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HPLC法测定复维颠茄溶液中水溶性含维生素的量隽海龙;薛泳;王崇益【摘要】建立以高效液相色谱法测定复维颠茄溶液中水溶性含维生素的量.以氨基键合硅胶(4.6×250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钾(75:25)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为40℃.结果表明,维生素B1在1.21～l8.48μg/mL(r=0.9996)范围内质量浓度和峰面积呈现良好的线性关系,平均回收率为95.35％,RSD值为3.79％;维生素B2在0.24～1.66μg/mL(r=0.9999)范围内质量浓度和峰面积呈现良好的线性关系,平均回收率为102.40％,RSD值为2.80％;维生素B6在0.39～2.71μg/mL(r=0.9999)范围内质量浓度和峰面积呈现良好的线性关系,平均回收率为94.66％,RSD值为2.76％.本测定方法简便、快速、准确,重复性好,可以作为测定复维颠茄溶液中水溶性含维生素量的常用方法.【期刊名称】《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(034)005【总页数】4页(P537-540)【关键词】高效液相色谱法;复维颠茄溶液;五维他口服溶液;含量测定【作者】隽海龙;薛泳;王崇益【作者单位】江苏正大清江制药有限公司江苏省骨科药物工程技术中心,江苏淮安223001;江苏正大清江制药有限公司江苏省骨科药物工程技术中心,江苏淮安223001;江苏正大清江制药有限公司江苏省骨科药物工程技术中心,江苏淮安223001【正文语种】中文【中图分类】R284复维颠茄溶液，临床上主要用于治疗胃肠平滑肌痉挛性疼痛，并可用于恶心、呕吐、胃酸分泌过多症状的治疗，亦可用于胆肾绞痛等适应症的治疗[1-4].五维他口服溶液作为其原料，主要含维生素B1、维生素B2、维生素B6三种维生素，由于维生素结构复杂，稳定性差，因此，对复维颠茄溶液中五维他口服溶液的含量进行控制，实现多种维生素的分离检测，对其质量控制具有重要的现实意义.笔者参考有关文献，经过多次试验摸索，采用高效液相色谱法同时测定复维颠茄溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量，且方法快速、准确、灵敏，可用于该制剂的质量控制[5-15].1 仪器与试剂1.1 仪器岛津高效液相色谱仪(LC-20AD溶液输送泵，SPD-20A检测器，Lab Solutions工作站)，电子天平(德国赛多利斯股份公司).1.2 试剂维生素B1(中国食品药品检定研究院，批号：100390-201505，质量分数97.0%)，维生素B2(中国食品药品检定研究院，批号：100369-201504，质量分数98.2%)，维生素B6(中国食品药品检定研究院，批号：100116-201404，质量分数100.0%)，乙腈和磷酸二氢钾为色谱纯，复维颠茄溶液(淮安市第一人民医院自制，批号170117)，水为纯化水.1.3 处方颠茄酊50 mL，聚山梨酯-80 1 mL，五维他口服溶液316.3 mL，纯化水加至1000 mL.2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：用氨基键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钾(75∶25)；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL.2.2 溶液的制备2.2.1 阴性溶液的制备精密称取聚山梨酯-80及颠茄酊适量，置100 mL容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，配成每1 mL含颠茄酊3 μL、聚山梨酯-80 0.06 μL的阴性溶液.2.2.2 供试品溶液取本品3 mL至50 mL容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，过滤即得.2.2.3 对照品溶液称取维生素B1、维生素B2、维生素B6对照品，加水溶解并稀释制成每1 mL含维生素B1 6.0 μg、维生素B2 1.2 μg、维生素B6 1.8 μg的混合对照品溶液.2.3 专属性干扰试验精密吸取对照品溶液、全辅料溶液和空白溶剂(即水)，取续滤液10 μL注入液相色谱仪，测定，记录图谱，如图1所示.结果表明，辅料与空白溶剂在主峰位置均无吸收峰，对含量测定无干扰.图1 干扰试验色谱图2.4 线性和范围2.4.1 维生素B1线性回归方程将对照品维生素B1分别配制成1.21、2.42、3.63、4.84、6.06、8.48 μg/mL的标准溶液，各精密量取10 μL注入液相色谱仪，每个标准液连续进样三次，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值(S)对质量浓度(C)进行线性回归，求得维生素B1的线性回归方程：y =11 633.27 x +13 059.93，r=0.999 6 .