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生物选修1知识点整理微生物的实验室培养一、基础知识（一）培养基1、概念：按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2、种类：液体培养基、固体培养基（需加入凝固剂琼脂），微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落3、成分：一般都含有碳源、氮源、水、无机盐四类物质。
4、注意：在提供上述几种主要营养物质的基础上，还需要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素；培养厌氧微生物时则需要提供无氧条件；培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性；培养细菌时需将培养基的pH调至中性或微碱性。
（二）无菌技术消毒：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子对培养细菌用的培养基与培养皿、玻棒、试管、烧瓶和吸管常用需要灭菌，常用的方法是高压蒸汽灭菌法；接种环、接种针用灼烧灭菌法灭菌；而对实验操作者的双手则用酒精消毒二、实验操作1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（计算→称量→溶化→灭菌→倒平板）2、纯化大肠杆菌：常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法（平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
在数次划线后培养，可分离到由一个细胞繁殖而来的菌落；稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。
在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落）。
3、培养、观察：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱中培养12h和24h 后，分别观察并记录结果。
（菌落的颜色、形状和大小等）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、基础知识（一）筛选菌株1、实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH 等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。
新人教版2018-2019学年高二生物选修1专题2课题1微生物的实验室培养一、培养基1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
2．种类：(按物理性质分)3．营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH 、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、无菌技术1．获取纯净培养物的方法获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下： (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2．消毒和灭菌 (1)概念：[填表]1.培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质。
2．消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3．实验室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用紫外线或化学药剂进行消毒，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。
4．固体培养基的配制过程为：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板。
5．微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
6．长期保存菌种可以采用甘油管藏法。
(2)常用方法：[连线]三、大肠杆菌的纯化培养1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)操作步骤：计算称量→溶化灭菌倒平板(2)倒平板的方法及注意事项：①请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
②甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
③丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。
2．纯化大肠杆菌(1)纯化原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
(2)接种方法：①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
微生物的实验室培养基础梳理一、微生物的营养1．碳源2．氮源【注意】①对许多微生物来说，既可利用无机含氮化合物作为氮源，也可利用有机含氮化合物作为氮源。
②固氮微生物可以利用氮气作为氮源。
③铵盐、硝酸盐等既可作为微生物最常用的氮源，也可作为某些化能自养微生物的能源物质。
④自养微生物与异养微生物类型的划分主要是依靠能否以CO2作为生长的主要或唯一的碳源，而不是由氮源决定。
3．水水是微生物生命活动必需的一种重要物质。
4．无机盐无机盐对微生物的生理功能有：构成微生物细胞的组成成分；作为酶的组成成分，也是某些酶的激活剂；调节和维持微生物细胞的渗透压和pH；某些无机盐具有特殊功能，如化能自养细菌的能源物质NH4+等。
5．生长因子6．其他条件培养微生物时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、培养基1．培养基的概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供适合其生长繁殖的营养基质。
2．配制原则目的要明确；营养要协调；pH要适宜；要经济节约。
3．培养基的类型（1）按物理性质分：（2）按化学性质分：（3）按功能分：①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效地避免操作者自身被微生物感染。
②培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板。
操作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基。
