小鼠超数排卵的实验方法

REPRODUCTION & BREEDING272020·3不同剂量生殖激素对小鼠超排效果的影响田风林，宋学功，邓树义（ 固原市民族职业技术学院，固原 756000 ）中图分类号：S823.3 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2020）03-0027-03DOI: 10.19305/ki.11-3009/s.2020.03.008开放科学(资源服务)标识码(OSID)微信扫描二维码听独家语音介绍与作者在线交流摘 要：为了探讨孕马血清促性腺激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）对小鼠超数排卵的最佳组合剂量、最佳注射时间间隔，本试验以成熟实验小鼠为试验动物，分别采用不同剂量PMSG（5IU、7.5IU、10IU、12.5IU）与不同剂量HCG（5IU、7.5IU、10IU、12.5IU）组合注射小鼠进行排卵效果研究，并以44h、46h、48h、50h 的间隔时间对小鼠进行超数排卵处理试验。

结果表明，（10+10）IU 剂量组合处理的见栓小鼠平均获卵数最高(10.3枚)；在注射间隔为48h 试验组中见栓小鼠平均获卵数最高（8.4枚）。

提示本试验条件下，小鼠超排中PMSG 与HCG 组合剂量为10IU、注射时间间隔为48h 时超排效果较好。

关键词：孕马血清促性腺激素（PMSG）；人绒毛膜促性腺激素（HCG）；小鼠；超排在动物胚胎生物技术的研究和应用中需要大量的优质卵子和胚胎，获取大量卵母细胞或早期胚胎的有效途径之一就是超数排卵（简称超排）[1]。

如今，绝大多数胚胎移植中心都采用超数排卵方法来获得较多的卵母细胞。

而小鼠为医学、生物研究领域应用最广的实验动物之一，特别是随着胚胎工程的深入研究，获得足够数量的小鼠胚胎是顺利开展各种胚胎生物实验的基础。

对于小鼠超数排卵，现在国内外均有较多研究[2,3]。

但是在养牛业中，特别奶牛超数排卵反应是一个极其复杂的生理过程，它受动物遗传特性、体况、营养状态、年龄、发情周期的阶段、卵巢的功能状态、季节、温度以及激素的品种与用量等多种因素的影响，这些因素错综复杂，使超排效果很不稳定。

不同交配时间对小鼠胚胎收集和发育的影响田静;赵刚;钟刚毅;郭建鑫;谢鑫;崔继红;杨艳红;李立文;陈富林;严兴荣【摘要】【目的】探索不同交配时间对小鼠胚胎收集和胚胎发育的影响,为小鼠的超排研究提供参考。

【方法】对小鼠进行超数排卵,分别于注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）后9,10,11,12,13,14和15h,在输卵管膨大部收集卵母细胞,研究排卵情况;将超排雌鼠与雄鼠合笼,分别于合笼后2,4,6,8,10和12h观察小鼠是否见阴道栓,研究小鼠交配时间;为了控制小鼠的交配时间,将超排雌鼠分别于注射hCG后0,2,4,6,8,10,12,14,16和18h与雄鼠合笼,每个时间点合笼后2h观察交配情况,于注射hCG后98h从子宫角收集囊胚,统计胚胎收集率,观察胚胎发育情况。

【结果】小鼠排卵主要集中于注射hCG后12～14h,交配时间主要在注射hCG后的前6h。

人为控制交配时间发现,注射hCG后4,6,8,10和12h的交配率均较高,较高的胚胎收集率出现在注射hCG后8,10和12h;囊胚发育率在注射hCG后4h（56.0%）和8h（54.5%）较高;扩张囊胚发育率在注射hCG后12h（68.2%）和16h （58.0%）显著高于其他时间点（P〈0.05）。

