血液学血细胞化学染色

细胞化学染色细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科学。

它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下,运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理活性物质原位地显示。

因而对于探索细胞内的化学成分、生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要意义。

血液细胞化学染色的范围一般可分为：蛋白质类（氨基酸、酶)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类,采用的方法通常为化学结合和物理溶解及酶-底物反应。

临床评价:1.细胞化学染色的开展,已有数十年的历史。

其在结合细胞形态学的基础上对各类白血病的确诊，对许多血液疾病鉴别诊断中的帮助，对各种良、恶性血液系统疾病疗效和预后估计提供一定的信息。

2.血液系统各种恶性疾病，特别是急性白血病，因其多为早期分化较差的病理细胞增殖,客观上存在着形态变异、畸形发育，即使是有经验的检验人员仅凭细胞形态也难以避免错误诊断的发生。

如将细胞形态和细胞化学染色相结合，能提高急性白血病的诊断和较正确地对其分型及亚型分型，即为急性白血病FAB 分型。

3.近年来，由于细胞免疫学、细胞遗传学、分子生物学和细胞超微结构等迅速发展，进一步推动了细胞化学染色这一领域的进展，并出现了细胞免疫组织化学染色、细胞超微化学染色等更新、更准确的检验方法与手段，对探讨各类血液疾病发病原理和观察治疗反应及预后起了极其重要的作用。

如将细胞免疫化学、细胞遗传学、分子生物学这三者与细胞化学染色及细胞形态学相结合，对各种白血病进行分型，即成为白血病的MICM分型诊断。

4.细胞化学染色通常应用在各种血液系统疾病特别是对各种急性白血病的诊断与鉴别诊断中。

但白血病细胞因其呈高度的异质性和多态性，有时即使是同一类型的白血病也可在细胞形态、细胞化学染色结果、细胞免疫表型及分子生物学等方面存在较大的差异。

所以对各类型白血病作一套较完整的细胞化学是补充了单凭形态对细胞辨认的不足。

因此我们在实际工作中若要对各类型白血病作出比较准确的诊断与鉴别诊断，应尽可能采用多项细胞化学染色或双（多）重染色。

细胞化学染色检验前言细胞化学是细胞和化学相结合的一门科学。

细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。

在病理情况下，血细胞的化学成分可发生改变。

因此，细胞化学染色不仅对研究血细胞的代谢活动、生理功能，而且对生理和病理情况下血细胞的化学成分的变化、各种类型血细胞的鉴别、某些血液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。

研究血细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。

下面主要介绍血液学中常用的一些细胞化学染色方法。

瑞氏染色法：瑞氏染色液的配制：瑞氏染料（粉）1g纯甲醇60ml将染料放在乳钵内加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒入洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及用完甲醇为止。

制配好的染液保存于温室中一周便可应用。

新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染色愈好。

缓冲液的配制及其作用:1% KH2PO4 (即1g KH2PO4+100ml蒸馏水) 30ml1% Na2HPO420ml加蒸馏水至1000mlPH 6.4~6.8过氧化物酶染色一、原理：细胞中的过氧化物酶（POX）分解底物过氧化氢（H2O2）产生新生态氧，后者使联苯胺氧化为联苯胺蓝沉淀而定位于POX活性部位。

二、过氧化物酶染色法染液的配制：（1）联苯胺（Benzidine）0.3g95%乙醇（Ethye alcohol）99ml36%亚硝基铁氰化钠（Sodium Nitroprusside）1ml (0.36g+1ml蒸馏水，置于37℃水浴箱中促溶。

)（2）30%mlml过氧化氢溶液：30%双氧水，吸取一滴约0.05ml放入50ml蒸馏水内，每次用时必须新鲜配制。

三、结果判断：细胞质中有蓝色颗粒的为阳性细胞。

四、临床意义：粒细胞中除早期原粒细胞呈阴性反应外，晚期原粒细胞及以后各阶段粒细胞均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。

