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小鼠超数排卵试验

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１４按方 案四超排 的 ５只小 白鼠 ，共 回收 卵 母细胞 １ ８ ． ７ 枚 ，平均每 只 回收 卵 ３ ．枚 （ ５ ６ 见表 ４ ） 表 ４ 方案 四超 排小 鼠的排 卵数
２左右 两侧卵巢 排卵数 差异显著 性检验 ． 由 表 ５可 见 Ｉ＜ ００ ， Ｐ ００ （００ （ ） ＝ ．０ ． ｔ ｔ．５ ＞ ．５ ｔ．５ ８ ｌ ２３ ６ ｔ．５ （） ＝ ．５ ） ００ ８ ３３ ５ ，说 明采 用四种不 同 的超排 方案左 右侧 卵巢排 卵数没 有显著差 异 。 ３两种 药物组 合间小 鼠排卵数 差异显 著性检 验 ． 用 Ｐ Ｇ＋ Ｇ法 和 Ｆ Ｈ＋ Ｈ方 法对 小 鼠进 行超 排处 ＭＳ ＨＣ Ｓ Ｌ 理 ，采用 不 同的 剂量 间 ，小 鼠排 卵数 没有 显 著性 差异 （ 差 异显 著性检验 见表 ６ ） 表 ５ 左右 侧卵巢排 卵数差 异显著性 检验
医动物房） 。 ２超 排 方 案 ． 将２ ０只母 分成 ４组 ，每组 ５只 。
２１方 案 一 给 每 只 小 鼠腹 腔 注 射 １ Ｉ 的 Ｐ Ｇ，间 ． ０Ｕ ＭＳ 隔４ ８小 时后 ，再 腹腔注 射 １ Ｉ 的 ＨＣ ０Ｕ Ｇ。 ２２方 案二 给 每 只小 鼠腹 腔注 射 ５Ｕ的 Ｐ Ｇ，间 隔 ． Ｉ ＭＳ ４ ８小时后 ，再腹 腔注射 ５Ｕ的 Ｈ Ｉ ＣＧ。 ２３方 案 三 给 每 只 小 鼠 注 射 Ｆ Ｈ 剂 量 为 ２Ｕ、２Ｕ、 ． Ｓ Ｉ Ｉ ２Ｕ、２ Ｕ、ＩＵ、ＩＵ、每 次 注射 间隔 ｌ Ｉ Ｉ ｌ ｌ ２小时 ，在最 后 一 次注射 Ｆ Ｈ后 １ 时 ，再腹 腔注射 １ Ｉ Ｓ ２小 ０Ｕ的 Ｌ Ｈ。 ２４方案 四 每 次给 小 鼠注射 Ｆ Ｈ剂 量 为 ２ Ｕ、２ Ｕ、 ． Ｓ Ｉ Ｉ 、 ＩＵ，每 次注射 时 间间隔 １ 时 ，在最 后一 次注 射 Ｆ Ｈ后 ｌ ２小 Ｓ ｌ ２小 时 ，再腹 腔注射 ５Ｕ 的 Ｌ Ｉ Ｈ。 ２５采 卵 最 后一 次注 射激 素后 ４ ６个 小 时 ，处 死 小 白 ． － 鼠 ，剪开 皮肤 ，用眼科镊拉 出小 白鼠左 右两侧子 宫和 卵巢 ， 把 输卵 管 与子 宫 、卵巢 分离 ，找 出输 卵管 的膨 大部 ，将 孵 卵管 移到培 养皿 中 。 ２ ． ６显微 观察 与 卵母细 胞 计数 在 体视 显微 镜 下 ，将沉 浸 在生 理盐 水 中的输卵 管 的膨 大 部 找出 ，用胚 胎操 作 针将 卵分离 出来 ，再加 入透 明质 算酶 （ ＨＥ液 ） ，过 ２ ３分 钟进 ￣ 行 观察 记数 。
ＸＩ ＮＮＯＮＧＣ ＵＮ
２ １． ２ ０ ２ ０
小鼠超数排卵试验
天耒义 吴集义
（ 宁 县 动 物 卫 生监 督 所 ，安 徽 休 宁 ２ ５ ０ ） 休 ４ ４ ０