【结论】交配时间影响小鼠交配成功率、胚胎收集率和胚胎发育;超数排卵后12h交配可提高小鼠的胚胎收集率和胚胎发育率。

%【Objective】 The effect of different mating time on mice embryonic collection and embryonic development by controlling mating time was investigated.【Method】 Ovulation was ensured by observing oocyte in oviduct at 9,10,11,12,13,14,15 h after injecting hCG.To observe the mating time,vaginal plug was recorded at 2,4,6,8,10,12 h after matingof superovulated female with male.To control the mating time,the female was caged with male mice at 0,2,4,6,8,10,12,14,16,18 h after injecting hCG.The mated mice were recorded at 2 h after caging,respectively.Theembryo was collected in uterus at 98 h after injecting hCG.The collecting and development rate of embryo were recorded.【Result】 In nature,the ovulation occurred at 12-14 h after injecting hCG.The mating rate was mainly concentrated at first 6 h after caging.In control of matingtime,mating rate was higher at 4,6,8,10,12 h after injecting hCG.The success of collecting embryo was higher at 8,10,12 h.Formation rate of blastocyst was higher at 4 h（56.0%） and 8 h（54.5%）;Development rate of expanded blastocyst was higher at 12 h（68.2%） and 16 h（58.0%）,respectively,which were significantly more than other points（P 〈0.05）.【Conclusion】 The mating rate,collection and development of embryo was improved by controlling the mating time,and the rates of embryonic collection and development were improved by mating at 12 h after superovulating.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(040)007【总页数】5页(P21-24,31)【关键词】小鼠;超数排卵;交配时间;胚胎收集;胚胎发育【作者】田静;赵刚;钟刚毅;郭建鑫;谢鑫;崔继红;杨艳红;李立文;陈富林;严兴荣【作者单位】西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;第四军医大学唐都医院妇产科,陕西西安710038;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069【正文语种】中文【中图分类】Q954.4实验动物为人类健康研究贡献了生命，合理而高效地控制与调整实验动物的繁殖周期与交配行为[1-2]，对减少实验动物无序繁殖而实现有计划生产和按时供给具有重要意义。

通过优化超排后合笼时间高效获取小鼠孵化囊胚翟椿东;顾美超;刘迪;王力红;齐晓龙;张嘉楠;刘云海;倪和民;郭勇【摘要】本试验旨在优化小鼠超排后的合笼时间,高效获取小鼠孵化囊胚.试验选用150只ICR系8周龄雌性小鼠,随机分为5组,同一时间超排处理后雌、雄按1∶1于18:00、19:00、20:00、21:00合笼过夜,次日上午08:00查栓,发现阴道栓这为妊娠第1天(D1).取妊娠第5天(D5)小鼠处死,剪取双侧子宫角,冲取胚胎.统计每组冲取胚胎的总数及孵化囊胚/未孵化囊胚的比值,作为胚胎获取效率的评价指标;统计内细胞团数/滋养外胚层细胞团数,作为评价胚胎质量的参考指标.结果发现,在数量上组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ囊胚数差异不显著(P＞0.05),但有增高趋势,组Ⅳ囊胚数显著高于其他3组(P＜0.05).组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ内细胞团数/滋养外胚层细胞团数分别为23.18％、23.55％、21.72％和23.28％,各组间差异不显著(P＞0.05).结果表明,组Ⅳ所对应的合笼时间获取小鼠孵化囊胚获取效率最高,胚胎囊胚质量无明显差异.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)005【总页数】6页(P1253-1258)【关键词】小鼠;孵化囊胚;超数排卵;合笼时间【作者】翟椿东;顾美超;刘迪;王力红;齐晓龙;张嘉楠;刘云海;倪和民;郭勇【作者单位】北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206【正文语种】中文【中图分类】S814.8近年来人们对生殖领域的研究越来越关注，以常规试验动物为基础研究对象的生殖研究便成为热点。