③平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，若将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
④在倒平板的过程中，不能将培养基溅到皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
三、无菌技术1．无菌技术的主要内容①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
【优化设计】2018-2019学年高中生物专题2 课题1 微生物的实验室培养课后习题（含解析）新人教版选修1课时演练·促提升1.含C、H、O、N的大分子有机化合物可以作为( )A.异养微生物的氮源、能源B.异养微生物的碳源、能源C.自养微生物的碳源、氮源、能源D.异养微生物的碳源、氮源、能源解析:含C、H、O、N的大分子有机化合物一般是蛋白质,因此可给异养微生物提供碳源、氮源、能源。
答案:D2.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是( )①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A.⑤③②①④⑥B.①②③④⑤⑥C.⑥②③④①⑤D.③④②①⑥⑤解析:培养基用高压蒸汽灭菌;培养皿能耐高温,用干热灭菌;接种环可通过灼烧灭菌达到迅速、彻底的灭菌效果;实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒,如用酒精擦拭双手;空气可用紫外线消毒;牛奶可采用巴氏消毒法,使营养成分不被破坏。
答案:A3.下列说法正确的是( )A.为微生物的生长繁殖提供营养基质的是固体培养基B.培养基只有两类:液体培养基和固体培养基C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D.微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的菌落解析:培养基是微生物生长繁殖的营养基质,根据培养基的物理性质不同,可将培养基分成固体培养基、液体培养基和半固体培养基;液体培养基不加凝固剂。
答案:D4.三个培养皿中分别加入10 mL不同的培养基,然后接种相同的大肠杆菌样液。
培养36 h后,计算菌落数,结果如表所示。
下列选项错误的是( )培养皿培养基成分菌落数Ⅰ琼脂、葡萄糖35Ⅱ琼脂、葡萄糖、生长因子250Ⅲ琼脂、生长因子0A.该实验采用的是固体培养基B.该实验可采用稀释涂布平板法接种C.Ⅰ和Ⅲ对照,说明大肠杆菌的生长不需要生长因子D.Ⅱ和Ⅲ对照,说明大肠杆菌的生长需要糖类解析:培养基中均加入了琼脂,故为固体培养基;微生物接种的方法很多,最常用的是平板划线法或稀释涂布平板法;Ⅰ组和Ⅲ组存在两个变量,不能说明大肠杆菌的生长是否需要生长因子;Ⅱ组和Ⅲ组对照,自变量是葡萄糖的有无,说明大肠杆菌的生长需要糖类。
选修一专题二课题1微生物的实验室培养考点一培养基1、概念？种类？在液体培养基中加入？后可以制成固体培养基2、琼脂的来源？本质？特性？（P14最左侧）3、培养基一般都含有哪些成分？4、培养基在提供主要营养物质的基础上，还需要满足微生物生长的哪些要求？培养乳酸菌时需要添加？培养霉菌是需要将PH调至？培养细菌是需将PH调至？考点二无菌技术1、获得纯净培养物的关键是？2、如何避免杂菌的污染？3、消毒的概念？常用的消毒方法有哪些？4、灭菌的概念？常用的灭菌方法有哪三种？5、灼烧灭菌的对象A:微生物的接种工具，如？直接在酒精灯火焰的？灼烧B:在接种过程中，？等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌6、干热灭菌的条件？对象？干热灭菌过程中灭菌对象要用？包裹严密（附录4）灭菌物品为什么不能与干热灭菌箱内壁的铁板接触？（附录4）7、高压蒸汽灭菌的条件？过程？（附录4）对象：如培养基8、除了消毒和灭菌，实验室里还可以用？方法进行消毒考点三制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1、步骤？2、灭菌过程中用什么方法？3、倒平板时的温度是？过程？倒平板后平板倒置的原因？（即可防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发）考点四纯化大肠杆菌1、微生物接种的方法最常用的有？2、菌落的概念？3、平板划线法的概念？操作过程？用的工具？（接种环）4、稀释涂布平板法的概念？过程？用的工具？（涂布器）5、大肠杆菌的培养温度？是否需要设置空白对照？（P20最上）对照组有菌落生长说明什么？6、为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，对于频繁使用的菌种可以采用？方法。
具体过程？此方法的缺点？对于需要长期保存的菌种，可以采用？方法。
课题1微生物的实验室培养一、培养基1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
2．种类：按照培养基的物理状态划分为液体培养基和固体培养基。
3．营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。
二、无菌技术1．无菌操作获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2．消毒和灭菌(1)消毒①概念：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。
②常用的方法有煮沸消毒法和化学药剂消毒法。
(2)灭菌①概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。
②常用的方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。
三、大肠杆菌的纯化培养 1．制备固体培养基的步骤计算溶化→倒平板 2．纯化大肠杆菌微生物接种的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
(1)平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
(2)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
四、菌种保存(阅读教材P20)1．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
2．对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
1．培养基下面是察氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分，根据下表，回答下列问题：1．培养基的作用是什么？根据形态分为哪几种？其营养成分有哪些？2．区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。
3．如何制备牛肉膏蛋白胨固体培养基？ 4．什么是平板划线法，如何操作？ 5．什么是稀释涂布平板法，如何操作？ 6．菌种保藏有哪些方法？该培养基根据物理性质划分应是固体培养基，原因是该培养基中加入了凝固剂琼脂。
