系统1套5.正版软件1套（工作站、操作系统、驱动等），全中文色谱1套管理系统，包括：64位色谱管理软件6.Oracle关系型图文数据库。

1套7.2ml样品瓶及瓶盖。

200个8.通用色谱柱接头。

2个9.原装C18色谱柱（5um 4.6×150mm；）1根10.1L溶剂瓶。

5个11.国产品牌电脑，含品牌打印机。

1套二、技术参数：1.四元梯度泵★1.1 工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路1.2 溶剂数量：四元1.3 流速范围：0.001～10.000mL/min，以0.001递增1.4 流速精确度：≦0.075%RSD（小数点后三位数字）1.5 流速准确度：±0.5%1.6 延迟体积：<650µL（包括进样器扩散体积），并且不随反压变化1.7 混合范围：0.0—100.0% 以0.1% 增量1.8 最大耐受压力：≧5000psi1.9 梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化★1.10 梯度精度：≦0.15%RSD ，不随反压变化1.11 具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态（必须提供彩页或官方文件证明）2.自动进样器★2.1 样品瓶数：≧115位（必须提供彩页或官方文件证明）2.2 进样范围：0.1—100uL2.3 进样次数：每个样品1—99次进样2.4 进样精度：≦0.25%RSD2.5 进样范围：0.1—100µL2.6 进样线性度：>0.999进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3.荧光检测器3.1 灯：150W 氙灯，连续弧光，3.2 灵敏度：水的拉曼光谱≥10003.3 激发波长：200～890nm3.4 发射波长：210～900nm3.5 波长重现性：±0.25nm3.6 波长准确度：±3nm3.7 流通池：< 13ul3.8 采样频率：80Hz3.9 流通池耐压：145psi3.10 需提供至少5次进样保留时间和峰面积重现性色谱图。

高效液相色谱仪（3台）高效液相色谱仪（3台）详细配置：1. 高效液相色谱主机（包含四元低压梯度泵，自动进样器，柱温箱）1套2. 二极管阵列检测器1台3. 样品瓶微量进样瓶300个4. 色谱柱2根5. 色谱工作站软件1套6. 电脑（带刻录机）打印机1套7、不间断电源（3KW/1H）重要参数及指标：1.液相色谱部分：泵系统：四元泵系统1.1每台流量范围：0.001-10.000 mL/min1.2最大压力≥40 Mpa1.3脉动：±0.1MPa(水,1.0ml/min输液时)1.4流量精度：≤0.06%RSD1.5梯度精密度：≤0.15%RSD，流速为0.2和1.0ml时1.6 溶剂数：4种1.7在线脱气：二极管阵列检测器1.1波长范围：190－800nm；1.2波长精密度：±0.1nm；1.2灯：氘灯、钨灯；1.3波长准确度：＜1nm；1.4噪声：<±1.0×10-5Au(254nm)；1.5基线漂移：<±8.0×10-4Au/h(254nm)；自动进样器：1.1交叉污染：0.004%1.2进样体积：0.01~100 μl1.2进样准确度：±1％1.3进样量精密度：0.2％RSD以下1.4试样处理数：1.5ml瓶≥96个。

1.5样速度：10μL进样量≤20秒柱温箱：1.1温控范围：室温~80℃1.3温控精度：±0.5℃1.4 柱容量：≥3根(300mm色谱柱)色谱软件：1.1中文，可容Windows XP或Vista或Win7系统；1.2具有3D扫描功能，能做纯度分析，光谱匹配度分析1.3可自动进行数据采集和后处理，具有系统适应性软件，计算分离度、理论塔板数、拖尾因子、容量因子、信噪比等。

1.4可提供适时分析条件参数和分析结果，在线监测和采集泵压力变化数据。

1.5可使用PDF、EXCEL等格式输出实验结果。

高效液相色谱仪使用说明1. 型号：LC-10AT 产地日本岛津。

2. 用途：高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。

与试样预处理技术相配合，HPL C 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。

随着固定相的发展, 有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。

由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。

3. 测定原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

4. 使用方法4.1 系统组成：本系统由1个LC-10ATvp溶剂输送泵、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。