摘 要 ： 四 种 方ຫໍສະໝຸດ 案 对 ２ Ｏ只 小 白 鼠进 行 超 排 处 理 。 方 案 １ ：给 小 白 鼠腹 腔 注 射 （０Ｕ） Ｐ Ｓ １Ｉ Ｍ Ｇ，４ ８小 时 后 再 腹 腔 注 射 （０Ｕ） ＨＣＧ；方案 ２ １Ｉ ：给 小 白 鼠腹 腔 注射 （Ｉ Ｐ Ｇ，４ ５Ｕ） ＭＳ ８小 时后 再 腹 腔 注射 （Ｉ ＨＣＧ；方 案 ３ ５Ｕ） ：给 小 白鼠 分 ６次腹 腔 注 射 Ｆ Ｈ （０Ｕ） ２小 时后 再 腹 腔 注 射 Ｌ （０ｕ） ； 案 ４ Ｓ １Ｉ ，７ Ｈ １Ｉ 方 ：给 小 白 鼠分 ３次腹 腔 注 射 Ｆ Ｈ （Ｉ ，４ Ｓ ５Ｕ） ８小 时后 再 腹 腔 注 射 Ｌ Ｈ （Ｉ 。在 最后 一次 注射 激 素后 １－ ６小 时 ，取 小 白鼠 输 卵 管膨 大部 ，记 录 左 右侧 卵 巢排 卵数 。结 果 ：方 案 ２ 到 的 平均 卵数 最 ５Ｕ） ４１ 得 高 （５ ４ ． ／只） ８个 ，但 各 组 间平 均排 卵数 无 显 著 差 异 （＞ ． ） Ｐ Ｏ ５ ，左 右侧 卵 巢排 卵数 亦无 显 著 差 异 （＞ ．５ 。 ｏ Ｐ ０ ） ０ 关键 词 ： 小鼠 超 数 排 卵
小 鼠是 一种使 用 最为 广泛 的 实验 动物 ，在 发育 生 物学 和生 殖生 物学 研 究方面 ，利 用小 鼠进 行有 关研 究 及探 索 许 多理论 和实 践问题有 许多便 利之处 。小 鼠对 超数排 卵反应 ， 受体 况 、年龄 、季 节 、营养 状况 、激 素 的种 类 、剂 量等 因 素 的影 响 。由于 影响 因素很 多 ，于是 要对 每 只受 体 鼠处 理 后都 得 到预期 的 效果 是 比较 困难的 。其 影响 的关 键 因素 在 于个 体对 药 物 的反应 （ 敏感 性 ）及 年龄 等 。我们 采 用 四种 方 法对 小 鼠进 行 超 排处 理 ， 目的是 比较 所 用 的超 排效 果 ， 为研 究山羊 、奶 牛的超数 排卵 ，胚 胎移植 提供材料 。
一
、
材 料 和 方 法
１实 验 材 料 ．
１１药 品 Ｆ Ｈ （ ． Ｓ 宁波 第二 激 素厂 ） ＭＳ （ 波 第二 ，Ｐ Ｇ 宁 激 素 厂），Ｌ （ 波 第二 激 素 厂 ） ＣＧ （ 州 动 物药 品 Ｈ 宁 ，Ｈ 杭 厂 ）等 。 １２实验 动物 雌 性 昆明 白系性 成熟小 鼠 ２ ． Ｏ只 （ 自安 购
二 、 结果
１各组 超数结 果 ． １１ 方案 一超排 的 ５只小 白鼠 ，共 回收卵母 细胞 １ ９ ．按 ８
枚 ，平 均每 只回收卵 ３ ．枚 （ ７ ８ 见表 １ ） １２按方 案二 超排 的 ５只 小 白鼠 ，共 回收 卵母细胞 ２ ９ ． ２ 枚 ， 均每 只回收 卵 ４ ．枚 （ 平 ５ ８ 见表 ２ ） １３按方 案三超 排的 ５只小 白鼠 ，共 回收卵 母细 胞 １ ６ ． ８ 枚 ，平 均每 只回收 卵 ３ ． ７２枚 （ 见表 ３ ） 表 １ 方 案一 超排小 鼠的排 卵数