结果表明维生素B1在1.21～8.48 μg/mL范围内线性关系良好.2.4.2 维生素B2线性回归方程将对照品维生素B2分别配制成0.24、0.4、0.71、0.95、1.19、1.66 μg/mL的标准溶液，各精密量取10 μL注入液相色谱仪，每个标准液连续进样3次，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值(S)对质量浓度(C)进行线性回归，求得维生素B2的线性回归方程：y =11 633.27 x +13 059.93 ，r=0.999 9 .结果表明维生素B2在0.24～1.66 μg/mL范围内线性关系良好.2.4.3 维生素B6线性回归方程将对照品维生素B6分别配制成0.39、0.77、1.16、1.55、1.93、2.71 μg/mL的标准溶液，各精密量取10 μL注入液相色谱仪，每个标准液连续进样三次，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值(S)对质量浓度(C)进行线性回归，求得维生素B6的线性回归方程：y =11 756.09 x +4 430.02，r=0.999 9.结果表明维生素B6在0.39～2.71 μg/mL范围内线性关系良好.2.5 进样精密度取2.2.3项下对照品溶液，连续进样5次，记录色谱图，试验结果维生素B1RSD 值为0.28%、维生素B2RSD值为0.30%、维生素B6RSD值为0.43%，表明进样精密度较好.2.6 重复性试验取批号170117样品6份，分别精密称定，照含量测定项下的方法测定，试验结果维生素B1RSD为4.30%，维生素B2RSD值为0.76%，维生素B6RSD值为0.74%，表明重复性较好.2.7 回收率实验取不含维生素B1、维生素B2、维生素B6的阴性溶液9份，分别精密加入相当于制剂含量80%、100%、120%的维生素B1、维生素B2和维生素B6对照溶液，照2.1项下色谱条件进行测定分析，计算回收率，测定结果见表1.表1 回收率试验结果待测成分加入量/(μg·mL-1)测得量/(μg·mL-1)回收率/%平均回收率/%RSD/%维生素B14.484.2494.6495.333.764.404.0792.504.494.3897.555.685.4796.305.595.6 2100.535.495.52100.556.686.1692.226.726.1992.116.756.1891.56维生素B20.940.95101.06102.563.080.930.95102.150.941.01107.451.181.23104.241. 171.24105.981.161.21104.311.441.4399.311.411.499.291.421.4199.30维生素B61.471.4095.2494.662.801.481.4195.271.471.4598.641.851.7896.221.831.7 796.721.841.7695.652.212.0391.862.212.0190.952.212.0291.402.8 含样品量测定取三个批号的复维颠茄溶液，按2.2.2项下方法制得供试品溶液，照回归方程计算，结果见表2.表2 含样品量测定结果(标示量%)样品批号维生素B1维生素B2维生素B616071896.35103.8296.25160719100.56104.3296.77160720100.57105.109 5.763 讨论3.1 流动相系统的选择由于复维颠茄溶液中水溶性维生素B1、维生素B2和维生素B6均在280 nm波长条件下检测，选择甲醇流动相系统基线漂移严重，所以选择乙腈-磷酸盐缓冲系统.当流动相比例为乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钾(70∶30)时维生素B1、B2分离度达不到要求；乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钾(80∶20)时维生素B1保留时间太长；乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钾(75:25)时维生素B1、B2、B6同一色谱条件下能够基线分离.3.2 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂以EDTA缓冲溶液(50 mgEDTA，庚烷磺酸钠1.1 g，25 mL冰乙酸，5 mL三乙胺加纯化水至1 000 mL，调节pH至3.4)-甲醇(86∶14)为流动相，检测含有维生素B1、维生素B2、维生素B6的混合对照品溶液.结果维生素B2出峰时间太长，整个运行时间约为70 min，不适合样品快速检测.3.3 检测波长的选择虽然维生素B1、维生素B2和维生素B6分别在265 、268和288 nm附近处有最大吸收，为兼顾各种维生素都有较好的灵敏度，选择280 nm为检测波长，在280 nm处3种维生素的色谱峰形和分离效果均较好.参考文献：【相关文献】[1] 扬州市卫生局. 扬州市医院制剂手册[M]. 扬州: 扬州市卫生局, 1986. 71.[2] 黄东亮, 黄小玲. 超声波提取颠茄草有效成分莨菪碱的技术[J]. 中国药业, 2002, 11(10): 58-59.