4.2 准备4.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声波脱气20min。

4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。

3.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常，特别注意输液管道内是否有气泡。

上海伍丰LC-100标准操作规程1．目的规范LC-100型高效液相色谱系统的使用和维护。

2．范围本规程LC-100型高效液相色谱系统的使用和维护。

3．职责质检室仪器分析员负责LC-100型高效液相色谱系统的日常使用和维护。

4．规程4.1 系统组成：本系统由1个LC-100溶剂输送泵，Rheodyne 7725i手动进样阀、LC-100紫外检测器、WS-100工作站和台式电脑等组成。

4.2 准备4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。

4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。

4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。

4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4.3 开机4.3.1接通电源，依次开启泵、检测器前面板右下角电源开关，待泵和检测器自检结束后（检测器自检需3-5分钟），打开电脑显示器、主机。

4.3.2启动工作站4.3.2.1确认仪器自检通过后，打开计算机电源，双击电脑桌面WS-100图标。

4.3.2.2 进入实时控制及采样画面：4.3.2.3 打开泵的排液阀（逆时针旋180度），排气泡1-2分钟。

再关闭排液阀，待基线平稳（大约需要30分钟左右）数据采集参数设置请单击工具条按钮，进入数据采集参数设置对话框，如图所示：请您输入采集的自动停止时间，各项屏显参数，数据采集的文件名称，采集文件自动保存路径。

文件名称的设置：用户可以自定义文件的命名规则，请鼠标单击名称设置按钮，系统弹出文件命名规则对话框，如图所示：系统会以“前缀+时间”或“前缀+序列号”方式自动命名采样文件。

您还可以在数据采样中更改自动生成的文件名称。

保存路径设置：用户可以自定义文件的保存路径，请鼠标单击保存路径设置按钮，系统弹出保存路径选择对话框，如图所示：开始进样分析：待基线在零点走平后和数据采集参数设置好后即可进样分析。

高效液相色谱仪性能指标一、工作条件：1.1 工作环境1.1.1 220V+5%电压范围，48-66HZ1.1.2 实验室温度：4-55 C1.1.3 湿度：<95%二、技术参数1 四元梯度泵(含在线真空脱气机)*1.1串联式双柱塞往复泵，20-100ul可变冲程，主动电磁阀，柱塞清洗，自主溶剂压缩因子设置1.2流量范围：0.2ml/min--10.0ml/min，递增率0.001ml/min*1.3流量精度：<0.07%RSD*1.4最大操作压力：400bar1.5滞后体积：600-900ul1.6混合精度：+ 0.20%SD1.7真空脱气机：四通路在线真空膜过滤技术，内置真空泵，压力传感器，实时监控真空腔压力变化，保证及时高效的脱气操作2 自动进样器*2.1自动进样器采用高压、阀进样技术，进样速度快，且进样系统中残留小2.2自动进样器可进行编程进样，用于进行柱前衍生，柱前样品自动稀释，自动混合等复杂进样方式。

