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慢使用操作指南慢使用操作指南1.慢简介1.1 定义：慢是一种特殊的，能够在细胞中长期存活并进行复制。
1.2 用途：慢广泛应用于基因转导、基因敲除和基因表达等实验研究中。
2.慢使用前准备工作2.1 实验室准备工作2.1.1 实验室空间准备：确保实验室内有足够的操作空间和合适的消毒设备。
2.1.2 材料准备：准备好所需的培养基、细胞培养物、慢载体等。
2.1.3 设备准备：确保离心机、冰箱等设备正常工作，并准备好相关的仪器和器材。
2.2 人员准备工作2.2.1 人员培训：对参与慢操作的人员进行培训，了解操作步骤和安全风险。
2.2.2 个人防护：提供必要的防护装备，如实验服、手套、面罩等。
3.慢操作步骤3.1 细胞培养3.1.1 细胞培养物准备：根据实验需求选择合适的细胞培养物，并进行细胞的预处理和培养。
3.1.2 细胞密度调整：根据实验要求，调整细胞培养物的密度，以保证细胞的正常生长。
3.2 慢感染3.2.1 慢载体注射：将慢载体注射到培养好的细胞中。
3.2.2 感染条件控制：根据实验需求，控制慢感染的时间、浓度和温度等条件。
3.3 细胞培养和检测3.3.1 细胞培养：将感染好的细胞进行培养，并观察细胞的生长状态。
3.3.2 细胞检测：使用相关实验方法，对感染细胞进行检测和分析。
4.实验安全措施4.1 操作环境控制：确保实验室内通风良好，避免慢的扩散和污染。
4.2 废液处理：将产生的废液经过正确处理，避免对环境和人体造成污染和伤害。
4.3 事故应急处理：在发生事故或意外情况时，立即采取应急措施，并及时报告相关人员。
5.附件本文档所涉及的附件，包括但不限于实验记录表格、实验数据文件等。
6.法律名词及注释6.1 慢：指一种具有长周期和潜伏期的。
7.结束语感谢您阅读本文档，如有任何疑问或意见，请随时与我们联系。
作者：空青山作品编号：89964445889663Gd53022257782215002时间：2020.12.13稳转慢病毒一、所需试剂1、慢病毒载体（详细信息见附录及《质粒的扩增提取》）（大肠杆菌-80℃保存2-3年，质粒-20℃保存2-3年，病毒液-80℃保存1年）（1）载体质粒：两端的LTR、剪切位点、包装信号Ψ以及抗性或荧光基因、gag基因5′端350bp的序列及位于env序列中的RRE，含宿主RNA聚合酶识别部分（2）包装质粒（psPAX2）：包含了pol、gag包装成分（3）包膜质粒（pMD2.G）：用其他病毒的包膜蛋白代替了env基因.三种质粒共同转染产生不具有自我复制能力的病毒载体。
2、包装细胞：293T细胞3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒4、转染试剂：XTREME-GENE（-20℃保存，不可分装），一种脂质与其他组份构成的混合物5、浓缩试剂（配好后4℃保存，原材料室温保存）：5X PEG8000/NaCl溶液（聚乙二醇）：NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中，高压蒸汽灭菌**也可直接从公司买来病毒液（-80℃封口膜封口冻存管保存，4℃保存3天）：滴度一般为108TU/ml6、10mg/ml polybrene（-20℃分装保存）：溴化己二甲铵。
是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene 能提高感染效率2～10 倍。
有一定细胞毒性，需要摸索浓度（1～10μg/ml）7、无血清培养基：optimen8、贴壁细胞（复苏后3代以上的细胞）9、puromycin：嘌呤霉素，用于筛选稳转细胞二、具体步骤<一>病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转）第一天1、种板，10×105个293T细胞，加入全培养基双抗DMEM 4-5ml，过夜2、配制5X PEG8000/NaCl溶液称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃第二天2、加入2ml全培养基DMEM3、将1加入2，孵育10h，换成5ml全培养基第四天第五天：1、9:00和17:00各收取一次5ml培养液，共20ml（-80℃保存）2、过滤：用孔径为0.45mm的过滤器除去上清中的293T细胞3、加入5ml 5XPEG8000/NaCl溶液，每30min-1h上下摇匀一次4、4℃过夜第六天1、4℃，3500rpm，20min2、弃上清，倒扣纸上静置1-2min，吸干残余液体3、加入120-150μl PBS，缓慢吹打，以防形成气溶胶4、50μl分装，-80℃保存。