[3] 刘灿黄, 张继, 康帅, 等. 颠茄草的生药学研究[J]. 中国中药杂志, 2014, 39(9): 1589-1592.[4] 沈刚义. 诺氟沙星联合颠茄配治疗急性胃肠炎42例临床疗效分析[J]. 医学信息(旬刊), 2013, 26(l0): 54-55.[5] 高旭, 李淑娟, 安娟, 等. 高效液相色谱法同时测定食品中8种水溶性维生素[J]. 中国医药指南, 2008, 10(6): 36-38.[6] 王海凤, 王东凯, 赵鹏, 等. HPLC检测注射用复方维生素中的多种成分[J]. 药物分析杂志, 2006, 26(12): 1709-1711.[7] 徐家根, 刁岩忠. 改进HPLC法测定注射用多种维生素(12)中维生素B12的含量[J]. 中国药房, 2016(36): 124-126.[8] 宋金春, 陆迅, 曾俊芬, 等. HPLC测定注射用13种复合维生素中维生素H, 叶酸及维生素B12含量[J]. 中国药学杂志, 2007(17): 69-71.[9] 王艳, 王坚民. 高效液相色谱法同时测定元素多维片中5种水溶性维生素[J]. 中国卫生检验杂志,2010, 20(3): 510-511.[10] 刘敏,李玉兰. HPLC法测定五维赖氨酸颗粒中四种维生素的含量[J]. 中国药师, 2006(7): 17-19.[11] 成志强, 孙成均, 黎源倩. 反相高效液相色谱法同时测定食品和多维片中8种水溶性维生素[J]. 分析化学, 2001(9): 1068-1071.[12] 林丽荣 ,梁懿, 黄芳, 等. HPLC法测定多维元素胶囊(16)中B族维生素的含量[J]. 广西中医学院学报, 2008(1):57-59.[13] 刘晓琳, 武谷, 钟淮滨. HPLC法测定复合维生素B溶液中维生素B1, 维生素B2, 维生素B6和烟酰胺的含量[J]. 中国药事, 2003(4): 241-242.[14] 李彩霞, 苏智阳, 袁文杰. HPLC法测定维生素B族片中3种组分的含量[J]. 海峡药学, 2017(6): 58-61.[15] 华永有. HPLC法测定保健食品中维生素C含量[J]. 海峡药学, 2014(10): 50-52.。
颠茄流浸膏试验报告提取部分1、试验目的通过本次试验得出颠茄浸膏提取是否可行。
收集试验数据为批量生产提供数据支持。
2、试验时间：2016年6月13日-6月25日试验人：栾序军、关明试验场地：本次试验在化验室进行试验原料：颠茄草、 95%乙醇、纯化水、稀硫酸、氢氧化钠等。
试验所需设备：渗漉装置（自制）、回流装置、旋转蒸发仪、真空泵、100或200目筛网、大烧杯、密度计、酒精计、量筒、高效液相色谱仪、电子天平等3、试验流程：3.1 渗漉法：.浸泡→渗漉→静置→滤过→减压浓缩→醇沉→减压浓缩3.2 回流法：.浸泡→回流提取→静置→滤过→减压浓缩→醇沉→减压浓缩3.3 稀硫酸回流法：回流提取→醇沉→静置→滤过→减压浓缩→醇沉→减压浓缩4、试验方法:4.1、渗漉法将颠茄草粉碎、粗粉200G放入渗漉装置，加入1200ml85%乙醇后浸泡48小时。
打开流量控制器，溶剂以每分钟3ml的流速缓缓渗漉，再400ml85%乙醇，继续渗漉。
收集初漉液约850ml左右另器储存，继续渗漉待溶剂完全漉出，做下次渗漉溶剂用。
将初漉液加入旋转蒸发仪，漉液在60℃下减压回收乙醇，密度在1.0时停止减压回收，放冷至室温，用100目筛网滤过去出叶绿素。
滤液在60℃-70℃继续减压回收至稠膏状，停止减压回收。
取样检验。
4.2、回流法将颠茄草粉碎、粗粉200G放入回流装置中，加入1600ml85%乙醇浸泡48小时，沸水浴回流1.5小时，冷却、滤过，取滤液参照4.1项漉液减压浓缩后操作。
4.3、稀硫酸回流法取颠茄草粗粉100克，以0.5％的稀硫酸溶液为溶剂提取，每次加稀硫酸溶液的质量为600g，提取1小时，共提取3次。
合并提取液，浓缩至相对密度 1左右，1.5克氢氧化钠用2毫升水溶解，搅拌状态下加入氢氧化钠溶液和95％乙醇，直到乙醇浓度达到65％，静置，取上清液，稀硫酸中和后，减压浓缩至稠膏，取样检验。
5、试验结果：渗漉法，使用颠茄草200g，最终得到流浸膏12ml。
2015年版药典高效液相色谱法、质谱法(DOC)正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。
品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。
调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变范围为0.7X～1.3X；当X大于33%时，允许改变范围为X-10%～X+10%。
若需使用小粒径（约2μm）填充剂，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也应作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。
当必须使用特定牌号的色谱柱方能满足分离要求时，可在该品种正文项下注明。
2.系统适用性试验色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等五个参数。