此外，用户可根据样品的粘度，调节取样及进样速度。

2.3自动进样器均采用深色避光盖板，便于光敏感样品的长时间放置；同时进样器内安装有照明装置，便于用户操作。

2.4进样范围：0.1~100μL，增量为0.1μL2.5进样精密度：< 0.25% RSD2.6样品容量： 132个2-mL样品瓶*2.7样品残留：<0.004%2.8重复进样次数：1~99次/样品*2.9最大操作压力：600bar3柱温箱：3.1控温范围：最高80℃3.2：色谱柱容量：2根300mm色谱柱4电化学检测器4.1、操作模式：直流，脉冲和扫描4.2、电位范围: 2500 mV4.3、直流模式：电流范围: 10pA-200μA数据采集速率：1-100Hz4.4.电流范围：10nA-200μA;* 脉冲波型：5段脉冲4.5、脉冲时间：tl:100-2000ms; t2,t3,t4,t5:0-2000 ms4.6、采样时间: ts:20ms to (t1- 60ms)4.7、扫描范围：10nA-200μA4.8、扫描速率：1-100mV/s4.9、恒温箱: 法拉第屏蔽式控温箱，室温＋7℃~60℃，温度稳定性0.1℃; 可同时放置色谱柱和流通池，ong ine EC/LC/MS)or HPLC and MS*4.10、降噪滤波器：先进的数字滤波器（ADF），10-0.001Hz4.11、分析流通池结构：中央喷壁式结构, 玻碳工作电极, 银/氯化银参比电极*4.12、分析流通池灵敏度可连续调节，工作体积在0-300nl之间连续可调，一个电极就可满足不同灵敏度的应用需求5紫外检测器5.1光源：氘灯5.2范围：190～600nm5.3狭缝宽度：6.5nm5.4光谱：停流扫描5.5检测通道：双通道5.6波长校正：氘灯和内置氧化钬滤光片自动校正5.7波长精度：《0.1nm*5.8基线噪音：±0.25⨯10-5AU at 230nm5.9基线漂移：1⨯10-4mAU/h at 230nm5.10线性范围：>2.5AU5.11测量范围：>2AUFS5.12最快采样速率：120Hz6荧光检测器6.1性能：纯水拉曼〉5006.2光源：氙闪灯，20W，寿命不低于4000h6.3脉冲频率：296Hz6.4波长重现性：±0.2nm6.5波长准确度：±3nm*6.6激发单色器：全息凹面光栅，F/1.6，闪耀波长300nm，范围200-1200nm，零序，带宽20nm*6.7发射单色器：全息凹面光栅，F/1.6，闪耀波长400nm，范围280-1200nm，零序，带宽20nm*6.8采集速率：74Hz6.9 波长范围：200-1200nm.8化学工作站8.1全中文操作软件：操作环境：图形界面液相色谱软件，中文版工作站8.2软件能够仪器控制，数据采集，数据分析，可进行色谱操作定性，定量分析;8.3报告：内置多种报告格式，可自动生成系统适应性报告、峰纯度报告、光谱检索报告等；用户也可编辑个性化的报告模板9、配件样品瓶500个，工具包一个，4.6*150mmC18色谱柱一根。

食品与发酵工业F OOD AND FERMENTAT I ON I N DU ST R I ES梯度洗脱高效液相色谱法快速测定1, 3 丙二醇发酵液中有机酸*王元好 , 董悦生 , 修志龙(大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系 , 辽宁大连 , 116024摘要提出了一种快速分析发酵液中 9种有机酸的高效液相色谱方法。

该方法利用 R Spak KC -811色谱柱 (300mm 8mm i d , 采用超纯水 -4mm ol/L高氯酸为流动相进行梯度洗脱。

流动相流速 1 0mL /mi n , 紫外检测波长 210nm, 柱温 60 时 , 能够快速、准确地分离测定发酵液中的丙酮酸、柠檬酸、苹果酸、延胡索酸、琥珀酸、乳酸、甲酸、乙酸等 8种有机酸 , 分析时间只需 15m in 。

各种有机酸的线性相关系数 R 2! 0 9992, 精密度的相对标准偏差为 0. 97%-2. 72%, 样品回收率为 96 8%-102 5%, 具有较高的精密度和准确度 , 可以用于 1, 3 丙二醇发酵液中有机酸的分析。

