蛋白质和多肽类药物的分析及检测方法
- 格式:pdf
- 大小:35.46 MB
- 文档页数:37
多肽类药物多肽和蛋白质类生物药物按药物的结构分类可分为:氨基酸及其衍生物类药物、多肽和蛋白质类药物、酶和辅酶类药物、核酸及其降解物和衍生物类药物、糖类药物、脂类药物、细胞生长因子和生物制品类药物。
结构分析多肽的定性至少应包括氨基酸分析、序列分析及质谱分析。
纯肽的氨基酸分析可提供该多肽的氨基酸组成和数量。
序列分析则提供氨基酸残基的精确排列顺序。
基于多种技术的质谱, 如快原子轰击、电喷雾、激光解吸, 经常用于提供多肽的相对分子量及其序列信息。
肽谱是蛋白质或多肽通过酶解得到的肽片段经分离和分析所得到的“指纹图谱”。
当多肽含有20 个以上的氨基酸残基时, 肽谱分析对多肽结构研究和特性鉴别具有重要意义。
2. 1 氨基酸分析用于氨基酸分析的水解方法主要是酸水解, 同时辅以碱水解。
酸水解中使用最广泛的是盐酸(一般浓度为6mo löL )。
多肽于110 ℃真空或充氮的安瓿瓶内水解10~24 h, 然后除去盐酸。
水解过程中氨基酸遭破坏的程度与保温时间有线性关系, 因此该氨基酸在多肽中的真实含量可通过以不同的保温时间对相应时间的样品中该氨基酸的含量作图, 用外推法求出。
高氨基酸分析仪的使用使氨基酸的分析越来越准确, 如W aters 公司的氨基酸分析系统的检出限已达100 fmo l。
2. 2 序列分析氨基酸测序主要为化学法, 酶法也有一定的意义。
化学法以Edman 降解法最为经典, 它对所有氨基酸残基具有普适性和近乎定量的高产率, 是近50年N 2端顺序分析技术的基础。
Edman机理的液相(旋转杯) 自动蛋白顺序分析仪在1967 年推出。
近年来不断对其改进, 其灵敏度已达到可以对0. 1pmo l 的样品进行常规分析。
2. 3 质谱(mass spect romet ry,M S)质谱以质量分析为基础, 可提供化合物的分子量以及一些结构信息。
1980 年代以后发展了许多新的“软电离”技术, 使其在蛋白质多肽分析中的应用越来越广。
百泰派克生物科技
多肽蛋白质QE鉴定
QE即Q Exactive,是美国赛默飞公司生产的一种具有快速扫描和多重检测能力的
质谱仪。
多肽蛋白质QE鉴定就是利用高分辨率QE质谱仪对多肽和蛋白质进行鉴定。
质谱分析法作为当前蛋白质组学研究以及生物大分子研究领域中强有力的分析技术,可以实现高通量的、高分辨率的、高要求的以及复杂的蛋白质以及多肽样品鉴定,包括定性定量分析、分子质量分析、氨基酸组成分析、一级结构鉴定以及翻译后修饰情况鉴定等。
质谱技术实现以上多种鉴定都是以其可以鉴定分子质量为基础而实现的,比如对于翻译后修饰的蛋白质/多肽来说,其发生修饰的氨基酸残基的分子
质量会增加相应修饰基团的分子量值,而质谱能检测到这种分子质量变化,因而可以用于验证或鉴定蛋白质或多肽是否含有翻译后修饰以及发生了何种修饰。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,结合Nano-LC
纳升色谱,提供高效精准的多肽蛋白质QE鉴定服务技术包裹,可对各种多肽和蛋
白质样品如蛋白质/多肽提取物、SDS-PAGE蛋白条带、2D蛋白胶点、pull-down及Co-IP等样品中的蛋白质进行鉴定,包括分子量、含量、序列以及翻译后修饰等,
欢迎免费咨询。
蛋白质、多肽等大分子的质谱分析检测仪器:1、基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)2、基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱(Autoflex III MALDI-TOF/TOF)3、纳升液相电喷雾四级杆飞行时间串联质谱仪(micrOTOF-Q II™ ESI-Qq-TOF)主要应用:1、生物大分子的分子量检测2、蛋白质、多肽的纯度鉴定3、蛋白质的肽指纹图谱检测4、混合组分的分子量分布检测5、合成物质的分子量检测与纯度评价6、重组蛋白的分子量检测与纯度评价7、蛋白质的多肽谱检测8、血清多肽谱的检测9、PEG修饰的蛋白药物的研究样品要求:1、样品含量: 50-100Fmol (液体约5ul)2、样品形式: 液体;干粉;胶粒/条带3、非胶样品: 挥发性盐<20mM,无PBS、SDS和尿素等物质4、胶类样品: 银染过程中未使用戊二醛作为固定剂5、保存方式: 液体建议低温,胶类用去离子水防干蛋白质及多肽质谱鉴定简介博奥生物有限公司蛋白质实验室于2006年开始对外提供多肽和蛋白质测试服务,包括多肽和蛋白质的分子量和序列测定,蛋白种类鉴定。