激素的不同剂量对小鼠超数排卵的影响郭庆勇;况玲;蒋国英;刘小兰;袁龙;张毅;侯宇;白亚峰【期刊名称】《新疆农业科学》【年(卷),期】2010(047)007【摘要】[目的]通过对小鼠超数排卵激素剂量和对其后代进行控制的研究,逐渐将这些技术运用到其它动物上,以加快其品种的改良,提高优良品种及个体的利用率.[方法]以昆明系小白鼠为实验动物,取性成熟个体,先进行发情鉴定,确定其发情周期及不同的阶段,然后按发情阶段分组,分别用5和10 IU剂量的孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素进行超排处理并与公鼠合笼,在见栓后的第3.5 d冲胚,对所得胚胎进行鉴定.[结果]对157只小鼠进行了发情鉴定.对40只小鼠在其发情周期的不同阶段进行了超排处理,发现10 IU剂量时,胚胎的质量和数量都优于5 IU.[结论]在小鼠发情周期中的间情后期和发情初期这两个阶段用5和10 IU的剂量进行超排,都能得到良好的效果,以发情初期的10 IU剂量效果最好.【总页数】4页(P1466-1469)【作者】郭庆勇;况玲;蒋国英;刘小兰;袁龙;张毅;侯宇;白亚峰【作者单位】新疆农业大学动物医学院,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学动物医学院,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学动物医学院,乌鲁木齐,830052;新疆出入境检验检疫局,乌鲁木齐,830000;深圳航空公司,深圳,518000;新疆农业大学动物医学院,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学动物医学院,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学动物医学院,乌鲁木齐,830052【正文语种】中文【中图分类】S865.13【相关文献】1.不同剂量激素处理对小鼠超数排卵及产仔性能的影响 [J], 周晓旭;李雁冰;宁博林;孙蕊;郭丽;李庆达;韩静;李井春2.不同生理状态及激素量对小鼠超数排卵及后续胚胎发育的影响研究 [J], 许惠艳;王塑天;杨巧蓉;杨小淦;卢克焕3.激素剂量及周龄对小鼠超数排卵的影响 [J], 吴银玲;石梦雅;董鑫;周志勇;葛少钦4.不同激素剂量和组合对不同品系小鼠超数排卵的影响 [J], 邱泽文;姜午旗;高丽波;罗光彬;陈军;詹红微;高文婷;王靖宇5.不同剂量孕马血清促性腺激素(PMSG)对未成年大鼠超数排卵效果与质量的影响[J], 张春燕;刘丽均;狄敏;赵丹凤;赵立虎;陈浩杰;徐平;芮荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同时间注射PMSG和HCG对小鼠超排卵效果的影响陈喜英;郭永昌;刘田福【摘要】目的探讨不同时间注射孕马血清激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)对小鼠超排卵效果的影响. 方法选用40只6周龄F1昆明小鼠,随机分成4组,分别在同一天的11:00,13:00,15:00,17:00注射PMSG 5 IU,48 h后注射HCG5 IU,然后与公鼠合笼;次日晨检查阴栓,阳性者于当日10:00处死取卵,计数受精卵的数量. 结果 11:00,13:00,15:00和17:00组平均每只获取可用受精卵9.8枚、24.8枚、11.5枚、4.7枚. 结论在13:00注射PMSG,48 h后注射HCG对小鼠超排效果最好.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2014(045)001【总页数】3页(P23-25)【关键词】孕马血清;人绒毛膜促性腺激素;超排卵;注射时间【作者】陈喜英;郭永昌;刘田福【作者单位】山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001【正文语种】中文【中图分类】R-33近年来，随着转基因技术的迅速发展和成熟，转基因动物在生物医药、生命科学研究领域得到越来越广泛的应用。

国际上报道了多种得到转基因动物的方法，目前真正成熟并可以稳定得到转基因动物的方法主要有三种，即原核显微注射法、精子介导的基因转移法和核移植。

其中，显微注射法是转基因最简单、最常用的的方法，其操作步骤包括受精卵的采集、显微注射和胚胎移植。

要取得原核显微注射的高成功率首先要得到质量好、数量多的原核期受精卵。

小鼠在生理状态下一次排卵10－15颗，远不能满足实验的需要。

为了增加可获得的卵子数量，用孕马血清(PMSG)模拟促卵泡激素，用人绒毛膜促性腺激素(HCG)模拟黄体生成素(LH)可以诱发交配雌鼠排卵多于正常排卵数即超排卵。

超排反应是一个由一系列极其复杂的生理过程累积而产生的结果，影响因素诸多［1］，包括动物遗传特性、体况、营养状态、年龄、发情周期的阶段、卵巢的功能状态、季节、温度以及激素剂量等。