按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。
（1）色谱柱的理论板数（n）用于评价色谱柱的分离效能。
由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量色谱柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测物质或内标物质的理论板数。
在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分色谱峰或内标物质色谱峰的保留时间t R和峰宽（W）或半高峰宽（W h/2），按n=16（t R/W）2或 n=5.54（t R/W h/2）2计算色谱柱的理论板数。
t R、W、W h/2可用时间或长度计（下同），但应取相同单位。
（2）分离度（R）用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。
可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测物质与某一指标性成分（内标物质或其他难分离物质）的分离度，或将供试品或对照品用适当的方法降解，通过测定待测物质与某一降解产物的分离度，对色谱系统分离效能进行评价与调整。
有限公司成品质量标准及检验操作规程1 品名：1.1中文名：颠茄浸膏1.2 汉语拼音：Dianqiejingao2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：《中国药典》（2020年版一部）。
6 质量标准：7 检验操作规程：7.1 试药与试剂：乙醇、浓氨、乙醚、乙酸乙酯、硫酸阿托品、甲醇、稀碘化铋钾，氢溴酸东莨菪碱、左旋山莨菪碱、乙腈、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸、水。
7.2 仪器与用具：高效液相色谱仪、超声波清洗器、离心沉淀器、显微镜、紫外光灯、电子天平、烘箱。
7.3 性状：取成品，在自然光下目测色泽和形态、闻气尝味，并记录结果。
7.4 鉴别：7.4.1取本品1g，置离心管中，加水5ml、浓氨试液5ml，摇匀，加乙醚10ml，剧烈振摇，离心，取上清液，反复操作3次，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。
另取硫酸阿托品对照品，加甲醇制成每1ml 含2mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液1µl、对照品溶液3µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.4.2取[含量测定]项下的备用续滤液作为供试品溶液。
另取氢溴酸东莨菪碱对照品、左旋山莨菪碱对照品和硫酸阿托品对照品适量，加[含量测定]项下的流动相分别制成每1ml各含0.1mg 的溶液，作为对照品溶液。
照[含量测定]项下的方法测定，供试品色谱中应呈现于氢溴酸东莨菪碱对照品、左旋山莨菪碱对照品和硫酸阿托品对照品色谱保留时间相同的色谱峰。
上述三个色谱峰与其他峰的分离度均不得小于 1.5;除硫酸阿托品色谱峰之外的其余两个色谱峰的峰面积之和不得小于上述三个色谱峰总峰面积的0.64%。
取[含量测定]项下滴定后的溶液适量，加氨试液使呈碱性，用三氯甲烷适量振摇提取，取三氯甲烷液，蒸干，残渣显托烷生物碱类的鉴别反应（附录21）。
HPLC法同时测定颠茄片 5个指标成分含量及特征图谱分析摘要：使用高效液相色谱法对颠茄片中的绿原酸、东莨菪内酯、芦丁、东莨菪苷、山柰素-3-O-半乳糖-（6→1）鼠李糖-7-O-葡萄糖苷五种成分进行检测，结果表明，本实验建立的高效液相色谱法具有重复性好、精密度高、检测结果稳定的特点。
以东莨菪内酯为参照峰，建立了颠茄片的特征图谱。
关键词：高效液相色谱；颠茄片；特征图谱1 前言颠茄片是一种中成药，在治疗平滑肌痉挛、胃肠道绞痛、十二指肠溃疡等方面具有显著疗效。
颠茄片主要由颠茄浸膏制备得到，颠茄浸膏属于茄类植物，主要生长在欧洲，在上个世纪引入到我国沿海地区，目前主要种植地集中在山东、浙江、湖南等。
颠茄浸膏的药物成分为莨菪类生物碱、黄酮类化合物、香豆素类花儿货物等。
通过准确的对颠茄片中有效组分的定性、定量分析，有助于颠茄片生产加工、治疗机理研究。
从化学组成分类来看，颠茄片中所含有的有效组分主要为有机物，因此其分析的基本原理主要使用色谱分离的原理。
张伟等人使用超高效液相色谱检测了颠茄片和电切草中莨菪碱类化合物含量；王全华等人对比了反相超高效液相色谱、薄层扫描、毛细管电泳-电致化学发光三种检测方法对颠茄浸膏中阿托品含量的检测。
张文婷等人使用特征图谱技术对市场中多种颠茄片药品进行检测，发现有15%的颠茄片药品不好颠茄草有效组分。
为了进一步加强颠茄片质量控制，本文使用高效液相色谱法对颠茄片中的5个指标成分的含量进行检测，并进行特征图谱分析。
2 实验过程1、仪器与试剂实验使用的绿原酸、东莨菪内酯、芦丁等标准物质均采购字中国食品药品检定研究院；使用的东莨菪苷、山柰素-3-O-半乳糖-（6→1）鼠李糖-7-O-葡萄糖苷为实验室自制，纯度检测结果为>99%；使用的颠茄片药品采购与各大药品生产企业；颠茄草、颠茄流浸膏等样品采购于鲁银药业公司；实验使用的甲醇等试剂均为色谱纯，采购于阿拉丁公司；实验使用的高效液相色谱仪由安捷伦公司提供，型号为Agilent 1100，配套的脱气机型号为G1322A、流量泵为G1311A四元泵、自动进样仪为G1313A、柱温箱为G1316A、检测器为G1314A紫外检测器。