博奥采用串联质谱法(Tandem Mass Spectrometry, MS/MS)鉴定蛋白,可靠性高。
蛋白经胰酶消化形成的肽段进入质谱,一级质谱检测多肽分子的大小,然后再将肽段打碎,形成一系列离子即N端离子系列(B系列)和C端碎片离子系列(Y系列)。
质谱再检测碎片离子的大小,即二级质谱。
将质谱数据与蛋白数据库进行比对,获得肽段的序列,特定的多肽序列对应着特定的蛋白,从而鉴定出待检测蛋白。
除了鉴定单个蛋白,我们的液相色谱和质谱联用平台(Liquid Chromatography- Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS)还具有分析混合蛋白的能力。
MALDI-TOF MS(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)是另一种常用的质谱平台,通过肽指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)来鉴定蛋白质。
中药中多肽类药物研究新技术目前,随着生物技术和生物医药领域的快速发展,中药中多肽类药物研究正处于革命性变革的时期。
多肽类药物因其具有较强的特异性、高效性和较低的毒副作用,逐渐成为中药研究的热点之一。
在这一背景下,各种新技术应运而生,推动了中药中多肽类药物研究领域的快速发展。
本文将就中药中多肽类药物研究中的新技术进行阐述,并探讨其在中药研究中的应用前景。
一、蛋白质组学技术的运用蛋白质组学技术是在分子生物学和生物化学领域的研究基础上发展起来的,它致力于对生物体细胞内所有蛋白质的研究。
在中药中多肽类药物研究中,蛋白质组学技术被广泛应用于筛选和鉴定具有药用价值的多肽类物质。
通过大规模蛋白质组学分析,可以快速高效地识别出有潜力的多肽类药物候选物,并进行进一步的研究和开发。
蛋白质组学技术还能够帮助研究者深入了解中药中多肽类药物的作用机制及其在人体内的代谢途径,为新药研发提供重要的参考依据。
二、分子生物学技术的创新随着分子生物学技术的不断创新,中药中多肽类药物研究得到了前所未有的发展机遇。
基因工程技术的应用使得研究人员能够通过改变中药植物中多肽类药物的基因序列,实现合成更为有效的药物分子。
内源性多肽类物质的寻找、提取和纯化也得到了分子生物学技术的大力支持。
通过这些创新技术的应用,中药中多肽类药物的研究和开发过程得到了大幅度的加速,为中药研究的现代化提供了技术和理论支持。
三、生物信息学技术在多肽类药物研究中的应用生物信息学技术是利用计算机和数学等工具对生物信息数据进行采集、储存、处理和分析的技术体系。
在中药中多肽类药物研究中,生物信息学技术的应用已经成为一种不可或缺的工具。
通过构建多肽类物质的结构与功能数据库,研究人员能够更好地掌握多肽类药物的结构特征和活性表现规律,为新药设计和开发提供重要的参考。
生物信息学技术还可以帮助研究人员对中药多肽类药物的相互作用网络进行系统分析,发现新的药效靶点,并加速新药研发的过程。
百泰派克生物科技
多肽定量
多肽是由两个及两个以上的氨基酸脱水缩合形成的具有独特生物活性的化合物,生物体中含有多种内源性多肽,其作为激素、信号传导受体、转运蛋白或载体、催化生物反应的酶以及细胞、组织和器官的结构原件,在机体生殖、生长和代谢等各个生理活动中具有重要作用。
越来越多的多肽被研制开发为药物用于临床治疗,特定多肽的含量鉴定对药物开发、生产以及监测临床治疗效果来说非常重要,多肽的定量方法和原理与蛋白质类似,目前最常用的多肽/蛋白质定量技术是基于质谱的技术,通常需要将液相色谱与质谱技术串联,该量化过程最重要的方面是使用MS/MS
将肽的质子化分子离子(M+H)+与其一个或多个氨基酸序列决定片段离子连接起来。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,结合Nano-LC
纳升色谱,提供高效精准的多肽/蛋白定量鉴定服务技术包裹,您只需要将您的实
验目的告诉我们并将您的样品寄给我们,我们会负责项目后续所有事宜,包括多肽提取、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析,欢迎免费咨询。