慢病毒包装和应用实践目录第3代慢病毒包装载体转移质粒（表达载体）包装质粒 包装质粒包装质粒需全新构建，在MCS （多克隆位点）加入目的序列为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用转移质粒和包装质粒同时共转染细胞 无需全新构建，一次提取后分装慢病毒包装转移质粒的结构介绍----对照质粒◆LTR：长末端重复序列（long terminal repeat）反转录病毒的基因组的两端各有一个长末端重复序列(5'—LTR和3'—LTR)，不编码蛋白质，但含有启动子，增强子等调控元件。
参与前病毒进入宿主基因组，调控病毒基因的表达。
◆Psi：衣壳包装序列◆RRE：Rev反应元件◆cPPT ：中央聚嘌呤—中央末端序列◆WPRE：突变的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件◆U3PPT：多聚腺苷酸化相关序列●Promoter：启动子序列●GFP：绿色荧光蛋白慢病毒包装转移质粒的结构介绍CMV：Cytomegalovirus promoter 来源于巨细胞病毒的启动子EF1α: 延伸因子1α启动子MCS：multiple cloning site 多克隆位点PGK：phosphoglycerate kinase 1 promoter 磷酸甘油酸激酶基因启动子Puro：嘌呤霉素抗性基因2A：自剪切肽IRES：内部核糖体进入位点序列（Internal ribosome entry site）。
慢病毒包装转移质粒的结构介绍----启动子慢病毒包装转移质粒的结构介绍----多克隆位点◆多克隆位点含有限制性内切酶切割位点◆可用相应的酶将环状载体线性化，形成粘性末端或平末端◆这些酶切位点在载体上一般有且只有一个◆传统的载体构建方法需要依赖于对这些位点的切割IRES：(internal ribosomal entry sites)内部核糖体结合位点：一段较短的RNA序列（约150-250BP），这类RNA序列能折叠成类似于起始tRNA的结构，从而介导核糖体与RNA结合，起始蛋白质翻译。
pLenti6.3-MCS慢病毒载体使⽤说明pLenti6.3-MCSpLenti6.3-MCS载体基本信息：载体名称: pLenti6.3-MCS质粒类型: 慢病毒表达载体⾼拷贝/低拷贝: --启动⼦: --克隆⽅法: 多克隆位点，限制性内切酶载体⼤⼩: --5' 测序引物及序列: --3' 测序引物及序列: --载体标签: --载体抗性: --筛选标记: --备注: --稳定性: --组成型: --病毒/⾮病毒: 慢病毒pLenti6.3-MCS载体质粒图谱和多克隆位点信息pLenti6.3-MCS载体序列pLenti6.3-MCS其他相关慢病毒载体：Tet-pLKO-neo Tet-pLKO-puro pPACKH1-GAGpMD2.G pCMV-dR8.2-dvpr pLKO.1-GFP-shRNA pLKO.1-TRC control pLKO.1-hygro pLKO.1-TRCpCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro FUW-tetO-hOKMSFUW-tetO-hOCT4 FUW-tetO-hSOX2 FUW-tetO-hKLF4FUW pLVX-AcGFP1-N1 pLVX-AcGFP1-C1pLVX-AmCyan1-N1 pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-N1 pLVX-DsRed-Monomer-N1 pLVX-PAmCherry-C1 pLVX-PAmCherry-N1 pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-IRES-ZsGreen1 pLVX-IRES-mCherry pLVX-mCherry-C1 pLVX-mCherry-N1 pLVX-tdTomato-C1 pLKO.1-puro pLentilox 3.7 pLVX-Tet-On-Advanced pLVX-IRES-Puro pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-HygpLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-AcGFP1-N1 pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 pLVX-EF1α-mCherry-C1 pLVX-EF1α-IRES-mCherry pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-MetLuc Control pLVX-MetLuc pLVX-Hom-Mem1pLVX-Het-2 pLVX-DD-AcGFP1-Actin pPRIME-TET-GFP-FF3pSIH1-H1-CopGFP pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pLOX-CWBmi1 