高效液相法测定颠茄磺苄啶片中硫酸阿托品含量刘益庆【摘要】目的：建立测定颠茄磺苄啶片中硫酸阿托品含量的高效液相色谱（HPLC）法。
方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.8%三乙胺溶液（用磷酸调节pH 值至2.9）-乙腈（85∶15）为流动相，检测波长为210nm，柱温为室温。
结果：硫酸阿托品在12.56～200.96μg/mL范围内线性关系良好；r=0.9998；平均回收率为96.79%（n=6），RSD为1.4%。
结论：该方法简便、快速、准确并且专属性强。
%Objective:To establish a HPLC method for determination of Atropine in Belladonna Sulfamethoxazole and Trimerhoprim Tablets. Methods:The HPLC System consisted of Gemini Phenomenex C18 column, 0.8%triethylamine solution (adjust pH value to 2.9 with phosphoric acid) - ace tonitrile (85∶15) as mobile phase, with detection wavelength 210nm. Results:The linear range of atropine was 12.56~200.96μg/mL . The mean recovery was 96.79%(n=6).conclusion:The method is proved to be simple,rapid,accurate and exclusive.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】2页(P13-14)【关键词】颠茄磺苄啶片;硫酸阿托品;高效液相【作者】刘益庆【作者单位】连云港市药品检验所连云港 222006【正文语种】中文【中图分类】R927.2颠茄磺苄啶片（Belladonna Sulfamethoxazole and Trimerhoprim Tablets）为复方制剂，其组分为：磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、颠茄流浸膏。
HPLC法检测膏药中硫酸阿托品含量方法的建立作者：吴春燕张立军张新玥张转平来源：《中国民族民间医药·下半月》2021年第11期【摘要】目的：建立高效液相色譜法检测膏药中硫酸阿托品的含量测定方法，用于市售止痛膏药的药品质量控制。
方法：采用萃取技术处理不同膏药样品，得含量测定分析提取物。
采用HPLC技术，以ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈-磷酸盐缓冲液（取6.8 g磷酸二氢钾溶于1000 mL水中，加入10 mL三乙胺，用磷酸调节pH值至2.8）（7∶93）为流动相，流速为1 mL·min-1，检测波长为210 nm，进样体积10 μL，测定不同厂家止痛膏药中硫酸阿托品含量。
结果：建立了止痛膏药中硫酸阿托品含量测定方法，其在0.088 2～0.882 0 μg具有良好的线性，平均回收率为95.73%，不同厂家止痛膏药中硫酸阿托品含量范围为0.06～0.39 mg/100cm2，含量差异很大。
结论：该法简便、准确、灵敏度高，重现性好，可以用于止痛膏药中硫酸阿托品含量测定及质量控制。
【关键词】止痛膏药;质量控制;硫酸阿托品;高效液相色谱法;含量测定【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）22-0029-05Establishment for Methods of Atropine Sulfate in Acesodyne Plaster by HPLCWU Chunyan1 ZHANG Lijun1 ZHANG Xinyue2 ZHANG Zhuanping1*1. Ankang Inspection and Detection Center of Food and Drug Control， Ankang 725000，China;2.Beijing University of Traditional Chinese Medicine， Beijing 100029，ChinaAbstract：Objective To establish a method for the determination of atropine sulfate in acesodyne plaster by high performance liquid chromatography （HPLC）. Used for quality control of acesodyne plaster.Method