血细胞化学染色简单记1.过氧化酶染色：检测过氧化酶。

胞质中无颗粒为阴性，出现细小颗粒分布稀疏为弱阳，出现密集粗大颗粒为强阳性。

强阳性（嗜酸性粒细胞）、弱阳或阴（单核粒细胞）、阴性（淋、红、巨、浆、嗜碱）；临床意义：辅助诊断急淋非急淋、鉴别急淋急粒。

注意：（1）过氧化物酶染色急性粒细胞白血病为阳性，急性淋巴细胞白血病是阴性。

（2）粒细胞中原始粒细胞是阴性，嗜碱性粒细胞是阴性。

2.过碘酸-雪夫反应：检测糖类物质。

胞质中出现紫红色颗粒、块状或弥漫状红色为阳性反应。

阳性（淋、粒、单、巨、血小板）（嗜酸特异颗粒间胞质为阳性、嗜碱粒细胞特异颗粒为阳性）阴性（分化差的原粒、幼红和红）。

临床意义：红白血病和骨髓异常增生综合征时幼红可呈阳性反应，良性贫血幼细胞多数为阴性。

戈谢细胞为强阳性，尼曼-匹克细胞呈阴性。

注意：（1）急性粒细胞白血病为阴性，急性淋巴细胞白血病是阳性。

（2）戈谢细胞为阳性，尼曼-匹克细胞为阴性。

3.碱性磷酸酶染色：只有中性粒细胞为阳性，临床意义碱性磷酸酶（NAP）的生理及病理增多减少。

注意：（1）慢性粒细胞白血病积分降低，类白血病积分升高。

4.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色：阴性或弱阳（原粒、嗜酸）；阳性或强阳（早幼粒至成熟中幼粒、嗜碱）。

临床作用：急粒为阳性、急单和急淋为阴性。

注意：（1）该染色是粒细胞特异性染色。

5.α-醋酸萘酚酯酶染色：阴性或弱阳（粒系、淋巴系、红系）；阳性（单核系、巨核、血小板）注意：（1）所有抑制试验中只有单核细胞会受抑制，所有可以用来鉴别粒细胞白血病和单核细胞白血病。

6.醋酸AS-D萘酚酯酶染色：基本同与α-醋酸萘酚酯酶染色。

注意：（1）同α-醋酸萘酚酯酶染色。

临床医学检验技师初级（师）临床血液学（血细胞化学染色的临床应用）模拟试卷1(题后含答案及解析)题型有：1. A1型题 2. A3型题 3. B1型题 4. B1型题1．中性粒细胞碱性磷酸酶染色积分明显增加，临床上最常见于下列哪种疾病A．类白血病反应B．慢性粒细胞白血病C．病毒感染D．恶性淋巴瘤E．急性淋巴细胞白血病正确答案：A解析：碱性磷酸酶主要存在于成熟的中性粒细胞中，类白血病反应中性粒细胞碱性磷酸酶染色积分明显增加。

知识模块：血细胞化学染色的临床应用2．非特异性酯酶染色阳性，加氟化钠明显抑制，见于下列哪种疾病A．急性淋巴细胞白血病B．急性单核细胞白血病C．急性粒细胞白血病D．急性红白血病E．以上均不是正确答案：B解析：AS-DAE染色单核细胞系统：原单为阴性或弱阳性；幼单细胞和单核为阳性，可被氟化钠抑制。

粒细胞系统：各期均为阴性，少数可呈弱阳性，不被氟化钠抑制。

淋巴细胞：淋巴细胞阴性或弱阳性，此反应不被氟化钠抑制。

红细胞系统：早期幼红细胞可呈阳性，随着细胞的成熟阳性反应程度逐渐减弱，此反应不被氟化钠抑制。

巨核细胞系统：巨核细胞和血小板均呈阳性。

知识模块：血细胞化学染色的临床应用3．最适宜用于鉴别原粒和原淋的细胞化学染色是A．PAS染色B．ACP染色C．AS—DAE染色D．NAP染色E．POX染色正确答案：E解析：POX染色：急粒时，白血病性原粒细胞可呈阳性反应，颗粒粗大局灶分布；急淋时，原淋和幼淋细胞呈阴性；急单时，白血性原单细胞呈阴性反应，少数可呈弱阳性，颗粒少常弥散分布。

POX染色区分小型原粒和原淋细胞，前者阳性。

知识模块：血细胞化学染色的临床应用4．抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的是A．慢性淋巴细胞白血病B．淋巴肉瘤C．多毛细胞白血病D．尼曼-匹克病E．B淋巴细胞正确答案：C解析：多毛细胞白血病时多毛细胞的酸性磷酸酶染色为阳性反应，此酶耐L 一酒石酸的抑制作用。

