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➢ 用作样品稀释的液体,每批都要有空白对照. ➢ 检样的稀释液可以用灭菌生理盐水或蒸馏水,
最好使用磷酸缓冲液.
精品课件
菌落总数测定
测定过程中的一些要求和规定 (二)检样稀释
➢ 检样稀释时应以无菌手续称取(或量取)有代表性的样 品,经充分振摇混匀后作成1:10的稀释液.
➢ 根据检样的具体情况,做几个适当的10倍递增稀释液. 注意每递增稀释一次,必须换一支灭菌吸管.
11
5
--
270 270或2.7×102
6
0
0
0
-- <1×10
<10
7 多不可计 305
12
--
30500 31000或3.1×104
精品课件
菌落总数测定
注意事项: ➢ 如果稀释度大的平板上菌落数反而比稀释度小
的平板上菌落数高,则系检验过程中的差错,也 可能是抑菌剂混入样品所致,均不可用作菌落 计数的依据. ➢ 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜 采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀 释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而 其余一半中菌落分布又很均匀,则可计算半个 平板后乘2以代表全皿菌落数.
报告方式/ [cfu/g (ml)]
16400 16000或1.6×104
2 多不可计 295 3 多不可计 271
46 1.6 60 2.2
37750 27100
38000或3.8×104 27000或2.7×104
4 多不可计 多不可计 313
--
313000 313000或3.1×105
5 27
精品课件
大肠菌群测定
检验方法 ➢ 乳糖发酵实验.以无菌操作采取样品,作几个10
倍递增稀释液,选取3个适宜的稀释度接种乳糖 胆盐发酵管,每个稀释度接种三管,36±1℃培 养24±2h. 若都不产气,可报告为大肠菌群阴 性,如有产气者,按下列程序进行. ➢ 分离培养. 将产气的发酵管分别转种在伊红 美蓝琼脂平板上, 36±1℃培养24±2h,取出后 观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实实验.
露的时间应与该检样从制备,稀释到加入平皿时所用的最长时间相 当,然后与加有检样的平皿一并置于温箱内培养. ➢ 培养温度应根据食品种类而定.
精品课件
菌落总数测定
测定过程中的一些要求和规定 (四) 对照试验
➢ 加入平皿内的检样稀释液,有时带有食品颗粒了避 免混淆,可做一检样稀释液与琼脂混合的平皿,不经培 养,而于4℃环境中放置,以便在计数时做对照.
精品课件
大肠菌群测定
检验方法 ➢ 证实实验. 在伊红美蓝琼脂平板上挑取1~2个
菌落总数主要作为判定食品被污染程度 的标志,也可以观察细菌在食品中繁殖的动态, 以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据.
精品课件
菌落总数测定
• cfu:colony-forming units 菌落形成 单位,一个细菌在平板计数琼脂培养基 上生长形成肉眼可见的菌落。
精品课件
菌落总数测定
检样
做成几个适当倍数的稀释液
➢ 为了防止检样中食品颗粒与菌落混淆,也可在已溶化而 保温于45 ℃水浴内的琼脂中,每100ml加入1ml 0.5%氯 化三苯四氮唑(TTC)水溶液.培养后,如系食品颗粒,不 见变化,如为细菌,则生成红色菌落.
精品课件
菌落总数测定
➢ 菌落计数 选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总
数测定标准.一个稀释度使用两个平板,应采用 两个平板平均数. ➢ 菌落数的报告
选择2—3个适宜稀释度,各取1ml分别加入灭菌平皿内
每皿内加入适量营养琼脂,36℃±1℃培养48h±2h
菌落计数 报 告精品课件
整个操作过程都要在 无菌状态下进行
菌落总数测定
测定过程中的一些要求和规定 (一) 所用器皿和稀释液
➢ 检验中所用器皿必须是完全灭菌的,在灭菌前 应洗刷干净,不得残留抑菌物质.
精品课件
基本内容
➢ 菌落总数测定 ➢ 大肠菌群测定 ➢ 霉菌和酵母菌计数 ➢ 罐头食品商业无菌的检验 ➢ 乳酸菌饮料中乳酸菌检验 ➢ 涂抹试验和空降试验
精品课件
大肠菌群测定
术语和定义 ➢ 大肠菌群系指一群能发酵乳糖,产酸产
气,需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢 杆菌.该菌主要来源于人畜粪便,故以此 作为粪便污染指标来评价食品的卫生质 量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可 能. ➢食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内 大肠菌群最可能数(MPN)表示.
食品微生物学检验
徐州质检所
精品课件
基本内容
➢ 菌落总数测定 ➢ 大肠菌群测定 ➢ 霉菌和酵母菌计数 ➢ 罐头食品商业无菌的检验 ➢ 乳酸菌饮料中乳酸菌检验 ➢ 涂抹试验和空降试验
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菌落总数测定
➢ 定义 食品检样经过处理,在一定条件下培养后
(如培养基成分,培养温度和时间,PH,需氧性质 等),所得1ml(g)检样中所含菌落的总数.本方 法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在 营养琼脂上生长发育的嗜中温需氧的菌落总数。 ➢ 意义
➢ 稀释过程中要注意无菌操作,防止在稀释过程中受到外 界的污染.
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菌落总数测定
测定过程中的一些要求和规定
(三) 平板接种和培养
➢ 将稀释液加入灭菌平皿内时,应选择2-3个适宜稀释度,在作10倍递 增稀释的同时,吸取1ml加入平皿内.
➢ 营养琼脂应预先加热融化,保温于45℃左右的恒温水浴中待用. ➢ 检液加入平皿后,应在20分钟内倾入营养琼脂,并立即混合均匀. ➢ 琼脂凝固后,应在数分钟内翻转培养,这样可以避免菌落蔓延生长. ➢ 为了控制污染,在检验的同时,于工作台上打开一块琼脂平板,其暴
精品课件
菌落总数测定
注意事项: ➢ 平板内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显
界限),若仅有一条链,可视为一个菌落;如果有 不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌 落计. ➢ 如果所有平板上都菌落密布,不要用多不可计 作报告,而应在稀释度最大的平板上任意数 2cm2中的菌落数,然后换算到整个平皿,再乘以 稀释倍数报告.
菌落数在100以内时,按其实有数报告;大于 100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后 面的数值,以四舍五入方法计算.为了缩短数字 后面的零数,也可以用10的指数来表示.
精品课件
菌落总数测定
➢稀释度的选择
稀释液及菌落数
两稀释
例 次
10-1
10-2
10-3 液之比
1 多不可计 164
20
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菌落总数/ [cfu/g(ml)]