Extraction technology was used to extract the atropine sulfate in acesodyne plaster from different production enterprises， HPLC method was developed to determination of atropine sulfate in acesodyne plaster from different production enterprises， and the contents were determined by Phenomenex ODS C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）， with acetonitrile-phosphate buffered salt solution as the mobile phase for isocratic elution （7∶93）， the flow rate was 1 mL.min-1， the detection wavelength was 210 nm，injection volume was 10 μL. Result The common mode for the determination of atropine sulfate in acesodyne plaster was established. A linear range of 0.088 2～0.882 0 μg， the mean recovery 95.73%. The content of atropine sulfate in analgesic plasters from different production enterprises varies greatly， the range of 0.06～0.39 mg/100cm2. Conclusion The method showed to be simple， quick， sensitive， accurate， reproducible and can be used to content determination and control quality of acesodyne plaster from different production enterprises.Keywords：Acesodyne Plaster; Quality Control; Atropine Sulfate; HPLC; Content Determination止痛膏为《中华人民共和国药典》2010、2015、2020年版收载的制剂，主要以止痛流浸膏、水杨酸甲酯、薄荷脑、冰片、芸香浸膏、颠茄浸膏等七味药为原料，另加基质制成膏药。
高效液相色谱法测定维U颠茄铝镁片中硫酸阿托品含量刘益庆;陈乃江【摘要】目的用高效液相色谱法测定雏U颠茄铝镁片中硫酸阿托品的含量.方法采用Phenomenex C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5 μm),以0.5%三乙胺溶液(0.2%四氢呋喃,用冰醋酸调pH至6.10)-乙腈(80∶20)为流动相,检测波长为210 nm,柱温为室温.结果硫酸阿托品质量浓度在24.18～290.16 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为97.21%,RSD=1.1%(n=5).结论该法简便、快速、准确且专属性强,可用于产品的质量控制.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)010【总页数】2页(P35-36)【关键词】维U颠茄铝镁片;硫酸阿托品;高效液相色谱法;含量【作者】刘益庆;陈乃江【作者单位】江苏省连云港市药品检验所,江苏,连云港,222006;江苏省连云港市药品检验所,江苏,连云港,222006【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R975+.7维U颠茄铝镁片为复方制剂，组分有维生素U、氢氧化铝、三硅酸镁和颠茄流浸膏。
目前，还没有特定的方法能用来对颠茄流浸膏成分进行定量分析，故建立定量方法极为重要。
颠茄流浸膏的定量难在提取，因为维U颠茄铝镁片中的颠茄流浸膏成分很少，要尽可能地提取完全，才能准确地定量。
虽经过多次摸索，笔者也只能检测出硫酸阿托品成分。
本试验以硫酸阿托品含量为指标，用高效液相色谱(HPLC)法对颠茄流浸膏进行了定量分析。
2695－2996型高效液相色谱仪(美国Waters公司);BP211d型电子分析天平(德国赛多利斯公司);超声波发生器(上海吉理超生仪器厂)。
硫酸阿托品对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100040－200510);维U颠茄铝镁片(山东新星药业有限公司，批号为20090918，20091028，20100101);阴性样品(自制);乙腈(色谱醇)，水(超纯水)，三乙胺、冰醋酸、四氢呋喃(分析纯)。
