慢病毒包装原理介绍定稿版

慢病毒包装原理
慢病毒包装是利用细胞中自身的基因表达机制，将外源基因引入细胞中，使其成为一种慢性感染病毒，它能在基因组中数月甚至多年连续作用，从而带来相应的治疗效果。

慢病毒包装主要是将需要表达的基因和病毒质粒结合，这种具有可复制性的结构，携带着外源基因，并利用病毒的自复制性能力将基因投射到感染细胞内，这种基因的稳定表达能够产生慢性的治疗效果。

慢病毒包装有助于保持病毒的稳定性，防止出现突变情况，而且能够更加精准地靶向特定的病灶。

此外，经过慢病毒包装之后，所生成的新型病毒可以有效防止外源基因的过早衰竭和可能造成的其他副作用，从而为基因治疗的药物的应用带来很大的便利。

第二代和第三代慢病毒包装系统精编W O R D版IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】第二代和第三代慢病毒包装系统将HIV-1 基因组中的顺式作用元件(如包装信号、长末端重复序列) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。

载体系统包括包装成分和载体成分：包装成分由 HIV-1 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白；载体成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的 HIV-1顺式作用序列。

同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。

第一代包装系统中，除vpu之外的辅助基因都被保留下来，Env包膜蛋白由VSV-G蛋白代替，应用 VSV-G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性。

3质粒系统，包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。

其中包装质粒在 CMV 启动子的控制下，表达 HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白，但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu；包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒G蛋白 (VSV 2G)，应用 VSV 2G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性，允许通过高速离心对载体进行浓缩，提高了滴度；转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列，还保留 350 bp 的 gag 和 RRE，并在其中插入目的基因或标志基因( 绿色荧光蛋白 GFP) 。

在第二代系统中辅助基因vif、vpr、nef被进一步剔除，这些辅助基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力，同时增加了载体的安全性。

第二代系统中5’LTR 634bp，3' LTR 634bp，5’LTR前不需要强启动子。

4质粒系统。

第三代系统中，tat调节基因也被剔除，对5’LTR进行了改造，换上了异源启动子，从而不需依赖tat基因（Tat 基因编码蛋白可与LTR结合，增加病毒所有基因转录率）；构建自身失活的慢病毒载体（SIN），即删除了U3区的3’LTR, 使载体失去HIV-1增强子及启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA；一些增强包装病毒滴度的元件被加入，如cPPT、WPRE。

慢病毒包装的原理
慢病毒（lentivirus）是一类RNA病毒，通常被用于基因转染和基因治疗。

慢
病毒包装是指将需要传递的外源基因包装到慢病毒颗粒中，以便将其传递到目标细胞中。

慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装、包装信使RNA（mRNA）和包
装蛋白等多个步骤。

首先，慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装。

慢病毒的组装是一个复杂的
过程，它涉及到病毒基因组的复制、转录和翻译等多个步骤。

在这个过程中，病毒基因组的RNA被转录成mRNA，然后被翻译成包装蛋白和其他病毒结构蛋白。

这
些蛋白质随后会组装成完整的病毒颗粒。

其次，慢病毒包装的原理还涉及到包装mRNA的过程。

在病毒颗粒组装的过
程中，包装蛋白会识别并结合到病毒基因组的特定序列上，然后将mRNA包装到
病毒颗粒中。

这个过程是高度特异性的，只有符合特定序列的mRNA才能被包装
到病毒颗粒中。

最后，慢病毒包装的原理还涉及到包装蛋白的作用。

包装蛋白在病毒颗粒组装
的过程中起着关键的作用，它能够识别特定的RNA序列，并将其包装到病毒颗粒中。

此外，包装蛋白还能够保护包装的mRNA免受降解的影响，从而确保外源基
因的稳定传递。

综上所述，慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装、包装mRNA和包装蛋
白等多个步骤。

这些步骤是高度协调和特异性的，能够确保外源基因的稳定传递到目标细胞中。

因此，对慢病毒包装原理的深入研究不仅有助于我们更好地理解病毒传播和基因转染的机制，还有助于开发更高效、更安全的基因治疗和基因转染技术。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和4 ～5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