知识模块：血细胞化学染色的临床应用5．为了鉴别巨幼细胞贫血与红白血病，最好的染色方法是A．ACP染色B．PAS染色C．α-NAE染色D．NAP染色E．POX染色正确答案：B解析：PAS染色，红血病或红白血病时幼红细胞可呈阳性反应。

骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种用于诊断血液疾病的特殊检查方法。

该检查可以通过染色技术直接观察血液细胞中特定的染色体、酶或其他化学物质，进而判断疾病的类型和程度。

下面我们将从步骤、原理及应用等多个方面进行细致的阐述。

一、步骤1.取样骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查需要从患者的骨髓中取得样本。

通常采用穿刺取骨髓的方法，使用空心针将骨髓组织抽取出来。

2.制片将采集到的骨髓组织用特定的方法制成薄片，然后将制片玻片放入预处理液中，去除组织中的脂肪和血液。

3.固定用甲醛等化学物质将薄片固定在制片玻片上，以免组织失去结构。

4.染色根据不同的需求，使用不同的染色方法染色。

常用的染色方法有Gear （G）染色、Wright（W）染色、Giemsa（G）染色、PAS染色、酶组织化学染色等。

5.观察染色完成后，使用显微镜观察染色后的组织和细胞，看到目标物质的颜色或形态变化，从而判断患者的疾病类型及程度。

二、原理骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查的原理是通过染色技术观察不同的物质反应，从而帮助医生确定患者的诊断。

例如，由于白血病细胞存在着特殊的染色体核型，因此通过染色技术可以直接观察到这些染色体。

又如，用PAS染色技术可以看到细胞中的糖原，发现是否存在糖尿病等疾病。

这些染色方法可以同时应用于细胞形态与细胞化学特性的研究。

三、应用骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查广泛用于对各种血液疾病的诊断，特别是在白血病、贫血、血小板疾病、骨髓增生异常综合症等疾病的确诊和辅助诊断中得到了广泛应用。

通过该检查方法的组织学检查，可以检查人体中蛋白质、酶液、糖原、脂肪等物质，并进一步辅助疾病的诊断和治疗。

而且，该检查方法具有操作简便、灵敏度高、结果准确等优势，可以为医生提供诊断血液疾病的重要实验依据，为患者提供更好的诊治服务。

总之，骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种具有较高研究价值和应用前景的检查方法。

血细胞染色原理及过程
血细胞染色是通过染色剂的特殊作用将血液中的细胞染色，以便进行形态学和功能学
研究。

常用的染色方法有：吉姆萨染色、瑞曼染色、偏碱性嗜酸性染色等。

1、吉姆萨染色原理
吉姆萨染色法通常是先用苏木精染色，再用伊红染色的方法，又称为改良双染色法。

苏木精能染色核酸，伊红能染色蛋白质。

因此，吉姆萨染色主要用于染色形态较大的细胞，如红细胞、白细胞和血小板等。

红细胞染色后呈现粉色，核显微镜下不可见；白细胞核染
色呈现紫色，细胞浆和红血球呈现粉色。

2、瑞曼染色原理
瑞曼染色法是将染色剂直接使用于干涂片上进行染色。

这种方法使用的染料是甲基绿
与其他染料的混合物，它们的化学性质与吉姆萨染料不同，具有更强的染色能力。

瑞曼染
色适用于对白细胞进行形态学细胞学的鉴定。

淋巴细胞染色后呈现深蓝色或淡蓝色，核呈
圆形或卵形；单核细胞呈现深蓝色，核呈圆形或椭圆形；多形核白细胞呈现深蓝色，核呈
多个不规则分叶状。

3、偏碱性嗜酸性染色原理
偏碱性嗜酸性染色是一种特殊的染色方法，它是根据细胞内容物的某些化学特性进行
染色的。

嗜酸性染色剂能够染色嗜酸性细胞颗粒，如嗜酸性粒细胞的嗜酸性细胞颗粒；偏
碱性染色剂能染色嗜碱性细胞颗粒，如嗜碱性粒细胞的嗜碱性细胞颗粒。

总之，血细胞染色是现代医学中非常重要的一项技术手段，它通过染色剂的特殊作用
为医学研究提供了非常珍贵的研究材料和数据，对于临床诊断和治疗提供了非常重要的参
考价值。

医学检验学基础知识：血细胞化学染色小结医学检验血液学是医疗卫生事业单位招聘考试中出题率相对较高的内容，其中血细胞化学染色可以说是血液学中的难点及重点,考试中很容易出题，它的各个试验多且内容繁杂,不容易记忆,同学们也很容易混淆的地方，今天今天帮助大家梳理，以便大家更好地复习和记忆。