【生物】高中生物选修1知识点总结1.来自空气中的毛霉孢子；2.直接接种优良毛霉菌种时间:5天加盐腌制:将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中,同时逐层加盐,随着层数的加高而增加盐量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些.加盐腌制的时间约为8天左右.用盐腌制时,注意控制盐的用量:盐的浓度过低,不足以抑制微生物的生长,可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味食盐的作用:1.抑制微生物的生长,避免腐败变质；2.析出水分,是豆腐变硬,在后期制作过程中不易酥烂； 3.调味作用,给腐乳以必要的咸味；4.浸提毛酶菌丝上的蛋白酶.配制卤汤:卤汤直接关系到腐乳的色、香、味.卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的.卤汤中酒的含量一般控制在12%左右.酒的作用:1.防止杂菌污染以防腐； 2.与有机酸结合形成酯,赋予腐乳风味；3.酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系,酒精含量越高,对蛋白酶的抑制作用也越大,使腐乳成熟期延长；酒精含量过低,蛋白酶的活性高,加快蛋白质的水解,杂菌繁殖快,豆腐易腐败,难以成块.香辛料的作用:1.调味作用；2.杀菌防腐作用；3.参与并促进发酵过程防止杂菌污染:①用来腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷干净后要用沸水消毒；②装瓶时,操作要迅速小心.整齐地摆放好豆腐、加入卤汤后,要用胶条将瓶口密封.封瓶时,最好将瓶口通过酒精灯的火焰,防止瓶口被污染.课题三制作泡菜制作泡菜所用微生物是乳酸菌,其代谢类型是异养厌氧型.在无氧条件下,降糖分解为乳酸.分裂方式是二分裂.反应式为:,含抗生素牛奶不能生产酸奶的原因是抗生素杀死乳酸菌.常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌.乳酸杆菌常用于生产酸奶.亚硝酸盐为白色粉末,易溶于水,在食品生产中用作食品添加剂.膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康,国家规定肉制品中不超过30mg/kg,酱腌菜中不超过20mg/kg,婴儿奶粉中不超过2mg/kg.亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外,但在适宜ph、温度和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺.一般在腌制10天后亚硝酸盐含量开始降低,故在10天之后食用最好.测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与n-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料,与已知浓度的标准显色液目测比较,估算泡菜中亚硝酸盐含量.专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养培养基:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质,是进行微生物培养的物质基础.培养基按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基.在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖,在配制培养基中用作凝固剂）后,制成琼脂固体培养基.微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落.根据菌落的特征可以判断是哪一种菌.液体培养基应用于工业或生活生产,固体培养基应用于微生物的分离和鉴定,半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等.按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基.合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成,其中成分的种类比例明确,常用于微生物的分离鉴定.天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成,常用于实际工业生产.按照培养基的用途,可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基.选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微生物的生长.鉴别培养基是根据微生物的特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的,用以鉴别不同类别的微生物.培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等.碳源:能为微生物的代谢提供碳元素的物质.如co2、nahco3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源.异养微生物只能利用有机碳源.单质碳不能作为碳源.氮源:能为微生物的代谢提供氮元素的物质.如n2、nh3、no3-、nh4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等.只有固氮微生物才能利用n2.培养基还要满足微生物生长对ph、特殊营养物质以及氧气的要求.例如,培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素,培养霉菌时须将培养基的ph调至酸性,培养细菌是需要将ph调至中性或微碱性,培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,要注意以下几个方面:①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒.②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌.③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行.④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触.消毒与灭菌的区别:消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）.消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒.灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子.灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌.灭菌方法:①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱；③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅；④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯.比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭较为温和部分生活状态的微生物全部微生物制作牛肉膏蛋白胨固体培养基:（1）方法步骤:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板.（2）倒平板操作的步骤:①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞.②右手拿锥形瓶,将瓶口迅速通过火焰.③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基（约10～20ml）倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖.④等待平板冷却凝固,大约需5～10min.然后,将平板倒过来放置,使培养皿盖在下、皿底在上.倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后,需要冷却到50℃左右时,才能用来倒平板.你用什么办法来估计培养基的温度？提示:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基.3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置？答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染.4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物.纯化大肠杆菌:（1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法.（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作.将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养.分为系列稀释操作和涂布平板操作两步.（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是:使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种.（5）平板划线法操作步骤:①将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红.②在火焰旁冷却接种环,并打开棉塞.③将试管口通过火焰.④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液.⑤将试管通过火焰,并塞上棉塞.⑥左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖.注意不要划破培养皿.⑦灼烧接种环,待其冷却后,从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线.重复以上操作,在三、四、五区域内划线.注意不要将最后一区的划线与第一区相连.⑧将平板倒置放入培养箱中培养.平板划线操作的讨论:1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落.划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者.2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线？答:以免接种环温度太高,杀死菌种.3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落.（6）涂布平板操作的步骤:①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中.②取少量菌液,滴加到培养基表面.③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却8～10s.④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面.涂布平板操作的讨论:涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行.结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一想,第2步应如何进行无菌操作？例如,酒精灯与培养皿的距提示:应从操作的各个细节保证“无菌”．离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等.菌种的保存:（1）对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法.①临时保藏方法将菌种接种到试管的固体斜面培养基上,在合适的温度下培养.当菌落长成后,将试管放入4℃的冰箱中保藏.以后每3～6个月,都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上.②缺点:这种方法保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异.（2）对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法.在3ml的甘油瓶中,装入1ml甘油后灭菌.将1ml培养的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混匀后,放在－20℃的冷冻箱中保存.课题二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数尿素是一种重要的农业氮肥,尿素并不能直接被农作物吸收.只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后,才能被植物利用.土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为他们能合成脲酶.尿素最初是从人的尿液中发现的.筛选菌株:（1）实验室中微生物的筛选应用的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、ph 等）,同时抑制或阻止其他微生物生长.（2）选择性培养基在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基.