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小鼠的超数排卵

小鼠的超数排卵


几种对母鼠繁殖有作用的激素A
类别 下
名称
简称
激 激 GnRH
来源
化学特征 生理功能
丘 脑 部 激 素
素 素
素 素 素 OXT ,
作用
几种对母鼠繁殖有作用的激素B
促 性 腺 激 素
促卵泡素 促黄体素 GnRH LH 腺垂体 腺垂体 糖蛋白 糖蛋白
促使卵泡发育和成熟，促 进精子发生 刺激排卵，促进黄体生成， 促进雄激素和孕激素的分 泌 促进泌乳，对某些动物刺 激黄体功能和孕酮的分泌， 增强母性行为 与促卵泡素类似，促进马 属动物辅助黄体的形成
小鼠的超数排卵
不同激素对不同小鼠超排的影响研究
指导老师:刘云海
Hale Waihona Puke 10131乙于昊研究的理论依据
造成超排效果（获卵率和可用的胚胎数）不 稳定的因素主要有两大类：一类是动物因素， 包括个体和遗传的差异、生理和营养状态、 开始超排的日期、季节及其它影响动物的环 境因素；另一类是药物因素，包括激素的半 衰期、激素制剂中的FSH／LH比例、给药途 径、剂量和频率等。
目前的研究进展
参考文献
①杨文胜 倪和民等 母兔超数排卵方法的研究 实验动物 科学与管理 1996. 4 ②徐平 不同日龄与品系小鼠超排卵、体外受精及受孕率的 比较研究 中国实验动物学杂志 2001. 6 ③李秦等 不同激素对哺乳动物超数排卵作用的研究 实验动 物科学与管理 1997.3
实验方法
主要实验内容： 主要实验内容：
实验方法
主要研究方法 c.实验器械
一次性塑料培养皿、显微镜、灭菌手术器械（眼科剪、眼科镊）、？ml 无菌注射器、吸管等。 d.实验步骤 将小鼠分为A、B及对照组三组，A、B每组6只，对照组8只，A组腹腔注 射PMSG + hCG ,B组腹腔注射PSMG + PG F2α ，对照组不作任何处理。 这样的注射一般在每天下午四点左右进行。先注射PMSG（A、C组）、 FSH（B组），在44小时候后注射hCG (B组)和PG F2α（C组）,在注射 组 （ 组 后第二天上午约八点左右将前一天处理过得小鼠处死，打开小鼠腹腔， 取出输卵管及卵巢，撕裂输卵管壶腹部，将胚胎冲出，在显微镜下检查 胚胎、卵巢，计数、记录 。
小鼠超数排卵效果分析