高效液相色谱法测定神农镇痛膏中硫酸阿托品的含量陈晓颙１ꎬ徐玲１ꎬ甘曙光２ꎬ周锐１(１.湖北省食品药品监督检验研究院ꎬ武汉㊀４３００６４ꎻ２.黄石燕舞药业有限公司ꎬ黄石㊀４３５００３)摘㊀要㊀目的㊀建立神农镇痛膏中硫酸阿托品的含量测定方法ꎮ方法㊀采用高效液相色谱法ꎬ选用ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８色谱柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎻ以乙腈￣磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾６.８ｇ溶于１０００ｍＬ水中ꎬ加入三乙胺１０ｍＬꎬ用磷酸调节ｐＨ值至２.８ꎬ７ ９３)为流动相ꎻ检测波长２１０ｎｍꎬ流速１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ柱温３０ħꎮ结果㊀硫酸阿托品在进样量２６１.２~３９１８ｎｇ范围内呈良好的线性关系(ｒ＝０.９９９５)ꎮ平均加样回收率为９８.３％(ＲＳＤ＝１.１６％ꎬｎ＝９)ꎮ结论㊀该方法简便㊁快速㊁专属性强㊁重复性好ꎮ关键词㊀神农镇痛膏ꎻ硫酸阿托品ꎻ色谱法ꎬ高效液相ꎻ含量中图分类号㊀Ｒ９７１.９２ꎻＲ９２７.２㊀㊀㊀文献标识码㊀Ｂ㊀㊀㊀文章编号㊀１００４－０７８１(２０１６)０８－０８７５－０２ＤＯＩ㊀１０.３８７０/ｊ.ｉｓｓｎ.１００４￣０７８１.２０１６.０８.０１８㊀㊀神农镇痛膏是由颠茄流浸膏㊁人工麝香㊁熊胆粉㊁薄荷脑㊁冰片㊁樟脑㊁薄荷脑㊁水杨酸甲酯㊁丁香罗勒油ꎬ乳香㊁没药㊁血竭等二十五味中药ꎬ配以适量氧化锌㊁橡胶㊁松香等基质组成的复方贴膏剂ꎬ具有活血散瘀㊁消肿止痛的功效ꎮ用于跌打损伤ꎬ风湿关节痛ꎬ腰背酸痛ꎮ目前有报道采用高效液相色谱法测定硫酸阿托品的含量ꎬ但２０１５年版«中华人民共和国药典»一部中仅收载了颠茄流浸膏中硫酸阿托品的含量测定方法ꎬ对收载的贴膏剂中并未对其含量进行测定ꎮ颠茄流浸膏的活性较强ꎬ且具有一定毒性ꎬ故应对其制剂中活性成分的含量进行控制ꎬ以保证用药安全ꎮ本实验建立了加热回流提取神农镇痛膏中的硫酸阿托品ꎬ并采用高效液相色谱法对其进行含量测定ꎬ所建立的方法准确可靠㊁专属性强ꎬ可用于该制剂的质量控制ꎮ同时ꎬ本实验建立的提取方法ꎬ可适用于其他贴膏剂中此类生物碱类成分的提取ꎮ１㊀仪器与试药㊀１.１㊀仪器㊀戴安Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００高效液相色谱仪ꎻＫＱ２２００超声波仪(昆山市超声仪器有限公司)ꎻＭＥＴＴＬＥＲ￣ＸＳ分析天平ꎬ感量:０.０１ｍｇꎻＭｉｌｌｉｐｏｒｅ超纯水机ꎮ１.２㊀试药㊀硫酸阿托品对照品(中国食品药品检定研究院ꎬ批号:１０００４０￣２００５１０)ꎻ乙腈为色谱纯ꎬ水为纯化水ꎬ其余试剂均为分析纯ꎻ神农镇痛膏由黄石燕舞药业有限公司提供ꎬ批号:２００８００１ꎬ２００８００２ꎬ２００８００３ꎬ２００９００１ꎬ２００９００２ꎬ２００９００３ꎮ２㊀方法与结果㊀２.１㊀色谱条件㊀色谱柱:ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８色谱柱收稿日期㊀２０１６－０４－２９㊀修回日期㊀２０１５－０５－１９作者简介㊀陈晓颙(１９８４－)ꎬ女ꎬ湖北荆州人ꎬ主管药师ꎬ硕士ꎬ研究方向:药物新剂型与中药质量标准ꎮ电话:０２７－８７２７２５１３ꎬＥ￣ｍａｉｌ:５７２７７１００＠ｑｑ.ｃｏｍꎮ(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎻ流动相为乙腈￣磷酸盐缓冲液(取６.８ｇ磷酸二氢钾溶于１０００ｍＬ水中ꎬ加入１０ｍＬ三乙胺ꎬ用磷酸调节ｐＨ值至２.８)(７ ９３)ꎻ流速:１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎻ检测波长２１０ｎｍꎻ柱温３０ħꎬ进样量２０μＬꎮ理论板数按硫酸阿托品峰计算应不低于４０００ꎮ２.２㊀溶液的制备㊀２.２.１㊀对照品溶液的制备㊀精密称取１２０ħ干燥至恒重的硫酸阿托品对照品５.４４ｍｇꎬ置２５ｍＬ容瓶中ꎬ加适量流动相溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ作为储备液ꎮ精密量取储备液３ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中ꎬ加流动相稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ作为测定硫酸阿托品的对照品溶液ꎮ２.２.２㊀供试品溶液的制备㊀取本品２片ꎬ除去盖衬ꎬ对折ꎬ剪碎ꎬ置２５０ｍＬ烧瓶中ꎬ加０.１％硫酸溶液１００ｍＬꎬ加热回流２ｈꎬ放冷ꎬ滤过ꎬ滤液浓缩至约４０ｍＬꎬ加浓氨试液调ｐＨ值至１２~１３ꎬ置分液漏斗中ꎬ用乙酸乙酯提取４次ꎬ每次２５ｍＬꎬ合并乙酸乙酯提取液ꎬ蒸干ꎬ残渣加流动相溶解并转移至１０ｍＬ量瓶中ꎬ用流动相稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ滤过ꎬ即得ꎮ２.２.３㊀阴性样品溶液的制备㊀取不含颠茄流浸膏的阴性样品ꎬ按 ２.２.２ 项下的方法操作ꎬ即得ꎮ２.３㊀方法学考察㊀２.３.１㊀系统适用性实验㊀分别精密吸取对照品溶液㊁供试品溶液㊁阴性样品溶液各２０μＬꎬ分别注入液相色谱仪ꎬ按 ２.