坐骨神经腓肠肌标本制备

简述制备坐骨神经腓肠肌标本的步骤
1、取材：从新鲜的成年能鼠死亡的腹部或颈部部分取出支配双腿的坐骨神经及其腓肠肌。

2、清理材料：洗去血清、脂肪、臀神经和肌纤维，只保留神经路径及肌肉纤维。

3、固定：将取出的神经和肌肉泡入4％氯化钠溶液中，浸泡数小时以固定神经肌肉。

4、浸泡：将固定的标本浸泡在硝酸甘油溶液中，以去除表面的脂肪和蛋白质。

5、染色：将固定好的材料放入硝酸胆红素油溶液中，以对不同组织标记其区分度。

6、切片：将显色的材料放入冷冻机中，以切成薄片状，并加以处理，使染色物能牢固地粘结在薄片上。

7、培养：将处理过的固定薄片置于玻片上，再加入培养基以促进细胞生长。

8、包埋：将培养的材料包埋于涂有胶或塑料的玻片上，以便对样本进行后续处理。

9、切片：将包埋的材料切成薄片，以便观察样本的形状和细胞特征。

10、观察：将薄片浸入染色剂中，并进行实时光学显微镜下的观察，观察样品的细胞结构及形态特征。

11、分析：利用扫描电镜或透射电镜观察样本的内部细微结构，以深入研究坐骨神经腓肠肌标本。

12、保存：将完成制备的腓肠肌标本用脱脂性液体物质覆盖起来，以便保存并达到常温下稳定性。

坐骨神经腓肠肌标本制备实验结论一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、实验结果五、实验结论一、实验目的本次实验的主要目的是通过坐骨神经腓肠肌标本制备，了解人体肌肉组织的结构和特点。