缓病毒包拆系统简介及应用之阳早格格创做一、缓病毒包拆简介及其用途缓病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为前提死少起去的基果治疗载体.辨别普遍的顺转录病毒载体，它对付团结细胞战非团结细胞均具备熏染本领.缓病毒载体的钻研死少得很快，钻研的也非常深进.该载体不妨将中源基果灵验天调整到宿主染色体上，进而达到少期性表黑.正在熏染本领圆里可灵验天熏染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、搞细胞等多种典型的细胞，进而达到良佳的的基果治疗效验，正在好国已经开展了临床钻研，效验非常理念，果此具备广阔的应用前景.暂时缓病毒也被广大天应用于表黑 RNAi 的钻研中.由于有些典型细胞脂量体转染效验好，变化到细胞内的 siRNA 半衰期短，体中合成 siRNA 对付基果表黑的压制效用常常是短促的，果而使其应用受到较大的节制.采与预先正在体中构修不妨表黑 siRNA 的载体，而后变化到细胞内转录siRNA 的战术，没有单使脂量体灵验转染的细胞种类减少，而且对付基果表黑压制效验也没有逊色于体中合成siRNA ，正在少暂宁静表黑载体的细胞中，以至不妨收挥少暂阻断基果表黑的效用.正在所构修的 siRNA 表黑载体中，是由 RNA 散合酶Ⅲ开用子去指挥 RNA 合成的，那是果为 RNA 散合酶Ⅲ有粗确的起初战终止序列，而且合成的RNA 没有会戴 poly A 尾.当 RNA 散合酶Ⅲ逢到连绝 4 个或者 5 个 T 时，它指挥的转录便会停止，正在转录产品 3' 端产死 1~4 个U . U6 战 H1 RNA 开用子是二种 RNA 散合酶Ⅲ依好的开用子，其个性是开用子自己元素均位于转录区的上游，切合于表黑～ 21ntRNA 战～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）.正在 siRNA 表黑载体中，形成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的开用子分别转录，而后二条链互补分散产死 siRNA ；也可由载体曲交表黑小收卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包罗位于 RNA 散合酶Ⅲ开用子战 4 ～ 5 T转录终止位面之间的茎环结构序列，转录后即可合叠成具备 1~4 个 U 3 ' 超过端的茎环结构，正在细胞内进一步加工成 siRNA .构修载体前常常要通过合成siRNA 的要领，觅找下效的 siRNA ，而后从中选择切合载体央供的序列，将其引进 siRNA 表黑载体.缓病毒载体（ Lentiviral vector ）较顺转录病毒载体有更广的宿主范畴，缓病毒不妨灵验熏染非周期性战有丝团结后的细胞.缓病毒载体不妨爆收表黑 shRNA 的下滴度的缓病毒，正在周期性战非周期性细胞、搞细胞、受粗卵以及瓦解的后代细胞中表黑 shRNA ，真止正在多种典型的细胞战转基果小鼠中特同而宁静的基果表黑的功能性重默，为正在本代的人战动物细胞构制中赶快而下效天钻研基果功能，以及爆收特定基果表黑落矮的动物提供了大概性.缓病毒表黑载体包罗了包拆、转染、宁静调整所需要的遗传疑息.缓病毒包拆量粒可提供所有的转录并包拆 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅帮蛋黑.为爆收下滴度的病毒颗粒，需要利用表黑载体战包拆量粒共时共转染细胞，正在细胞中举止病毒的包拆，包拆佳的假病毒颗粒分泌到细胞中的培植基中，离心博得上浑液后，不妨曲交用于宿主细胞的熏染，手段基果加进到宿主细胞之后，通过反转录，调整到基果组，进而下火仄的表黑效力分子.二、那一系统的手段，主假如为了办理以下问题：1. 对付于一些较易转染的细胞，如本代细胞、搞细胞、没有瓦解的细胞等，能大大普及手段基果转导效用，而且手段基果调整到宿主细胞基果组的几率大大减少，那便为RNAi，cDNA 克隆以及报告基果的钻研提供了一个有利的道路.2. 举止稳转细胞株的筛选；3. 为活体动物模型真验提供下品量的包罗手段基果的病毒液；正在细胞相闭的真验支配中，对付于一些按惯例要领易以转染以至无法转染的细胞，通过病毒介导的真验不妨大大普及基果的转导效用，以达到手段基果的下效瞬时表黑.