（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的.例如,培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素,可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等.统计菌落数目:（1）测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数.（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理.当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活细菌.为了保证结果准确,一般设置3～5个平板,选择菌落数在30～300的平板进行计数,并取平均值.统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,因此,统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示.采用此方法的注意事项:1、一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数2、为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入ttc3、本法仅限于形成菌落的微生物设置对照:设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度.对照实验是指除了被测试的条件以外,其他条件都相同的实验,其作用是比照试验组,排除任何其他可能原因的干扰,证明确实是所测试的条件引起相应的结果.实验设计:实验设计包括实验方案,所需仪器、材料、用具和药品,具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排.（1）土壤取样:同其他生物环境相比,土壤中的微生物,数量最大,种类最多.在富含有机质的土壤表层,有更多的微生物生长.从富含有机物、潮湿、ph≈７的土壤中取样.铲去表层土,在距地表约3～8cm的土壤层取样.（2）样品的稀释:样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目.在实际操作中,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板.测定土壤中细菌的数量,一般选用104105106测定放线菌的数量,一般选用103104105测定真菌的数量,一般选用102103104（3）微生物的培养与观察不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间.细菌30~37℃,1~2天；放线菌25~28℃,5~7天；霉菌25~28℃,3~4天每隔24小时统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目.一般来说,在一定的培养条件下（相同的培养基、唯独及培养时间）,同种微生物表现出稳定的菌落特征.课题三分解纤维素的微生物的分离纤维素,一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物,是地球上含量最丰富的多糖类物质.纤维素与纤维素酶:（1）棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物,木材、作物秸秆等也富含纤维素.（2）纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即c1酶、cx酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖.纤维素最终被水解成葡萄糖,为微生物的生长提供营养.纤维素分解菌的筛选:（1）筛选方法:刚果红染色法.能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选.（2）刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理:刚果红是一种染料,它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应.当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物.当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红－纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈.这样,我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌.分离分解纤维素的微生物的实验流程:土壤取样→选择培养（此步是否需要,应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落（1）土壤采集选择富含纤维素的环境.（2）刚果红染色法分离纤维素分解菌的步骤倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板（3）刚果红染色法种类一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应,另一种是在倒平板时就加入刚果红.课题延伸:对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选后,只是分离纯化的第一步,为确定得到的是纤维素分解菌,还需要进行发酵产纤维素酶的实验,纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种.纤维素酶的测定方法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定.专题三植物的组织培养技术课题一菊花的组织培养植物组织培养的基本过程:细胞分化:在生物个体发育过程中,细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程.离体的植物组织或细胞,在培养了一段时间以后,会通过细胞分裂,形成愈伤组织,愈伤组织的细胞排列疏松而无规则,是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞.由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化,或者叫做去分化.脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化.再分化形成的试管苗,移栽到地里,可以发育成完整的植物体.植物细胞工程:具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞,都具有发育成完整个体的能力,即每个生物细胞都具有全能性.但在生物体的生长发育过程中并不表现出来,这是因为在特定的时间和空间条件下,通过基因的选择性表达,构成不同组织和器官.