小鼠超数排卵效果分析

第15卷 第1期北 京 农 学 院 学 报Vol.15No.1 2000年1月JOU RNA L OF BEIJIN G AGRI CU L T U RA L COL LEGE Jan 2000文章编号:1002-3186(2000)01-0025-04小鼠超数排卵效果分析高建明 侯文元1) 焦占海1)(北京农学院动物科学技术系,北京102206)摘 要 本试验通过对80只昆明白小鼠超数排卵效果的观察分析表明,超排月份、小鼠日龄及注射P MSG剂量均对超排效果有显著或极显著的影响.每只小鼠获平均可用胚数,以4月份、35和36日龄小鼠、注射PM SG剂量11 2iu时最多.关键词 小鼠;超数排卵;效果中图分类号:Q813 7 文献标识码:AAnalysis on Effect of Mouse SuperovulationGao Jianming Hou Wenyuan Jiao Zhanhai(Beijing Ag ricultural College,Beijing102206)Abstract The test observed and analyzed the superovulation effect in eighty mice.T he results indicated that there were sig nificant difference for the superovulation effect in the tested months,ages of the m ice and PM SG dosages.The fourth month,thirty five and thirty six ages of mouse and11 2iu PM SG dosage were the best for the available embryos average per mouse.Key words mouse,superovulation,effect动物胚胎移植首次成功(Heape,1890)距今已有一百年了.在这期间,又有多种动物胚胎移植试验成功,技术也在不断改进,胚胎移植已成为一个与当今生物科学、商业、医学、社会及物种保存等诸多方面密切相关的领域[1].胚胎移植技术的关键是要有足够数量的胚胎,迄今为止,能够获得大量的胚胎来源仍为超数排卵方法,虽然胚胎分割、卵子体外受精技术收稿日期:1999-07-191)北京农学院动物科技系92级、93级毕业生已趋成熟,但还不能应用于生产实践.因此,完善的超数排卵技术是胚胎移植成功的先决条件.超数排卵反应是一个极为复杂的过程,许多内外因素错综交织,使超排效果极不稳定,本试验对影响小鼠超排效果的一些因素进行了观察和分析,以期为今后小鼠超排工作提供帮助,也为提高家畜超数排卵效果,提供可借鉴的参考资料.1 材料和方法1 1 超排处理将购进的昆明白小鼠在实验条件下饲养1周后,用PM SG 处理.48h 后再用H CG 处理,然后放入雄鼠,放入雄鼠后第2d 检查阴栓,发现阴栓者为妊娠的第1d.1 2 胚胎回收将有阴栓的小鼠于妊娠的第4d 上午处死,取出子宫后用冲卵液(PBS+20%小牛血清)分别冲洗二侧子宫角,收集桑椹期和囊胚期胚胎.根据胚胎的色泽、卵裂球是否整齐、排列紧凑、透明带和细胞膜是否完整、胚胎发育阶段与回收时间是否相符等情况综合分析,确定其是否为可用胚.1 3 数据处理采用方差分析和t 检验对试验结果进行统计.2 结果和讨论本试验共用昆明白小鼠80只,共收集胚胎742枚,平均每只9 3枚;其中可用胚450枚,平均每只5 6枚.2 1 1、4、5月份对超排影响本试验是在1、4、5三个月份进行的,三个月份的超排效果见表1.表1 1、4、5月份超排处理结果月份室温小鼠只数超排成功数超排成功率%获胚胎总数(枚)平均获胚数(枚)可用胚总数(枚)可用胚胎率%平均可用胚数(枚)118 2201155 0b 1089 82D 4339 81f 3 91h423 2292793 10a 45317 89C 27961 59e 10 33g 527 1312577 42a 1817 24D 12870 71e 5 12h * 同一竖行数值中不同小写字母标记者差异显著(P<0 05),不同大写字母标记者差异极显著(P<0 01),由表1结果表明,1、4、5月份的超排成功率和可用胚胎率,4、5月份均显著高于1月份(P<0 05);4月份获胚枚数17 89枚,极显著的高于1月份9 82枚和5月份7 24枚(P<0 01);平均可用胚胎数,4月份与1、5月份比较差异显著(10 33枚vsn3 91枚和5 12枚)(P<0 05).