周龄初始注射时间对小鼠超数排卵的影响巩雪洁;臧敦安;许文豪【摘要】[目的]探讨不同周龄、不同初始注射时间对小鼠超数排卵效果的影响.[方法]用10 IU PMSG+10 IU HCG 间隔48 h 处理C57BL/6J小鼠,收集并统计合子数.[结果]4周龄超排效果优于于8周龄,可达26.86枚∕只;4周龄C57BL/6J小鼠PMSG和HCG注射时间为12:00—13:00,超排后收集合子数可达30枚∕只以上,而且体外培养的发育状况良好.[结论]4周龄C57BL/6J小鼠适宜超数排卵;PMSG和HCG注射时间为12:00—13:00,超排效果相对理想.%[Objective]To discuss the influence of week-age and initial injection time on superovulation in mice.[Method]The C57BL/6J mice were treated with 10 IU PMSG+10 IU HCG interval 48h,and the number of zygotes was collected and counted.[Result]The effect of the four week age superovulation was better than that of eight weeks,and it could reach 26.86.The time of PMSG and HCG injection of C57BL/6J mice at 4 weeks old was 12-13 at noon,and the number of zygotes collected was up to 30 and in vitro culture of the fertilized ovum was in good condi-tion.[Conclusion]The 4-week oldC57BL/6J mice are suitable for superovulation.When the injection time of PMSG and HCG is 12-13 at noon, the superovulation effect is relatively ideal.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)015【总页数】3页(P72-74)【关键词】小鼠;超排卵;激素;周龄;初始注射时间【作者】巩雪洁;臧敦安;许文豪【作者单位】中南民族大学生命科学学院医学生物研究所,湖北武汉430074;中南民族大学生命科学学院医学生物研究所,湖北武汉430074;中南民族大学生命科学学院医学生物研究所,湖北武汉430074【正文语种】中文【中图分类】S865.1以各种外源促性腺激素诱发动物卵巢的许多卵泡发育并排出具有受精能力的卵子的过程称为超数排卵(Superovulation),简称“超排”。

小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究林峰;陈玉霞;孙克宁;杨婷;田晓军【期刊名称】《江西农业学报》【年(卷),期】2010(022)012【摘要】为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响,分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚.结果表明:子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0.01),而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P0.05),说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著,且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法.小鼠早期胚胎发育观察结果表明:超排处理后,在公母鼠合笼后76～79.5 h采胚,胚胎大多处于桑椹胚期,而在公母鼠合笼后88～91.5 h采胚,胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期;采用TCM199+15%胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的.【总页数】3页(P144-146)【作者】林峰;陈玉霞;孙克宁;杨婷;田晓军【作者单位】河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】Q132.8【相关文献】1.兔超数排卵效果及早期胚胎体外发育的研究 [J], 张金友;田亚光;黄贺;李万华;张贵学2.小鼠超数排卵和小鼠胚胎体外培养的研究 [J], 张春兰;侯健3.甘草素对小鼠早期胚胎体外发育影响的初步研究 [J], 朱纯宇;尹月;李钟淑;方南洙4.牛体外受精技术的研究——单层细胞预培养时间对牛早期胚胎体外培养效果的影响 [J], 谭世俭;卢克焕5.柠檬黄对小鼠卵母细胞成熟、体外受精及早期胚胎发育的影响研究 [J], 牛焕付;韩伟;王雪楠;魏泽锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

江丙农业学报2010，22(12)：144～146A c t a A g r i c uhu r ae J i an gxi小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究林峰，陈玉霞+，孙克宁，杨婷，田晓军(河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002)摘要：为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响，分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。

结果表明：子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0．01)，而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P< O．05)，两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P>0．05)，说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著，且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。

小鼠早期胚胎发育观察结果表明：超排处理后，在公母鼠合笼后76～79．5h采胚，胚胎大多处于桑椹胚期，而在公母鼠合笼后88～91．5h采胚，胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期；采用TC M l99+15％胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。

