维生素C尿负荷试验

维生素C中国居民膳食营养素参考摄入量（2013版）摘录维生素C又名抗坏血酸，是人体内重要的水溶性抗氧化营养素之一。

维生素C缺乏导致的坏血病是最早被发现的维生素缺乏病之一，早在公元前1550年就有坏血病的记载。

公元前450年，希腊的医学资料记在了坏血病的症状。

15~16世纪，坏血病曾波及整个欧洲，并导致多起远航海员死亡事件。

1747年英国的一名海军军医首次发现柑橘和柠檬能治疗坏血病。

1928年剑桥大学的学者从牛肾上腺、柑橘和甘蓝叶中分离出了抗坏血酸。

到20世纪30年代，科学家们以阐明了维生素C的结构，并成功地合成了维生素C。

近年来，营养学界对人类维生素C的摄入量与慢性病的预防进行了多项研究，取得了许多重要研究进展。

本书根据有关研究资料，就修订了我国维生素C的DRIs提出建议。

一、消化吸收与代谢（一）吸收食物中的维生素C在小肠上段吸收，吸收方式是通过一种转运蛋白以主动转运为主，经被动扩散吸收量较少。

维生素C的吸收率与摄入量有关，其吸收率随摄入量的增加而减少。

维生素C的摄入量较低时几乎完全被吸收；摄入量30~200mg/d，吸收率为80%~100%；摄入量达500mg时，吸收率下降至75%左右；摄入量达1250mg/d时，吸收率下降至50%左右。

（二）分布维生素C被吸收后迅速进入血压循环，分布在体内不同组织器官中。

人体组织中，维生素C浓度以脑下垂体最高，其次是肾上腺、肾脏、脾脏和肝脏，胰腺和胸腺也存在一定量的维生素C，血浆和唾液中含量最低。

当组织中的维生素C达到饱和后，多余的维生素C将从组织中排出。

维生素C能逆浓度梯度被转运至细胞内储存。

人体内可有少量维生素C储存，健康人体代谢池内维生素C的含量一般在1200~2000mg，最多可达3000mg，总转换率是45~60mg/d。

体内储存的维生素C大部分在细胞内，不同细胞的维生素C通常要比血浆高很多。

体内维生素C的储存量随摄入量变化，但不成线性关系，在不连续摄入维生素C时，其在体内储存较少。

实验一烹调前后食物总抗坏血酸含量的改变（2,4-二硝基苯肼比色法）(一)目的意义食物中的抗坏血酸包括还原型和脱氢型两种形式。

当食物放置时间较长或经过烹调处理后，有相当一部分抗坏血酸转变为脱氢型，脱氢型的抗坏血酸仍有85%左右的维生素C活性，测定总抗坏血酸可以评价烹调方法对食物中抗坏血酸的影响。

(二)原理总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸,样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比,进行比色定量。

(三)仪器与试剂1. 恒温箱：37 ±0.5℃。

2. 可见-紫外分光光度计。

3. 捣碎机。

4. 4.5mol/L硫酸: 谨慎地加250mL硫酸(比重1.84)于700mL水中,冷却后用水稀释至1000mL。

5. 85%硫酸：谨慎地加900mL硫酸(比重1.84)于100mL水中。

6. 2%2,4-二硝基苯肼溶液:溶解2g2,4-二硝基苯肼于100mL4.5mol/L硫酸内,过滤。

不用时存于冰箱内,每次用前必须过滤。

7. 2%草酸溶液:溶解20g草酸(H2C2O2)于700mL水中,稀释至1000mL。

8. 1%草酸溶液:稀释500mL2%草酸溶液到1000mL。

9. 1%硫脲溶液:溶解5g硫脲于500mL1%草酸溶液中。

10. 2%硫脲溶液:溶解10g硫脲于500mL1%草酸溶液中。

11. 1mol/L盐酸:取100ml盐酸,加入水中,并稀释至1200mL。

12. 抗坏血酸标准溶液:溶解100mg纯抗坏血酸于100 mL1%草酸中,配成每毫升相当于1mg抗坏血酸。

13. 活性炭:将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中,回流1～2h,过滤,用水洗数次,至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110℃烘箱中烘干。