常用的血细胞化学染色有过氧化酶染色(POX),过碘酸-雪夫反应(PAS)，碱性磷酸酶染色(NAP)，氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色(AS-D-NCE)，-醋酸萘酚酯酶染色( -NAE)，碱性-丁酸萘酚酯酶染色( -NBE)，铁染色。

结果判断:结果阳性：1.POX:棕黑色颗粒2.PAS：红色颗粒块状呈弥漫状红色3.NAP：灰褐色至深黑色颗粒状或片状沉淀4.AS-D-NCE:红色沉淀5. -NAE：棕黑色颗粒沉淀6. -NBE：蓝色颗粒7.铁染色：弥散蓝色，颗粒状，小珠状或块状正常血细胞的染色反应：1.POX：粒细胞系统：绝大部分(+)单核细胞系统：可(-)/(+)淋巴细胞系统：(-)2.NAP：粒细胞系统：绝大部分(+)单核细胞系统：绝大部分(+)淋巴细胞系统：绝大部分(-)3.NAP：除了巨噬细胞(+)，其他都(-)4.AS-D-NCE：粒细胞系统：原始粒细胞绝可(-)/(+)，大部分(+) 单核细胞系统：绝大部分(+)淋巴细胞系统：(-)5. -NAE：粒细胞系统：绝大部分(+)单核细胞系统：原始单细胞绝可(-)/弱(+)，其他(+)淋巴细胞系统：绝大部分(-)6. -NBE：粒细胞系统：(-)单核细胞系统：绝大部分(+)淋巴细胞系统：B淋巴(-)，其他(+)7.铁染色：细胞外铁：大多(++)临床意义：1.POX:鉴别急性白血病2.PAS：白血病分型3.NAP:主要慢性粒细胞白血病与类白血病的鉴别：慢性粒细胞白血病：NAP积分值常为0类白血病：NAP积分值明显增高4.AS-D-NCE:急性粒细胞白血病(+)，急单急淋(-)5. -NAE：急粒大部分(-)不能被NAF抑制;急单大部分(+)能被NAF抑制;急淋大部分(-)6. -NBE：与-NBE染色的临床意义相同7.铁染色：诊断缺铁性性贫血。

常用血细胞化学染色原理及应用（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义[原理] 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶（peroxidase，POX）能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。

联苯胺蓝自我脱氢氧化，显棕色四甲基苯醌二胺，再加入亚硝基铁氰化钠与联苯胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位于细胞浆内酶所在的部位。

[临床意义]临床上主要用于急性白血病类型的鉴别：急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞POX染色均呈阴性反应；急性粒细胞白血病原粒细胞POX 染色呈局灶分布的阳性反应；急性早幼粒细胞白血病颗粒增多的早幼粒细胞POX染色呈强阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞POX染色多呈细小颗粒弱阳性反应。

（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义[原理] 过碘酸-雪夫（Pexiodic acid-schiff，PAS）染色又称糖原染色。

胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（Periodic acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫（Schiff）试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。

该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。

[临床意义]1）急性白血病类型的鉴别红白血病的幼红细胞PAS染色多呈阳性反应，阳性率高，反应强；成熟红细胞有时亦可为阳性；急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞PAS染色多为红色颗粒或块状阳性反应；急性粒细胞白血病的原粒细胞呈阴性或胞质呈弥漫淡色阳性反应；急性早幼粒细胞白血病异常早幼粒细胞的PAS染色为阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈弥漫分布的红色细颗粒，巨核细胞白血病原巨核细胞PAS染色呈阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。

2）各类贫血的鉴别 MDS、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血（曾称地中海贫血）的幼红细胞PAS染色多为阴性反应，有时可出现阳性反应；巨幼红细胞贫血、溶血性贫血、再障的幼红细胞PAS染色为阴性。

一、名词解释造血微环境：造血微环境是由骨髓基质细胞、微血管、神经、细胞外基质和基质细胞分泌的细胞因子构成，是造血干细胞赖以生存的环境。

幼红细胞造血岛：中心为一个巨噬细胞，周围环绕不同发育程度的红细胞。

干抽：非技术操作或穿刺不当而抽不出骨髓液或只抽出少量血液粒红比值：各阶段粒细胞百分率总和与各阶段有核红细胞百分率总和之比。

细胞化学染色：是细胞学与化学相结合而形成的一门科学，是以细胞形态为基础，结合化学反应的原理对血细胞内各种化学成分进行定性、定量、半定量分析的方法。

铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞环形铁粒幼红细胞：是指幼红细胞胞质内含贴颗粒6个以上，并环绕细胞核排列超过核周径2/3以上。