pLOX-CW-CREpRSV-rev pMDLg-pRRE pLL3.7pLVX-DD-AmCyan1 Control pLVX-DD-AmCyan1 Reporter pLVX-DD-tdTomato Reporter pLVX-DD-tdTomato Control pLVX-PTuner-Green pLVX-CherryPicker2pLVX-TetOne-Puro-Luc pLVX-TetOne pLVX-TetOne-PuropLVX-TetOne-Luc pLVX-rHom-Nuc1 pLVX-rHom-Sec1pLVX-rHom-1 pLVX-Hom-Nuc1 pLVX-Het-Nuc1pLVX-PTuner pLVX-PTuner2 pLVX-DD-ZsGreen1 Reporter pLVX-Het-1 pLVX-CherryPicker Control pLVX-Tet3GpCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV pCDH1-MCS2-EF1-copGFP pCDF1-MCS2-EF1-Puro pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP pWPXL pLVX-TRE3G-ZsGreen1 pLVX-TRE3G-mCherry pLenti6.3-EmGFP-BveI miR pLenti6/V5-GW/lacZpLenti6.3/V5-GW/EmGFP pLenti6.3-MCS pLenti6.3-DsRed2-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP pLVX-shRNA2 psPAX2VSV-G pSico PGK Puro pcDNA6.2-DsRed2-MCS1 miR pcDNA6.3-EmGFP-NC- II pcDNA6.2-EmGFP-NC- I pcDNA6.2-EmGFP-BsaI miR pLenti6.3-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-DsRed2 pLEX-MCSpGIPZ pLP2 pLP1FUGW pFUGW pLOX-Ttag-iresTKpMDLg/pRRE pLentG-KOSM pCMV-dR8.91pLVX-TRE3G-Luc Control pLVX-TRE3G-IRES pCgpvpSico pSicoR pLVTHMpGensil-1 pLVX-EF1α-IRES-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pPACKH1-REV pLVX-Het-Mem1 pLVX-shRNA1pLKO.1-puro-GFP-siRNA pPRIME-TREX-GFP-FF3 pcDNA6.2-DsRed2-BsmBI miR pCDH-MSCV-MCS-EF1-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP pLVX-TRE3GFUW-tetO-hMYC pLOX-TERT-iresTK pLP/VSVGFUW-M2rtTA pCDH-EF1-MCS-(PGK-Puro) pcDNA6.2-EmGFP-MCS1 miR pLVX-AmCyan1-C1 pLVX-Hom-1 pcDNA6.2-BsaI miRpLVX-DsRed-Monomer-C1 pLVX-mCherry-Actin pTRIPZpLVX-ZsGreen1-C1 pLVX-CherryPicker1 LeGO-iC2pLVX-IRES-tdTomato pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro pLKO.3GpLVX-tdTomato-N1 pLVX-PTuner2-C pLVX-PuropLVX-Tight-Puro pLVX-DD-ZsGreen1 Control pSicoR PGK PuropLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 pCDH-UbC-MCS-EF1-Hygro pLVTHpLVX-EF1α-mCherry-N1 pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP。
整理慢病毒稳转细胞株步骤竹密岂妨流水过蛮鬼2021. 3山高哪碍野云飞稳转慢病毒一、所需试剂1、慢病毒载体（详细信息见附录及《质粒的扩增提取》）（大肠杆菌-80°C保存2-3 年，质粒-20°C保存2-3年，病毒液-80°C保存1年）（1）载体质粒：两端的LTR、剪切位点、包装信号屮以及抗性或荧光基因、gag基因5’端350bp的序列及位丁,nv序列中的RRE,含宿主RNA聚合酶识别部分（2）包装质粒（psPAX2）:包含了 pol、gag包装成分（3）包膜质粒（pMD2.G）：用其他病毒的包膜蛋白代替了 env基因.三种质粒共同转染产生不具有口我复制能力的病毒载体。