１ 项下色谱条件进行测定得色谱图(图１)ꎬ结果硫酸阿托品峰与邻近峰分离度>１.５ꎬ保留时间约为３２ｍｉｎꎬ阴性样品无干扰ꎮ２.３.２㊀线性关系考察㊀配制浓度为２６.１２ꎬ６５.３０ꎬ１３０.６０ꎬ２６１.２０及３９１.８μｇ ｍＬ－１浓度的硫酸阿托品对照品溶液ꎬ分别进样１０μＬꎬ记录色谱图ꎬ以峰面积为纵坐标(Ｙ)ꎬ硫酸阿托品的进样量(Ｘꎬｎｇ)为横坐５７８医药导报２０１６年８月第３５卷第８期标ꎬ进行线性回归ꎬ得回归方程:Ｙ＝０.２４８Ｘ－０.４０９ꎬｒ＝０.９９９５ꎻ结果表明ꎬ硫酸阿托品溶液在２６１.２~３９１８ｎｇ范围内线性关系良好ꎮ２.３.３㊀精密度实验㊀取对照品溶液重复进样６次ꎬ每次进样量２０μＬꎬ测定其峰面积ꎬ结果ＲＳＤ＝０.０８％(ｎ＝６)ꎬ表明仪器精密度良好ꎮＡ.阴性样品溶液ꎻＢ.对照品溶液ꎻＣ.供试品ꎻ１.硫酸阿托品图１㊀３种溶液高效液相色谱图㊀２.３.４㊀重复性实验㊀取同一供试品(批号:２００９００１)ꎬ照 ２.２.２ 项方法重复制备６份ꎬ依次进样２０μＬꎬ测定其平均含量为每片０.２７３ｍｇꎬＲＳＤ＝０.１５％(ｎ＝６)ꎬ表明重复性良好ꎮ２.３.５㊀稳定性实验㊀取供试品(批号:２００９００１)溶液分别于０ꎬ２ꎬ４ꎬ６ꎬ８ꎬ１０ꎬ１２ｈꎬ进样２０μＬꎬ测定峰面积ꎬＲＳＤ＝０.０９％(ｎ＝６)ꎬ表明供试品溶液在１２ｈ内稳定性良好ꎮ２.３.６㊀加样回收率实验㊀分别取已知含量的样品０.５片㊁１片及１.５片各３份(批号:２００９００１ꎬ硫酸阿托品含量:每片０.２７３ｍｇ)ꎬ分别加入浓度为０.１３０６ｍｇ ｍＬ－１的硫酸阿托品对照品溶液１ꎬ２及３ｍＬꎬ照 ２.２.２ 项下方法制备ꎬ依次进样２０μＬꎬ分别测定硫酸阿托品含量ꎬ并计算回收率ꎬ结果平均加样回收率为９８.３％(ＲＳＤ＝１.１６％ꎬｎ＝９)ꎬ具体测定结果见表１ꎮ２.４㊀样品测定㊀取不同批次(批号:２００８００１ꎬ２００８００２ꎬ２００８００３ꎬ２００９００１ꎬ２００９００２ꎬ２００９００３)的样品照 ２.２.２ 方法制备供试品溶液ꎬ进样２０μＬꎬ分别测定峰面积ꎬ计算硫酸阿托品含量ꎮ结果依次为每片０.２８３ꎬ０.２８０ꎬ０.２８１ꎬ０.２７３ꎬ０.２７４ꎬ０.２７２ｍｇꎮ２.５㊀含量限度的测定㊀综合此次收集样品测定的含量ꎬ参考２０１５年版«中华人民共和国药典»一部中颠茄流浸膏原料的含量限度值拟定限度ꎮ以最低限度６.６ｍｇ ｍＬ－１ꎬ相对密度１.０９投料ꎬ按照转移率８０％拟定含量限度ꎬ拟定限度值为每１００ｃｍ２含颠茄流浸膏以硫酸阿托品[(Ｃ１７Ｈ２３ＮＯ３)２ Ｈ２ＳＯ４]计ꎬ不得少于０.３１ｍｇꎮ表１㊀硫酸阿托品加样回收率实验结果㊀原有量加入量测得量ｍｇ平均回收率/％０.１３６５０.１３０６０.２６３７９７.４００.１３６５０.１３０６０.２６２２９６.２５０.１３６５０.１３０６０.２６６６９９.６２０.２７３００.２６１２０.５２７７９７.５１０.２７３００.２６１２０.５３００９８.３９０.２７３００.２６１２０.５３１２９８.８５０.４０９５０.３９１８０.８００１９９.６９０.４０９５０.３９１８０.７９８３９９.２３０.４０９５０.３９１８０.７９４１９８.１６３㊀讨论㊀３.１㊀样品的前处理㊀本实验同时考察过直接采用乙酸乙酯回流提取ꎬ乙醇回流提取[１]及盐酸￣乙醇混合溶液回流提取等提取方法ꎬ均不能很好地去除基质ꎬ消除干扰ꎮ现采用０.１％硫酸溶液回流提取ꎬ加浓氨试液调ｐＨ值后ꎬ用乙酸乙酯提取的方法ꎬ现有方法能够很好地去除有关杂质峰ꎬ并使颠茄流浸膏中硫酸阿托品提取完全ꎬ保证含量测定的稳定性ꎮ并对提取溶剂用量及萃取次数进行了考察ꎬ最终确定了供试品的提取方法ꎮ３.２㊀流动相的选择㊀本实验先后考察了１０ｍｍｏｌ Ｌ－１庚烷磺酸钠液(用冰醋酸调ｐＨ值至３.３)￣乙腈￣无水乙醇(６６ ２８ ６)㊁乙腈￣０.１％磷酸㊁０.０１ｍｏｌ Ｌ－１庚烷磺酸钠溶液－乙晴(７０ ２５)等流动相体系[２￣４]ꎮ结果表明此３种体系分离效果不理想ꎬ均不能使主峰与杂质完全分离ꎬ最后参考２０１０年版«中华人民共和国药典»一部中 颠茄流浸膏 项下方法ꎬ最终确定流动相为:乙腈￣磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾６.８ｇ溶于１０００ｍＬ水中ꎬ加入三乙胺１０ｍＬꎬ用磷酸调节ｐＨ值至２.８ꎬ７ ９３)ꎮ参考文献[１]㊀李鹏ꎬ李志浩ꎬ孙新建.活血止痛膏质量标准研究[Ｊ].医药导报ꎬ２００８ꎬ２７(１１):１３９３－１３９４.[２]㊀贾晓斌ꎬ刘齐ꎬ韦英杰ꎬ等.ＲＰ￣ＨＰＬＣ双波长同时测定关节止痛膏中硫酸阿托品㊁盐酸苯海拉明㊁辣椒碱和二氢辣椒碱的含量[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１０ꎬ３５(２１):２８３８－２８４１.[３]㊀姜家书ꎬ石国明ꎬ孔泉ꎬ等.ＨＰＬＣ法测定颠茄流浸膏中硫酸阿托品的含量[Ｊ].河南中医ꎬ２０１０ꎬ３０(３):２４５－２４６.[４]㊀韩忠刚ꎬ冯华ꎬ罗秀琼.ＨＰＬＣ色谱法测定颠茄浸膏片中硫酸阿托品的含量[Ｊ].中医药导报ꎬ２００８ꎬ１４(９):７８－８３.６７８ ＨｅｒａｌｄｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＶｏｌ ３５Ｎｏ ８Ａｕｇｕｓｔ２０１６。