同时，通过对标本制备过程中各个步骤的操作，掌握标本制备技能和方法。

二、实验原理1. 坐骨神经腓肠肌标本制备原理坐骨神经腓肠肌标本制备是指将动物或人体组织切割成薄片并进行染色处理，使其能够在显微镜下观察。

在这个过程中，需要进行以下几个步骤：（1）取样：从动物或人体中取出需要观察的组织样品。

（2）固定：将组织样品放入固定液中进行固定处理。

（3）包埋：将固定后的组织样品放入包埋剂中进行包埋处理。

（4）切片：将包埋后的组织样品切成薄片。

（5）染色：将切片进行染色处理，使其能够在显微镜下观察。

2. 坐骨神经腓肠肌结构原理坐骨神经腓肠肌是人体下肢的一部分，由坐骨神经支配。

它主要由三个部分组成：大腿后侧的半膜状肌、半腱状肌和小腿后侧的胫长伸肌。

这三个部分都是由肌纤维束组成的，每个束内又包含有许多个单独的肌纤维。

三、实验步骤1. 取样：从动物或人体中取出需要观察的组织样品。

2. 固定：将组织样品放入10%福尔马林液中进行固定处理，固定时间为24小时。

3. 包埋：将固定后的组织样品放入包埋剂中进行包埋处理，包埋时间为48小时。

4. 切片：将包埋后的组织样品切成厚度为5微米左右的薄片。

5. 染色：将切片进行染色处理，常用染色方法有HE染色法和Masson染色法等。

本次实验采用HE染色法进行染色处理。

6. 封片：将染好色的切片放入玻璃片上，加上封片胶，用玻璃片盖住，使其能够在显微镜下观察。

四、实验结果经过以上步骤的操作，制备出了坐骨神经腓肠肌标本。

在显微镜下观察到了肌纤维束组成的三个部分：半膜状肌、半腱状肌和胫长伸肌。

每个束内又包含有许多个单独的肌纤维。

五、实验结论通过本次实验，我们了解到了坐骨神经腓肠肌标本制备的基本步骤和操作方法，并且通过观察标本结构，掌握了人体肌肉组织的结构和特点。

生物实验报告-坐骨神经腓肠肌标本制备
本实验旨在通过制备坐骨神经腓肠肌标本的过程，掌握基础的组织学实验技能，同时加深对神经肌肉解剖结构的理解。

材料与方法：
材料：成年大鼠标本、无水乙醇、石蜡、光学显微镜、麻醉手套、组织取样器、组织取样盒、理化试管架等。

1.准备标本
用麻醉手套将成年大鼠净化神经集中于坐骨神经下1-2厘米范围内，然后将腓肠肌标本从骨骼中取出。

2.固定标本
将取出的腓肠肌标本置于10%的无水乙醇中固定24小时；
3.去水
从10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%到80%的无水乙醇渐次去除，每步时间为1小时；
4.透明
将固定去水的腓肠肌标本分别置于50%敌敌畏-乙醇溶液、70% 敌敌畏-乙醇溶液和100% 敌敌畏透明液溶液中，每步时间为2小时，至标本彻底透明。

5.包埋
取出已透明的腓肠肌标本，置于石蜡组织取样盒中，根据实验需求，选择合适的包埋方向。

6.取薄片
将石蜡包埋的腓肠肌标本取出，用微型切片机切制厚度为5微米的切片，将切片拉直后在干净的水晶片上展开。

7.染色与制成玻片
用哈里斯血液染色将切片染色，脱色后洗净水片后，在水晶片上滴几滴覆盖剂，然后用平凡玻片将组织接口反过来盖住薄片，压紧即可。

实验成果：
经过制备和染色后，我们取得了成年大鼠坐骨神经腓肠肌的标本，通过光学显微镜的观察与检测，我们发现该标本包含完整的腓肠肌结构及肌纤维分离范围。

切片上清晰可见腓肠肌内有明显的核团和细胞质呈透明状，同时染色后肌纤维呈现出红色，血管呈现出蓝色，系统性地展示了腓肠肌肌纤维和血管位置的分布情况。

结论与意义：。

坐骨神经-腓肠肌标本制备骨骼肌单收缩及其总和以及Powerlab实验系统的使用二、实验目的：1. 学习蛙类动物单毁髓与双毁髓方法，并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

2. 了解电刺激的极性法则和方法，学习肌肉收缩的记录方法。

3. 观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系、骨骼肌的单收缩过程和肌肉收缩的总和以及强直收缩现象, 了解肌肉收缩过程的时相变化以及刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。

三、实验原理：腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。

当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。

而能引起肌肉发生收缩反应的最小刺激强度，为阈刺激。

当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。

这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大，该刺激强度为最适刺激强度。

肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速的收缩反应，称为单收缩。

单收缩一般要经历潜伏期、收缩期和舒张期三个过程。

当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，则出现多个收缩反应的叠加，叫做强直收缩。

当后一收缩发生在前一收缩的舒张期，即发生不完全强直收缩；当后一收缩发生在前一收缩的收缩期，各自的收缩则完全融合，肌肉出现持续的收缩状态，即产生完全强直收缩。

四、实验材料：青蛙五、实验步骤：1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本：1) 洗干净实验动物2) 双毁髓，剥制后肢，分离两后肢3) 分离坐骨神经4) 游离腓肠肌5) 分离股骨头6) 标本检验7) 电刺激极性法则的验证2. 连接实验装置：将换能器的输出线接至RM6240生理记录装置的2通道，电刺激信号接至肌槽的电极上。

然后把制备好的坐骨神经-腓肠肌标本股骨固定在肌槽上。

将固定肌肉的棉线另一端接在张力换能器上，保持适度松紧，将坐骨神经搭在肌槽的电极上。

3. 设置通道放大器和刺激器：1) 打开PowerLab电源，检查USB线连接2) 打开Chart5中文版3) 设置通道数为24) 设置通道2-桥式放大器：量程5mV,低通10Hz，调零5) 设置刺激器：刺激方式选脉冲，脉冲数1，手动方式，量程10V,振幅100mV,标记通道1，频率1Hz,持续时间1mS,4. 开始测试：1) 打开刺激器面板和点右下角”开始“按钮2) 点右上角调节采样速度（“走纸速度”）3) 菜单打开设置刺激器的脉冲数2个或5个，重新打开刺激器面板4) 调节走纸速度为400六、实验结果：图1. 蛙坐骨神经—腓肠肌标本图（二）坐骨神经-腓肠肌标本在Powerlab实验系统中所记录下的数据1.通过不断调整刺激强度，使肌肉收缩的幅度适中，记录单收缩的曲线（图2-1 ）。