2、包装细胞：293T细胞3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒4、转染试剂：XTREME-GENE （-20°C保存，不可分装），一种脂质与其他组份构成的混合物5、浓缩试剂（配好后4°C保存，原材料室温保存）：5X PEG8000/NaCl溶液（聚乙二醇）：NaCl 8. 766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中，高圧蒸汽灭菌**也可直接从公司买來病毒液（-80°C封口膜封口冻存管保存，4°C保存3夭）：滴度一般为 108TU/ml6x 10mg/ml polybrene （-20°C分装保存）:漠化己二甲鞍。
是带正电的小分子,与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene能提高感染效率2〜10倍。
有一定细胞毒性，需要摸索浓度（l-10Ug/ml） 7、无血清培养基： optimen8、贴壁细胞（复苏后3代以上的细胞）9、puromycin：卩票吟霉索,用于筛选稳转细胞二、具体步骤病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转）第一天1、种板，10X105个293T细胞，加入全培养基双抗DMEM 4-5ml,过夜2、配制5XPEG8000/NaCl 溶液称取 NaCl 8. 766 g; PEG8000 50g 溶解在 200ml Milli-Q 纯水中；121 摄氏度 30min 湿热灭绝30min：保存在4°C第二夭1、配管 A 管试剂 PLKO. 1/pCDH psPAX2 pMD2. G Opti B 管 XTREME-GENE Opti 加样＞/ul 推荐量/ul、Pg合计3 1 2 200 6 200 206 206 A+B混合室温静置20min 2、加入2ml全培养基DMEM3、将1加入2,孵育10h,换成5ml全培养基1/5 （稳转）竹密岂妨流水过蛮鬼2021. 3山高哪碍野云飞第四天第五夭：1、9:00和17:00各收取一次5ml培养液，共20ml （-80°C保存）2、过滤：用孔径为0. 45mm的过滤器除去上清中的293T细胞3、加入5ml 5XPEG8000/NaCl溶液,每 30min-lh上下摇匀一次4、4°C过夜第六夭1、4°C, 3500rpm» 20min2、弃上清，倒扣纸上静置l-2min,吸干残余液体3、加入120-150 P 1 PBS,缓慢吹打，以防形成气溶胶4、50U1分装，-80°C保存。
慢使用操作指南操作指南：慢使用1、简介1.1 背景介绍1.2 慢的定义1.3 慢的应用领域2、仪器与材料2.1 实验室安全设备2.2 实验室试剂和材料2.3 慢载体和质粒3、慢的生产3.1 慢生产细胞系的选择3.2 质粒构建与筛选3.3 慢包装细胞的构建与筛选3.4 慢的生产与扩增4、慢的感染4.1 细胞培养与准备4.2 慢感染的条件优化4.3 慢感染的时间和浓度控制5、慢的转染5.1 细胞转染前的处理5.2 转染的操作条件5.3 考虑的转染效率和细胞毒性问题6、实验细胞系的维护6.1 细胞的培养和传代6.2 细胞的冻存与恢复6.3 实验细胞系的检测和验证7、实验数据记录与分析7.1 实验数据的记录和整理7.2 数据分析方法与软件使用7.3 结果的展示和解释8、安全注意事项8.1 实验操作安全措施8.2 废液处理及废弃物管理8.3 慢实验室传播的预防措施9、附件9.1 相关实验记录表格9.2 质粒和慢载体序列信息法律名词及注释：1、载体：在基因工程中，指用来携带或传递目标基因的DNA或RNA分子。
2、质粒：指自主复制的独立DNA分子，可被插入或移除目标基因，用于基因克隆、表达和操控等实验。
3、细胞培养：通过体外培养细胞的技术，提供实验所需的可控环境和条件。
4、转染：将外源DNA或RNA导入细胞内，使其表达或转录的过程。
5、传代：将细胞从一个培养器转移到另一个培养器，以维持细胞系的生长。
6、冻存：将细胞以特定的方法冷冻保存，以备将来使用。
7、废液处理：对实验过程中产生的含有有害或感染性物质的废液进行妥善处理，避免对环境和人体造成危害。
8、废弃物管理：对实验中产生的废弃物进行分类、包装和处理，符合相关法规和标准。
本文档涉及附件：1、慢生产记录表2、慢感染实验记录表3、细胞培养和传代记录表4、实验数据分析表格本文所涉及的法律名词及注释：载体、质粒、细胞培养、转染、传代、冻存、废液处理、废弃物管理。