铁粒红细胞：成熟红细胞中出现铁颗粒贫血：是由多种原因引起的外周血红细胞、血红蛋白或血细胞比容低于本地区、相同年龄和性别人群参考范围下限的一种病理状态或综合征。

无效造血：红细胞在造血组织骨髓内成熟过程中，由于某种原因使其在成熟过程中或进入外周血循环之前就被破坏死亡。

白血病：白血病属于造血系统的恶性肿瘤，是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病。

克隆中的白血病失去进一步分化成熟的能力，而停滞在细胞发育的不同阶段。

骨髓病性贫血：骨髓被异常组织浸润，使造血组织受排挤和干扰所发生的贫血。

主要指骨髓转移瘤和骨髓纤维化。

非红细胞计数（NEC）：仅单核和粒细胞的分类，除去幼红细胞、浆细胞、淋巴细胞、网状细胞等非白血性白血病：类白血病的一种,是指外周血没发现白血病细胞且白细胞计数减小的一类白血病二、第一章1胚胎期造血分为三期：中胚层造血（卵黄囊造血）、肝脏造血、骨髓造血。

三期产生各类血细胞顺序为红粒巨淋单。

红细胞最早生成2出生后，人体主要造血器官包括：骨髓、胸腺、脾和淋巴结等。

骨髓是人体唯一产生红系、粒系和巨核系细胞的场所。

分为三期骨髓造血、淋巴器官造血、髓外造血。

3造血干细胞具有高度自我复制能力、多向分化能力、多态性。

是所有血细胞最原始的起源细胞。

血液细胞化学染色技术在血液病诊断中的应用细胞化学(或组织化学)是组织学的一个分支，是在细胞形态学的基础上研究细胞的生物化学成分、定位、定量及代谢功能状态的学科。

经典细胞化学从1830年问世以来已经逐步完善。

本世纪50年代哺乳动物和人白细胞的过氧化酶、碱性磷酸酶、酯酶、溶酶体等染色技术相继出现，并不断完善。

近代细胞化学则在此基础上，吸收并运用生物化学、免疫学、细胞生物学和分子生物学的基本原理与技术，从细胞分子水平研究细胞形态与功能的关系，发展了放射自显影、免疫荧光、免疫酶标等免疫组织化学新技术。

对研究核蛋白的合成、细胞动力学、细胞胞浆和表面免疫球蛋白合成、细胞分化抗原表达及癌变研究发挥了巨大的作用。

原位杂交细胞化学，通过染色体基因定位、核酸分子原位杂交、原位聚合酶链反应，洞察单个细胞内原癌基因的激活、扩增及表达变化等等，为探索癌变发生机制、肿瘤早期诊断、治疗、预后判断以及肿瘤防治展现美好前景。

急性白血病分型，形态学是基础，瑞氏染色准确率45.7%，细胞化学染色可将诊断提高到80%以上，国际上用MIC分型进一步提高了白血病的诊断率。

而现国际上又提出WHO分型，对细胞化学提出更高要求。

一．髓过氧化物酶(myeloperoxidase，POX)染色(一) 联苯胺染色法(Washburn)[原理] 粒细胞及分化较好的单核细胞胞质内颗粒中的过氧化物酶，分解过氧化氢后，释放初生态氧，使联苯胺氧化，氧化联苯胺与亚硝基铁氰化钠在细胞内结合,形成蓝色颗粒，经进一步氧化而成棕黑色，定位于胞质内。

[试剂配制]1.0.3％复方联苯胺染液：联苯胺0.3g加入90％乙醇99m1中，再加入36％亚硝基铁氰化钠1m1，混匀。

此染液在棕色瓶内可保存10个月。

2.过氧化氢溶液：3％过氧化氢溶液1滴加入蒸馏水5m1中，混匀。

每次用前需新鲜配制。

[操作步骤]1.在新鲜干燥的血或骨髓涂片上滴加0.3％复方联苯胺染液6～10滴，使之盖满涂膜，作用1分钟。