华南师范大学实验报告一、实验题目：坐骨神经-腓肠肌标本制备、骨骼肌单收缩及其总和以及Powerlab实验系统的使用二、实验目的：1. 学习蛙类动物单毁髓与双毁髓方法，并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

2. 了解电刺激的极性法则和方法，学习肌肉收缩的记录方法。

3. 观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系、骨骼肌的单收缩过程和肌肉收缩的总和以及强直收缩现象, 了解肌肉收缩过程的时相变化以及刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。

三、实验原理：腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。

当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。

而能引起肌肉发生收缩反应的最小刺激强度，为阈刺激。

当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。

这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大，该刺激强度为最适刺激强度。

肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速的收缩反应，称为单收缩。

单收缩一般要经历潜伏期、收缩期和舒张期三个过程。

当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，则出现多个收缩反应的叠加，叫做强直收缩。

当后一收缩发生在前一收缩的舒张期，即发生不完全强直收缩；当后一收缩发生在前一收缩的收缩期，各自的收缩则完全融合，肌肉出现持续的收缩状态，即产生完全强直收缩。

四、实验材料：青蛙五、实验步骤：1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本：1)洗干净实验动物2)双毁髓，剥制后肢，分离两后肢3)分离坐骨神经4)游离腓肠肌5)分离股骨头6)标本检验7)电刺激极性法则的验证2. 连接实验装置：将换能器的输出线接至RM6240生理记录装置的2通道，电刺激信号接至肌槽的电极上。

然后把制备好的坐骨神经-腓肠肌标本股骨固定在肌槽上。

将固定肌肉的棉线另一端接在张力换能器上，保持适度松紧，将坐骨神经搭在肌槽的电极上。

3. 设置通道放大器和刺激器：1)打开PowerLab电源，检查USB线连接2)打开Chart5中文版3)设置通道数为24)设置通道2-桥式放大器：量程5mV,低通10Hz，调零5)设置刺激器：刺激方式选脉冲，脉冲数1，手动方式，量程10V,振幅100mV,标记通道1，频率1Hz,持续时间1mS,4. 开始测试：1)打开刺激器面板和点右下角”开始“按钮2)点右上角调节采样速度（“走纸速度”）3)菜单打开设置刺激器的脉冲数2个或5个，重新打开刺激器面板4)调节走纸速度为400六、实验结果：（一）坐骨神经-腓肠肌标本制备股骨脊柱骨坐骨神经腓肠肌图1. 蛙坐骨神经—腓肠肌标本图（二）坐骨神经-腓肠肌标本在Powerlab实验系统中所记录下的数据1.通过不断调整刺激强度，使肌肉收缩的幅度适中，记录单收缩的曲线（图2-1 ）。

实验二-坐骨神经标本—腓肠肌标本的制备一、实验目的：1.学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。

2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌的制备方法。

3.了解电刺激的极性法则。

二、实验原理：1、牛蛙作为实验动物的优势：离体实验是动物生理学主要的实验方法之一。

两栖动物是冷血动物，其基本生理机能与温血动物近似，而其离体组织器官维持活性所需要的条件比较简单，因此它常被选为生理学实验提供离体组织或器官的实验动物。

蟾蜍或青蛙坐骨神经—腓肠肌在任氏液中可维持生理活性数小时，在其基础上还可进一步制作神经干标本、腓肠肌标本，可用于研究肌肉收缩的特性，神经和肌肉的兴奋性、传导性，刺激与反应的关系，神经肌肉接头活动等生理活动及相关机制，甚至还可以用于药物筛选如抗疲劳药物的模型。