关键词高效液相色谱 , 梯度洗脱 , 有机酸 , 1, 3 丙二醇 , 发酵液第一作者 :博士研究生 (修志龙教授为通讯作者。

*∀ 863#计划项目 (2007AA02Z208 和∀ 973#计划项目 (2007CB 714306收稿日期 :2009-07-10, 改回日期 :2009-11-16代谢组学 (m e tabono m ics 是近几年来的一门新兴学科 , 主要应用高效液相色谱、气相色谱质谱、液相色谱质谱以及核磁共振等现代分析仪器手段 , 定性定量的研究生物体内代谢产物及其随时间变化的规律 [1]。

质谱及核磁共振等分析手段由于仪器价格昂贵、专业性强 , 限制了其普及应用。

因而开发常规仪器 H PLC 在代谢组学领域的应用具有重要意义。

微生物代谢过程中会生成有机酸 , 分析有机酸的种类、含量和变化趋势 , 对于了解不同条件下菌体内的代谢通量分布 , 发酵过程的优化控制具有指导意义。

高效液相色谱仪的基本操作和使用1.准备工作：-确保高效液相色谱仪的设备和耗材齐全。

-检查色谱柱，确保色谱柱选择正确并在有效使用期内。

-检查溶剂的质量和纯度，确保溶剂无杂质。

-设置所需的操作温度。

2.连接高效液相色谱仪：-将进样器连接到色谱柱，并将进样针座固定住。

- 将固相柱插入色谱柱座，然后将电导/ UV-Vis检测器连接到色谱柱座。

3.样品制备：-将待测样品溶解于合适的溶剂中，并进行必要的前处理步骤（如过滤、稀释等）。

-对于固体样品，可以采用适当的溶解方法，如超声波处理等。

4.设置色谱仪参数：-开启电源，等待色谱仪预热稳定。

- 打开色谱仪的软件，并设置所需的参数，包括流速、波长（对于UV-Vis检测器）、进样量、运行时间等。

5.校准仪器和程序：-制备标准品溶液，并用标准曲线法对色谱仪进行校准，以确保仪器输出的结果准确可靠。

-确认色谱仪的波长和检测器的线性范围，并根据需要进行修正。

6.进样：-打开进样器盖，用吸尘器吸出残液，然后用纯溶剂将针清洗干净。

-分别进行空白样品和待测样品的进样，保证进样量准确。

7.开始运行：-在软件界面上点击“开始运行”，观察色谱图输出的曲线形状和峰的出现。

-根据需要，可以进行多次重复运行。

8.结果分析：-对于定性分析，根据色谱图的特征峰形状、保留时间和波长，进行物质的鉴别。

-对于定量分析，根据标准曲线和色谱图的峰面积，计算出待测样品中目标物质的浓度。

9.清洗仪器：-运行结束后，关闭仪器，并将进样器和色谱柱进行清洗。

10.维护：-定期检查仪器的性能和功能是否正常。

-及时更换色谱柱、固相柱和检测器，确保仪器的正常运行。

-做好仪器维护和维修记录。

仪器分析答案刘志广第二版【篇一：仪器分析复习】化学分为经典分析方法和仪器分析方法，其中经典分析方法也成为湿化学方法或化学分析方法，化学分析需要使用简单仪器，仪器分析中也包含某些化学分析技术。

2、仪器分析的特点：试样用量少，适用于微量、半微量乃至超微量分析；检验灵敏度高，最低检出量和检出浓度大大降低；重现性好，分析速度快，操作简便，易于实现自动化、信息化和在线检测；仪器分析可在物质原始状态下分析，可实现试样非破坏性分析及表面、微区、形态等分析；可实现复杂混合物成分分离、鉴定或结构测定；相对误差较高，较不适宜常量和高含量成分分析；需要结构较复杂的昂贵仪器设备，分析成本比化学分析高； 3、仪器分析方法：光学分析法、电分析化学法、分离分析法。

n4、精密度：用相对标准差dr表示精密度（rsd）dr?nsxn?(x；s?ii?xn)2n?1；?xn?ixin5、灵敏度：是区别具有微小浓度差异分析物能力的度量。