可见不同月份对超排效果有一定影响.季节实际上是气温、湿度、光照等自然环境条件的综合,不同地区,由于纬度、地形、地貌的不同,即是同一季节,气候条件也有很大差别,动物所感受的刺激也不尽相同[2].本试验所用实验动物超排实验是在实验室饲养条件下进行的,环境条件相对稳定.小鼠正常生长的适宜温度是在25 [3],4月份室温为(23 2) ,比较接近其正常生存温度范围,超排效果较为理想,而1月份气温相对较低,5月份又较高,因此对小鼠机体造成一定应激,影响其发情排卵,致使超排效果较差.26 北 京 农 学 院 学 报 第15卷2 2 激素注射剂量对超排效果的影响本试验每只小鼠PMSG 注射剂量为9 6、11 2、12 8iu;HCG 注射剂量为16iu.超排后,小鼠的子宫色泽、充血情况及回收胚胎情况见表2.表2 不同激素注射剂量超排结果PM SG 注射量超排只数超排成功数子宫粗细子宫色泽子宫充血胚胎总数(枚)平均获胚数(枚)可用胚总数(枚)平均可用胚数(枚)9 6iu 1211细长苍白不明显877 90B 605 45D 11 2iu 129细长浅红明显17719 67A 12513 89C 12 8iu105短粗肿大暗红高度充血408 0B255 0D由表2结果表明,PM SG 注射剂量为11 2iu 时,平均获胚数(19 67枚)和平均可用胚数(13 89枚)均极显著高于9 6iu(7 90枚和5 45枚)和12 8iu(8 0枚和5 0枚)(P<0 01).可见,PMSG 注射剂量多少直接影响了超排效果.这与杨文胜等(1995)以PMSG 超排母兔时所得出的结果相一致[4].PM SG 注射剂量过低,不足以刺激较多的卵泡成熟,达不到超排的目的;注射剂量过高,对子宫刺激明显,子宫肿大,高度充血,卵巢易发生囊肿,从而减少了排卵数,同样也达不到理想的超排效果.因此,在超排过程中,激素的注射剂量要适宜准确.2 3 小鼠超排日龄对超排效果的影响表3 不同日龄小鼠超排处理效果日龄超排只数超排成功数超排成功率%获胚胎总数(枚)平均获胚数(枚)可用胚总数(枚)可用胚胎率%平均可用胚数(枚)3266100396 5b 2974 364 83d 3366100305 0b 2066 673 33d 34121083 3313913 9a 7755 407 70cd 35111090 9112512 5a 10886 4010 80c 366350 04113 67a 3278 0110 67c 376583 33306 0b 1860 03 60d 387457 14235 75b1878 264 50d表3结果表明,在平均获胚数上,34、35、36日龄小鼠与其它日龄小鼠差异显著(P<0 05);其中,35、36日龄小鼠平均获可用胚胎数量上显著高于32、33、36、37、38日龄小鼠(P <0 05),而34日龄与其它日龄小鼠无显著差异(P>0 05),说明超排效果以35、36日龄小鼠为好.可见,超排时小鼠的日龄也是影响超排效果不可忽略的因素.哺乳动物自接受超排处理后,其体内的生殖内分泌轴(下丘脑!!!垂体!!!卵巢)的活动,内分泌的情况均将发生变化,并进而影响卵巢上卵泡群的生长、发育直至啮齿类动物的卵泡都是以波浪形式生长的,在发情的第4d 或者第5d 起,就有一个持续3d 的卵泡生长波,而且正是这个波中的卵泡数决定了超排处理后的排卵数.本试验虽未对小鼠的动情周期进行观察,但由试验结果可见不同的日龄其超排效果不同,这可能与卵泡生长波中所具有的卵泡数及个体对激素反应敏感程度有关.超排是一个极为复杂的一系列生理过程累积产生的结果,影响因素很多,本文仅就超排月份、激素注射剂量和小鼠日龄方面进行探讨.说明动物体内的某些因素,如卵泡生长情况和内分泌活动对超排效果将产生更直接的影响,今后还有待进一步研究.272000年第1期 高建明等:小鼠超数排卵效果分析参考文献1 G F Seidel.Jr.Embryo tr ansfer:the next 100years.T heriog enology ,1991,35:171~1812 李维军等.季节与饲养管理条件对奶牛超排效果的影响 河南农业科学,1992,1:42~433 俞慧珠等.小鼠胚胎发生.北京:科学出版社,19864 杨文胜等.转基因兔研究中供体母兔的超数排卵.全国第八届动物繁殖学术讨论会论文汇编,19955 Armsro ng D T et al.Seminar in reproductive endcorinology,1990,8(3):219~23128 北 京 农 学 院 学 报 第15卷。