检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应。

将2%亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀。

维生素C缺乏症．……维生素C缺乏症又称坏血病；是由于人体长期缺乏维生素C( 抗坏血酸)所引起的出血倾向及骨骼病变的疾病。

本病多见于婴幼儿。

维生素C为水溶性，人体自身不能合成，需由食物供给，维生素C广泛存在于新鲜水果和绿叶蔬菜中。

烹调时加热、遇碱或金属，易被氧化分解失去活性。

蔬菜切碎、浸泡、挤压、腌制，也致维生素C损失。

母乳中维生素C含量与乳母膳食有关( 正常含4～6mg／d1 )，一般可满足婴儿生理需要。

谷类及牛乳中含量极少，经煮沸后则大多被破坏。

病理生理维生素C主要功能是起还原剂作用及参与重要的羟化反应。

最重要的是对脯氨酸的羟化作用，能促进脯氨酸转变为羟脯氨酸，后者对胶原合成起重要作用。

当维生素C缺乏时，胶原合成障碍，引起毛细血管通透性增加，发生出血现象，并阻碍骨化过程，使成骨细胞不能形成正常骨样组织，软骨内骨化障碍。

因钙盐在基质内沉着不受影响，致临时钙化带增厚，而骨骺端骨质脆弱，易发生干骺脱位或分离，而骨质吸收继续进行，因而出现普遍性骨质疏松与萎缩。

此外，牙骨基质形成障碍，牙质发育不良，且易松动、脱落。

维生素C可使三价铁还原为二价铁，促进食物铁的吸收和铁蛋白的储存。

还可使叶酸还原为具有活性的四氢叶酸，促进红细胞成熟和增殖，故维生素C缺乏时，易致贫血。

维生素C尚可促进机体应激能力和免疫功能。

病因(一) 摄入不足乳母膳食长期缺乏维生素C，或以牛乳或单纯谷类食物长期人工喂养，而未添加富含维生素C辅食的婴儿，则易患本病。

(二) 吸收障碍慢性消化功能紊乱，长期腹泻等可致吸收减少。

(三) 需要量增加婴儿和早产儿生长发育快，需要量增多；患感染性疾病，严重创伤等消耗增多，需要量亦增加，若不及时补充，易引起缺乏。

临床表现多见于6个月至2岁的婴幼儿，母孕期摄入足量维生素C，则生后2～3个月婴儿体内储存的维生素C可供生理需要，若孕母患本病，则新生儿出生后即出现症状。

(一) 一般症状维生素C缺乏约需3～4个月方出现症状。

一、实验目的本次实验旨在通过维生素C尿负荷试验，评价被检者维生素C的营养状况。

通过观察被检者在摄入一定量维生素C后，尿液中维生素C的排泄情况，来判断其体内维生素C的储存和代谢能力。

二、实验原理维生素C，又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素，对于人体的生长发育、免疫调节、抗氧化等多种生理功能具有重要作用。

维生素C尿负荷试验是通过测定被检者在摄入一定量维生素C后，尿液中维生素C的排泄量来评估其营养状况。

实验原理基于还原型抗坏血酸（AsA）的还原性。

还原型抗坏血酸能够还原2,6-二氯酚靛酚（DCIP）染料。

DCIP在酸性溶液中呈红色，被还原后颜色消失。

通过测定被检者尿液中DCIP的还原程度，可以间接了解尿液中维生素C的浓度。

三、实验方法1. 实验材料：维生素C片剂、2,6-二氯酚靛酚染料、1%草酸溶液、0.02%DCIP溶液、标准抗坏血酸溶液、试管、移液管、酸度计等。

2. 实验步骤：（1）被检者空腹状态下，口服105.6mg维生素C片剂。

（2）分别在口服前、后0.5小时、1小时、2小时、4小时收集被检者尿液。

（3）将收集到的尿液样本分别加入1%草酸溶液和0.02%DCIP溶液，观察颜色变化。

（4）通过比色法测定尿液样本中DCIP的还原程度，计算出尿液中维生素C的浓度。

四、实验结果1. 被检者在口服维生素C前，尿液中维生素C浓度为0.6mg/24h。

2. 在口服维生素C后0.5小时、1小时、2小时、4小时，尿液中维生素C浓度分别为1.5mg/24h、2.1mg/24h、1.8mg/24h、1.2mg/24h。

3. 在实验过程中，尿液样本颜色变化明显，说明尿液中含有还原型抗坏血酸。

五、实验讨论1. 维生素C尿负荷试验可以有效地评估被检者维生素C的营养状况。

本次实验结果显示，被检者在口服维生素C后，尿液中维生素C的排泄量明显增加，说明其体内维生素C的储存和代谢能力较好。

2. 在实验过程中，尿液样本颜色变化明显，提示尿液中含有还原型抗坏血酸。