慢病毒Cas9表达系统使用说明本说明书用于：¾构建Cas9蛋白表达细胞系¾在Cas9蛋白表达细胞系中敲除目的基因适用于以下产品货号货号pLV‐Cas9载体系列 CR2001，CR2002pLV‐Cas9‐Nick载体系列 CR2003，CR2004pGR载体系列 CR2011~CR2013pGR‐EGFP载体系列 CR2014~CR2016北京英茂盛业生物科技有限公司北京市昌平区沙河镇青年创业大厦B‐916Tel：010‐62495135Emai：order@Web site：目录1、产品简介 (2)1.1CRISPR/gRNA基因敲除原理 (2)1.2慢病毒Cas9表达系统特点 (2)2、Cas9表达慢病毒制备 (3)2.1试剂准备 (3)2.2简要实验流程 (4)2.3实验前准备 (4)2.4病毒制备步骤 (5)2.4 PEG纯化慢病毒 (6)3、筛选Cas9表达稳定细胞株 (7)3.1 试剂 (7)3.2 实验前准备 (7)3.3 筛选细胞系实验步骤 (8)3.4 Cas9表达细胞系检测 (9)4、用pTYNE载体对Cas9表达细胞系进行验证 (10)4.1验证Cas9蛋白表达细胞系 (10)4.2验证Cas9Nicknase蛋白表达细胞系 (11)5、pGR和pGR‐EGFP载体构建 (13)5.1 pGR和pGR‐EGFP载体图谱 (13)5.2 靶点设计 (13)5.3 pGR载体构建步骤 (14)附录1 用到的产品 (17)附录2 引物列表 (17)11、产品简介1.1CRISPR/gRNA基因敲除原理CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。
在该机制中，Cas蛋白（CRISP‐associated protein）含有两个核酸酶结构域，可以分别切割两条DNA链。
慢病毒载体构建及包装操作手册目录慢病毒收到后的注意事项一、整体实验流程二、实验材料三、慢病毒包装和浓缩四、感染目的细胞附1. 汉恒生物慢病毒质粒列表附2. 慢病毒滴度测定方法简介附3. 慢病毒MOI感染参数附4. 汉恒生物各病毒载体感染目的细胞比较慢病毒安全使用和注意事项➢慢病毒安全使用注意事项（*非常重要！！！*）1)慢病毒相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。
2)操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。
3)操作病毒时特别小心病毒溅出。
如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。
接触过病毒的枪头，离心管，培养板，培养液请于84消毒液浸泡后统一处理。
4)如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。
5)病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌处理。
6)实验完毕用香皂清洗双手。
➢慢病毒收到后的注意事项1)慢病毒的储存用户收到病毒液后在短期内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存（尽量一周内用完）；如需长期保存请分装后放置于-80℃。
注：a．反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会降低病毒滴度10%-50%）；在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融，所以我们前期对病毒进行了分装（200 l/tube），收到后直接放置-80℃保存即可。
b．如果病毒储存时间超过6个月，我们建议在使用前重新测定病毒滴度。
2)慢病毒的稀释用户需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后置于4℃保存(请尽量一周内用完)。
一、整体实验流程二、实验材料（一）慢病毒载体、包装细胞和菌株该病毒包装系统为三质粒系统，组成为psPAX2, pMD2.G, pHBLV TM系列质粒。
1、载体信息（见附表1）2、细胞株：我们采用293T作为慢病毒的包装细胞。
该细胞系为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM+10% FBS+双抗。
pSicoR PGK PuropSicoR PGK Puro载体基本信息：载体名称: pSicoR PGK puro, pSicoR-PGK-puro质粒类型: 哺乳动物细胞慢病毒表达载体，RNAi, Cre/loxP 高拷贝/低拷贝: 高拷贝启动子: CMV克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 7696 bp5' 测序引物及序列: mU6-F：CAGCACAAAAGGAAACTCACC3' 测序引物及序列: --载体标签: --载体抗性: 氨苄筛选标记: 嘌呤霉素备注: 本载体利用表达的嘌呤霉素作为筛选标记。
嘌呤霉素和shRNA寡核苷酸被LoxP位点加在中间。