三、缓病毒载体介绍缓病毒载体（ Lentiviral vector, LVs ）是正在 HIV-1 病毒前提上变革而成的病毒载体系统，它能下效的将手段基果（或者 RNAi ）导进动物战人的本代细胞或者细胞系.缓病毒载体基果组是正链 RNA ，其基果组加进细胞后，正在细胞浆中被其自己携戴的反转录酶反转为 DNA ，产死 DNA 调整前复合体，加进细胞核后， DNA 调整到细胞基果组中.调整后的 DNA 转录 mRNA ，回到细胞浆中，表黑手段蛋黑；或者爆收 RNAi 搞扰.缓病毒载体介导的基果表黑或者 RNAi 搞扰效用持绝且宁静，本果是手段基果调整到宿主细胞基果组中，并随细胞基果组的团结而团结.其余，缓病毒载体能灵验熏染并调整到非团结细胞中.以上个性使缓病毒载体与其余病毒载体相比，比圆没有调整的腺病毒载体、调整率矮的腺相闭病毒载体、只调整团结细胞的保守顺转录病毒载体，有明显的个性.洪量文件钻研标明，缓病毒载体介导的手段基果少暂表黑的构制或者细胞包罗脑、肝净、肌肉、视网膜、制血搞细胞、骨髓间充量搞细胞、巨噬细胞等.缓病毒载体没有表黑所有 HIV-1 蛋黑，免疫本性矮，正在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较矮，没灵验率病毒载体的第 2 次注射.四、缓病毒载体的构修1. 构修本理缓病毒属于顺转录病毒科，但是其基果组结构搀杂，除gag、pol 战 env 那 3 个战简单顺转录病毒相似的结构基果中，还包罗 4 个辅帮基果，vif、vpr、nef、vpu 战 2 个安排基果 tat 战 rev . HIV 21 是缓病毒中最具个性性的病毒，第一个缓病毒载体系统即以此病毒为前提举止构修的.缓病毒载体的构修本理便是将 HIV 21 基果组中的顺式效用元件( 如包拆旗号、少终端重复序列 ) 战编码反式效用蛋黑的序列举止分散.载体系统包罗包拆身分战载体身分：包拆身分由 HIV 21 基果组去除了包拆、顺转录战调整所需的顺式效用序列而构修，能反式提供爆收病毒颗粒所需的蛋黑；载体身分与包拆身分互补，含有包拆、顺转录战调整所需的HIV 21顺式效用序列.共时具备同源开用子统制下的多克隆位面及正在此位面拔出的手段基果.为落矮二种身分共源重组爆收有复制本领的病毒 (RCV ) 的大概性，将包拆身分的5 ′ LTR 换成巨细胞病毒 (CMV ) 坐时早期开用子，3 ′ LTR 换成 SV 40 polyA 位面等.将包拆身分分别构修正在二个量粒上，即一个表黑 gag 战 pol、另一个表黑 env .根据那个本理，Naldini 战 Kafri 等构修了三量粒表黑系统.2. 三量粒表黑系统三量粒表黑系统包罗包拆量粒、包膜蛋黑量粒战变化量粒.其中包拆量粒正在 CMV 开用子的统制下，表黑 HIV 21 复制所需的局部反式激活蛋黑，但是没有爆收病毒包膜蛋黑及辅帮蛋黑 vpu；包膜蛋黑量粒编码火泡性心炎病毒 G 蛋黑 (V SV 2G)，应用 VSV 2G 包膜的假构型缓病毒载体夸大了载体的靶细胞嗜性范畴，而且减少了载体的宁静性，允许通过下速离心对付载体举止浓缩，普及了滴度；变化量粒中除含有包拆、顺转录及调整所需的顺式序列，还死存350 bp 的 gag 战 RRE，并正在其中拔出手段基果或者标记基果 ( 绿色荧光蛋黑 GFP) .将载体系统分成三个量粒最大的益处是使序列重叠的机会大大缩小，缩小载体重组历程中爆收 RCV 的大概性.通过三量粒共转染 293T 细胞，超速离心后病毒滴度可达 109IU /m l .3. 四量粒表黑系统为了缩小 HIV 21 包拆结构的序列共源性，进一步缩小重组成 RCV 的大概性，Dull 等人将辅帮基果去除.但是由于gag2pol 的转运需要 rev，果此，正在上述的三量粒系统的前提上，构修成四量粒表黑系统，该系统加上含 rev 的量粒缩小了爆收 RCV 的大概性，而且对付非团结期细胞转导效用无效用.五、缓病毒载体应用1. 将手段基果 /RNAi 基果转进易以转染的细胞，比圆神经元细胞、搞细胞或者其余本代细胞；2. 将手段基果 /RNAi 基果转进动物构制，以期赢得少暂表黑；3. 构修宁静表黑手段蛋黑 /RNAi 的细胞系，再用exvivo的要领导进动物体内；4. 基果治疗；5. 转基果动物；6. 基果敲除；7. 药物钻研：构修表黑受体蛋黑的细胞系，钻研药物的效用；8. 赶快修坐死产手段蛋黑的细胞系，非常有前途的真核细胞表黑要领.。