植物组织培养技术的应用有:实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等.细胞分化是一种持久性的变化,它的生理意义是:使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化,有利于提高各种生理功能的效率.比较根尖分生组织和愈伤组织的异同:影响植物组织培养的条件:材料:不同的植物组织,培养的难易程度差别很大.植物材料的选择直接关系到试验的成败.植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果.菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料.一般来说,容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养.选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好,容易诱导脱分化和再分化.营养:离体的植物组织和细胞,对营养、环境等条件的要求相对特殊,需要配制适宜的培养基.常用的培养基是ms培养基,其中含有的大量元素是n、p、s、k、ca、mg,微量元素是fe、mn、b、zn、cu、mo、i、co,有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等.激素:植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素.在生长素存在的情况下,细胞分裂素的作用呈现加强趋势.在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素,其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果.使用顺序实验结果先生长素,后细胞分裂素有利于分裂但不分化先细胞分裂素,后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高生长素／细胞分裂素比值与结果比值高时促根分化,抑芽形成比值低时促芽分化,抑根形成比值适中促进愈伤组织生长环境条件:ph、温度、光等环境条件.不同的植物对各种条件的要求往往不同.进行菊花的组织培养,一般将ph控制在5.8左右,温度控制在18~22℃,并且每日用日光灯照射12h.操作流程:配制ms固体培养基:配制各种母液:将各种成分按配方比例配制成的浓缩液（培养基母液）.使用时根据母液的浓缩倍数,计算用量,并加蒸馏水稀释.配制培养基:应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液,并用蒸馏水定容到1000毫升.在菊花组织培养中,可以不添加植物激素.原因是菊花茎段组织培养比较容易.灭菌:采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌.ms培养基中各种营养物质的作用是什么？与肉汤培养基相比,ms 培养基有哪些特点？答:大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源,维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求.微生物培养基以有机营养为主,ms培养基则需提供大量无机营养.外植体的消毒:外植体:用于离体培养的植物器官或组织片段.选取菊花茎段时,要取生长旺盛的嫩枝.菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉,用软刷轻轻刷洗,刷洗后在流水下冲洗20min左右.用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分,放入体积分数为70%的酒精中摇动2~3次,持续6~7s,立即将外植体取出,在无菌水中清洗.取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分,放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中1~2min.取出后,在无菌水中至少清洗3次,漂洗消毒液.注意:对外植体进行表面消毒时,就要考虑药剂的消毒效果,又要考虑植物的耐受能力.接种:接种过程中插入外植体时形态学上端朝上,每个锥形瓶接种7～8个外植体.外植体接种与细菌接种相似,操作步骤相同,而且都要求无菌操作.培养:应该放在无菌箱中进行,并定期进行消毒,保持适宜的温度（18~22℃）和光照（12h）.移栽:栽前应先打开培养瓶的封口膜,让其在培养间生长几日,然后用流水清洗根部培养基.然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间,进行壮苗.最后进行露天栽培.栽培:外植体在培养过程中可能会被污染,原因有外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等.专题二月季的花药培养被子植物的花粉发育被子植物的雄蕊通常包含花丝、花药两部分.花药为囊状结构,内部含有许多花粉.花粉是由花粉母细胞经过减数分裂而形成的,因此,花粉是单倍体的生殖细胞.被子植物花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核期和双核期等阶段.在小孢子四分体时期,4个单倍体细胞连在一起,进入单核期时,四分体的4个单倍体细胞彼此分离,形成4个具有单细胞核的花粉粒.这时的细胞含浓厚的原生质,核位于细胞的中央（单核居中期）.随着细胞不断长大,细胞核由中央移向细胞一侧（单核靠边期）,并分。
人教版高级高中生物选修一专题二微生物的培养与应用知识点归纳文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
高二生物选修一专题二：微生物的培养和应用考点一 微生物的实验室培养(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。
此外，还需要满足微生物生长对pH 、氧气以及特殊营养物质的要求。
(3)分类⎩⎪⎨⎪⎧固体培养基：含凝固剂液体培养基：不含凝固剂2.无菌技术(1)关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)不同对象的无菌操作方法3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(2)纯化大肠杆菌的方法①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤：接种。
③常用的微生物接种方法有两种a.平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
b.稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
(3)菌种的保存方法①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