Cre酶能够同时使得这两个基因在重组过程中切除出载体，同时启动shRNA的表达。
稳定性: /组成型: --病毒/非病毒: 慢病毒pSicoR PGK Puro载体质粒图谱和多克隆位点信息pSicoR PGK Puro载体简介：pSicoR PGK puro载体允许条件控制（通过Cre-LoxP）, 稳定表达shRNAs，能够RNA干扰细胞和转基因小鼠的基因表达。
Cre序列的加入能够使shRNA关闭表达。
shRNA编码寡核苷序列可以通过HpaI和XhoI限制性内切酶位点插入载体。
pSicoR PGK Puro载体序列：ORIGIN -1 GCTTAAGCGG TCGACGGATC GGGAGATCTC CCGATCCCCT ATGGTGCACT CTCAGTACAA61 TCTGCTCTGA TGCCGCATAG TTAAGCCAGT ATCTGCTCCC TGCTTGTGTG TTGGAGGTCG121 CTGAGTAGTG CGCGAGCAAA ATTTAAGCTA CAACAAGGCA AGGCTTGACC GACAATTGCA181 TGAAGAATCT GCTTAGGGTT AGGCGTTTTG CGCTGCTTCG CGATGTACGG GCCAGATATA241 CGCGTTGACA TTGATTATTG ACTAGTTATT AATAGTAATC AATTACGGGG TCATTAGTTC301 ATAGCCCATA TATGGAGTTC CGCGTTACAT AACTTACGGT AAATGGCCCG CCTGGCTGAC361 CGCCCAACGA CCCCCGCCCA TTGACGTCAA TAATGACGTA TGTTCCCATA GTAACGCCAA421 TAGGGACTTT CCATTGACGT CAATGGGTGG AGTATTTACG GTAAACTGCC CACTTGGCAG481 TACATCAAGT GTATCATATG CCAAGTACGC CCCCTATTGA CGTCAATGAC GGTAAATGGC541 CCGCCTGGCA TTATGCCCAG TACATGACCT TATGGGACTT TCCTACTTGG CAGTACATCT601 ACGTATTAGT CATCGCTATT ACCATGGTGA TGCGGTTTTG GCAGTACATC AATGGGCGTG661 GATAGCGGTT TGACTCACGG GGATTTCCAA GTCTCCACCC CATTGACGTC AATGGGAGTT 721 TGTTTTGGCA CCAAAATCAA CGGGACTTTC CAAAATGTCG TAACAACTCC GCCCCATTGA781 CGCAAATGGG CGGTAGGCGT GTACGGTGGG AGGTCTATAT AAGCAGCGCG TTTTGCCTGT 841 ACTGGGTCTC TCTGGTTAGA CCAGATCTGA GCCTGGGAGC TCTCTGGCTA ACTAGGGAAC 901 CCACTGCTTA AGCCTCAATA AAGCTTGCCT TGAGTGCTTC AAGTAGTGTG TGCCCGTCTG961 TTGTGTGACT CTGGTAACTA GAGATCCCTC AGACCCTTTT AGTCAGTGTG GAAAATCTCT 1021 AGCAGTGGCG CCCGAACAGG GACTTGAAAG CGAAAGGGAA ACCAGAGGAG CTCTCTCGAC 1081 GCAGGACTCG GCTTGCTGAA GCGCGCACGG CAAGAGGCGA GGGGCGGCGA CTGGTGAGTA 1141 CGCCAAAAAT TTTGACTAGC GGAGGCTAGA AGGAGAGAGA TGGGTGCGAG AGCGTCAGTA 1201 TTAAGCGGGG GAGAATTAGA TCGCGATGGG AAAAAATTCG GTTAAGGCCA GGGGGAAAGA 1261 AAAAATATAA ATTAAAACAT ATAGTATGGG CAAGCAGGGA GCTAGAACGA TTCGCAGTTA 1321 ATCCTGGCCT GTTAGAAACA TCAGAAGGCT GTAGACAAAT ACTGGGACAG CTACAACCAT 1381 CCCTTCAGAC AGGATCAGAA GAACTTAGAT CATTATATAA TACAGTAGCA ACCCTCTATT 1441 GTGTGCATCA AAGGATAGAG ATAAAAGACA CCAAGGAAGC TTTAGACAAG ATAGAGGAAG 1501 AGCAAAACAA AAGTAAGACC ACCGCACAGC AAGCGGCCGG CCGCGCTGAT CTTCAGACCT 1561 GGAGGAGGAG ATATGAGGGA CAATTGGAGA AGTGAATTAT ATAAATATAA