关于慢病毒包装的简介1、技术原理：慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础，使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。

其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。

慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。

慢病毒可以把外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达；因此成为导入外源基因的有力工具。

现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因敲除/敲入、基因过表达、RNA干扰、microRNA 研究以及活体动物实验中。

2、技术优势：慢病毒与其他病毒比较，具有以下优势：① 表达时间长：慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上，可实现目的基因长时间稳定的表达，不随着细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选；② 免疫原性低：直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验；③ 安全性高：未发现致病性，已被用于CAR-T 治疗作用于人体。

3、质量控制：① 基因序列测序② 载体酶切鉴定③ 慢病毒通过qPCR对病毒基因拷贝进行测定④ 一般情况下，慢病毒的滴度在108~109TU/ml4、应用：细胞感染：慢病毒可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，为神经领域、心血管领域、肝脏、肌肉、眼、肺、肿瘤及其他领域的科研工作者们提供更强有力的基因研究工具。

体内注射：神经系统病毒图片来源百度※独有的病毒分级纯化工艺，满足您从永生化细胞到原代细胞和干细胞，到动物体内水平等不同实验需求。

①基因过表达慢病毒服务②基因干扰慢病毒服务③ MicroRNA研究慢病毒服务④ CRISPR/Case9慢病毒服务。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用欧阳家百（2021.03.07）一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装原理-介绍慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装的原理慢病毒（lentivirus）是一类能够将基因信息稳定地整合到宿主细胞基因组中的病毒，因其具有较高的转染效率和广泛的宿主细胞范围而被广泛应用于基因治疗、基因编辑和细胞治疗等领域。

慢病毒的包装是指将外源基因载体包装入慢病毒颗粒中，使其具有传递和整合到宿主细胞基因组的能力。

本文将介绍慢病毒包装的原理及其相关技术。

慢病毒包装的原理主要包括载体构建、包装细胞系和包装技术三个方面。

首先是载体构建，即将外源基因插入到慢病毒基因组中，构建成慢病毒表达载体。

慢病毒基因组包括基因组RNA和辅助质粒DNA两种形式，通过重组技术将外源基因插入到慢病毒基因组中，并在适当的位点上加入启动子、终止子和调控元件，构建成慢病毒表达载体。

其次是包装细胞系的建立。

包装细胞系是指能够表达慢病毒包装蛋白的细胞系，通常采用293T细胞或HEK293细胞。

通过转染慢病毒表达载体和包装蛋白表达质粒，使其在细胞内表达慢病毒包装蛋白，从而实现慢病毒颗粒的包装和产生。

最后是包装技术，主要包括质粒转染、病毒包装和病毒收集等步骤。

质粒转染是指将慢病毒表达载体和包装蛋白表达质粒转染至包装细胞系，使其在细胞内表达慢病毒包装蛋白。

病毒包装是指慢病毒包装蛋白识别慢病毒基因组RNA，并将其包装成慢病毒颗粒的过程。

病毒收集是指通过超速离心或滤膜浓缩等方法，从包装细胞系的培养上清中收集慢病毒颗粒。

总的来说，慢病毒包装的原理是通过构建慢病毒表达载体，利用包装细胞系表达慢病毒包装蛋白，将外源基因包装入慢病毒颗粒中，最终实现慢病毒的包装和产生。

这一技术为基因治疗和基因编辑研究提供了重要工具，也为细胞治疗等领域的发展提供了有力支持。

随着基因治疗和细胞治疗的不断发展，慢病毒包装技术的进一步优化和改进将为相关研究和临床应用带来更多的机遇和挑战。

慢病毒包装原理
慢病毒是一类具有潜伏期和长期感染能力的病毒，它们能够有效地将自己的基因材料包装在宿主细胞内，并在细胞分裂过程中一代代地传递下去。

慢病毒的包装原理主要涉及它们与宿主细胞的相互作用和利用细胞的内源性机制。

慢病毒感染宿主细胞后，它们首先通过慢病毒外壳表面的膜蛋白与宿主细胞表面受体结合，进而与宿主细胞融合。

这种融合使得慢病毒能够进一步释放其基因材料到宿主细胞内。

在宿主细胞内，慢病毒的基因材料被转录成RNA，然后通过逆转录酶的作用，将其逆转录成DNA。

这个逆转录过程发生在细胞质内，将RNA转录成DNA以后，这段DNA能够进入细胞核，并被宿主细胞的转录机器读取和表达。

为了将自己的基因材料包装在宿主细胞内，慢病毒利用了宿主细胞的包装机制。

在细胞核内，慢病毒的DNA片段能够结合到一类被称为病毒RNA提取子（viral RNA packaging signal）的特定序列上。

这些特定序列与一类称为包装蛋白（nucleocapsid protein）的病毒蛋白结合。

此外，慢病毒还会在细胞核内包装自己的DNA片段。

通过与宿主细胞内的其他蛋白相互作用，慢病毒的DNA片段在细胞核内形成核心颗粒，这些颗粒随后能够与细胞膜相互作用，引导慢病毒的包装和释放。

总结起来，慢病毒的包装原理主要涉及它们与宿主细胞的相互
作用和利用细胞内的包装机制。

慢病毒通过与宿主细胞融合并释放其基因材料，然后经过逆转录过程将RNA转录成DNA。

在细胞核内，慢病毒的DNA片段利用病毒RNA提取子和包装蛋白相互作用，形成核心颗粒，最终包装和释放。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。