其中牛蛙人工养殖成本低产出率高，相对蟾蜍要更安全。

因此，本次实验选择牛蛙作为实验对象。

2、锌铜弓刺激检测标本活性的原理：锌铜弓在溶液中沾湿以后，锌的表面电离出正离子，里面形成负离子；而铜的表面电离出负离子,里面形成正离子。

当用锌铜弓接触活组织时，电流便沿着锌一活组织→铜的方向流动而产生刺激效应。

所以锌相当于正极,面铜相当于负极发挥刺激作用；当断开时，则发生相反的效应。

锌的金属电势比铜低，形成一定的电势差（就相当于有电压），锌铜弓是把一根锌棒和一根铜棒一端焊在一起，另一段分开，则接触样本（例如神经干）时，会引起样本局部去极化，引发动作电位。

三、实验器材：牛蛙，常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针)，蜡盘，蛙板（木质或硬泡沫塑料），玻璃板，固定针，锌铜弓，培养皿或不锈钢盘，污物缸，滴管，纱布，粗棉线，任氏液。

四、实验流程和步骤：1.牛蛙的双毁髓一手握住牛蛙，背部向上。

用拇指压住牛蛙的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂；另一手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及两耳中间的凹陷处（此处与两眼的连线成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。

机能实验学实验报告实验项目名称：坐骨神经腓肠肌标本制备及肌肉的收缩性质1.实验目的（1）学会坐骨神经腓肠肌标本的制备；（2）观察骨骼肌的收缩形式，分析刺激频率、强度与肌肉收缩的关系；（3）明确阈刺激、阈下刺激、阈上刺激的概念。

2.材料与方法2.1实验动物动物：牛蛙2.2实验器材与试剂器材：蛙类手术器械1套，刺蛙针1根，锌铜弓1只，玻璃分针一根，万能支架，生物信号采集系统，张力换能器。

试剂：任氏液2.3实验方法与步骤（1）坐骨神经—腓肠肌标本的制备：①破坏脑脊髓：左手固定住牛蛙，右手拿刺蛙针，找到枕骨大孔处将刺蛙针刺入2-5mm，分别捣损脑组织和脊髓。

待左手感受到牛蛙四肢瘫软并处于对称部位时，代表牛蛙的脑和上部脊髓被完全破坏。

②剪除躯干上部及内脏：在牛蛙骶髂关节水平上1厘米处剪断脊柱并将蛙头、前肢和内脏去除；保留部分脊柱和下肢。

注意剪断脊柱位置不宜太靠后，以免伤及牛蛙坐骨神经。

③剥皮：小心地剥去牛蛙的皮肤，沿着脊柱正中，将牛蛙剪成两半，注意不要伤及标本上的坐骨神经。

④游离坐骨神经：腓肠肌向上将标本固定于蛙板上，使用玻璃分针，沿着坐骨神经的走向仔细将坐骨神经由脊柱分离至膝关节处。

⑤：制成坐骨神经—腓肠肌标本：在坐骨神经起源下1厘米处剪断椎骨，夹住余下的一小段椎骨，将游离出的坐骨神经放至蛙小腿一侧，并用任氏液浸润。

剪断膝关节周围所有大腿肌肉，剪断股骨（保留约1cm），在跟腱处结扎并剪断腓肠肌腱，将膝关节以下小腿部分全部剪除，剩下即为坐骨神经—腓肠肌标本。

⑥标本检验：用锌铜弓轻轻刺激坐骨神经，腓肠肌收缩表示标本制备完好。

（2）肌肉收缩的性质观察：①连接刺激器和记录装置：将张力换能器和肌槽固定在铁支架上，张力换能器的输出端连接放大器通道Ⅲ。

②固定坐骨神经-腓肠肌标本：以股骨作支点固定，腓肠肌与张力换能器连接，将穿好手术线的坐骨神轻轻提起，放在刺激电极上，并保证接触良好。

③调试采样设备：打开PcLab生物医学信号采集处理系统，选择项目——生理实验：刺激的强度和幅度对肌肉收缩的影响。