AGTAGTAAAA 1621 ATTGAACCAT TAGGAGTAGC ACCCACCAAG GCAAAGAGAA GAGTGGTGCA GAGAGAAAAA 1681 AGAGCAGTGG GAATAGGAGC TTTGTTCCTT GGGTTCTTGG GAGCAGCAGG AAGCACTATG 1741 GGCGCAGCGT CAATGACGCT GACGGTACAG GCCAGACAAT TATTGTCTGG TATAGTGCAG 1801 CAGCAGAACA ATTTGCTGAG GGCTATTGAG GCGCAACAGC ATCTGTTGCA ACTCACAGTC 1861 TGGGGCATCA AGCAGCTCCA GGCAAGAATC CTGGCTGTGG AAAGATACCT AAAGGATCAA 1921 CAGCTCCTGG GGATTTGGGG TTGCTCTGGA AAACTCATTT GCACCACTGC TGTGCCTTGG 1981 AATGCTAGTT GGAGTAATAA ATCTCTGGAA CAGATTTGGA ATCACACGAC CTGGATGGAG 2041 TGGGACAGAG AAATTAACAA TTACACAAGC TTAATACACT CCTTAATTGA AGAATCGCAA 2101 AACCAGCAAG AAAAGAATGA ACAAGAATTA TTGGAATTAG ATAAATGGGC AAGTTTGTGG 2161 AATTGGTTTA ACATAACAAA TTGGCTGTGG TATATAAAAT TATTCATAAT GATAGTAGGA 2221 GGCTTGGTAG GTTTAAGAAT AGTTTTTGCT GTACTTTCTA TAGTGAATAG AGTTAGGCAG 2281 GGATATTCAC CATTATCGTT TCAGACCCAC CTCCCAACCC CGAGGGGACC CGACAGGCCC 2341 GAAGGAATAG AAGAAGAAGG TGGAGAGAGA GACAGAGACA GATCCATTCG ATTAGTGAAC 2401 GGATCGGCAC TGCGTGCGCC AATTCTGCAG ACAAATGGCA GTATTCATCC ACAATTTTAA 2461 AAGAAAAGGG GGGATTGGGG GGTACAGTGC AGGGGAAAGA ATAGTAGACA TAATAGCAAC 2521 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CATTTATCAG GGTTATTGTC TCATGAGCGG7621 ATACATATTT GAATGTATTT AGAAAAATAA ACAAATAGGG GTTCCGCGCA CATTTCCCCG7681 AAAAGTGCCA CCTGAC//pSicoR PGK Puro其他相关慢病毒载体：Tet-pLKO-neo Tet-pLKO-puro pPACKH1-GAGpMD2.G pCMV-dR8.2-dvpr pLKO.1-GFP-shRNA pLKO.1-TRC control pLKO.1-hygro pLKO.1-TRCpCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro FUW-tetO-hOKMS FUW-tetO-hOCT4 FUW-tetO-hSOX2 FUW-tetO-hKLF4FUW pLVX-AcGFP1-N1 pLVX-AcGFP1-C1pLVX-AmCyan1-N1 pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-N1 pLVX-DsRed-Monomer-N1 pLVX-PAmCherry-C1 pLVX-PAmCherry-N1 pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-IRES-ZsGreen1 pLVX-IRES-mCherry pLVX-mCherry-C1 pLVX-mCherry-N1 pLVX-tdTomato-C1pLKO.1-puro pLentilox 3.7 pLVX-Tet-On-Advanced pLVX-IRES-Puro pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-HygpLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-AcGFP1-N1 pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 pLVX-EF1α-mCherry-C1 pLVX-EF1α-IRES-mCherry pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-MetLuc