6、最低见出现浓度或检测量表示能得到相当于3倍空白信号波动标准差或噪音信号的最低物质浓度或最小物质质量。

二、1、光分析法分为光谱分析法和非光谱分析法。

2、区别：光谱分析法中能量作用于待测物质后产生光辐射，以及光辐射作用于待测物质后发生的某种变化与待测物质的物理化学性质有关，并为波长或波数的函数，如光的吸收及光的发射，这些均涉及物质内部能级跃迁；非光谱分析法表现为光辐射作用于待测物质后，发生散射、折射、反射、干涉、衍射、偏振等现象，这些现象的发生只是与待测物质的物理性质有关，不涉及能级跃迁。

3、电磁波谱的主要参数：波普区波长范围光子能量/ev5～140pm10?32.5?101.2?106~8.3?10~1.2?103～10nm6210～200nm 200～400nm125~6 6~3.1可见光近红外光中红外光远红外光微波射频3.1~1.71.7~0.5 0.5~0.02?42?104?104?10?2~4?10~4?10~4?10?4?7?7?104、光谱的形状：线状、带状、连续状5、lambert-beer定律：a?lgi0iii0=t透光度，a与浓度c成正比）四、1、原子吸收光谱法（aas）是基于气态的基态原子外层电子对紫外光和可见光范围的相对应原子共振辐射线的吸收强度来定量被测元素含量为基础的分析方法。

概述：
液相色谱仪是公司用于检测原料、成品、中间品的检测设备。

设备由输液泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，色谱工作站组成。

由高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱，自动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由色谱工作站软件记录和处理色谱信号。

目的：
为了满足生产规模增加而带来的样品分析量的增加需求，化验室计划购买一台高效液相色谱仪，所购买的仪器应符合公司及各类相关法规的要求。

范围：
适用于我公司内部高效液相色谱仪的配置选型、购买、安装、验证等过程。

职责：
需求方职责：结合公司实际生产产品的性质和其他要求提出符合要求的购买计划。

供应商职责：在规定时间内回复需求方提出的用户需求。

1主要用途技术要求：
1.1主要用途：主要用于样品的鉴别，杂质的检查、含量测定、纯度检查等。

1.2 要求仪器为原装进口。

具体配置与性能要求见下表：
2 用户需求具体内容：
注：1、供应商在确认时如符合客户要求在确认栏打“√”，不符合则打“×”。

2、如在确认过程中有不符合要求的请详细在附件7.1 中描述不符合的部分。

高效液相色谱质谱联用仪名词解释
高效液相色谱质谱联用仪（HPLC-MS）是一种结合了高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）技术的仪器。

下面是一些相关的名词解释：
- 高效液相色谱（HPLC）：一种分离和分析复杂混合物的技术，通过将混合物分离成单独的组分，并使用不同的化学性质和物理性质实现其分离。

- 质谱（MS）：一种将化合物分子转化为离子，并测量这些离子的质量/电荷比的技术。

质谱可以用来确定化合物的分子量、结构和组成。

- 联用仪（MS）：由HPLC和MS两个部分组成的仪器。

HPLC用于分离混合物，并将组分逐个引入质谱进行分析。

- 离子源：质谱中的一个部分，用于将化合物转化为离子。

常见的离子源包括电喷雾离子源（ESI）和化学电离（CI）。

- 质量分析器：质谱中的另一个部分，用于测量离子的质量/电荷比。

常见的质量分析器包括四极质量分析器（QqQ）和飞行时间质量分析器（TOF）。

- 溢流：在HPLC-MS中，溢流是指通过增加样品负载量，使分析物质更容易进入质谱进行分析的方法。

溢流可以提高质量分析的灵敏度和信号强度。

- 质谱图：质谱仪测得的质谱图是显示离子信号强度和质量/电荷比的图形，可以用来确定化合物的分子量和结构。

- 数据分析：HPLC-MS测得的数据通常需要进行进一步的处理和分析。

数据分析可以包括质谱图的解释、化合物的鉴定和定量等方面。