考点二 微生物的筛选和计数2.分解纤维素的微生物的分离 (1)纤维素酶①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C 1酶、Cx 酶和葡萄糖苷酶。
②作用纤维素――→C 1酶Cx 酶纤维二糖――→葡萄糖苷酶葡萄糖 (2)纤维素分解菌的筛选①原理纤维素分解菌 ↓⎭⎪⎬⎪⎫刚果红纤维素→红色复合物――→纤维素酶红色消失，出现透明圈 ②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。
④实验流程土壤取样：富含纤维素的环境选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度 梯度稀释：制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落3.分离纤维素分解菌所用的两种培养基比较分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。
专题二微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养一、课题背景1．研究和应用微生物的前提是。
2．在实验室培养微生物，一方面需要，另一方面需要。
二、培养基1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质称为培养基。
2．种类：根据培养基的物理性质可将培养基可以分为、和半固体培养基。
3．琼脂：是一种从红藻中提取的，在℃以上熔化，在℃以下凝固，在常规培养条件下呈现。
琼脂是制备培养基时最常用的剂。
4．营养构成：各种培养基一般都含有水、、和无机盐，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加，培养霉菌时需将培养基的pH调至，培养细菌时需将pH调至或，培养厌氧微生物时则需要提供的条件。
5．牛肉膏，蛋白胨来源于，含有、和等营养。
三、无菌技术1．获得纯净培养物的关键是防止的入侵。
2．无菌技术围绕着展开，主要包括以下几个方面：(1)对实验操作的、操作者的衣着和进行清洁和。
(2)将用于微生物培养的器皿、和等进行。
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与_____ ______相接触。
3．无菌技术的目的：(1)防止，(2)避免。
4．消毒和灭菌四、大肠杆菌的纯化培养(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：1．计算：依据是培养基 的比例，计算配制某一体积（如100ml ）的培养基时，各种成分的用量。
2．称量：牛肉膏比较 ，可用玻棒挑取到 上，同其一块称量。
牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要 ，称后及时 。
3．溶化： 和称量纸＋少量的水（ ）取出_________→ 加_________和_________ →加 (注意：不断用玻璃棒搅拌，防止_____________而导致_____________)。
当_________完全熔化后→ 补加蒸馏水至100 mL 。
调节__________后再进行灭菌。
4．灭菌⎩⎪⎨⎪⎧培养基：_________灭菌培养皿：_____灭菌5．倒平板：待培养基冷却至_____左右时，在 附近倒平板。
微生物培养技术[1][培养基技术]成分分类条件：pH、氧气、特殊营养物质常见培养基消毒与杀菌无菌技术的目的：•防止实验室的培养基被其它外来微生物污染•防止实验操作人员被污染培养基使用完后的处理：•进行高压蒸汽灭菌，然后丢弃目的：分离细菌，得到单菌落[平板划线法][稀释涂布平板法]稀释涂布平板法•用稀释涂布平板法进行接种•选用一定的稀释范围，使菌落数在30-300之间•稀释倍数通常为103-106•两个或多个细胞有时会连在一起，只形成一个菌落。
因此，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
•统计结果一般用菌落数而不用活菌数表示显微镜直接计数法/血细胞计数板计数法•显微镜直接计数/血细胞计数板计数法也是测定微生物数量的常用方法•由于观测到的细胞包括死细胞，因此统计结果偏大滤膜法•将已知体积的水过滤•将滤膜放在鉴别培养基上培养•根据培养基上菌落的数目，计算出水样中目标细菌的数量选择培养•筛选出所需要的微生物•增加所需要的微生物的浓度鉴别培养观察菌落特征•形状•大小•隆起程度•颜色临时保藏接种→培养→冰箱保藏→转移→保藏•将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养•菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏•每3-6个月，要重新将菌种从旧的培养基转移到新鲜的培养基上❖保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异甘油管藏装甘油→灭菌→加菌液→混匀→冷冻箱保存•在3mL的甘油瓶中装入1mL甘油，灭菌•将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀•放在-20℃的冷冻箱中保存❖供长期保存菌种[7][实验原则]检测是否有杂菌污染/检测培养皿灭菌是否合格❖设置空白对照•取一个空白的培养皿，滴加无菌水，置于相同条件下•若没有菌落生成，说明没有杂菌的污染判断选择培养基是否起到筛选作用❖用全培养基作为对比•若全培养基中的菌落数明显多于选择培养基的菌落数，说明选择培养基起到了筛选作用进一步鉴定分离出来的菌种❖部分微生物可以利用其它微生物的代谢分解产物，从而在不含某些必要营养物质的培养基上存活❖运用生物化学的方法进行鉴定。
专题2：微生物的培养与应用
一、培养基的种类及用途
（1）按培养基物理性质划分:
（
2）按培养基的化学成分划分：
（3）按培养基的功能分：
二、微生物的营养
(1)碳源
(2)氮源：
关于氮源物质的来源和作用：
①对许多微生物来说，既可利用无机含氮化合物作为氮源，也可利用有机含氮化合物作为氮源。
②固氮微生物可以利用氮气作为氮源。
③铵盐、硝酸盐等既可作为微生物最常用的氮源，也可作为某些化能自养微生物的能源物质。
如消化细菌。
④自养微生物与异养微生物类型的划分主要是依靠能否以CO2作为生长的主要或唯一的碳源，而不是由氮源决定。
(3)水：水是微生物生命活动必需的一种重要物质。
(4)无机盐
无机盐对微生物的生理功能有：①构成微生物细胞的组成成分；②作为酶的组成成分，也是某些酶的激活剂；③调节和维持微生物细胞的渗透压和pH；④某些无机盐具有特殊功能，如化能自养细菌的能源物质NH3等。
(5)生长因子。
(6)培养微生物还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
三、微生物的纯化培养（两种接种方法）
1.平板划线法：操作简单，但单菌落不易分离
(1)无菌操作：在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可。