超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响

超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响

超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响作者：顾红霞，邹晨鹏来源：《畜牧兽医科学》 2018年第13期摘要：研究超数排卵对小鼠子宫组织结构的影响，发现超排处理后子宫壁的结构变化规律，为实际生产中超数排卵提供技术参数。

通过做石蜡切片的方法观察小鼠子宫的变化，首先对一组小鼠进行超数排卵处理后取出小鼠子宫，另一组小鼠不做处理，作为对照组，做好标记，放入福尔马林中固定保存，然后做石蜡切片，完成取材、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、染色、封片等实验步骤，最后在显微镜下观察子宫内膜、子宫腺、子宫壁等组织的变化，进行综合对照分析。

由于超数排卵激素的作用，会引起子宫内膜发生变化，分泌性内膜的结构特征表现的更为明显，与对照组相比，子宫内膜上皮增生、腺体加长、弯曲增多，子宫内膜的结缔组织和成纤维细胞发育。

关键词：小鼠；超数排卵；子宫内膜；子宫腺中图分类号：S814文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2018.13.0060引言子宫是一个中空的肌质性器官，富有伸展性，是胎儿生长发育和娩出的器官。

子宫借子宫阔韧带附着于腰下部和骨盆腔侧壁，大部分位于腹腔内，小部分位于骨盆内，在直肠和膀胱之间，前端与输卵管相接，后端与阴道相通。

子宫阔韧带为宽而厚的腹膜褶，含有丰富的结缔组织、血管、神经及淋巴管，其外侧有子宫圆韧带。

1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验组织超数排卵处理后的子宫10个和未经处理的子宫10个。

1.1.2试剂与药品70%、80%、90%、95%酒精及无水酒精、二甲苯、甲醛、苏木素液、1%的盐酸酒精、伊红水溶液、蒸馏水。

1.1.3主要仪器包埋机：型号KD-BM，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产生产。

切片机：型号RM2235，上海莱卡仪器有限公司生产。

推片机：型号TP-1，上海医疗仪器厂产品。

烘片机：型号KD-H，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产。

显微镜及图像采集系统：型号OLYMPUS-BH2，沈阳市互利康医疗器械公司。

1动物胚胎工程实验教程小鼠卵的体外成熟与体外受精材料与方法

1动物胚胎工程实验教程小鼠卵的体外成熟与体外受精材料与方法

《动物胚胎工程实验教程》王子玉自编南京农业大学动科院2005年8月实验一小鼠卵母细胞的体外成熟实验一、实验目的熟悉雌鼠的生殖器官的结构特点；掌握小鼠的超数排卵方案；掌握从卵巢上扎取未成熟卵母细胞的方法、卵母细胞的分类方法、体外成熟培养方法及核成熟情况和卵丘扩展程度的观察。

二、实验器材和材料1. 器材及药品体视显微镜，手术器械（眼科剪，眼科镊），1mL注射器，胶头滴管，口吸管，CO2培养箱，水浴锅，移液器，枪头，塑料培养皿，记号笔。

操作液（M2），成熟培养液（M－199），激素（PMSG和HCG），石蜡油。

2．实验动物：3-4周龄昆明系雌性小白鼠，自由采食饮水。

三、实验内容1.小鼠的超数排卵注射剂量皮下或腹腔注射PMSG 10 IU/只小鼠。

注射方法皮下注射：用手指捏住小鼠的头及尾部固定（图1-1），以酒精棉球消毒其背部，提起皮肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头微向上挑起不露出针尖时，再注入药物。

随着药物的推入，在皮下可看到鼓起一个小泡，即证实药物确已注入皮下部位。

皮下注射时防止药液从针孔处逸出。

腹腔注射：针头刚进入腹腔后向上挑，防止损伤小鼠腹腔内器官。

注射针头宜选用小号细针头。

注射药物后的小鼠自由饮水、采饲，自然光照。

2.卵巢的采集方法在注射PMSG后46h利用颈椎脱臼法处死小鼠（将供体鼠置于饲养笼上，鼠爪自然抓紧笼上铁支架，此时一只手拉紧鼠尾，另一只手食指与拇指压紧鼠颈部，或用镊子压紧颈部即可致死，此为引颈法。

用75%酒精喷湿鼠全身以消毒并防止毛发飞扬）。

将小鼠头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱臼的振动；也可用食指和拇指直接掐断颈椎致死。

然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上或鼠解剖台上。

图1－1 小鼠的固定将处死并固定好的小鼠，在下腹部中间剪开1个小口，一只手抓住鼠尾，另一只手抓住切开的皮肤向头部牵拉直至充分暴露腹部（图1-2）。

剪开腹膜，向前方揭去肠胃内脏，即暴露出生殖器官，可在肾脏后方看到两侧呈乳白色的卵巢及与输尿管相平行的两子宫角（图1-3）。