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• 培养基46±1ºC水浴 保温。
• 倾注前先加TTC于营 养琼脂中,加入量比 例为1ml/1L。
• 小心旋转培养皿勿将 培养基溢出。
菌落总数测定
• 琼脂凝固后,翻转 平板,置36 ±1ºC 温箱内培养48 ±2h.
• 若有太多水珠在皿盖 上,应先倒置打开, 以免湿度大使菌成片 状生长。
菌落总数测定ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 乳糖发酵管36 ±1ºC下培养24 ±2h -----不产气------大肠菌群阴性------报 告
大肠菌群测定
• 革兰氏染色------呈现阴性 • 乳糖发酵管36 ±1ºC下培养24 ±2h ------
产气------大肠菌群阳性------报告
沙门氏菌检验
• 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性,最适生 长温度37 ºC,对营养要求不高,能在普通 培养基上生长.
• 同一来源的链状菌落 作为一个菌落。
霉菌、酵母菌计数
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择3个适宜稀释度,各取1ml分别加入灭 菌培养基内------每皿内加入适量培养基----- 25~28ºC下培养5d ------菌落计数-----报告
菌落总数PK霉菌、酵母菌
• 营养琼脂
• 报告表示:100mg(ml)检样内大肠菌 群最可能数(MPN)
大肠菌群测定
• 检样------稀释------乳糖胆盐发酵管9支 36 ±1ºC下培养24 ±2h ------不产气-----大肠菌群阴性
产气------分离培养
大肠菌群测定
• 以无菌操作将检样25g(ml)加入225ml 灭菌生理盐水中,充分振摇或使用匀浆 机制成1:10的均匀稀释液。吸取1ml该 稀释液沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理 盐水中,混合均匀,制成1:100的稀释 液。
中,每个稀释级做 两个平行样,
• 如果需要乳化剂,样品与 乳化剂先混匀后,再加入 稀释剂。
• 吸取前先用刻度吸管反 复吸取供试液1-2次,每做 一个稀释级都要换用1支 1ml灭菌刻度吸管。
菌落总数测定
• 用1ml灭菌刻度吸 管吸取空白稀释液 1ml于培养皿中, 作空白对照。
菌落总数测定
• 将凉至46ºC的营 养琼脂培养基注 入培养皿,每个 约15ml,轻轻转 动培养皿使混合 均匀。
• 培养温度36±1ºC • 培养时间48±2h • 菌落数选择30~300/
皿
• 马铃薯-葡萄糖琼脂 培养基附加抗菌素或 孟加拉红培养基或高 盐察氏培养基
• 25ºC~28ºC • 3d后开始观察,培养
5d • 10~150 /皿
大肠菌群测定
• 大肠菌群是一群在37ºC能发酵乳糖、在 24h内产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。
• 选择菌落数在 30~300之间的平板 进行计数,两个平 板的平均数乘以稀 释倍数报告。
• 平板菌落均数在15以 下:0~4,1~7,2~9,3~10,4~1 2,5~14,6~15,7~17,8~18,9 ~19,10~20.
• 有较大片状菌落生长 的平板不宜采用
• 片状菌落不到平板的 一半而其余一半中菌 落分布均匀,计算半 个平板后乘以2计数。
菌落总数测定
• 在一定条件(如培养成分、培养温度和 时间、PH、需氧性质等)下培养后,所 得1ml(g)检样中所含菌落的总数。所 得结果只包括一群在营养琼脂上生长发 育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数测定
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择2个或3个适宜稀释度,各取1ml分别加 入灭菌培养基内------每皿内加入适量营 养琼脂培养基------ 36 ±1ºC下培养48 ±2h ------菌落计数------报告
沙门氏菌检验
• 取增菌液1环,划线接种于一个亚硫酸铋琼 脂平板和一个DHL琼脂平板(或HE琼脂 平板、WS或SS琼脂平板)。两种增菌液 可同时划线接种在同一平板上。于36 ±1ºC培养18-24h。
沙门氏菌检验
• 观察各个平板上有 无菌落生长,若无 则未检出沙门菌;
• 若有,观察菌落特 征,做进一步生化 试验。
沙门氏菌检验
• 以无菌操作将检样25g(ml)加入225ml 灭菌缓冲蛋白胨水中,充分混合供试液,于 36 ±1ºC培养4h,
沙门氏菌检验
• 移取10ml,转种于100ml氯化镁孔雀绿增 菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内,于42ºC培 养18h~24h,同时,另取10ml,转种亚硒酸胱 氨酸增菌液内,于36 ±1ºC培养18h~24h.
大肠菌群测定
• 取6支单料乳糖胆 盐培养基,3支接 种1:10稀释液,3 支接种1:100稀释 液,每支1ml。
• 取3支双料乳糖胆 盐培养基,每支分 别接种1:10稀释 液10ml。
大肠菌群测定
• 接种后置36 ±1ºC温箱中培养24 ±2h。
• 所有乳糖胆盐发酵管都不产气,报告为 大肠菌群阴性。若有产气者,需进行分 离培养。
大肠菌群测定
• 将产气的发酵管转种于伊红美兰琼脂培 养基平板上, 36 ±1ºC温箱中培养24 ±2h, 若无菌落生长,则判断大肠菌群阴性,若有 菌落生长,观察其形态,并挑起可疑菌落进 行革兰氏染色和证实试验.
•
划板的格式
大肠菌群测定
• 革兰氏染色------呈现阳性------大肠 菌群阴性------报告
菌落总数测定
• 以无菌操作将检样 25g(ml)加入225ml 灭菌生理盐水中,充 分振摇或使用匀浆机 制成1:10的均匀稀 释液。然后吸取该稀 释液1ml沿试管壁徐 徐注入含有9ml灭菌 生理盐水的试管中, 混合均匀,制成1: 100的稀释液。
菌落总数测定
• 用1ml刻度吸管分 别吸取 1:10稀释 液1ml,1:100稀释 液1ml注于培养皿
志贺氏菌检验
• 兼性厌氧的革兰氏阴性,最适生长温度 37 ºC,对营养要求不高,能在普通培养基 上生长.
食品卫生微生物限度检验
GB/T 4789--2003
微生物限度检验
• 试验中所有涉及到的用具,试剂,培养基,都 必须经过灭菌.
• 干热灭菌:160°C,2h • 湿热灭菌:视灭菌物品而定
食品卫生微生物限度检验
• 菌落总数测定 • 霉菌和酵母菌计数 • 大肠菌群测定 • 沙门氏菌检验 • 志贺氏菌检验 • 金黄色葡萄球菌检验 • 溶血性链球菌检验