关键词：小鼠；超数排卵；早期胚胎；体外培养；冲胚方法中图分类号：Q132．8文献标识码：A文章编号：1001—8581(2010)12—0144—03St udy on E f f ect of Super ovul a t i on and i n vi t r o C ul t ur e of Ear l y Em br yo i n M ous eLI N Fe n g，C H E N Y u—xi a‘，SU N K e—ni ng，Y A N G Ti ng．T I A N X i ao—j u“(C ol l ege of A n i m a l H us ba ndr y a nd V et er i nar y M e di ci ne，H enan A矛c ul t ur al U ni ver si t y．Z he ngzhou450002，C hi na)A bs t r act：I n t hi s paper．t he e ffe c t of dif f erent m e t h ods of c o l l ec t i n g e m br yos on t he s uper ovul at i on of m i c e w a s s t udi ed，and t he e m br yos i n t he suoer ovul at ed m i Ce w er e coll ected by usi ng t he ut erus—m i nc i ng m e t ho d a nd ut er us—col l ect i ng m e t hod re s pec t i ve l y．ne r es ult s show e d t ha t t he aver age num ber of eggs and em bryos obt ai ned by t he ut er us—co l l ect i ng m e t ho d w er e,ext r em el y s ignif i ca ntl y hi gher(P<0．01)t han t hos e obt ai ned by t he ut e r us—m i nci ng m e t hod，an d t he aver age nu m ber of us abl e em bryos obt ai ned by t he u t e r r us—coll ect i ng m e t he d w强si gni f i cant l y hi gher(P<0．05)t han t ha t di d by t he ut erus—m i nc i ng m et hod．ne aver age num be r of an-fe r t i l i zed eggs obt ai ned by t hes e t w o m e t h ods w a s no t s ignif i cant ly di f f er e nt(P>O．05)．So t he s uper ovu l at i on e ffe c t of m i c e W a S s i g-nif i e ant lv i nnue nee d by t he m e t ho d of coll ect ing em bryos．T he obs er vat i on r es ult s of ear l y e m br yos de vel opm ent i ndi cat ed t hat m ost of t he em bryos coll ected76—79．5hour s aft er com bi ni ng cages w e r e at m or ul a s t age．w hi l e m os t of t}l e em bryos coll ected88～91．5 hour s a ft e r com bi ni ng cages w e r e a t com pa ct e d m or u l a s t a ge and bla s t o e yst s t ag e．I t W a S f eas i ble t ha t t he em bryos of m i c e w er e cul t i—vat ed i n vi t ro by usi n g t he m i xed s o l ut i o n of T C M l99and15％F C S．K e y w or ds：M ouse；Sup er ov ul at i on；E ar l y em br yo；I n vi t ro cul t ur e；M e t hod of coll ect ing em bryos雌性哺乳动物一生所产的卵子总数早在其胚胎发育形成卵巢的过程中已被确定，成熟卵子在成年后的发情周期中分别排出，但是单纯依靠动物的自然排卵，一方面所得到的卵母细胞数或胚胎数较少，另一方面又消耗大量的时间和浪费较多的动物．因此为了获取大最的胚胎，多采用超数排卵的方法，即利用外源性促性腺激素诱发多个卵泡同时发育并排出具有正常受精能力的卵子¨。

.小鼠性成熟早，35 日龄雄性附睾精液中有运动的精子，雌鼠在35 日龄即可发情排卵、受孕．雌鼠在正常情况下，每隔4～5 d为一个性周期，发情后2～3 h即可排卵．雌鼠产后还可出现一次动情期，即分娩后24 h内排卵，此时交配可受孕，俗称“血配”，出现边哺育边妊娠的现象．2.实验动物的选择选用性成熟未交配过的健康小鼠进行．实验发现，体形和体重较大动物交配比较容易受孕．3.掌握小鼠性周期时间镜检阴道涂片，低倍镜下观察细胞的类型，然后换上高倍镜，细胞可能是有核上皮细胞、角化(老的、无核的)上皮细胞．观察阴道涂片的组织细胞学变化，可确定动情期的不同阶段．4.把握交配季节小鼠生殖有关的实验，一般应在春秋季进行，因小鼠怕热畏寒，这二季节温度比较适宜，动物的受孕率较高．若在夏冬季实验，动物房室温应控制在22±2~C，空气湿度为50％左右.5.动物交配，妊娠识别选择适龄雌雄小鼠，鉴定动情期，是确保小鼠受孕的关键．交配前查看雌鼠外阴和阴道口，外阴充血肿胀，阴道口张开且呈干燥状态，确认为动情期雌鼠.小鼠阴栓一般在交配后12～24 h自动脱落．由于小鼠交配后能产生阴栓，所以常把阴栓的有无作为判断是否交配的重要标志．6.受孕辅助方法及其影响为提高受孕率，可对动物进行动情周期诱导和同步化．常用两种方法：一种是物理方法，即“预接触”，经“预接触”处理后的雌鼠，60％～70％可查见阴栓．另一种是化学方法，即对小鼠进行“超数排卵”(supemvu lation)，腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)，48 h后结合HCG腹腔注射处理的雌鼠，当晚与雄鼠1：1合笼，一般均可受孕，80％可见阴栓．自然同步发情的生殖是理想的，副作用少，效果好，而超排卵质量较差，胚胎生活力较差，体外培养增殖缓慢．7.合理管理，精心饲养动物饲养应在开放系统动物房进行．由于光照能刺激小鼠性激素的分泌，对雌鼠性周期有一定的影响，因而采用12 h：12 h明暗光照，温度18～25℃，空气相对湿度40％～60％，噪音≤60分贝．8.昆明小鼠系远交系，l945年由印度Haffikine研究所引入云南昆明。