Control pLVX-MetLuc pLVX-Hom-Mem1pLVX-Het-2 pLVX-DD-AcGFP1-Actin pPRIME-TET-GFP-FF3pSIH1-H1-CopGFP pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pLOX-CWBmi1 pLOX-CW-CREpRSV-rev pMDLg-pRRE pLL3.7pLVX-DD-AmCyan1 Control pLVX-DD-AmCyan1 Reporter pLVX-DD-tdTomato Reporter pLVX-DD-tdTomato Control pLVX-PTuner-Green pLVX-CherryPicker2pLVX-TetOne-Puro-Luc pLVX-TetOne pLVX-TetOne-PuropLVX-TetOne-Luc pLVX-rHom-Nuc1 pLVX-rHom-Sec1pLVX-rHom-1 pLVX-Hom-Nuc1 pLVX-Het-Nuc1pLVX-PTuner pLVX-PTuner2 pLVX-DD-ZsGreen1 Reporter pLVX-Het-1 pLVX-CherryPicker Control pLVX-Tet3GpCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV pCDH1-MCS2-EF1-copGFP pCDF1-MCS2-EF1-Puro pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP pWPXL pLVX-TRE3G-ZsGreen1 pLVX-TRE3G-mCherry pLenti6.3-EmGFP-BveI miR pLenti6/V5-GW/lacZpLenti6.3/V5-GW/EmGFP pLenti6.3-MCS pLenti6.3-DsRed2-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP pLVX-shRNA2 psPAX2VSV-G pSico PGK Puro pcDNA6.2-DsRed2-MCS1 miR pcDNA6.3-EmGFP-NC- II pcDNA6.2-EmGFP-NC- I pcDNA6.2-EmGFP-BsaI miR pLenti6.3-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-DsRed2 pLEX-MCSpGIPZ pLP2 pLP1FUGW pFUGW pLOX-Ttag-iresTKpMDLg/pRRE pLentG-KOSM pCMV-dR8.91pLVX-TRE3G-Luc Control pLVX-TRE3G-IRES pCgpvpSico pSicoR pLVTHMpGensil-1 pLVX-EF1α-IRES-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pPACKH1-REV pLVX-Het-Mem1 pLVX-shRNA1pLKO.1-puro-GFP-siRNA pPRIME-TREX-GFP-FF3 pcDNA6.2-DsRed2-BsmBI miR pCDH-MSCV-MCS-EF1-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP pLVX-TRE3GFUW-tetO-hMYC pLOX-TERT-iresTK pLP/VSVGFUW-M2rtTA pCDH-EF1-MCS-(PGK-Puro) pcDNA6.2-EmGFP-MCS1 miR pLVX-AmCyan1-C1 pLVX-Hom-1 pcDNA6.2-BsaI miRpLVX-DsRed-Monomer-C1 pLVX-mCherry-Actin pTRIPZpLVX-ZsGreen1-C1 pLVX-CherryPicker1 LeGO-iC2pLVX-IRES-tdTomato pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro pLKO.3GpLVX-tdTomato-N1 pLVX-PTuner2-C pLVX-PuropLVX-Tight-Puro pLVX-DD-ZsGreen1 Control pSicoR PGK PuropLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 pCDH-UbC-MCS-EF1-Hygro pLVTHpLVX-EF1α-mCherry-N1 pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP。
